CN113262298A

CN113262298A - 含有trpv2激动剂的疫苗佐剂及其用途

Info

Publication number: CN113262298A
Application number: CN202110342847.8A
Authority: CN
Inventors: 刘万里; 赵萌; 张敬仁; 张林琦; 李翠峰; 刘亚萍; 安浩然
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2020-03-31
Filing date: 2021-03-30
Publication date: 2021-08-17
Also published as: CN111281973A; WO2021197346A1

Abstract

本发明提出了含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂及其用途，所述疫苗佐剂包括：TRPV2激动剂。本发明含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强抗体免疫应答，尤其适用于预防和治疗携带荚膜多糖的致病菌(以肺炎球菌为代表)、霍乱弧菌肠毒素或新冠病毒引发的疾病，具有较好的应用前景。

Description

含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂及其用途

技术领域

本发明涉及医药领域。具体地，本发明涉及含有TRPV2的疫苗佐剂及其用途。

背景技术

肺炎链球菌感染是全世界儿童死亡的主要原因，也是公认的全球严重的公共卫生问题之一。肺炎链球菌是一种革兰氏阳性双球菌，它通常寄生在健康人的鼻咽部，正常情况下并不致病，但是当人机体抵抗力下降或者其他病毒引起的呼吸道感染等情况出现时，可突破粘膜防御体系，引起儿童和成人的广泛感染，包括侵袭性(脑膜炎、细菌血症和细菌性肺炎)和非侵袭性感染(非细菌性肺炎、中耳炎、鼻窦炎和结膜炎)。侵袭性肺炎链球菌感染是肺炎发病和死亡的主要原因。据估计，2008年全球范围内，年龄在5岁以下的儿童约 43万名儿童死于肺炎链球菌感染。对于肺炎感染后的控制，普遍采用抗生素治疗，适当的使用抗生素可以有效减少肺炎感染后的死亡率。但是，对于医疗资源匮乏和治疗经验不足的地区，在肺炎发生时，无法甄别出感染的确定致病性病原体，会导致非有效的抗生素过度使用。不当使用抗生素会导致耐药细菌株的出现和发展，这会严重威胁到公共卫生安全。细菌的进化已经超过了我们能有效应对的能力，不仅仅是肺炎链球菌，以肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、致病性大肠杆菌为代表的耐多药(MDR)革兰氏阴性菌，全球范围内能在临床应用并有效抑制的候选药物已经是寥寥无几。

基于耐多药(MDR)细菌的急剧增加以及新型抗生素开发陷入瓶颈阶段，目前，迫切需要替代方法。疫苗可以通过减少病例总数来减少疾病的流行，进而有效地减少对抗菌药物的使用。因此能够通过疫苗预防肺炎，是现如今目前非常迫切的需求，也是预防肺炎的最有效手段。以肺炎球菌为例，它的的荚膜多糖是主要的毒力因子，根据荚膜多糖的组成，可以把肺炎球菌分为不同的血清型，截至目前已发现90多种血清型。荚膜多糖是一种多价分子表现出重复结构，与此同时它也被认为是肺炎球菌疫苗研发的重要靶标。人们普遍认为因为多糖抗原不能通过主要的组织相容性复合物进行加工和呈递，进而不会诱导T淋巴细胞辅助的B淋巴细胞抗体亚型转换，所以肺炎球菌荚膜多糖是典型的T淋巴细胞非依赖性抗体应答2型抗原。B细胞介导的抗体应答对于人类健康是至关重要的，多糖抗原易于促进B细胞受体(BCR)的广泛交联。BCR的交联通过免疫突触中的复合物网络触发B细胞活化后，从而产生保护性体液免疫。有效的肺炎球菌疫苗需要刺激B淋巴细胞产生抗体，并诱导出记忆性抗体应答。以肺炎球菌为例，目前广泛应用的肺炎球菌疫苗，主要有2种，一个是23价肺炎球菌多糖疫苗(Pneumovax，纽莫法)和13价肺炎球菌多糖结合疫苗 (Prevenar 13，沛儿13)。其中，价指的是指针对肺炎链球菌里的几种血清型。此外，肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和致病性大肠杆菌这些同样是被荚膜多糖包裹的耐多药革兰氏阴性致病菌，针对它们的荚膜多糖结构，目前已经有若干疫苗相关的研究。

长期以来，人们一直认为2岁以下儿童，由于免疫储备库(repertoire)的适应能力尚未发展成熟，对于以荚膜多糖为代表的免疫原性很差，不会引发长期的保护性抗体免疫反应，对大多数肺炎球菌荚膜的抗体反应较弱或者不持久。以23价肺炎球菌多糖疫苗纽莫法为例，它覆盖了最多的血清型，但是在世界范围内允许的接种对象的年龄区间是2岁以上的儿童。在儿童中，肺炎链球菌感染2岁内的风险最大，然而目前并没有一个理想的覆盖最广的疫苗可以使用。目前采取的建议措施是13价肺炎球菌多糖结合疫苗，通过将荚膜多糖与载体蛋白共价结合吸附于磷酸铝佐，来诱导出T细胞依赖的抗体反应。但是，目前肺炎球菌多糖结合疫苗的推荐接种年龄为6周龄以上的婴幼儿。由此可见，缺乏针对6周龄以下婴幼儿的有效预防肺炎的疫苗接种措施，同时在2岁以下儿童中缺乏高覆盖血清型的保护性疫苗。

全球每年有300万-500万人感染霍乱，而死亡人数可达10万多。霍乱依旧是目前人类面对的较为严重的传染性疾病之一。特别是对发展中国家的儿童危害更大。现阶段在疫情流行地区预防霍乱的最主要的手段还是霍乱疫苗的使用。自2002年起，世界卫生组织(WHO)认定将霍乱疫苗作为公共健康有效策略用于亚非国家的霍乱预防。霍乱弧菌感染宿主后，表达产生霍乱毒素直接作用于肠道上皮细胞，引起机体体液和电解质失衡，导致腹泻。霍乱弧菌感染机体诱导免疫应答后能产生抗毒素抗体，对机体产生免疫保护作用。目前，主要有两种口服霍乱疫苗可以使用：Dukoral；Shanchol和mORCVAX。但目前这两种疫苗都存在不足。与自然感染霍乱相比，口服霍乱疫苗对机体的免疫保护周期(2-3年) 较短，免疫保护作用相对较弱；与成年人接种后保护相比，疫苗对幼龄儿童的保护效果较差。因此需要开发更安全、高效、廉价的口服霍乱疫苗(佐剂)。

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)，简称新冠肺炎。感染后会出现轻度至中度的呼吸道疾病，老年人以及患有诸如心血管疾病，糖尿病，慢性呼吸道疾病和癌症等基础疾病问题的人，可能会出现重度的症状，呈现更高的死亡率。目前全球范围有超过100个候选疫苗研发的项目，国内目前已经上市获批的有四款疫苗。除了研发候选疫苗，适合的疫苗佐剂也是至关重要的，可以有效助力新冠病毒疫苗在体内的效果。

佐剂是疫苗中使用的成分，有助于在接受疫苗免疫的人体产生更强的免疫反应，即佐剂可以帮助疫苗更好地发挥作用，以帮助人体产生足够强的免疫反应，从而保护人免受接种疫苗所致疾病的侵害。佐剂可以有效提高机体对于疫苗的适应性免疫应答。理想新冠疫苗佐剂可以减少单次所需抗原剂量或缩短免疫周期；提升体液免疫应答的抗体中和病毒的能力；调节免疫反应类型，提升细胞抗病毒能力。

佐剂主要可分为两种：一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、结核分枝杆菌以及革兰阴性杆菌等，这些由弱化或处死的细菌制成的疫苗，即含有天然佐剂，可帮助机体产生强大的保护性免疫反应；另一种本身无免疫原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等，例如弗氏佐剂(Freund adjuvant)。铝盐(例如氢氧化铝，磷酸铝和硫酸铝钾) 已在疫苗中安全使用70多年了，最初用于白喉和破伤风疫苗，后来发现它们能增强人体对这些疫苗的免疫反应。但是由于铝佐剂的一些局限性，如佐剂效果弱，需要配合免疫原性较强的抗原才能起到很好的作用，特别是不能够很好的促进介导细胞免疫的Th1反应。与非佐剂疫苗相比，佐剂疫苗可引起更多的局部反应(例如注射部位发红，肿胀和疼痛)和更多全身反应(例如发烧，发冷和身体疼痛)。到目前为止，在世界范围内临床批准使用的佐剂包括使用铝盐、CpG 1018、基于角鲨烯的水包油乳剂(MF59、AS03和AF03)和AS04、 AS01_B(Monophosphoryl lipid A联合铝盐或QS21)。对于佐剂效应的机制研究仍然并不透彻，目前已知的分子靶标主要是Toll样受体(Toll like receptor,TLR)。不仅如此，在多糖疫苗领域，并没有一种成熟的佐剂能够激发更强的免疫反应，所以现有的23价肺炎球菌多糖疫苗(Pneumovax，纽莫法)，是无佐剂的疫苗。目前多糖疫苗领域已呈现停滞不前的状态，迫切需要针对增强B淋巴细胞活化的新佐剂和/或递送系统。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了疫苗佐剂、疫苗组合物、制备抗体的方法、抗体、人工抗体、TRPV2激动剂在制备疫苗佐剂或疫苗组合物中的用途、试剂在制备试剂盒中的用途，本发明的含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强抗体免疫应答，如T淋巴细胞非依赖型免疫应答和T淋巴细胞依赖型应答，尤其适用于预防和治疗携带荚膜多糖的致病菌(以肺炎球菌为代表)、霍乱弧菌肠毒素或新冠病毒引发的疾病，具有较好的应用前景。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种疫苗佐剂。根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂包括：TRPV2激动剂。发明人发现，激活瞬时受体电位类香草酸通道(transientreceptor potential vanilloid 2，TRPV2)可以触发B细胞激活，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，尤其适用于预防和治疗携带荚膜多糖的致病菌(以肺炎球菌为代表)、霍乱弧菌肠毒素或新冠病毒引发的疾病，具有较好的应用前景。

根据本发明的实施例，上述疫苗佐剂还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂选自大麻二酚(CBD)、丙磺舒(probenecid)、 2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)或四氢大麻酚(Δ9-THC)，优选大麻二酚。发明人发现，上述TRPV2激动剂(尤其是大麻二酚)可以有效地激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，尤其适用于预防或治疗携带多糖荚膜的致病菌，对于致病菌的荚膜多糖产生免疫应答，也可以对霍乱弧菌肠毒素或新冠病毒引发的疾病具有较好的预防和治疗效果。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂进一步含有溶剂，所述溶剂选自植物油。

根据本发明的实施例，所述溶剂选自玉米油和/或葵花籽油。

根据本发明的实施例，所述溶剂选自玉米油。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种疫苗组合物。根据本发明的实施例，所述疫苗组合物包括：疫苗；以及前面所述疫苗佐剂。含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂可以有效地帮助疫苗更好地发挥作用，激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T 淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，以帮助机体产生足够强的免疫反应，尤其适用于预防和治疗携带荚膜多糖的致病菌(以肺炎球菌为代表)、霍乱弧菌肠毒素或新冠病毒引发的疾病，具有较好的应用前景。

根据本发明的实施例，所述疫苗选自产生T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答的致病菌或病毒。

根据本发明的实施例，所述疫苗选自荚膜多糖疫苗、霍乱疫苗或新型冠状病毒疫苗。

根据本发明的实施例，所述疫苗选自肺炎链球菌疫苗。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备抗体的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使动物接触前面所述疫苗组合物；从所述动物的血液中分离所述抗体。含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂或疫苗组合物可以有效地帮助疫苗更好地发挥作用，激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答。因此，将该疫苗佐剂或疫苗组合物接触动物后，激活免疫应答产生相应的抗体。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种抗体。根据本发明的实施例，所述抗体是通过前面所述制备抗体的方法所获得的。由此，TRPV2激动剂可以激活B淋巴细胞，增强T 淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，从而产生抗体。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种人工抗体。根据本发明的实施例，所述人工抗体与前面所述抗体具有相同的抗原决定簇。

在本发明的又一方面，本发明提出了TRPV2激动剂在制备疫苗佐剂或疫苗组合物中的用途。根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于激活B淋巴细胞。发明人发现，TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，从而产生免疫应答。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂用于对荚膜多糖产生免疫应答。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于预防或治疗由携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，所述致病菌选自肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、致病性大肠杆菌、乙型流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌和/或肺炎链球菌。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于预防或治疗由肺炎链球菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂选自大麻二酚、丙磺舒、2-氨基乙基联苯基硼酸酯或四氢大麻酚，优选大麻二酚。

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂用于提高B淋巴细胞表面受体的聚集程度。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物的给药方式包括肌肉注射或口服，其中，肌肉注射的给药剂量为8mg～2.13g/kg/鼠，口服的给药剂量为100mg～200mg/kg/鼠。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物的给药方式包括肌肉注射或口服，其中，肌肉注射的给药剂量为0.67mg～178mg/kg/人，口服的给药剂量为0.2mg～200mg/kg/ 人。

在本发明的另一方面，本发明提出了试剂在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒用于诊断携带荚膜多糖的致病菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，所述试剂包括前面所述疫苗组合物。TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答，对荚膜多糖产生免疫应答，产生可检测信号，可用于诊断携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病，尤其是肺炎链球菌引发的疾病。并且，也可以增强T 淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，诊断霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述试剂进一步包括前面所述抗体或人工抗体。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示了根据本发明一个实施例的小鼠对1型(CPS1)和3型(CPS3)荚膜多糖免疫的动态抗体应答反应示意图；

图2显示了根据本发明一个实施例的实时荧光定量PCR检测不同年龄健康人的外周血单个核细胞的TRPV2转录水平分布图，一个点代表一个独立个体，共101人；

图3显示了根据本发明一个实施例的实时荧光定量PCR检测不同年龄组小鼠的TRPV2 转录水平分布图；

图4显示了根据本发明一个实施例的小鼠细胞过表达TRPV2后的抗体应答反应示意图；

图5显示了根据本发明一个实施例的B淋巴细胞表面受体(BCR)聚集程度分析示意图；

图6显示了根据本发明一个实施例的不同剂量CBD对肺炎球菌荚膜多糖免疫小鼠后 IgM抗体滴度的影响；

图7显示了根据本发明一个实施例的不同剂量CBD对肺炎球菌荚膜多糖免疫小鼠后 IgG抗体滴度的影响；

图8显示了根据本发明一个实施例的CBD对肺炎球菌荚膜多糖8型免疫小鼠后抗体水平和小鼠感染8型肺炎球菌后保护效率的影响；

图9显示了根据本发明一个实施例的不同剂量CBD对于模式抗原NP-Ficoll免疫小鼠后IgG抗体滴度的影响；

图10显示了根据本发明一个实施例的肺炎球菌荚膜多糖在新生鼠免疫后的抗体水平分析示意图；

图11显示了根据本发明一个实施例的CBD对于新冠病毒S蛋白RBD结构域免疫小鼠后IgG抗体滴度和病毒中和效率的影响；

图12显示了根据本发明一个实施例的小鼠口服免疫霍乱毒素(CT)后抗体应答反应示意图以及小鼠攻毒实验后肠道积液质量示意图；

图13显示了根据本发明一个实施例的小鼠口服免疫霍乱毒素(CT)并进行攻毒实验后小肠总质量示意图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

本发明提出了疫苗佐剂、疫苗组合物、制备抗体的方法、抗体、人工抗体、TRPV2激动剂在制备疫苗佐剂或疫苗组合物中的用途、试剂在制备试剂盒中的用途，下面将分别对其进行详细描述。

疫苗佐剂

在本发明的一个方面，本发明提出了一种疫苗佐剂。根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂包括：TRPV2激动剂。

发明人发现，激活瞬时受体电位类香草酸通道(transient receptor potentialvanilloid 2， TRPV2)可以触发B细胞激活。TRPV2通道的多种生物学作用包括伤害感受、机械力感知、表皮分化、钙/镁吸收和热感知作用。如图1所示，在第-1天(免疫前一天)对小鼠(个体数＝ 4)采血，然后当天用CPS1和CPS3免疫，免疫后第6天和第12天收集血液(B)小鼠脾细胞中的基因转录水平，C-WT、C-Het均为正常小鼠，C-KO为B淋巴细胞中敲除TRPV2 的小鼠。发明人发现B细胞特异性TRPV2缺陷型小鼠对肺炎链球菌荚膜多糖的抗体反应严重受损。

进一步地，发明人在针对101个不同年龄人群的样本分析后，相比较其他年龄组，新生儿(2月龄以内)TRPV2的表达水平呈现最低水平(图2)。这个结论在小鼠模型上得到了进一步佐证，即成年鼠的TRPV2水平明显高于新生鼠(年龄组1)和婴儿鼠(年龄组2) (图3，其中，年龄组1代表出生7天内；年龄组2代表出生7天-3周；年龄组3代表出生3-8周龄；年龄组4代表出生8周龄以上，个体数＝4)。并且，增强小鼠B淋巴细胞的 TRPV2表达(TRPV2+组)可以有效提高小鼠的T细胞非依赖性抗体应答水平(图4)。

上述结果表明，通过提升T淋巴细胞非依赖性抗体应答可以弥补低年龄组TRPV2低表达的不足，对于TRPV2表达不足的儿童再补充可能会提高抗体的产生，对肺炎链球菌感染起到有效免疫保护。

霍乱孤菌和新型冠状病毒(例如，病毒SARS-CoV-2，由其引起的肺炎COVID-19)在机体内产生的免疫应答为T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。发明人发现，TRPV2激动剂也可以增强T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，提升疫苗的作用效果。

根据本发明的实施例，TRPV2激动剂选自大麻二酚、丙磺舒、2-氨基乙基联苯基硼酸酯或四氢大麻酚。发明人发现，上述TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强T 淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答，尤其适用于治疗携带荚膜多糖的致病菌疾病，对于荚膜多糖产生免疫应答。并且，也可以增强T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，从而对诸如霍乱孤菌或新型冠状病毒所引发的疾病具有较好的预防和治疗目的。通过体外实验监测离子通道的电流水平，发现上述4个激动剂中，大麻二酚激活通道后的效能EC50值最高，表明其具有较好的激活效果。大麻二酚的EC50对应的有效浓度最低，表明该化合物相比较其他几种，具有更好的激活活性。根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂进一步含有溶剂，所述溶剂选自植物油，优选玉米油和/或葵花籽油，更优选玉米油。由此，可以使TRPV2激动剂更好地溶解于溶剂中，便于保存。

疫苗组合物

在本发明的另一方面，本发明提出了一种疫苗组合物。根据本发明的实施例，所述疫苗组合物包括：疫苗；以及前面所述疫苗佐剂。含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂可以有效地帮助疫苗更好地发挥作用，激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T 淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，以帮助机体产生足够强的免疫反应，尤其适用于治疗携带荚膜多糖的致病菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述疫苗选自荚膜多糖疫苗、霍乱疫苗或新型冠状病毒疫苗。由此，采用TRPV2激动剂可以有效地提升上述疫苗的免疫作用效果。

根据本发明的实施例，所述疫苗选自肺炎链球菌疫苗。由此，采用含有TRPV2激动剂可以有效地增强肺炎链球菌免疫应答。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对疫苗佐剂所描述的特征和优点，同样适用于该疫苗组合物，在此不再赘述。

制备抗体的方法

在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备抗体的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使动物接触前面所述疫苗组合物；从所述动物的血液中分离所述抗体。含有TRPV2激动剂的疫苗佐剂或疫苗组合物可以有效地帮助疫苗更好地发挥作用，激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。因此，将该疫苗佐剂或疫苗组合物接触动物后，激活免疫应答产生相应的抗体。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对疫苗组合物所描述的特征和优点，同样适用于该制备抗体的方法，在此不再赘述。

抗体

本领域技术人员能够理解的是，前面针对制备抗体的方法所描述的特征和优点，同样适用于该抗体，在此不再赘述。

人工抗体

在本发明的又一方面，本发明提出了一种人工抗体。根据本发明的实施例，所述人工抗体与前面所述抗体具有相同的抗原决定簇。由此，可以增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对抗体所描述的特征和优点，同样适用于该人工抗体，在此不再赘述。

TRPV2激动剂在制备疫苗佐剂或疫苗组合物中的用途

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。发明人发现，TRPV2激动剂可以有效地激活 B淋巴细胞，均可增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答。

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂用于对荚膜多糖产生免疫应答。发明人发现， TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，对荚膜多糖产生免疫应答。

根据本发明的实施例，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于预防或治疗由携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，所述致病菌选自肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、致病性大肠杆菌、乙型流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌和/或肺炎链球菌。具体地，疫苗佐剂或疫苗组合物用于预防或治疗由肺炎链球菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述TRPV2激动剂选自大麻二酚、丙磺舒、2-氨基乙基联苯基硼酸酯或四氢大麻酚，优选大麻二酚。发明人发现，上述TRPV2激动剂(尤其是大麻二酚)可以有效地激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答，尤其适用于预防或治疗携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病，对于荚膜多糖产生免疫应答。并且，也可增强T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，促进霍乱疫苗和新型冠状病毒疫苗发挥更好的免疫效果。

根据本发明的实施例，TRPV2激动剂用于提高B淋巴细胞表面受体的聚集程度。TRPV2 激动剂可以有效地刺激B淋巴细胞表面受体(BCR)聚集能力，提高聚集程度，从而更好地发挥机体免疫作用。

根据本发明的实施例，疫苗佐剂或疫苗组合物的给药方式包括肌肉注射或口服，其中，鼠的肌肉注射的给药剂量为8mg～2.13g/kg/鼠。由此，在此剂量范围内TRPV2激动剂均可以有效地刺激鼠对于T细胞非依赖性模式抗原和T细胞依赖性模式抗原，产生很强的IgG 抗体水平。在一些优选实施例中，鼠的肌肉注射的给药剂量为8mg～1g/kg/鼠。发明人通过对鼠肌肉注射的剂量进行换算以及相应的实验，获得了鼠的口服剂量为100mg～200mg/kg/ 鼠，人的肌肉注射剂量为0.67mg～178mg/kg/人，人的口服剂量为0.2mg～200mg/kg/人。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对疫苗佐剂或疫苗组合物所描述的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。

试剂在制备试剂盒中的用途

在本发明的另一方面，本发明提出了试剂在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒用于诊断携带荚膜多糖的致病菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，所述试剂包括前面所述疫苗组合物。TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答，对荚膜多糖产生免疫应答，产生可检测信号，可用于诊断携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病。并且，也可以增强T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，诊断霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病。

根据本发明的实施例，所述试剂进一步包括前面所述抗体或人工抗体。TRPV2激动剂可以有效地激活B淋巴细胞，增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答，产生免疫应答，因此，若机体感染致病菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒，则会与抗体或人工抗体发生特异性结合，产生可检测信号，从而实现疾病的诊断。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对疫苗佐剂、疫苗组合物、抗体或人工抗体所描述的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。

需要说明的是，本发明所使用的术语“治疗”用于指获得期望的药理学和/或生理学效果。效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病(例如预防携带荚膜多糖的致病菌引发的相关疾病)或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文制剂的药物给予有需要的个体。

本发明的制剂的给药频率和剂量可以通过多个相关因素被确定，该因素包括要被治疗的疾病类型、给药途径、病人年龄、性别、体重和疾病的严重程度以及作为活性成分的药物类型。根据本发明的一些实施例，日剂量可分为适宜形式的1剂、2剂或多剂，以在整个时间段内以1次、2次或多次给药，只要达到治疗有效量即可。

术语“治疗有效量”是指化合物足以显著改善某些与疾病或病症相关的症状的量，也即为给定病症和给药方案提供治疗效果的量。例如，在肺炎链球菌相关疾病治疗中，减少、预防、延缓、抑制或阻滞疾病或病症的任何症状的药物或化合物应当是治疗有效的。治疗有效量的药物或化合物不需要治愈疾病或病症，但将为疾病或病症提供治疗，使得个体的疾病或病症的发作被延缓、阻止或预防，或者疾病或病症的症状得以缓解，或者疾病或病症的期限被改变，或者例如疾病或病症变得不严重，或者加速康复。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

已知的常规方法和常规条件，或按照试剂盒及仪器制造商所建议的条件。

实施例1

测定大麻二酚(简称CBD)对于B淋巴细胞表面受体招募的影响

材料和设备来源：野生型B6小鼠(清华大学动物中心提供)体重20g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，HBSS(Gibco)，基于脂双层的B细胞活化系统，奥林巴斯全内反射荧光显微成像系统和Image J分析软件(以上发明人所在实验室自备)。

实验方法：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)的储备溶液。通过反应溶液HBSS稀释后，CBD的终浓度为10μM，记为CBD组，对照组HBSS反应溶液中加入等体积玉米油，记为Ctrl组。小鼠安乐死后得到脾脏，用细胞筛和MACS缓冲液处理后，再通过红细胞裂解液处理得到小鼠脾脏细胞悬液。用荧光探针偶联的抗体，标记上B细胞表面受体，然后将细胞分别加入到已经制备好的基于脂双层的B 淋巴细胞活化系统(系统中的反应溶液分别为上述含有一定体积的CBD或玉米油)，在37℃环境下，让细胞反应7分钟后，用4％多聚甲醛终止反应。

检测方法：奥林巴斯全内反射荧光显微成像系统，拍摄在接触面的B细胞表面受体图像。荧光信号强度控制在2000以内。将图片保存导出后，用ImageJ软件，分析每个细胞的接触面总信号强度。

实验结果参见图5，CBD组中B淋巴细胞表面受体(BCR)聚集程度显著高于Ctrl组，在机制层面上表明了CBD可以有效刺激小鼠BCR的聚集能力，从而为体内的应用提供了机制层面的合理解释。

实施例2

测定CBD在成年小鼠中对于肺炎球菌荚膜多糖疫苗的佐剂作用

材料来源：野生型B6小鼠(清华大学动物中心提供)体重20g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖(清华大学张敬仁实验室提供)。

采用酶联免疫吸附测定评估体系，以抗体滴度来反映佐剂活性。

实验方法：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)或0.2mg CBD/100μL(玉米油)的悬液。CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖用生理盐水溶解，配成终浓度为25μg CPS1和CPS3/100μL(生理盐水)的溶液。实验组小鼠预先注射配好的CBD悬液，每只100μL。对照组小鼠采用同样体积的玉米油替代。小鼠个体数在实验组和对照组均为4只。注射部位为肌肉注射。注射完CBD或者对照玉米油后，进行原位的免疫抗原注射。免疫后7天后，对小鼠进行尾静脉取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖IgM抗体的滴度。

抗体滴度的检测：用PBS稀释CPS1和CPS3蛋白至浓度为4μg/mL，包被在96孔酶标板中，每孔50μL，4℃孵育过夜。用含有0.05％吐温20的PBS清洗酶标板3次，用0.3％的明胶溶液封闭，每孔200μL，室温封闭2h。用PBST(吐温磷酸缓冲液)清洗酶标板5次，加入倍比稀释免疫OVA后的鼠血清，每孔50μL，室温孵育2h。用PBST清洗酶标板5次后，加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的山羊抗鼠IgM的抗体，室温孵育45min。用PBST 清洗酶标板5次，加入柠檬酸钠OPD(邻苯二胺)显色液，避光显色10min后，加入硫酸终止。用酶标仪OD490读数，实验组和对照组光吸收比值≥2.0时最大的血清稀释倍数为血清中抗CPS1和CPS3抗体的滴度。

实验结果参照图6。两种剂量的CBD均可以有效地刺激小鼠在初次免疫后，对于肺炎球菌荚膜多糖的IgM抗体应答。

实施例3

CBD在成年小鼠中对于肺炎球菌荚膜多糖疫苗的记忆性免疫应答作用的评估

材料来源：野生型B6小鼠(清华大学动物中心提供)体重25g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖(清华大学张敬仁实验室提供)。

采用酶联免疫吸附测定评估体系，以抗CPS1和CPS3 IgG抗体滴度来反映记忆性免疫应答水平。

实验方法：CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖用生理盐水溶解，配成终浓度为25μgCPS1 和CPS3/100μL(生理盐水)的溶液。实施例2中的小鼠，继续饲养，期间每隔1个月追踪一次抗体水平。当抗体水平回落至基础水平后(数据略)，给予二次追加免疫。抗原剂量等同于初始免疫，但是不予以佐剂CBD注射。免疫后7天后，对小鼠进行尾静脉取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体的滴度。酶联免疫吸附测定评估类同于实施例1。

实验结果参照图7。二次追加免疫后，初次免疫接受过CBD佐剂辅助的小鼠在追加免疫中，产生了更高水平的IgG抗体。

实施例4

CBD在成年小鼠中对于肺炎球菌荚膜多糖8型免疫的佐剂效果及对8型肺炎球菌感染的保护性促进作用评估

材料来源：野生型B6小鼠(清华大学动物中心提供)体重15g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，CPS8肺炎球菌荚膜多糖和8型肺炎球菌(清华大学张敬仁实验室提供)。

采用酶联免疫吸附测定评估体系，以抗CPS8 IgG抗体滴度来反映记忆性免疫应答水平。采用单位体积血液肺炎球菌菌落形成(cfu)计数和小鼠存活曲线，评估8型肺炎球菌感染后，CBD的佐剂效果对于荚膜多糖免疫保护性促进作用。

实验方法：CPS8肺炎球菌荚膜多糖用生理盐水溶解，配成终浓度为2μg CPS8/100μL (生理盐水)的溶液。采取初次、二次追加和三次追加的免疫策略，时间间隔为2周，每次每只100μL。抗原剂量等同于初始免疫。每次免疫后14天后，对小鼠进行尾静脉取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗CPS8肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体的滴度。酶联免疫吸附测定评估类同于实施例1。小鼠第三次免疫后14天，给予尾静脉注射活肺炎球菌8型，剂量为5×10⁶CFU/小鼠。在注射细菌后的第12h，24h，48h，72h采集小鼠眼底眶静脉丛血液10ul测量血液中细菌cfu数，同时观察小鼠的存活数量，持续追踪14天。

实验结果参照图8。4mg剂量的CBD联合肺炎球菌荚膜多糖CPS8型免疫，可以有效刺激小鼠产生CPS8的抗体，并预防小鼠在8型肺炎球菌感染后造成的菌血症死亡，保护率为67％。

实施例5

测定CBD在成年小鼠中对于T淋巴细胞非依赖性模式抗原的佐剂作用

材料来源：野生型B6小鼠(清华大学动物中心提供)体重20g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，NP-Ficoll(Biosearch公司)。

采用酶联免疫吸附测定评估体系，以抗体滴度来反映佐剂活性。NP-Ficoll，全称4-Hydroxy-3-nitrophenylacetic结合在AminoEthylCarboxyMethyl-Ficoll上，是一种研究B淋巴细胞体内活化的经典T淋巴细胞非依赖性模式抗原。

实验方法：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)或0.2mg CBD/100μL(玉米油)的悬液。抗原NP-Ficoll用生理盐水溶解，配成终浓度为5 μgNP-Ficoll/100μL(生理盐水)的溶液。实验组小鼠预先注射配好的CBD悬液，每只100 μL。对照组小鼠采用同样体积的玉米油替代，注射部位为肌肉注射。小鼠个体数在实验组和对照组均为4只。注射完CBD或者对照玉米油后，进行原位的免疫抗原(NP-Ficoll)注射。免疫7天后，对小鼠进行尾静脉取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗NP的IgG 抗体的滴度。

实验结果参照图9。两种剂量的CBD均可以有效地刺激小鼠对于T细胞非依赖性模式模式抗原NP-Ficoll，产生很强的IgG抗体水平。

实施例6

测定CBD在新生小鼠中对于肺炎球菌荚膜多糖疫苗的佐剂作用

材料来源：出生5天的B6品系乳鼠(清华大学动物中心提供)体重约5g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖(清华大学张敬仁实验室提供)。

实验方法：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/50μL(玉米油)。CPS1和CPS3肺炎球菌荚膜多糖用生理盐水溶解，配成终浓度为25μg CPS1和CPS3/50μL (生理盐水)的溶液。实验组小鼠预先注射配好的CBD悬液，每只50μL。对照组小鼠采用同样体积的玉米油替代，注射部位为肌肉注射。小鼠个体数在实验组和对照组均为4只。注射完CBD或者对照组的玉米油后，进行原位的免疫抗原注射。之后将小鼠放回，与母鼠功能生活。14天后，对小鼠进行尾静脉取血，每只小鼠取血25μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗CPS1和 CPS3的IgM抗体的滴度。酶联免疫吸附测定评估类同于实施例1。

实验结果参照图10，新生小鼠对于T淋巴细胞非依赖性的抗体应答，几乎是不健全的。结果显示，对照组小鼠在免疫前后，血清中抗CPS1和CPS3的IgM抗体无变化。但是接受过CBD佐剂辅助的新生小鼠相比较对照组，产生了更高IgM抗体。

实施例7

测定CBD在成年小鼠中对于新型冠状病毒突刺蛋白受体结合位点抗原(RBD)的佐剂作用

材料来源：野生型BALB/c小鼠(清华大学动物中心提供)体重20g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，RBD抗原(清华大学张林琦实验室提供)。

实验方法：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)。抗原RBD用PBS溶解，配成终浓度为10μg RBD/100μL(PBS)的溶液。第1天，实验组小鼠预先大腿肌肉注射配好的CBD溶液。小鼠个体数在实验组和对照组均为5只。注射方式为双腿肌肉各50uL。免疫二周和四周后，分别加强免疫一次，方法同第一次免疫。第五周，对小鼠进行眼眶取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g 离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗RBD的IgG抗体的滴度。

病毒中和实验方法如下：提前一天将293T细胞传至六孔板，控制密度至转染时能达到80-90％，将4μg骨架质粒PNL 4-3、1μg携带新冠病毒spike蛋白的pcDNA3.1载体质粒和16ul PEI加到200μl的无血清DMEM培养基中，混匀后静置10-30分钟，然后将混合液轻柔加入293T细胞培养上清中，6-8小时后弃去原有细胞上清，每孔补充3ml新鲜含10％胎牛血清的DMEM培养基，继续培养48小时后收取细胞上清，4000rpm离心10 分钟后，取上清使用或分装置于-80℃冰箱中长期保存。取平底96孔细胞培养板，在细胞对照孔加入150μl培养基，首孔稀释孔加入140μl培养基，病毒对照孔和其余稀释孔加入 100μl培养基。向首孔稀释孔中加入10μl小鼠血清，与细胞培养基混合均匀，每组实验设定两个复孔。取多道移液器吸取50μl首孔的小鼠血清稀释液，加入到100μl细胞培养基中混匀，依次三倍比稀释，共八个稀释度，最后稀释孔混匀后吸出50μl液体弃掉。每孔加入病毒量应为仪器测量靶细胞本底相对荧光强度(RLU)200-300倍所对应测滴度时病毒液的体积，稀释至50μl后，加入至除细胞对照孔之外的其余各孔。随后将96孔培养板置于37℃细胞培养箱中孵育1小时。将预先培养好的Hela-ACE2靶细胞消化，离心后按 2×10⁵/ml的密度重悬，向孵育后的96孔板每孔加入100μl细胞。将96孔板置于37℃细胞培养箱中，继续培养60小时。培养60小时后弃细胞上清，加入50μl荧光素酶检测试剂，反应2分钟后将96孔板置于化学发光检测仪中，读取相对荧光强度(RLU)。中和抑制率的计算方法为抑制率(％)＝[1-(各稀释度RLU–细胞对照组RLU)/(病毒对照组RLU －细胞对照组RLU)]×100％

实验结果参照图11。相比对照组，CBD可以有效地加强小鼠对于RBD抗原的体液免疫反应，产生更高的IgG抗体水平。经过体外中和实验评估结果显示，产生的抗体可以有效中和抑制新冠病毒。

实施例8

测定CBD在成年小鼠中对于霍乱毒素(CT)的佐剂作用及对CT感染的保护作用评估(CT攻毒实验)

材料来源：野生型C57BL/6小鼠(清华大学动物中心提供)体重20g，CBD(云南汉素生物科技有限公司)，食用玉米油，CT抗原(Sigma)。

采用酶联免疫吸附测定评估体系，以抗体滴度来反映佐剂活性。采用小肠内容物质量与小肠长度比值来评估小鼠对CT诱导腹泻的程度。

实验方法一：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)。抗原RBD用PBS(含6％碳酸氢钠)溶解，配成终浓度为3μg CT/200μL(PBS)的溶液。将小鼠分为4组，对照组1，对照组2，实验组1，实验组2。第0天，小鼠禁食禁水一天，第1天，实验组2小鼠灌胃配好的CBD溶液，每只100μL，并灌胃CT溶液100 uL。实验组1小鼠灌胃玉米油，每只100μL，并灌胃CT溶液100uL。对照组1小鼠灌胃配好的玉米油，每只100μL，并灌胃PBS溶液100uL。对照组2小鼠灌胃配好的CBD溶液，每只100μL，并灌胃PBS溶液100uL。小鼠个体数在实验组和对照组为5-6只。灌胃免疫10天后，加强免疫一次，方法同第一次免疫，CT抗原量改为5ug/只。第17天，对小鼠进行眼眶取血，每只小鼠取血50μL。将取出的血放4℃过夜，次日以800g离心8min，将上层血清吸出，采用酶联免疫吸附实验测定血清中抗CT的IgG抗体的滴度。第27天，小鼠禁食禁水过夜，第28天，麻醉小鼠进行小肠结扎手术：打开腹腔，结扎空肠(6-8cm)，结扎段注射3.5ug CT/200uL/只，将小肠重新放入腹腔，缝合腹腔。5小时后，处死小鼠，称量小鼠结扎段小肠重量(g)，并量取结扎段小肠长度(cm)。用结扎小肠内容物质量与小肠长度比值来表征小鼠的腹泻程度。

实验结果参照图12。相比对照组，CBD可以有效地加强小鼠对于CT抗原的体液免疫反应，产生更高的IgG抗体水平。相比对照组和实验组1(只免疫CT抗原)，实验组2(免疫CT及CBD)腹泻程度更低，表明CBD能对小鼠产生更好的肠道免疫保护作用。

实验方法二：将CBD用食用级别玉米油溶解，配成终浓度为2mg CBD/100μL(玉米油)。抗原CT用PBS(含6％碳酸氢钠)溶解，配成终浓度为2μg CT/200μL(PBS)的溶液。将小鼠分为4组，对照组1，对照组2，实验组1，实验组2。第0天，小鼠禁食禁水一天，第1天，实验组2小鼠灌胃配好的CBD溶液，每只100μL，并灌胃CT溶液200 uL。实验组1小鼠灌胃玉米油，每只100μL，并灌胃CT溶液200uL。对照组1小鼠灌胃配好的玉米油，每只100μL，并灌胃PBS溶液200uL。对照组2小鼠灌胃配好的CBD溶液，每只100μL，并灌胃PBS溶液200uL。小鼠个体数在实验组和对照组为5-6只。灌胃免疫14天后，小鼠禁食禁水6h，然后灌胃10ug CT/200uL/只。2小时后，处死小鼠，称量小鼠小肠及内容物总重量(g)，用于表征小鼠的腹泻程度。

实验结果参照图13。相比对照组和实验组1(只免疫CT抗原)，实验组2(免疫CT 及CBD)腹泻程度更低，表明CBD能对小鼠产生更好的肠道免疫保护作用。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种疫苗佐剂，其特征在于，包括：TRPV2激动剂。

2.根据权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述TRPV2激动剂选自大麻二酚、丙磺舒、2-氨基乙基联苯基硼酸酯或四氢大麻酚。

3.根据权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂进一步含有溶剂，所述溶剂选自植物油。

4.一种疫苗组合物，其特征在于，包括：

疫苗；以及

权利要求1～3任一项所述疫苗佐剂。

5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗选自产生T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答的致病菌或病毒。

6.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗选自荚膜多糖疫苗、霍乱疫苗或新型冠状病毒疫苗。

7.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗选自肺炎链球菌疫苗。

8.一种制备抗体的方法，其特征在于，包括：

使动物接触权利要求4～7任一项所述疫苗组合物；

从所述动物的血液中分离所述抗体。

9.一种抗体，其特征在于，是通过权利要求8所述制备抗体的方法所获得的。

10.一种人工抗体，其特征在于，所述人工抗体与权利要求9所述抗体具有相同的抗原决定簇。

11.TRPV2激动剂在制备疫苗佐剂或疫苗组合物中的用途，其特征在于，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于激活B淋巴细胞。

12.根据权利要求11所述用途，其特征在于，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于增强T淋巴细胞非依赖型抗体免疫应答和T淋巴细胞依赖型抗体免疫应答；

所述TRPV2激动剂用于提高B淋巴细胞表面受体的聚集程度。

13.根据权利要求11所述用途，其特征在于，所述TRPV2激动剂用于对荚膜多糖产生免疫应答。

14.根据权利要求11所述用途，其特征在于，所述疫苗佐剂或疫苗组合物用于预防或治疗由携带荚膜多糖的致病菌引发的疾病、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，所述致病菌选自肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、致病性大肠杆菌、乙型流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌和/或肺炎链球菌。

15.根据权利要求11所述用途，其特征在于，所述TRPV2激动剂选自大麻二酚、丙磺舒、2-氨基乙基联苯基硼酸酯或四氢大麻酚。

16.根据权利要求11所述用途，其特征在于，所述疫苗佐剂或疫苗组合物的给药方式包括肌肉注射或口服，

其中，肌肉注射的给药剂量为8mg～2.13g/kg/鼠或0.67mg～178mg/kg/人，口服的给药剂量为100mg～200mg/kg/鼠或0.2mg～200mg/kg/人。

17.试剂在制备试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒用于诊断携带荚膜多糖的致病菌、霍乱孤菌或新型冠状病毒引发的疾病，

所述试剂包括权利要求4～7任一项所述疫苗组合物。

18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于，所述试剂进一步包括权利要求9所述抗体或10所述人工抗体。