CN113293117A - 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用 - Google Patents

寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113293117A
CN113293117A CN202110782126.9A CN202110782126A CN113293117A CN 113293117 A CN113293117 A CN 113293117A CN 202110782126 A CN202110782126 A CN 202110782126A CN 113293117 A CN113293117 A CN 113293117A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stenotrophomonas
broad
strain
growth
biocontrol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110782126.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113293117B (zh
Inventor
张新慧
王兰梦
李小康
郎多勇
郑立昊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ningxia Medical University
Original Assignee
Ningxia Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningxia Medical University filed Critical Ningxia Medical University
Priority to CN202110782126.9A priority Critical patent/CN113293117B/zh
Publication of CN113293117A publication Critical patent/CN113293117A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113293117B publication Critical patent/CN113293117B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物领域，特别是涉及寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用。本发明提供了一株具有广谱生防和促生作用的寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)FT2，所述的寡养单胞菌FT2的保藏编号为CGMCC No.21379；该菌株对多种真菌病害有抑制作用，具有无毒、无害、无污染的优势，而且还可以促进植物种子的萌发及植株的生长，同时提高植物根际土壤酶活性及速效养分含量，增加土壤细菌数量。

Description

寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，特别是涉及寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用。
背景技术
植物病害的发生常常破坏植株的生长，可直接导致其产量及品质的降低，是威胁农业生产的主要因素之一。药用植物因连作、栽培地土壤条件较差、病原菌的抗药性增加等因素导致的土传病害种类繁多，再加上关于药用植物病害的系统研究甚少，使药用植物病害的防治成为目前农业生产中最薄弱的环节。当前，防治植物病害主要依赖化学农药或是抗逆农作物的筛选，植物生长促进主要依赖于化学肥料的使用。然而化学农药和肥料的长期、过量使用造成了环境污染、土壤板结、农药残留等一系列的问题，严重威害着人类健康以及生态环境安全。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用。本发明所述寡养单胞菌FT2对多种真菌病害有抑制作用，具有无毒、无害、无污染的优势，而且还可以促进植物种子的萌发及植株的生长，同时提高植物根际土壤酶活性及速效养分含量，增加土壤细菌数量。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一株具有广谱生防和促生作用的寡养单胞菌(Stenotrophomonassp.)FT2，所述的寡养单胞菌FT2的保藏编号为CGMCC No.21379。
本发明提供了一种具有广谱生防和促生作用的微生物肥料，所述微生物肥料的有效成分包括上述的寡养单胞菌FT2。
优选的，所述寡养单胞菌FT2的浓度为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL。本发明提供了一种具有广谱生防和促生作用的微生物菌剂，所述微生物菌剂的有效成分包上述的寡养单胞菌FT2。
优选的，所述的寡养单胞菌FT2的浓度为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL。
本发明提供了上述的菌株或上述微生物肥料或上述微生物菌剂在广谱生防和促生中的应用。
优选的，所述广谱生防的病原菌包括真菌病原菌。
优选的，所述真菌病原菌包括叶点霉病菌、灰霉病菌、枯萎病菌和根腐病菌。
优选的，所述促生的植物包括药用植物。
优选的，所述药用植物包括甘草和牵牛。
有益效果：本发明提供了一株具有广谱生防和促生作用的寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)FT2，所述的寡养单胞菌FT2的保藏编号为CGMCC No.21379。本发明所述菌株为种子内生菌，具有产吲哚乙酸、产铁载体、产ACC脱氨酶、产纤维素酶、产蛋白酶、产氨、固氮、解无机磷、解钾等多种促生效应，而且该菌株具有广谱生防的作用。本发明通过培养基试验，利用该菌株抑制了山药叶点霉病菌、知母灰霉病菌、黄芩灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和当归根腐病菌的生长；通过发芽试验和温室盆栽试验证明该菌株可以促进药用植物甘草和牵牛种子萌发及植株生长，同时提高植物根际土壤酶活性及速效养分含量，增加土壤细菌数量。本发明为研究开发环境友好型的具有生防促生效应的药用植物专用微生物肥料提供了优质的材料及科学依据。
生物保藏信息
寡单胞杆菌(Stenotrophomonas sp.)FT2，于2020年12月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.21379。
附图说明
图1为寡单胞杆菌FT2对5种植物病原菌的抑制作用图，其中CK为未接种寡单胞杆菌FT2，FT2为接种寡单胞杆菌FT2，a为山药叶点霉病菌，b为当归根腐病菌，c为知母灰霉病菌，d为黄瓜枯萎病菌，e为黄芩灰霉病菌；
图2为接种寡单胞杆菌FT2在LB培养基上的菌落形态；
图3为接种寡单胞杆菌FT2基于16S rDNA序列同源性构建的系统发育树；
图4为IAA标准曲线，其中c为浓度；
图5为接种寡单胞杆菌FT2的促生效应结果，其中a为IAA产生，1为未接种菌株，2为接种寡单胞杆菌FT2，b为铁载体产生，c为固氮，d为NH3产生，e为溶无机磷，f为溶有机磷，g为解钾，h为ACC脱氨酶产生，i为蛋白酶产生，j为纤维素酶产生，FT2为接种寡单胞杆菌FT2；
图6为寡单胞杆菌FT2对甘草种子萌发的影响，其中a为接种寡单胞杆菌FT2与未接种寡单胞杆菌FT2的对比照片，b为发芽率，CK为无菌水处理，FT2为接种寡单胞杆菌FT2；
图7为寡单胞杆菌FT2对甘草和牵牛植株生长指标的影响，其中a为无菌水处理的甘草，b为接种寡单胞杆菌FT2的甘草，c为无菌水处理的牵牛，d为接种寡单胞杆菌FT2的牵牛。
具体实施方式
本发明提供了一株具有广谱生防和促生作用的寡养单胞菌(Stenotrophomonassp.)FT2，所述的寡养单胞菌FT2的保藏编号为CGMCC No.21379。本发明所述寡养单胞菌FT2具有产吲哚乙酸、产铁载体、产ACC脱氨酶、产纤维素酶、产蛋白酶、产氨、固氮、解无机磷、解钾等多种促生效应，不能使硝酸盐还原、淀粉水解，能产生H2S、黑色素，但不能使明胶液化、牛奶胨化与凝固；生长pH范围为5.0～9.0，最适生长pH为7.0；温度耐受范围为15～37℃，最适生长温度为28℃；能生长在NaCl含量小于15％的培养基上；不能利用D-木糖和D-山梨醇，能利用D-甘露醇、D-葡萄糖、D-麦芽糖、蔗糖、D-乳糖和D-果糖；不能利用尿素、甘氨酸、硫酸铵，能利用谷氨酰胺、组氨酸。
本发明所述寡养单胞菌FT2的培养特征优选为：菌落呈浅黄色，菌落类似于圆形，边缘不规则，皱褶状凸起，表面粗糙不透明。
本发明所述寡养单胞菌FT2的有效种序列优选如SEQ ID No.3所示：TCAGAGTGAACGCTGGCGGTAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGCAGCACAGTAAGAGCTTGCTCTTATGGGTGGCGAGTGGCGGACGGGTGAGGAATACATCGGAATCTACCTTTTCGTGGGGGATAACGTAGGGAAACTTACGCTAATACCGCATACGACCTTCGGGTGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCGGATAGATGAGCCGATGTCGGATTAGCTAGTTGGCGGGGTAAAGGCCCACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATACCGCGTGGGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCCCTTTTGTTGGGAAAGAAAAGCAGTCGATTAATACTCGGTTGTTCTGACGGTACCCAAAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGTGGTTGTTTAAGTCTGTTGTGAAAGCCCTGGGCTCAACCTGGGAATTGCAGTGGATACTGGGCGACTAGAGTGTGGTAGAGGGTAGTGGAATTCCCGGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATCGGGAGGAACATCCATGGCGAAGGCAGCTACCTGGACCAACACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGCGAACTGGATGTTGGGTGCAATTTGGCACGCAGTATCGAAGCTAACGCGTTAAGTTCGCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATGTCGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCGAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCTAAGGAGACCGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTACTACAATGGTAGGGACAGAGGGCTGCAAACCCGCGAGGGCAAGCCAATCCCAGAAACCCTATCTCAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGAAGCAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTTGCCACGGTGTGGCCGATGACTGGGGTGAAGTCGTA。
本发明所述寡养单胞菌FT2与寡养单胞菌属的有效种序列相似性最高，与嗜根寡养单胞菌的相似性为100％(图3)。因此，寡养单胞菌FT2属于寡养单胞菌属的成员。
本发明提供了一种具有广谱生防和促生作用的微生物肥料，所述微生物肥料的有效成分包括上述的寡养单胞菌FT2。在本发明中，所述寡养单胞菌FT2的浓度优选为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL，更优选为1×108CFU/mL～6.5×108CFU/mL，进一步优选为1×108CFU/mL～6×108CFU/mL。
本发明提供了一种具有广谱生防和促生作用的微生物菌剂，所述微生物菌剂的有效成分包括上述的寡养单胞菌FT2。在本发明中，所述寡养单胞菌FT2的浓度优选为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL，更优选为1×108CFU/mLL～6.5×108CFU/mL，进一步优选为1×108CFU/mL～6×108CFU/mL。
本发明所述寡养单胞菌FT2具有广谱生防和促生的作用。本发明具体实施例中通过培养基试验，利用该菌株抑制了山药叶点霉病菌、知母灰霉病菌、黄芩灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和当归根腐病菌的生长；通过发芽试验和温室盆栽试验证明该菌株可以促进药用植物甘草和牵牛种子萌发及植株生长，同时提高植物根际土壤酶活性及速效养分含量，增加土壤细菌数量。所以，本发明所述菌能够用于广谱生防和促生。
本发明提供了上述的菌株或上述微生物肥料或上述微生物菌剂在广谱生防和促生中的应用。在本发明中，所述广谱生防的病原菌优选包括真菌病原菌，进一步优选包括叶点霉病菌、灰霉病菌、枯萎病菌和根腐病菌，更优选包括山药叶点霉病菌(Phyllostictasp.)、知母灰霉病菌(Botrytis cinereaPers.)、当归根腐病菌(Fusarium acuminatum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum Sacc)和黄芩灰霉病菌(Scutellariae botrytis)；在本发明中，所述山药叶点霉病菌已公开于《Antifungal meroterpenes and dioxolanonederivatives fromplant-associated endophytic fungus Phyllosticta sp.WGHL2》(YanW,Zhao S,Gu C,et al.Fitoterapia,2021,148:104778)，所述知母灰霉病菌已公开于《Differential aggressiveness amongs Botrytis cinerea Pers.isolates inFragaria vesca L.cv.Albion》(Leiva-Mora M,Panimboza-Yanzapanta J G,Rivas-Figueroa F,et al.2019)，所述当归根腐病菌已公开于《Fusarium acuminatumAssociated with Root Rot of Ophiopogon japonicus(Linn.f.)in China》(Tang T,Wang F,Guo J,et al.Plant Disease,2020.)，所述黄瓜枯萎病菌已公开于《SuitableIntegrated Approach for Management of Fusarium Wilt of Tomato caused byFusarium oxysporum f.sp.lycopersici(Sacc.)》(Lal K,Singh P,Biswas S K,etal.Journal of Pure and Applied Microbiology,2017,11(2):953-961)，黄芩灰霉病菌已公开于《黄芩灰霉病发生规律及药效试验》(张新燕，刘海光，赵淑珍，等.北方园艺，2010(13):209-211)，本发明对所述真菌病原菌的来源没有特殊限定。
在本发明中，所述促生的植物优选包括药用植物，更优选包括甘草和牵牛。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
寡养单胞菌FT2的分离
选取健康、籽粒饱满的甘草种子，用质量百分含量为85％的浓硫酸溶液浸湿种子45min，不定时搅拌，无菌水冲洗3次，接着用质量百分含量为0.1％的过氧化氢溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次，最后用无菌水浸泡3h，然后转入超净工作台中对种子进行表面消毒。在无菌条件下，用体积百分含量为75％乙醇溶液浸泡5min，质量百分含量为1％过氧化氢溶液浸泡30s，质量百分含量为5％次氯酸钠溶液浸泡10s，无菌水冲洗10次，最后，用无菌滤纸吸取种子表面的液体，放入研钵中，加入10mL无菌水研磨。取悬浮液200μL均匀涂布在NA固体培养基中，28℃人工气候箱中培养5d后挑取菌株单菌落划线纯化，获得一株纯培养的菌株。
实施例2
实施例1得到的菌株的鉴定
在LB培养基上划线接种实施例1得到的菌株，28℃恒温培养2～7d，记录菌落的颜色、形状、透明度以及表面边缘隆起程度等。参考《伯杰细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》测定实施例1得到的菌株的生理生化特性，生理生化特征见表2。
表2寡养单胞菌FT2菌株的部分生理生化特征
特征 结果 特征 结果 特征 结果
生化试验 碳源利用 氮源利用
MR试验 － D-甘露醇 + 尿素 －
V-P试验 － D-半乳糖 + 谷氨酰胺 +
柠檬酸盐试验 + D-木糖 － 甘氨酸 －
吲哚产生试验 + 蔗糖 + 硫酸铵 －
氧化酶 + D-葡萄糖 + 组氨酸 +
脂酶 － D-山梨醇 +
尿素酶 － D-果糖 －
过氧化氢酶 +
注：“+”表示阳性，“－”表示阴性。
由图2和表2记载的可知，本发明所述寡养单胞菌FT2菌株在LB培养基上呈淡黄色，菌落类似于圆形，边缘不规则，皱褶状凸起，表面粗糙不透明。寡养单胞菌FT2菌株不能使硝酸盐还原、淀粉水解，能产生H2S，能利用丙二酸，不能使明胶液化、牛奶胨化与凝固；生长pH范围为5.0～9.0，最适生长pH为7.0；温度耐受范围为15～37℃，最适生长温度为28℃；能生长在NaCl含量小于15％的培养基上。
采用DNA提取试剂盒(购买厂家为生工生物工程(上海)股份有限公司，货号为SK8255)提取细菌DNA，采用16S rDNA细菌通用引物对7F-1540(RCAGAGTTTGATCCTGGCTAGGAGGTGATCCAGCCGCA，SEQ ID No.1)和27F-1492(RAGTTTGATCMTGGCTCAGGGTTACCTTGTTACGACTT，SEQ ID No.2)进行PCR扩增。
PCR反应体系为：模板DNA 2μL，10×buffer(with Mg2+)5μL，d NTP(10mM)2μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL，每个引物(10μM)各2μL；反应参数：96℃1min，95℃10s，50℃5s，60℃4min，共25个循环。
PCR扩增后，采用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将扩增产物送至生工(上海)有限公司测序，经过NCBI数据库进行BLAST比对分析，利用MEGA7.0软件，设置Bootstrapvalues为1000，使用邻接法(Neighbor-Joining)构建系统发育树并进行系统发育分析。
序列比对如图3所示，实施例1得到的菌株与寡养单胞菌属的有效种序列相似性最高，与嗜根寡养单胞菌的相似性为100％。因此，寡养单胞菌FT2应属于寡养单胞菌属的成员，命名为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)FT2。
实施例3
寡养单胞菌FT2菌株的促生特性的测定
产IAA(吲哚乙酸)的能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落接种于含色氨酸0.5g/L的NA液体培养基(牛肉膏3g、蛋白胨10g，NaCl 5g，ddH2O 1L，pH 7.2～7.4)中，28℃、160r/min振荡培养3d，然后9000r/min离心10min，取2mL上清液和4mL Salkowski试剂(0.5mM FeCl3和50mL H2SO4混合)，28℃避光静置30min后颜色变红(图5中的a)，说明寡养单胞菌FT2菌株可以产IAA，测定OD530，为0.2522，同时绘制IAA标准曲线如表1和图4所示，将测定OD530代入标准曲线计算出IAA含量可达到8.732mg/L。
表1 IAA标准曲线数据
浓度(mg/) 0 5 10 15 20 25
OD<sub>530</sub> 0 0.157 0.308 0.42 0.553 0.689
产铁载体能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落接种于检测铁载体的通用CAS培养基平板上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的b所示，寡养单胞菌FT2菌株周围具有明显的黄色透明圈，则说明该菌株具有产铁载体的能力。
固氮作用
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落划线接种于Ashby无氮固体培养基(甘露醇10g、NaCl 0.2g，CaCO3 5g、KH2PO4 0.2g、FeSO4·7H2O 0.1g、CaSO4·2H2O 0.1g和琼脂20g)平板上，28℃培养2d观察菌株长势，如图5中的c所示，所示结果发现寡养单胞菌FT2菌株在无氮条件下长势良好，具有固氮活性。
产ACC脱氨酶活性
挑取菌株单菌落划线接种于ADF固体培养基(KH2P04 4g、Na2HPO4 6g、MgSO4·7H2O0.2g、FeSO4·7H2O 0.1g、H3BO3 10μg、MnSO4 10μg、ZnSO4 70μg、CuSO4 50μg、MoO3 10μg、葡萄糖2g、葡萄糖酸2g、柠檬酸2g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养2d后观察菌株长势，如图5中的h所示，结果发现寡养单胞菌FT2菌株转接3次后还能在以ACC为唯一氮源的培养基上生长，具有产ACC脱氨酶活性。
产NH3活性
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落接种于含10mL蛋白胨水(蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、ddH2O 1L，pH 7.6)的试管中，28℃培养2d，每管加入0.5mL Nessler's试剂，若出现黄褐色沉淀则说明具有产NH3活性，若无则不产NH3。如图5中的d所示，寡养单胞菌FT2菌株培养后显色反应呈阳性，说明寡养单胞菌FT2菌株具有产NH3的活性。
溶无机磷能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落点接于Pikovasky's溶磷培养基(NaCl 0.3g、MgSO4·7H2O 0.3g、MnSO4 0.03g、KCl 0.3g、(NH4)2SO4 0.5g、FeSO4·7H2O 0.03g、Ca3(PO4)25g、葡萄糖10g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的e所示，寡养单胞菌FT2菌株周围具有明显的溶磷圈，则说明该菌株具有溶无机磷的能力。
溶有机磷能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落点接于孟金娜有机磷培养基((NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、葡萄糖10g、FeSO4·7H2O 0.03g、MnSO4 0.03g、CaCO3 5g、MgSO4·7H2O0.3g、卵磷脂0.2g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的f所示，寡养单胞菌FT2菌株周围没有溶磷圈，则说明该菌株不具有溶有机磷的能力。
解钾能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落点接于解钾固体培养基(蔗糖5g、Na2HPO4 0.2g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeCl3 0.005g、CaCO3 0.1g、钾长石粉1g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的g所示，寡养单胞菌FT2菌株周围具有明显的透明水解圈，则说明该菌株具有解钾的能力。
产蛋白酶能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落点接于蛋白酶产生菌筛选培养基(脱脂奶粉15g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的i所示，寡养单胞菌FT2菌株周围具有明显的透明水解圈，则说明该菌株具有产蛋白酶的能力。
产纤维素酶能力
挑取寡养单胞菌FT2菌株单菌落点接于CMC培养基(CMC-Na 10g、KNO3 2g、MgSO4·7H2O 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、NaCl 0.5g、K2HPO4 1g、琼脂20g、ddH2O 1L)上，28℃培养5d后滴加0.5％刚果红溶液染色1h，然后用1moL/LNaCl溶液盖过平板脱色10min，菌落周围出现透明圈为阳性。如图5中的j所示，寡养单胞菌FT2菌株周围具有明显的透明水解圈，则说明该菌株具有产纤维素酶的能力。
实施例4
寡养单胞菌FT2对植物病原菌的抑制作用
采用平板对峙法，取培养5d的山药叶点霉病菌(Phyllosticta sp.)、知母灰霉病菌(Botrytis cinereaPers.)、当归根腐病菌(Fusarium acuminatum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum Sacc)和黄芩灰霉病菌(Scutellariae botrytis)，用0.6cm打孔器制成菌饼倒接于PDA平板中央，同时在距离菌饼中间1.5cm处的PDA平板相对称的两侧，用接种环挑取在NA固体培养基(3g牛肉膏、10g蛋白胨、5g NaCl，19g琼脂，ddH2O 1L，pH 7.2～7.4)上培养4h的寡养单胞菌FT2菌株单菌落，划直线接种寡养单胞菌FT2菌株，以仅接种病原菌的平板为对照，重复3次。28℃培养7d后采用十字交叉法测量抑菌圈直径。结果见表2。
表2寡养单胞菌FT2对5种植物病原菌的抑制作用
Figure BDA0003157398970000101
由图1和表2记载的可知，本发明寡养单胞菌FT2菌株对山药叶点霉病菌、知母灰霉病菌、当归根腐病菌、黄瓜枯萎病菌和黄芩灰霉病菌水稻纹枯病菌5种植物病原菌均具有抑菌作用。
实施例5
寡养单胞菌FT2菌株应用试验
菌悬液制备：挑取在NA固体平板上生长48h的寡养单胞菌FT2菌株单菌落，接种于250ml的NA液体培养基中，30℃，180rpm摇瓶培养2d，9000rpm离心收集菌体，无菌水调节菌体OD600＝1，此时菌体浓度约为108cfu/mL。
种子发芽试验
选取健康、籽粒饱满的甘草种子，用质量百分含量为85％的浓硫酸溶液浸湿种子45min，不定时搅拌，无菌水冲洗3次，接着用质量百分含量为0.1％的过氧化氢溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次后用上述制备的寡养单胞菌FT2菌株悬液浸泡6h，同时以无菌水处理作为对照，每个处理30粒种子，每处理4次重复。将浸泡后的种子在超净工作台中放入垫有一层纱布和一层滤纸的无菌培养皿上，加入10mL无菌水，放于室内自然光培养，第2d开始观察并记录甘草种子的发芽情况，发芽数连续2d不变之后停止统计。计算种子发芽率、发芽势、发芽指数和幼苗活力指数，结果见表3和图6。
发芽率(％)＝(种子发芽数/供试种子总数)×100％；
发芽势(GE，％)＝(种子发芽达到最高峰的发芽粒数/供试种子总数)×100；
发芽指数(GI)＝∑(Gt/Dt)；
式中，Gt为第t天发芽数，Dt为相应发芽天数；
幼苗活力指数(VI)＝幼苗生长量(长度或重量)×发芽指数。
表3寡养单胞菌FT2对甘草种子发芽特性的影响
处理 发芽势(％) 发芽指数 幼苗活力指数
CK 0.867 37.50 176.17
FT<sub>2</sub> 0.933 42.25 241.40
由图6和表3可知，采用菌悬液浸种处理后，甘草幼苗发芽率、发芽势、发芽指数、幼苗活力指数均有不同程度的增长。
温室盆栽试验
甘草种子的预处理与“种子发芽试验”相同，最后用无菌水代替菌悬液浸泡6h备用。牵牛种子先用次氯酸钠消毒10min，再用无菌水冲洗多次，洗净后于无菌水中浸泡6h备用。将浸泡后的种子均匀地播种于装有630g高压灭菌后沙子的发芽杯(12×12×6cm)中，整个试验期间保持沙子湿润，将其放于恒温培养箱中(温度为28℃，光照12h，无光照12h交替，相对湿度为50％)。甘草每个处理25粒种子，牵牛每个处理20粒种子，每处理4次重复。培养20天后，用上述制备的寡养单胞菌FT2菌悬液灌溉，每个处理寡养单胞菌FT2菌悬液的用量为50mL，以无菌水处理为对照。7d后对甘草和牵牛的生长情况进行记录、拍照(见图7)并测定以下生长及生理生化指标：
(1)生长指标测定
采收不同处理下的植株，用自来水冲洗干净，用滤纸吸去表面水分，直尺测定茎长、根长；游标卡尺测定茎粗、根粗；分析天平测定干重。
(2)土壤酶活及速效养分含量测定
土壤脲酶测定采用靛酚蓝比色法；蔗糖酶测定采用3，5-二硝基水杨酸比色法；磷酸酶测定采用磷酸苯二钠比色法；过氧化氢酶测定采用高锰酸钾滴定法。速效氮采用碱解扩散法；速效磷采用钼锑钪比色法。
(3)土壤细菌总数测定
土壤细菌数测定采用稀释平板法。
试验测定结果见表4、表5和图7。
表4不同处理对牵牛子和甘草生长指标的影响
Figure BDA0003157398970000121
注：表中数据为平均数±标准误.同列数据后不同字母表示在P＜0.05水平差异显著。
结果如表4和图7所示，与无菌水处理对照相比，寡养单胞菌FT2对牵牛子和甘草植株生长均有不同程度的促进作用，主要表现在植株的根长增加都十分显著。
表5不同处理对牵牛和甘草根际土壤酶活性、速效养分含量及细菌数量的影响
Figure BDA0003157398970000122
注：表中数据为平均数±标准误.同列数据后不同字母表示在P＜0.05水平差异显著。
结果如表5和图7所示，寡养单胞菌FT2的菌悬液对牵牛和甘草植株根际土的酶活、速效氮、速效磷及细菌数量的影响均大于无菌水对照处理，主要表现在对牵牛和甘草植株根际土速效氮和细菌总数的促进作用都十分显著。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 宁夏医科大学
<120> 寡养单胞菌FT2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
rcagagtttg atcctggcta ggaggtgatc cagccgca 38
<210> 2
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ragtttgatc mtggctcagg gttaccttgt tacgactt 38
<210> 3
<211> 1481
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcagagtgaa cgctggcggt aggcctaaca catgcaagtc gaacggcagc acagtaagag 60
cttgctctta tgggtggcga gtggcggacg ggtgaggaat acatcggaat ctaccttttc 120
gtgggggata acgtagggaa acttacgcta ataccgcata cgaccttcgg gtgaaagcag 180
gggaccttcg ggccttgcgc ggatagatga gccgatgtcg gattagctag ttggcggggt 240
aaaggcccac caaggcgacg atccgtagct ggtctgagag gatgatcagc cacactggaa 300
ctgagacacg gtccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga caatgggcgc 360
aagcctgatc cagccatacc gcgtgggtga agaaggcctt cgggttgtaa agcccttttg 420
ttgggaaaga aaagcagtcg attaatactc ggttgttctg acggtaccca aagaataagc 480
accggctaac ttcgtgccag cagccgcggt aatacgaagg gtgcaagcgt tactcggaat 540
tactgggcgt aaagcgtgcg taggtggttg tttaagtctg ttgtgaaagc cctgggctca 600
acctgggaat tgcagtggat actgggcgac tagagtgtgg tagagggtag tggaattccc 660
ggtgtagcag tgaaatgcgt agagatcggg aggaacatcc atggcgaagg cagctacctg 720
gaccaacact gacactgagg cacgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt 780
agtccacgcc ctaaacgatg cgaactggat gttgggtgca atttggcacg cagtatcgaa 840
gctaacgcgt taagttcgcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaat 900
tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagtat gtggtttaat tcgatgcaac gcgaagaacc 960
ttacctggtc ttgacatgtc gagaactttc cagagatgga ttggtgcctt cgggaactcg 1020
aacacaggtg ctgcatggct gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc 1080
aacgagcgca acccttgtcc ttagttgcca gcacgtaatg gtgggaactc taaggagacc 1140
gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt catcatggcc cttacgacca 1200
gggctacaca cgtactacaa tggtagggac agagggctgc aaacccgcga gggcaagcca 1260
atcccagaaa ccctatctca gtccggattg gagtctgcaa ctcgactcca tgaagtcgga 1320
atcgctagta atcgcagatc agcattgctg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1380
ccgcccgtca caccatggga gtttgttgca ccagaagcag gtagcttaac cttcgggagg 1440
gcgcttgcca cggtgtggcc gatgactggg gtgaagtcgt a 1481

Claims (10)

1.一株具有广谱生防和促生作用的寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)FT2，其特征在于，所述的寡养单胞菌FT2的保藏编号为CGMCC No.21379。
2.一种具有广谱生防和促生作用的微生物肥料，其特征在于，所述微生物肥料的有效成分包括权利要求1所述的寡养单胞菌FT2。
3.根据权利要求2所述的微生物肥料，其特征在于，所述寡养单胞菌FT2的浓度为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL。
4.一种具有广谱生防和促生作用的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的有效成分包括权利要求1所述的寡养单胞菌FT2。
5.根据权利要求4所述微生物菌剂，其特征在于，所述的寡养单胞菌FT2的浓度为1×108CFU/mL～7×108CFU/mL。
6.权利要求1所述的菌株或权利要求2或3所述微生物肥料或权利要求4或5所述微生物菌剂在广谱生防和促生中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述广谱生防的病原菌包括真菌病原菌。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述真菌病原菌包括叶点霉病菌、灰霉病菌、枯萎病菌和根腐病菌。
9.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述促生的植物包括药用植物。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述药用植物包括甘草和牵牛。
CN202110782126.9A 2021-07-12 2021-07-12 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用 Active CN113293117B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110782126.9A CN113293117B (zh) 2021-07-12 2021-07-12 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110782126.9A CN113293117B (zh) 2021-07-12 2021-07-12 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113293117A true CN113293117A (zh) 2021-08-24
CN113293117B CN113293117B (zh) 2022-04-12

Family

ID=77330743

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110782126.9A Active CN113293117B (zh) 2021-07-12 2021-07-12 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113293117B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115287225A (zh) * 2022-06-29 2022-11-04 昆明学院 一株寡养单胞菌菌株kc098，其发酵液及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434472A (zh) * 2016-10-18 2017-02-22 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种寡养单胞菌及其应用
CN112592850A (zh) * 2020-12-08 2021-04-02 北京农业生物技术研究中心 一株促进百合生长发育和/或拮抗百合病原菌的寡养单胞菌及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434472A (zh) * 2016-10-18 2017-02-22 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种寡养单胞菌及其应用
CN112592850A (zh) * 2020-12-08 2021-04-02 北京农业生物技术研究中心 一株促进百合生长发育和/或拮抗百合病原菌的寡养单胞菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邓振山: "巨菌草内生细菌多样性及其促生特性", 《草地学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115287225A (zh) * 2022-06-29 2022-11-04 昆明学院 一株寡养单胞菌菌株kc098，其发酵液及应用
CN115287225B (zh) * 2022-06-29 2023-06-02 昆明学院 一株寡养单胞菌菌株kc098，其发酵液及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113293117B (zh) 2022-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100940615B1 (ko) 토양 처리용 미생물 및 이를 얻기 위한 방법
CN105886428A (zh) 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用
CN113621532B (zh) 含耐盐碱副地衣芽孢杆菌的复合微生物菌剂及其制备方法
CN107593769B (zh) 巨大芽孢杆菌yjb3在促进植物生长和生防中的应用
Dastager et al. Characterization of plant growth-promoting rhizobacterium Exiguobacterium NII-0906 for its growth promotion of cowpea (Vigna unguiculata)
CN114480183B (zh) 阿氏芽孢杆菌hz18-3及其用途
CN109280628B (zh) 一种肠杆菌菌种及其在促进毛竹生长中的应用
CN101230327B (zh) 一株可产生铁载体的植物病原真菌拮抗菌及其应用
CN108048360B (zh) 一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌
CN113875548A (zh) 贝莱斯芽孢杆菌bv03在制备促进蔬菜生长的育苗基质中的应用
CN111172071B (zh) 一株可提高酸性土壤pH值的拮抗细菌及其菌剂的制备和应用
CN104818231A (zh) 一种产acc脱氨酶的拮抗促生长的假单胞菌及其应用
CN113293117B (zh) 寡养单胞菌ft2及肥料和菌剂在广谱生防和促生中的应用
CN105018367B (zh) 一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌
CN113755397B (zh) 一株具广谱拮抗性的解淀粉芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用
CN111019841B (zh) 一株多功能里氏木霉及其应用
Arshad et al. Isolation and identification of chromium-tolerant bacterial strains and their potential to promote plant growth
CN108130303B (zh) 一株沃氏食酸菌tcp2011036及其应用
CN117165475A (zh) 一株蜡样芽孢杆菌及其应用
CN114874953B (zh) 一株花生根际生防菌—贝莱斯芽孢杆菌sw-1及其应用
CN114874948B (zh) 一株高地芽孢杆菌hmqau20091、菌剂及其制备方法和应用
CN107189964B (zh) 拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基
CN112481173B (zh) 一株产吲哚乙酸的植物内芽孢杆菌gbw-f008及其应用
CN115558615A (zh) 一种耐胁迫促生复合微生物菌剂及其应用
CN109762766A (zh) 一株具有吸附重金属、解磷及植物益生的细菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant