CN113288875A - 一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法 - Google Patents

一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法，本方法通过溶出试验获得金霉素过瘤胃颗粒药物在体外的崩解、释放过程，并与药物在体内的吸收过程和对瘤胃菌群的影响建立相关性，从而制定药物在体外的溶出限度为：在模拟瘤胃液中，5小时内的释放度低于25％，且在模拟真胃液中，2小时内的释放度大于85％。以本发明的溶出限度为质量标准，通过对金霉素过瘤胃制剂产品体外溶出的评价，进而控制制剂生产的产品质量，保证不同生产批次产品的体内过程的一致性。

Description

一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域，更具体地，涉及一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法。
背景技术
口服固体制剂在胃肠道有一个溶出和吸收的过程，兽用口服给药的抗菌药物要求药物随食物在瘤胃滞留时间内尽可能不释放，或释放的药物量不影响菌群发育生长，并在真胃及小肠前段完全释放，以降低抗菌药物对瘤胃菌群的影响避免影响其消化代谢功能，又可保证小肠段对药物的吸收。
体外溶出度检查是评价制剂质量和工艺的一种重要的手段,通过模拟口服固体制剂在胃肠道崩解和溶出的体外试验，可从一定程度上反映制剂间工艺、生物利用度等差异。目前尚无对反刍动物过瘤胃颗粒的质量评价控制方法，无法评价抗菌药物是否对瘤胃微生物有影响，也无法保证药物的体内释放、吸收过程。研究表明反刍动物瘤胃pH在6.8左右，真胃pH在1.2左右。因此，有必要通过抗菌制剂体外溶出与体内相关性，制定一种合适的体外溶出限度，以满足金霉素过瘤胃颗粒在模拟瘤胃环境(pH 6.8)中尽可能不释放，在模拟真胃环境(pH 1.2)中完全释放，以尽可能减少药物对瘤胃菌群的影响，同时又可尽可能多的吸收进入体内，保证金霉素过瘤胃颗粒在反刍动物的体内过程，为制剂生产和质量评价提供依据。
金霉素是广谱抗生素，其抗菌机理与其他四环素类药物相似，主要是通过抑制敏感微生物的蛋白质合成而起作用。近年相关报道2～3月龄羊羔常有发生大肠杆菌导致的羔羊腹泻，此时羊羔瘤胃基本发育完善，但瘤胃菌群相比较成年羊群更加敏感。反刍动物瘤胃微生物(瘤胃细菌、瘤胃真菌等)能消化纤维类饲料并将其转化为反刍动物自身所需营养物质，瘤胃微生物菌群的平衡对反刍动物的生长健康起着重要作用。抗菌药物在瘤胃中会对瘤胃细菌多样性及菌群组成结构产生影响，长时间使用金霉素会干扰纤维素消化瘤胃环境，从而可能导致动物不反刍、瘤胃鼓胀，消化障碍等一系列不良的反应，影响瘤胃正常的发酵降解。美国食品药品监督管理局(FDA)已批准金霉素用于牛、羊等反刍动物，主要用于治疗大肠杆菌导致的犊牛腹泻和弯曲杆菌导致的绵羊流产等，但尚未见控制制剂产品生产质量，以达到在治疗疾病的同时减少对瘤胃菌群影响的方法的相关报道。
本发明通过提供一种金霉素过瘤胃颗粒质量评价控制方法，通过体外溶出过程与体内的吸收过程和对瘤胃菌群的关系的建立，制定合适的溶出限度，以保证药物的体内过程，减少药物对瘤胃菌群的影响，控制金霉素过瘤胃颗粒的产品工艺与质量。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中金霉素过瘤胃制剂进入反刍动物体内后，因制剂本身释放行为不一致导致其在体内行为的不确定性的不足，提供一种通过溶出限度评价和控制产品质量的方法。
本发明的第一个目的是提供一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒。
本发明的第二个目的是提供所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度测定方法。
本发明的第三个目的是提供一种金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
本发明提供了一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒，所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度为：在模拟瘤胃液中，5小时内的释放度低于30％，且在模拟真胃液中，2小时内的释放度大于80％；
所述金霉素过瘤胃颗粒由金霉素原料药和辅料制备得到，所述辅料包含单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和氢化油中的一种或几种。
优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度为：在模拟瘤胃液中，5小时内体外释放度低于25％；在模拟真胃液中，2小时内释放度大于85％。
优选地，所述模拟瘤胃液为pH＝6.5～7.0的磷酸缓冲液，所述模拟真胃液为pH＝1.0～1.5的盐酸缓冲液。
优选地，所述模拟瘤胃液为pH＝6.8的磷酸缓冲液，所述模拟真胃液为pH＝1.2的盐酸缓冲液。
更优选地，pH＝6.8的磷酸缓冲液的配制方法为：取0.1mol/L盐酸溶液和250mL的0.2mol/L磷酸钠溶液按照3：1比例混合(缓冲液用2mol/L盐酸溶液和0.2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，摇匀后超声。
更优选地，所述pH＝1.2的盐酸缓冲液的配制方法为：取250mL的0.2mol/L氯化钾溶液置于1000mL的容量瓶中，再取425mL浓度为0.2mol/L的盐酸溶液，加水定容，摇匀后超声。
优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒由金霉素原料药和辅料制备得到，所述辅料包含单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和氢化油。
优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒的粒径范围为20～80目。
更优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒的粒径范围为40～60目。
更优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒的制备方法为：先将辅料加热至90～120℃融化，然后加入金霉素原料药，混匀；待混合物降温至70～85℃后进行流化床喷雾制粒球化，然后收集40～60目的金霉素过瘤胃颗粒；所述制粒球化的流化空气温度为5℃，所述流化床喷雾液滴的线速度为20～80米/秒；。
本发明还要求保护所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度测定方法，将溶出介质和金霉素过瘤胃颗粒加入到溶出装置中进行释溶，在释溶过程中，分别在1～2小时、4～6小时内的两个时间点进行取样，过滤后分别以滤液和滤渣为供试品，然后采用高效液相色谱法测定供试品中金霉素的浓度，计算金霉素过瘤胃颗粒的释放度；
所述溶出介质为模拟瘤胃液、模拟真胃液；高效液相色谱法的检测条件为：C18色谱柱；流动相：以体积比计，水：2mol/L磷酸溶液：N，N-二甲基甲酰胺＝(650～750)：(15～25)：(250～300)；紫外检测波长：350～370nm；柱温：34～36℃；流速：1.0mL/min；进样量：5～10μL。
优选地，所述金霉素过瘤胃颗粒和溶出介质的用量比为10mg：900～1000ml。
更优选地，金霉素过瘤胃颗粒和溶出介质的用量比为10mg：1000ml。
优选地，所述溶出介质分别为pH＝6.5～7.0的磷酸缓冲液、pH＝1.0～1.5的盐酸缓冲液。
优选地，所述溶出介质分别为pH＝6.8的磷酸缓冲液、pH＝1.2的盐酸缓冲液。
优选地，在释溶过程中，分别在2小时、5小时的两个时间点进行取样；其中，在盐酸缓冲液中，取样时间点为2小时；在磷酸缓冲液中，取样时间点为5小时。
优选地，所述释溶的溶出条件为36～38℃，篮法50～100转/分钟。
更优选地，所述释溶的溶出条件为37℃，篮法100转/分钟。
优选地，所述高效液相色谱法的检测条件为：C18色谱柱；流动相：以体积比计，水：2mol/L磷酸溶液：N，N-二甲基甲酰胺＝700：20：280；紫外检测波长：365nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
优选地，按公式(Ⅰ)计算金霉素过瘤胃颗粒的释放度：
Figure BDA0003049391840000041
公式(Ⅰ)中K为释放百分数；C表示取样时间点所取溶出液中金霉素的质量浓度；V为溶出介质体积；m表示用于溶出试验的药物的质量，ω表示所取溶出液中金霉素的质量分数。
本发明还要求保护一种金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法，利用以上任一所述的溶出限度测定方法测定颗粒的释放度，若颗粒的释放度符合权利要求1或2中所述的溶出限度，则判定为合格的金霉素过瘤胃颗粒。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明建立了一种以溶出限度为依据的反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制标准，通过药物体外溶出度与在体内的药动学过程和对瘤胃菌群的影响建立相关性，进而制定适合的控制产品质量的溶出限度要求。其中，反刍动物用金霉素过瘤胃制剂在满足以下溶出限度时，药物对瘤胃菌群影响较小，可以实现过瘤胃的效果，同时药物又可完全释放：在模拟瘤胃液中，5小时内的释放度应小于25％，在模拟真胃液中，2小时内的释放度应大于85％。
本发明的方法适用于测定由金霉素原料药、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和氢化油制备的反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制。本发明通过提供一种金霉素过瘤胃颗粒质量评价控制方法，通过溶出限度与体内瘤胃菌群的关系保证药物在体内的代谢过程，减少药物对瘤胃菌群的影响，控制金霉素过瘤胃颗粒的产品工艺与质量，保证产品的质量可控。以本发明的溶出限度为质量标准，通过对金霉素过瘤胃制剂产品体外溶出的评价，进而控制制剂生产的产品质量，保证不同生产批次产品的体内过程的一致性。
附图说明
图1为金霉素过瘤胃颗粒在羊体内的药动学结果图。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1金霉素过瘤胃颗粒的体外溶出限度测定
一、试验方法
1、金霉素过瘤胃颗粒的组成及制备
金霉素过瘤胃颗粒的组成包括金霉素原料药和辅料，辅料为单硬脂酸甘油酯、PEG4000和氢化油。
制法：将辅料中的的单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和氢化油加热至90～120℃融化，然后加入金霉素原料药，混匀；待混合物冷却至70～85℃后进行流化床喷雾制粒球化阶段，所述制粒球化阶段的流化空气温度为5℃，所述流化床喷雾液滴的线速度为20～80米/秒；收集40～60目的金霉素过瘤胃颗粒。
2、金霉素过瘤胃颗粒的体外溶出试验
按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)溶出度测定法第一法(篮法)，将称取好的金霉素过瘤胃颗粒和金霉素预混剂(以金霉素本品计约各10mg)，分别投于干燥的转篮内，每个溶出杯分别加入1000mL pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液进行体外溶出试验；其中，pH1.2盐酸缓冲液溶出介质模拟真胃环境，pH6.8磷酸缓冲液模拟瘤胃环境。溶出条件设定为为37℃，100转/min。分别在对应时间点对溶出液和滤渣进行取样，溶出液经过滤后取续滤液；滤渣用少量水冲洗2次，滤干。
将滤渣转移至50ml容量瓶中，加2mol/L的盐酸溶液2ml浸润，然后用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，置于磁力搅拌器上搅拌30分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰，计算各个时间点的金霉素浓度后按公式(Ⅰ)计算释放度(％)，
Figure BDA0003049391840000051
公式(Ⅰ)中K为释放百分数；C表示取样时间点所取溶出液中金霉素的质量浓度；V为溶出介质体积；m表示用于溶出试验的药物的质量，ω表示所取溶出液中金霉素的质量分数。
在pH1.2盐酸缓冲液的取样时间点为2小时；在pH6.8磷酸缓冲液的取样时间为5小时。
高效液相色谱法的检测条件为：C18色谱柱；流动相：以体积比计，水：2mol/L磷酸溶液：N，N-二甲基甲酰胺＝700：20：280；紫外检测波长：365nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
pH1.2盐酸缓冲液的配制方法：精密移取250mL的0.2mol/L氯化钾溶液置于1000mL的容量瓶中，再准确移取425mL浓度为0.2mol/L的盐酸溶液，加水定容，摇匀后超声。
pH 6.8的磷酸缓冲液的配制方法为：量取0.1mol/L盐酸溶液和250mL的0.2mol/L磷酸钠溶液按照3：1比例混合(缓冲液用2mol/L盐酸溶液和0.2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8)摇匀后超声。
二、试验结果
在pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液的溶出介质下，金霉素过瘤胃颗粒的释放度见表1所示。结果表明，金霉素过瘤胃颗粒在模拟瘤胃液中(pH6.8磷酸缓冲液)，5小时内的体外释放度不超过25％(如7.40％)，而金霉素预混剂的释放度达70.37％；在模拟真胃液中(pH1.2盐酸溶液)中，2小时内释放度大于85％(例如99.62％)。
说明金霉素预混剂没有具备过瘤胃的效果，而本发明的金霉素过瘤胃颗粒在瘤胃环境中几乎不释放，在真胃环境中完全释放，可避免药物提前释放对瘤胃菌群的影响，保护瘤胃环境。本发明确立的体外溶出限度对金霉素过瘤胃颗粒的研制和体外处方筛选提供了合理的方法参考，大大节约了药物筛选的成本和时间。
表1金霉素过瘤胃颗粒在溶出介质为pH1.2盐酸溶液和pH6.8磷酸缓冲液中的释放度
Figure BDA0003049391840000061
实施例2金霉素过瘤胃颗粒在羊体内的药动学试验和对瘤胃菌群数量的影响
为了验证实施例1中的方法所测定的金霉素过瘤胃颗粒溶出限度的合理性和准确性，本发明对金霉素过瘤胃颗粒进行动物体内的药动学试验和对瘤胃菌群数量的影响试验，判断过瘤胃效果。
一、试验方法
1、金霉素过瘤胃颗粒在羊体内的药动学试验
将16头黑头大尾×黑头杜泊羊随机地、平均分为两组，每组八头，按下表方式给药：
Figure BDA0003049391840000071
于给药后第15、30、45分钟、1、2、3、4、5、6、8、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120小时从羊颈静脉采集血液样本5mL，采集后置于一次性肝素钠管中，4000转/分钟离心10分钟后取血浆样品置于-80℃冰箱保存至分析。
血浆样品自然解冻后摇匀，准确吸取0.5mL血浆于15mL塑料离心管中，加入5mL提取液EDTA-McIlvaine缓冲液，旋涡混匀1min，水浴超声10min，摇床振荡10min后，于4℃下8000r/min离心10min，取上清液待净化。用3mL甲醇和超纯水以自然流速依次过柱活化HLBSPE小柱，待净化的提取液以自然流速过柱，提取液流出后，3mL超纯水淋洗，负压抽干后用2mL甲醇洗脱2次，合并2次洗脱液。洗脱液于35℃水浴下氮气吹干、1mL甲醇复溶后，转至2mL离心管，于4℃下14000r/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS测定。
复溶后的样品按如下高效液相色谱串联质谱条件进行样品检测：
色谱柱：CNW Athena C18 WP(150mm×2.1mm，5μm)，上海安谱公司。流动相：C相为0.1％的甲酸水，B相为乙腈；柱温：20℃；流速：0.25ml/min；进样量：5.0μL；离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测模式(MRM)；电喷雾电压(IS)：4500V；雾化气压力(GS1)：55psi；辅助气压力(GS2)：55psi；气帘气压力(CUR)：20psi；离子源温度(TEM)：550℃；碰撞室压力(CAD)：6psi；计算金霉素过瘤胃颗粒在羊体内各个时间点的血药浓度。
2、金霉素过瘤胃颗粒对瘤胃菌群数量的影响试验
将24头黑头大尾×黑头杜泊羊随机地、平均分为三组，每组八头，按下表方式给药：
Figure BDA0003049391840000081
每个给药剂量组按25mg/kg灌胃给药，每天晨饲前给药。连续给药5d后对3组绵羊进行瘤胃食糜采集，采集的瘤胃食糜均迅速经4层纱布过滤，保留滤液于液氮中，之后于-80℃保存。之后运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术对绵羊瘤胃液相瘤胃微生物进行定量检测。
二、试验结果
1、金霉素过瘤胃颗粒在猪体内的药动学结果
金霉素过瘤胃颗粒和金霉素预混剂在羊体内各个时间点的血药浓度如图1所示，主要药动参数及滞后时间分别如表2和表3所示。结果显示，金霉素过瘤胃颗粒在符合实施例1的pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液中的溶出限度的条件下，其滞后时间较大(表2)，表明药物在瘤胃中未能大量释放，在真胃中完全释放后才被肠道吸收，所以药物被吸收时间才会有较大时滞。而且金霉素过瘤胃颗粒的药时曲线下面积与文献报道的非反刍动物猪(《金霉素微囊颗粒在猪体内的比较药动学研究》)相似，表明其瘤胃环境对药物的释放无影响，药物最终吸收的量与无瘤胃动物接近。
而金霉素预混剂在不符合实施例1的pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液中的溶出限度的条件下，其滞后时间较小(表3)，表明药物在瘤胃中会大量释放，不能达到过瘤胃释放的目的。
表2禁食羊灌胃口服金霉素过瘤胃颗粒剂后的药代动力学参数
Figure BDA0003049391840000082
表3禁食羊灌胃口服金霉素预混剂后的药代动力学参数
Figure BDA0003049391840000091
2、金霉素过瘤胃颗粒对瘤胃菌群数量的影响结果
金霉素过瘤胃颗粒和金霉素预混剂对瘤胃菌群数量的影响试验结果如表4所示。结果显示，金霉素过瘤胃颗粒在满足实施例1的pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液中的溶出限度的条件下，其瘤胃菌群数量与空白对照差异不显著，表明金霉素过瘤胃颗粒具有良好的过瘤胃效果，药物对瘤胃菌群基本无影响。
而金霉素预混剂在不满足实施例1的pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液中的溶出限度的条件下，与空白对照相比，产琥珀酸拟杆菌和牛链球菌显著减少，表明金霉素预混剂不具有过瘤胃效果，药物对瘤胃菌群会产生影响。
表4金霉素过瘤胃颗粒对瘤胃菌群数量的影响结果
Figure BDA0003049391840000092
注：数据后上标不同小写字母表示组间差异显著，上标相同小写字母表示组间差异不显著。
以上结果说明，本发明实施例1体外溶出限度测定方法所测定的金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度结果与体内药动学结果一致。因此，可根据本发明的体外溶出限度测定方法，制定金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度为：其在瘤胃环境中(pH6.8磷酸缓冲液)5小时内体外释放度不超过25％(如7.40％)；在真胃环境中(pH1.2盐酸溶液)中2小时释放度大于85％(例如99.62％)。
以上实施例说明在本发明的体外溶出限度测定的评价体系下满足以上溶出限度的金霉素过瘤胃颗粒具有良好的过瘤胃效果，说明可以用本发明的体外溶出数据来预测每一批次的金霉素过瘤胃颗粒药物在体内的过瘤胃效果，所以本发明研发制定的溶出限度可用于固体分散法制备的金霉素过瘤胃颗粒的质量控制和工艺分析，为金霉素过瘤胃颗粒的研制和体外处方筛选提供了合理的方法参考。
对比例1普通金霉素颗粒(溶出度不符合实施例1的溶出限度)
该对比例的体外溶出限度测定方法、对瘤胃菌群数量的影响试验和实施例1、2基本相同，不同之处在于：金霉素颗粒由以下原料制备得到：
金霉素颗粒①的组成包括金霉素原料药和辅料，辅料为氢化油。
金霉素颗粒②的组成包括金霉素原料药和辅料，辅料为PEG4000、单硬脂酸甘油酯。
金霉素颗粒①、②的体外释放度结果如表5所示，金霉素颗粒①、②在pH1.2盐酸溶液的释放度分别为98.84％、98.05％，在pH6.8磷酸缓冲液中的释放度分别为37.38％、47.81％，不满足实施例1的溶出限度条件，其滞后时间较小，药物在瘤胃中会大量释放，不能达到过瘤胃释放的目的；对瘤胃菌群数量的影响试验结果如表6所示，与空白对照相比，金霉素颗粒①组的产琥珀酸拟杆菌和牛链球菌显著减少，金霉素颗粒②组的产琥珀酸拟杆菌显著减少，表明溶出度不符合实施例1的溶出限度的金霉素颗粒①、②不具有过瘤胃效果，药物对瘤胃菌群会产生影响。
表5金霉素颗粒在溶出介质为pH1.2盐酸溶液和pH6.8磷酸缓冲液中的溶出释放度
Figure BDA0003049391840000101
表6金霉素过瘤胃颗粒对瘤胃菌群数量的影响结果
Figure BDA0003049391840000102
注：数据后上标不同小写字母表示组间差异显著，上标相同小写字母表示组间差异不显著。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒，其特征在于，所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度为：在模拟瘤胃液中，5小时内的释放度低于30％，且在模拟真胃液中，2小时内的释放度大于80％；
所述金霉素过瘤胃颗粒由金霉素原料药和辅料制备得到，所述辅料包含单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和氢化油中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的金霉素过瘤胃颗粒，其特征在于，所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度为：在模拟瘤胃液中，5小时内体外释放度低于25％；在模拟真胃液中，2小时内释放度大于85％。
3.根据权利要求1或2所述的金霉素过瘤胃颗粒，其特征在于，所述模拟瘤胃液为pH＝6.5～7.0的磷酸缓冲液，所述模拟真胃液为pH＝1.0～1.5的盐酸缓冲液。
4.根据权利要求3所述的金霉素过瘤胃颗粒，其特征在于，所述模拟瘤胃液为pH＝6.8的磷酸缓冲液，所述模拟真胃液为pH＝1.2的盐酸缓冲液。
5.权利要求1或2所述金霉素过瘤胃颗粒的溶出限度测定方法，其特征在于，将溶出介质和金霉素过瘤胃颗粒加入到溶出装置中释溶，在溶出过程中，分别在1～2小时、4～6小时内的两个时间点进行取样，过滤后分别以滤液和滤渣为供试品，然后采用高效液相色谱法测定供试品中金霉素的浓度，计算金霉素过瘤胃颗粒的释放度；
所述溶出介质为模拟瘤胃液、模拟真胃液；高效液相色谱法的检测条件为：C18色谱柱；流动相：以体积比计，水：2mol/L磷酸溶液：N，N-二甲基甲酰胺＝(650～750)：(15～25)：(250～300)；紫外检测波长：350～370nm；柱温：34～36℃；流速：1.0mL/min；进样量：5～10μL。
6.根据权利要求5所述的溶出限度测定方法，其特征在于，所述金霉素过瘤胃颗粒中的金霉素和溶出介质的用量比为10mg：900～1000ml。
7.根据权利要求5所述的溶出限度测定方法，其特征在于，所述溶出介质分别为pH＝6.5～7.0的磷酸缓冲液和pH＝1.0～1.5的盐酸缓冲液。
8.根据权利要求7所述的溶出限度测定方法，其特征在于，所述溶出介质分别为pH＝6.8的磷酸缓冲液和pH＝1.2的盐酸缓冲液。
9.根据权利要求5所述的溶出限度测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的检测条件为：C18色谱柱；流动相：以体积比计，水：2mol/L磷酸溶液：N，N-二甲基甲酰胺＝700：20：280；紫外检测波长：365nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
10.一种金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法，其特征在于，利用权利要求5～9任一所述的溶出限度测定方法测定颗粒的释放度，若颗粒的释放度符合权利要求1或2中所述的溶出限度，则判定为合格的金霉素过瘤胃颗粒。
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