CN113308448B - 一种水稻叶色调控基因wss1及其编码蛋白质和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水稻叶色调控相关基因WSS1及其编码蛋白质和应用,基因WSS1的核苷酸序列如SEQ ID No:1或SEQ ID No:2所示,蛋白质的氨基酸序列SEQ ID No:3所示。本发明提供的水稻叶色调控相关基因WSS1,该基因为分蘖期标记性状,对其他主要农艺性状无显著影响,为水稻遗传育种研究提供了有力的工具,为选育纯种不育系奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术工程,具体涉及一种水稻叶色调控相关基因WSS1及其编码蛋白质和应用。
背景技术
水稻是是世界上重要的粮食作物之一,全球有超过一半的人口以水稻为主食。在我国,有超过60%的人以水稻为主食,是最重要的粮食作物之一。因此,水稻的高产稳产对我国粮食安全具有重要意义。叶片是植物进行光合作用的主要器官,水稻产量的95%来自于叶片的光合作用,而光合作用的高效依赖于叶绿素的合成和叶绿体的正常发育。叶色是叶绿体中各种色素的综合表现,正常水稻叶片中叶绿素占优势,通常表现为绿色。
叶色突变体的特点是叶片颜色发生了变化,而这些叶色变化大多都发生在苗期,根据苗期的叶色不同叶色突变体分为:转绿型(virescent)、条纹(stripe)、白化(albino)、黄化(chlorina)、斑马纹(zebra)和黄色斑点(yellow variegated)等6种类型。叶色变异是水稻中突变频率较高且容易鉴定的突变性状,突变基因往往是直接或者间接影响到叶绿素的合成以及降解,改变叶绿素含量,所以叶色突变体也称为叶绿素突变,因此也有人把叶色突变体分为4种类型:缺叶绿素型,缺叶绿素a型,缺叶绿素b型和叶绿素增加型。已报道的叶色突变体有很多和温度相关,依据对温度的响应不同,把叶色突变体分为:高温诱导型,低温诱导型和温钝型。
叶色突变体表型易于发现,突变基因大多直接或间接影响到叶绿素的合成或降解。叶色突变体大多都表现为叶绿素含量下降,光合效率变低,作物产量降低。随着近年来功能基因组学以及基因设计育种的发展,叶色突变体的利用价值越来越受到关注,现已经广泛应用于基础研究和生产实践。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种水稻叶色调控相关基因WSS1及其编码蛋白质和在水稻育种中的应用。
为了解决上述技术问题,本发明提供一种水稻叶色调控基因WSS1编码的蛋白质,如(A)或(B)所示的序列:
(A)SEQ ID No:3所示的氨基酸序列;
(B)在(A)所限定的氨基酸序列中添加、取代或缺失一个或几个氨基酸且具有调控水稻叶色功能的由(A)衍生的蛋白质。
本发明还提供了一种编码上述蛋白质的基因。
上述基因,其核苷酸序列如(a)或(b)所示:
(a)SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的核苷酸序列;
(b)在(a)所限定的核苷酸序列中添加、取代或缺失一个或几个核苷酸而生成的可编码具有调控水稻叶色功能的蛋白质的突变基因、等位基因或衍生物;
本发明还提供了一种含有上述基因的重组载体;所述载体为pCAMBIA1300。
本发明还提供了一种含有上述基因的转化体。
优选地,所述转化体的宿主细胞为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。
本发明还提供了一种调控水稻叶色的方法,包括用上述基因转化水稻,再将转化后的水稻培育成植株。
转化水稻,再将转化后的水稻培育成植株。
本发明还提供了一种上述基因在培育调控水稻叶色水稻品种中的应用。
进一步具体说明:本发明的目的是提供一种从水稻突变体wss1中克隆的新基因WSS1,具有如SEQ ID No:1或SEQ ID No:2所示的DNA序列,也包括与SEQ ID No:1或SEQ IDNo:2所示的DNA序列至少有70%同源性的基因序列。本发明中的SEQ ID No:3所示的蛋白质属于水稻受体蛋白激酶TMK1,其中进行一个或几个氨基酸的替换、插入或缺失所获得的功能类似物。另外,也包括在SEQ ID No:1或SEQ ID No:2中取代、插入或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物,具有相同功能的序列也能达到本发明的目的。
本发明的另一个目的是提供一种用WSS1基因进行高效的植物转化的方法,具体地说,本发明提供了具有SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的序列的基因或基因部分片段的重组载体及转化体,其中,如图3所示的pCAMBIA1300-WSS1,该载体可以表达有上述核苷酸序列编码的多肽或其同源类似物。
本发明还提供了一种利用植物表达载体转化植物细胞影响水稻叶色的方法。本发明还提供了WSS1基因的应用,具体地是利用其调控水稻叶色的功能。
本发明的有益效果在于:本发明提供了水稻叶色调控相关基因WSS1,该基因为分蘖期标记性状,对其他主要农艺性状无显著影响,为水稻遗传育种研究提供了有力的工具,为选育纯种不育系奠定基础。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是野生型(WT)和突变体wss1的表型分析,A:分蘖盛期野生型(左)和wss1(右)的表型;B:野生型(左)和wss1(右)叶片的表型;C:野生型(左)和wss1(右)的叶绿素含量测定。
图2是WSS1基因的定位图,A:WSS1基因的初定位;B:WSS1基因在第11号染色体上的精细定位图;C:WSS1基因定位区间目的基因结构分析及突变位点测序的结构示意图。
图3是功能互补载体pCAMBIA1300-WSS1的图谱。
图4是功能互补实验T1转基因水稻植株的表型。A:分蘖盛期野生型(左)、wss1(中)和互补转基因苗(右)的表型;B:野生型(左)、wss1(中)和互补转基因苗(右)叶片的表型;C:野生型、wss1和互补转基因苗的叶绿素含量测定。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
为了更充分的解释本发明的实施,下面提供了水稻水浸状叶色突变体wss1基因的实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的原料均有市售。
实施例1:突变体材料的获得及其表型
通过EMS(甲基磺酸乙酯)化学诱变籼稻品种金刚30,筛选到一份水浸状叶色突变体wss1。该突变体的性状经过多代自交已稳定遗传,wss1在苗期和分蘖始期无明显差异表型,到分蘖盛期叶片的一些部位表现出浅绿色的水浸状斑点,有的表型严重的出现枯死表型,而野生型在相同时期叶片均表现正常且未出现早衰症状(图1A-B)。另外,突变体wss1中的正常绿色部位中的叶绿素含量及类胡萝卜素含量与野生型相比没有减少,而突变体wss1中水浸状斑点部位的叶绿素和类胡萝素含量均较野生型有显著地减少(图1C)。
实施例2:WSS1基因的遗传分析和精细定位
将突变体wss1和常规粳稻02428、NIP进行杂交配组,F1植株均表现出正常野生型表型,说明wss1受隐性核基因控制。统计F2分离群体分离比(表1),结果表明,正常表型的植株和突变体表型的植株的分离比经过卡方检验接近3:1分离,这表明wss1的水浸状叶色表型是由单隐性核基因控制。
表1水浸状叶色突变体wss1的遗传分析
利用本实验室保存的均匀分布于水稻12条染色体的InDel引物对突变体与02428进行多态性筛选,筛选到89对引物具有多态性。然后用21个02428/wss1中F2水浸状叶色单株进行连锁分析,初步确认目标基因所在的染色体位置。基因组DNA采用CTAB法提取。具体步骤如下:
①、称取0.1g的水稻叶片用液氮研磨成粉状,然后加入600μl的CTAB溶液(2%(m/V)CTAB,100mmol/L Tris-Cl,20mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl;pH8.0)配制的DNA提取缓冲液,65℃水浴40分钟。再加600μl的氯仿:异戊醇(24:1的体积比),并混匀。10,000rpm离心5分钟,将上清液转移到新的离心管中。
②、在上述步骤①离心后所得的上清液中加2/3~1倍体积预冷(至4℃)的异丙醇,轻轻混匀至DNA沉淀。13,000rpm离心8分钟,倒出上清液。
③、再用70%(体积浓度)的已醇200μl洗涤上述步骤②所得的DNA沉淀物。
④、将上述洗涤后的DNA晾干并溶于100μl TE缓冲液或纯水中。
⑤、紫外分光光度法检测上述步骤④所得的DNA样品的浓度,0.7%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性。完整合适的DNA用于PCR扩增,不完整的DNA则重新提取,直至获得完整的DNA。
PCR反应体系采用10μL体系:DNA模板1μL,10×PCR缓冲液1μL,正反向引物(10μmol/L)各0.5μL,dNTPs 1μL,rTaq酶0.2μL,加ddH2O补足10μL。PCR扩增程序如下:94℃下预变性4min;94℃下变性30s,55℃~60℃下退火30s(温度因引物不同而异),72℃下延伸30s,40个循环;最后72℃下延伸10min。PCR产物用4%琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后在凝胶成像仪拍照并读胶。利用上述筛选的89对InDel引物进行WSS1基因连锁分析发现在第11号染色体的标记Ch11-12处表现出连锁现象,随后在该标记的上下游附件选择标记进行区间确定,结果将目的基因锁定在标记Ch11-131和Ch11-12之间(如图2A所示)。在此区间再次设计新的多态性分子标记,用1184个F2单株最终将该基因定位在Ch11-38和Ch11-42这两个分子标记之间(如图2B所示)。引物序列见表2。
表2精细定位所用分子标记
实施例3:候选基因的确定
根据精细定位的89.53kb的区间内,在水稻基因组数据库(http:// rice.plantbiology.msu.edu/)进行候选基因预测,发现共有13个开放阅读框(ORF)。其中包括了1个表达蛋白,9个转座子蛋白,3个功能蛋白。利用PCR的方法,将突变体wss1和野生型金刚30中这13个基因所在的基因组序列扩增出来,测序分析,发现只有一个基因(LOC_Os11g26130)出现突变,该基因的CDS序列的第1187位核苷酸T突变为C,导致第396位的编码氨基酸序列发生亮氨酸(Leucine)到脯氨酸(Proline)的变异。
该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如序列表的SEQ ID No:3所示。该基因的cDNA全长如SEQ ID NO:1所示,gDNA全长如SEQ ID NO:2所示。
实施例4:功能互补载体的构建与转基因功能互补
为验证水稻突变体wss1的水浸状叶色表型是由突变基因WSS1引起的,以野生型JG30基因组DNA为模板,1300-WSS1-CF:GAGCTCGGTACCCGGGGATCCAGGAAAAACCCCCTCTCTCTCAACTG,1300-WSS1-CR:CAGGTCGACTCTAGAGGATCCCGTGGATTGGTTGTTCGGTTTAAATGTGG为引物,通过PCR扩增成功获得包含启动子、表达框以及终止子在内的WSS1 DNA全长序列。随后应用诺唯赞公司的ClonExpress II One Step Cloning Kit试剂盒(货号:C112-01)通过重组将WSS1 PCR产物片段连接上经BamHI单酶切线性化后的载体pCAMBIA1300(具体使用参照说明书)。将此重组产物热激转化大肠杆菌TOP10后涂布于含50mg/L卡那霉素的LB平板上生长16小时,挑选阳性克隆小提质粒送北京生工有限公司测序,将测序正确的质粒命名为pCAMBIA1300-WSS1(图3)。
这个质粒通过电击的方法转入农杆菌EHA105中转化水稻。我们利用突变体wss1成熟胚诱导的愈伤组织,经过诱导培养基培养2周后,挑选生长旺盛的愈伤用作转化的受体。用含有双元质粒载体(pCAMBIA1300-WSS1)的EHA105菌株侵染水稻愈伤,在黑暗、25℃条件下共培养3天后,在含有50mg/L Hygromycin的筛选培养基上光照培养14天左右(光照强度为13200LX,温度为32℃)。将预分化的愈伤转至分化培养基上在光照条件下(光照强度为13200LX,温度为32℃)培养一个月左右得到抗性转基因植株。转基因植株表现为正常叶片表型和生育期,实验结果表明互补载体能够完全恢复wss1的水浸状叶色表型,并且叶绿素含量也恢复到野生型一样的水平(图4)。
备注说明:上文中提及的各项培养基(诱导培养基、筛选培养基、分化培养基)均为常规培养基。
实施例5:水稻叶色控制基因WSS1在水稻育种中的应用
由于水稻水浸状叶色是理想的形态标记性状,其叶色变异对其它性状尤其产量、品质性状没有显著影响,因而在回交转育中,能快速达到育种要求。所以本发明公开的WSS1突变基因为水稻的分子育种提供了重要的基因资源。利用水浸状叶色性状进行作物杂种一代新品种选育和种子纯度鉴定,能通过观察标记性状的存在或消失与否来识别真假杂种,从而达到能及早识别剔除杂种或非杂种株、实现亲本和杂交种种子纯度双重排杂、加强种子质量监督、大大降低种子鉴定费用、保证田间品种纯度、增产节支等目的。该项技术直观准确,简便快速,具有一般的异地种植鉴定和DNA分子标记鉴定技术无法比拟的优越性。
最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。
<110> 中国农业科学院作物科学研究所
<120> 一种水稻叶色调控基因WSS1及其编码蛋白质和应用
<160> 3
<210> 1
<211> 2739
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)cDNA全长
<400> 1
ATGGGGAGGGACGCCCGCCGCCTCCCCCTCCTCCCCTTCCTCCTCCTCCTCCTCGCCGCCGCCGCCGGCGTCGCCGAGTCGGCGACCGACGCGGAAGCCATCCACGACCTGGCCAGGTCGGTCCCGGCCCTAGGGTGGGATGGCGACAACGTGTGCGGCTTCGAGGGCGTCACCTGCGAGCGGGGCGGGGCGGGGAAGGTGACGGAGCTCAACCTCGCCGACAGGGGGCTCTCCGGCACGCTCCCGGACTCGCTCTCCTCCCTCACCTCGCTCACCGCGCTGCAGCTCCAGGGGAACGCGCTCACCGGCGCCGTCCCTTCCCTCGCCAGGATGGGCTCCCTCGCCCGCCTCGCCCTCGACGGCAACGCCTTCACCTCCCTCCCCCCCGACTTCCTCCACGGCCTCACCTCACTGCAGTATCTCACCATGGAGAACCTCCCCCTCCCGCCATGGCCCGTCCCCGACGCCATCGCCAACTGCTCCTCCCTCGACACCTTCTCCGCCTCCAACGCCTCCATCTCGGGGCCCTTCCCCGCCGTGCTCGCCACCCTCGTTTCGCTCAGGAACCTCCGCCTCTCCTACAACAACCTCACCGGCGGGCTGCCGCCCGAGTTGTCCTCGCTCATTGCCATGGAGAGCCTGCAGCTCAACAACCAGAGGTCGGATGACAAGCTATCGGGCCCAATCGATGTCATCGCCTCGATGAAGAGCCTCAAGCTGCTGTGGATTCAGTCCAACAAGTTCACCGGCCCGATCCCGGATTTGAACGGCACGCAGCTGGAAGCGTTCAATGTCAGGGACAATATGCTCACTGGTGTGGTGCCGCCCTCGCTGACAGGGTTAATGAGCTTGAAGAATGTTTCACTGTCCAACAATAATTTTCAGGGGCCGAAGCCAGCGTTTGCTGCGATCCCCGGGCAAGATGAGGATAGCGGGAATGGGTTTTGTCTTAATTCACCTGGTCCATGTTCTCCACTGACAACCACTCTTCTTCAGGTGGCTGAAGGGTTTGGTTACCCGTATGAGCTCGCCAAGACGTGGAAAGGGAATGATCCATGCAGTCCAGCCTGGGTCGGAATCGTTTGCACTTCGTCGGATGTGTCCATGATCAACTTGTCTCGTAAGAACTTATCAGGTAGGATATCGCCTGCTTTGGCAAACCTGACTAGGCTCGCGAGGCTGGATCTTTCGAACAATAACCTCACAGGGGTGATACCGGATGTTTTGACTACATTGCCGAGCCTTACAGTTCTTAATGTCGCAAATAACAGACTCACTGGCGAAGTGCCCAAGTTTAAGCCATCAGTTAATGTGCTTGCTCAAGGAAACCTGTTCGGGCAATCAAGTGGTAGCAGTGGAAGGGGAGGTGGTTCTGATGGTGACTCTTCATCGTCAGATTCTGCAGGTGGAGGAAAGTCAAAGCCAAATACTGGAATGATTATTGGAATTATTGTAGCTGTGATTATTCTTTTTGCTTGCATTGCGCTTTTGGTGCATCATCGAAAGAAGAAGAATGTAGAAAAGTTCAGGCCTGTGTCAACCAAAACCTCTCCTGCTGAATCTGAGATGATGAAGATTCAGGTGGTTGGAGCAAATGGCATTAGCAATGGAAGCAGTGCATTCCCAACTGAGCTTTACAGCCATGTGAGCGCTGCTAACAGCTCAAACATTTCTGAGCTGTTTGAGTCCCATGGAATGCAGTTGTCAGTAGAAGTGCTGCTAAAAGCCACAAACAACTTCAGTGAGGACTGCATCTTAGGTAGAGGGGGGTTTGGTGTGGTTTTCAAGGGCAACCTCAATGGAAAGCTGGTAGCTGTGAAGAGGTGCGACAGTGGTACCATGGGGACTAAAGGGCAGGAAGAATTCCTGGCTGAAATTGATGTTCTTAGGAAAGTAAGACACCGGCACTTGGTTGCACTACTTGGTTACTGCACCCATGGCAATGAGAGACTCTTGGTCTATGAGTACATGTCTGGTGGAACATTACGTGAGCATCTCTGTGATCTTCAGCAGAGTGGGTTTATCCCTCTTACATGGACGCAGAGAATGACAATAGCTTTGGATGTTGCTAGGGGGATAGAATATTTGCATGGCTTGGCACAGGAAACTTTCATCCATAGAGATCTTAAGCCCTCCAATATATTGTTAGATCAAGATTTGAGAGCTAAGGTTTCGGACTTTGGGTTGGTCAAGCTTGCCAAAGATACAGATAAGTCATTGATGACAAGAATTGCCGGGACATTTGGGTACCTCGCGCCTGAATATGCTACTACAGGAAAAGTTACTACAAAAGTTGATGTGTATGCATATGGTGTGATACTAATGGAGATGATTACGGGAAGGAAAGTACTTGATGATTCGTTACCTGATGATGAAACACATCTTGTAACAATCTTCCGAAGAAATATTCTTGATAAAGAGAAGTTCAGGAAGTTTGTAGATCCCACGCTGGAGCTCAGTGCAGAAGGTTGGACGAGTTTGCTGGAGGTAGCCGACCTTGCCCGCCACTGCACAGCAAGAGAACCATACCAGAGGCCAGACATGTGCCACTGTGTGAACCGACTATCCAGCCTGGTGGATCAGTGGAAGCCTACAAACATTGATGAAGATGACTACGAGGGTGAGACAAGCGAGATGGGCCTCCACCAGCAACTAGAGAAATGGAGATGTGATGATTTCACTATTTCTGACTCAGATACATTTGGCTCATTCAACGTGCCAAGGAAGTACAATGGATAA
<210> 2
<211> 7520
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)gDNA全长
<400> 2
ATGGGGAGGGACGCCCGCCGCCTCCCCCTCCTCCCCTTCCTCCTCCTCCTCCTCGCCGCCGCCGCCGGCGTCGCCGAGTCGGCGACCGACGCGGAAGCCATCCACGACCTGGCCAGGTCGGTCCCGGCCCTAGGGTGGGATGGCGACAACGTGTGCGGCTTCGAGGGCGTCACCTGCGAGCGGGGCGGGGCGGGGAAGGTGACGGAGCTCAACCTCGCCGACAGGGGGCTCTCCGGCACGCTCCCGGACTCGCTCTCCTCCCTCACCTCGCTCACCGCGCTGCAGCTCCAGGGGAACGCGCTCACCGGCGCCGTCCCTTCCCTCGCCAGGATGGGCTCCCTCGCCCGCCTCGCCCTCGACGGCAACGCCTTCACCTCCCTCCCCCCCGACTTCCTCCACGGCCTCACCTCACTGCAGTATCTCACCATGGAGAACCTCCCCCTCCCGCCATGGCCCGTCCCCGACGCCATCGCCAACTGCTCCTCCCTCGACACCTTCTCCGCCTCCAACGCCTCCATCTCGGGGCCCTTCCCCGCCGTGCTCGCCACCCTCGTTTCGCTCAGGAACCTCCGCCTCTCCTACAACAACCTCACCGGCGGGCTGCCGCCCGAGTTGTCCTCGCTCATTGCCATGGAGAGCCTGCAGCTCAACAACCAGAGGTCGGATGACAAGCTATCGGGCCCAATCGATGTCATCGCCTCGATGAAGAGCCTCAAGCTGCTGTGGATTCAGTCCAACAAGTTCACCGGCCCGATCCCGGATTTGAACGGCACGCAGCTGGAAGCGTTCAATGTCAGGGACAATATGCTCACTGGTGTGGTGCCGCCCTCGCTGACAGGGTTAATGAGCTTGAAGAATGTTTCACTGTCCAACAATAATTTTCAGGGGCCGAAGCCAGCGTTTGCTGCGATCCCCGGGCAAGATGAGGATAGCGGGAATGGGTTTTGTCTTAATACACCTGGTCCATGTTCTCCACTGACAACCACTCTTCTTCAGGTGGCTGAAGGGTTTGGTTACCCGTATGAGCTCGCCAAGACGTGGAAAGGGAATGATCCATGCAGTCCAGCCTGGGTCGGAATCGTTTGCACTTCGTCGGATGTGTCCATGATCAACTTGTCTCGTAAGAACTTATCAGGTAGGATATCGCCTGCTTTGGCAAACCTGACTAGGCTCGCGAGGCTGGATCTTTCGAACAATAACCTCACAGGGGTGATACCGGATGTTTTGACTACATTGCCGAGCCTTACAGTTCTTAATGTCGCAAATAACAGACTCACTGGCGAAGTGCCCAAGTTTAAGCCATCAGTTAATGTGCTTGCTCAAGGAAACCTGTTCGGGCAATCAAGTGGTAGCAGTGGAGGGGGAGGTGGTTCTGATGGTGACTCTTCATCGTCAGATTCTGCAGGTGGAGGAAAGTCAAAGCCAAATACTGGAATGATTATTGGAATTATTGTAGCTGTGATTATTCTTTTTGCTTGCATTGCGCTTTTGGTGCATCATCGAAAGAAGAAGAATGTAGAAAAGTTCAGGCCTGTGTCAACCAAAACCTCTCCTGCTGAATCTGAGATGATGAAGATTCAGGTGGTTGGAGCAAATGGCATTAGCAATGGAAGCAGTGCATTCCCAACTGAGCTTTACAGCCATGTGAGCGCTGCTAACAGCTCAAACATTTCTGAGCTGTTTGAGTCCCATGGAATGCAGTTGTCAGTAGAAGTGCTGCTAAAAGCCACAAACAACTTCAGTGAGGACTGCATCTTAGGTAGAGGGGGGTTTGGTGTGGTTTTCAAGGGCAACCTCAATGGAAAGCTGGTAGCTGTGAAGAGGTGCGACAGTGGTACCATGGGGACTAAAGGGCAGGAAGAATTCCTGGCTGAAATTGATGTTCTTAGGAAAGTAAGACACCGGCACTTGGTTGCACTACTTGGTTACTGCACCCATGGCAATGAGAGACTCTTGGTCTATGAGTACATGTCTGGTGGAACATTACGTGAGCATCTCTGTGATCTTCAGCAGAGTGGGTTTATCCCTCTTACATGGACGCAGAGAATGACAATAGCTTTGGATGTTGCTAGGGGGATAGAATATTTGCATGGCTTGGCACAGGAAACTTTCATCCATAGAGATCTTAAGCCCTCCAATATATTGTTAGATCAAGATTTGAGAGCTAAGGTTTCGGACTTTGGGTTGGTCAAGCTTGCCAAAGATACAGATAAGTCATTGATGACAAGAATTGCCGGGACATTTGGGTACCTCGCGCCTGAATATGCTAGTAAGTGTACTTCTCTCTGCTGTTAATTTTTTTATTCTAAATTACCAGTCTGTAGTTTCTTTTTGCACACTTTTCTCCTCTGTTACAATCTGTTTTTTTTTTGGAGTGATTGCAGTTTGATTACATTTGTCTTGGAACAAATTTTCAGCTTTGCATATTCACTAGTATCATAATTCAAGGACGAGCACAATTGTGTTGCACTCTGACACTTCCTAGGAGGACCCATAGGGCATTTCCAATTAGAAATGACTTGGCCATTTCTATAGGATTTCATATCACCCAGGAACAATGATAGTAACAGCCATTACAAAGGGTTCCTTGAAGAATTACTGATTGGTAGGCTTTATTCAAAATTTATTTTGAAATAGGATGGGTTCAGTCCTATAAATATGTGAGGTGTGATTTGTTTAAGTAGTTTCATAAGTCGAAGGAGCTAATAGCATTAATTGTTTCATGGAATCTCTTAGTGTAGTGAATTTGGTGTTGGCCTAGGTTTCTTTTTGTTTCTATCCCCAAAAGAGTTCTCTCTATAGAGAAACAACTTGCTTCTCTCTCCTCTCCATCTCTCTGCCTAATAAAAATAATGATGCTGGGCTTATAGAAACTAGGATACAAGGTTAGTATAGCATAGGGATTATCGATTAGGAAATAGAACATCGATTAGTAGGAACATAGAAATGTTTTATATGCATCAATTATTACATAGATCCTTTTGAAATGCTGCACTTGGAATTCTGGGCGCACCTAGAATAATGGACCAGCATATGGTTTTTTTGGTACATGGTATAATACGTGGTTAATTGTAATGGGAGCATTGCGCTTGTGAACTGCACAAAGCAATGTCTTGGCAGAGTATTAGCATTGGCCTCAGTTTGTTCTTTTAACGTGAGTAGTTTTACCTTTGGCCTTGTTTGTGAAATCTTGTTTATGACTTAGAACATATAAGTATCTTATGCAGGACTGAAGTGTCCAGTGAAGTATTGGATGTACTACAATGCTGTATTATCTAGCCATTTACATTCTAGGAAACAAAATATAGATCTTAGACACCTAGAGCTTTCCTCTCCTTTATTCTAAGAGCTTCTGTGGGATGTGCAGTTATTTTATGATGTCACTTTTCAGAGTAGGTGTTGATAAGTTAACCATATTGCATCTTTTTACTCCTGTTAGCTGGACAGCACTACTGGTTTCTTGGATACATGAGCACCATTTTTTTTATAAGGATGCCATAGTGCTTTGCAGATCCTAGCCTTGTTATGCTTCTTAAAGTAATGCAAATTTCATAACCACTCCGTATGTTGCTTTTTTCATAGTAGAGGTTTGACTACCTTGTTCATACTATCAATCCATTAGACTAAAGGGTACATCAATGTAATAGGAGAGAAATAAATATGGAAGGGTAAGTGGGTAACCCGATTGTTTAGTCTGAGGGGAGAGATCAATAGTACTATTCATAAATGGTTTTCTTCAATTGGGGCATGTTTATATCCTTTAATTGAACAGCTAATATTTGTGTATCCTTCGAACATTGAACTTCTTACTTTGTTGACACATAATCTCTTGTGACAATGAACGTTGCCCAAACCAATTATCCAGGTTTCTGCTGGAGATAATTTTAATCTGTTAAGTCCTCTTAACGGAATGGGGGAAGAGTTCAAAAAAATGAGGGCGAAACCACAAAGTTGGGAAAGTAGGGGTAAAAATCACAATTGGAGTTGAAAACAGGCTCAATTGTCACTTTACTAGGGGTTTTATTGCTTTTCTTTATCCAAACTCTAAAACATGTCTCAAATCCACAGCCAGTGGTTACACTAATAGCTGGTCGTATTTGTTAGGGAAACACTAGGTCACTAGTTATCCTTGCGGTGACACATTTTTGTATTGTTCATTCTACTGTTCTATCAACTCAAGTTTTCACATGCATCATGTCTATTAGCAGTTATTCCTTGACTGTGTACCTCCATGATGCAGAGGCTGGAGATATCTTCTGTTATCTAAAAAAGTTATGTTTTCCTAGGGACAGGAAATGCATTATCTTGATATTGTGAAATTTGGAGCTTCTCAGTTCACATGTTGTTTTTTCCTCCTAGATGCTTGAGCATAATTATGACATCAATAAATCATTCCATAGAAATTATTAGTTCTGGTTGCTGATATACTTACAAAGAATAGCTATTATCAATTGATATGCTCAGAGAAAATAAGGGTCCTACTTAACTCATGACATGTGATCAATATAGTTGTAGTTTAGTATATATGAAGAGCCATGATACATTCCTGGGAATACAACGAATATTCCCTTATGTGCCGGTCGAGGTAACTTAGCCTGGTAAAGGTGGTAGGGATGGAGACGAGTAGCAGAAGGATGAAAAGGGAGTGAACAGCTAGGGAACTAGCACAAGGTATGTTGCAAGGTAGGAGGGGAGAGTTTAGTTGTGAGACGAGCATATGCATAGGTTGACATGGGAAGTCCGAAACAATATATTGAATGCAACTAGCAGATAACAAATATTTATTTGTTTTCAACTAAAAAATCAGCTTCGAGCACACCACATACTGTTGCTGCTGGTGTGATGCTTGTCCTTGGGCCTTGTTGAGTTATTCTATTTCTATAGGCTACAAGAAGTTTTTGCATTGATCTATAAAAAAATGCTGGATATGGGAGGAGGGGCTCTCATATCGAAATTTATTAAGAGCGGTGAGGCTCGAACTTGCGTCGGCTAGCCCACAC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<211> 912
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 3
MetGlyArgAspAlaArgArgLeuProLeuLeuProPheLeuLeuLeuLeuLeuAlaAlaAlaAlaGlyValAla
GluSerAlaThrAspAlaGluAlaIleHisAspLeuAlaArgSerValProAlaLeuGlyTrpAspGlyAspAsn ValCysGlyPheGluGlyValThrCysGluArgGlyGlyAlaGlyLysValThrGluLeuAsnLeuAlaAspArg GlyLeuSerGlyThrLeuProAspSerLeuSerSerLeuThrSerLeuThrAlaLeuGlnLeuGlnGlyAsnAla LeuThrGlyAlaValProSerLeuAlaArgMetGlySerLeuAlaArgLeuAlaLeuAspGlyAsnAlaPheThr SerLeuProProAspPheLeuHisGlyLeuThrSerLeuGlnTyrLeuThrMetGluAsnLeuProLeuProPro TrpProValProAspAlaIleAlaAsnCysSerSerLeuAspThrPheSerAlaSerAsnAlaSerIleSerGly ProPheProAlaValLeuAlaThrLeuValSerLeuArgAsnLeuArgLeuSerTyrAsnAsnLeuThrGlyGly LeuProProGluLeuSerSerLeuIleAlaMetGluSerLeuGlnLeuAsnAsnGlnArgSerAspAspLysLeu SerGlyProIleAspValIleAlaSerMetLysSerLeuLysLeuLeuTrpIleGlnSerAsnLysPheThrGly ProIleProAspLeuAsnGlyThrGlnLeuGluAlaPheAsnValArgAspAsnMetLeuThrGlyValValPro ProSerLeuThrGlyLeuMetSerLeuLysAsnValSerLeuSerAsnAsnAsnPheGlnGlyProLysProAla PheAlaAlaIleProGlyGlnAspGluAspSerGlyAsnGlyPheCysLeuAsnSerProGlyProCysSerPro LeuThrThrThrLeuLeuGlnValAlaGluGlyPheGlyTyrProTyrGluLeuAlaLysThrTrpLysGlyAsn AspProCysSerProAlaTrpValGlyIleValCysThrSerSerAspValSerMetIleAsnLeuSerArgLys AsnLeuSerGlyArgIleSerProAlaLeuAlaAsnLeuThrArgLeuAlaArgLeuAspLeuSerAsnAsnAsn LeuThrGlyValIleProAspValLeuThrThrLeuProSerLeuThrValLeuAsnValAlaAsnAsnArgLeu ThrGlyGluValProLysPheLysProSerValAsnValLeuAlaGlnGlyAsnLeuPheGlyGlnSerSerGly SerSerGlyArgGlyGlyGlySerAspGlyAspSerSerSerSerAspSerAlaGlyGlyGlyLysSerLysPro AsnThrGlyMetIleIleGlyIleIleValAlaValIleIleLeuPheAlaCysIleAlaLeuLeuValHisHis ArgLysLysLysAsnValGluLysPheArgProValSerThrLysThrSerProAlaGluSerGluMetMetLys IleGlnValValGlyAlaAsnGlyIleSerAsnGlySerSerAlaPheProThrGluLeuTyrSerHisValSer AlaAlaAsnSerSerAsnIleSerGluLeuPheGluSerHisGlyMetGlnLeuSerValGluValLeuLeuLys AlaThrAsnAsnPheSerGluAspCysIleLeuGlyArgGlyGlyPheGlyValValPheLysGlyAsnLeuAsn GlyLysLeuValAlaValLysArgCysAspSerGlyThrMetGlyThrLysGlyGlnGluGluPheLeuAlaGlu IleAspValLeuArgLysValArgHisArgHisLeuValAlaLeuLeuGlyTyrCysThrHisGlyAsnGluArg LeuLeuValTyrGluTyrMetSerGlyGlyThrLeuArgGluHisLeuCysAspLeuGlnGlnSerGlyPheIle ProLeuThrTrpThrGlnArgMetThrIleAlaLeuAspValAlaArgGlyIleGluTyrLeuHisGlyLeuAla GlnGluThrPheIleHisArgAspLeuLysProSerAsnIleLeuLeuAspGlnAspLeuArgAlaLysValSer AspPheGlyLeuValLysLeuAlaLysAspThrAspLysSerLeuMetThrArgIleAlaGlyThrPheGlyTyr LeuAlaProGluTyrAlaThrThrGlyLysValThrThrLysValAspValTyrAlaTyrGlyValIleLeuMet GluMetIleThrGlyArgLysValLeuAspAspSerLeuProAspAspGluThrHisLeuValThrIlePheArg ArgAsnIleLeuAspLysGluLysPheArgLysPheValAspProThrLeuGluLeuSerAlaGluGlyTrpThr SerLeuLeuGluValAlaAspLeuAlaArgHisCysThrAlaArgGluProTyrGlnArgProAspMetCysHis CysValAsnArgLeuSerSerLeuValAspGlnTrpLysProThrAsnIleAspGluAspAspTyrGluGlyGlu ThrSerGluMetGlyLeuHisGlnGlnLeuGluLysTrpArgCysAspAspPheThrIleSerAspSerAspThr PheGlySerPheAsnValProArgLysTyrAsnGly
Claims (5)
1.一种调控水稻叶色的方法,其特征在于,包括用水稻叶色调控基因转化水稻,再将转化后的水稻培育成转基因植株;所述水稻叶色调控基因编码如SEQ ID No:3所示的氨基酸序列的蛋白质。
2.如权利要求1所述的方法,特征在于,包括用所述水稻叶色调控基因通过农杆菌转化水稻,再将转化后的水稻细胞培育成转基因植株。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述水稻叶色调控基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1 或SEQ ID No:2所示。
4.一种水稻叶色调控基因在培育调控水稻叶色品种中的应用,其特征在于,所述水稻叶色调控基因编码如SEQ ID No:3所示的氨基酸序列的蛋白质。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述水稻叶色调控基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1 或SEQ ID No:2所示。
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