CN113262195A - 一种含干细胞外泌体的面霜及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含干细胞外泌体的面霜及其制作方法，属于化工合成技术领域，该面霜包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液3‑5份、卡波姆0.5‑0.8份、甘油5‑10份、维生素C1‑2份、维生素E1‑2份、去离子水20‑30份、保湿剂1‑3份、熊果苷1‑5份、鲸蜡醇3‑5份、微晶蜡2‑5份、异透明质酸钠0.05‑0.2份；其中脂肪干细胞外泌体浓缩液能够被蛋白酶剪切，剪切的碎片能够作为配体与细胞膜上的受体结合，从而激活细胞内的信号通路，进而淡化皱纹、改善暗沉、提亮肤色、延缓衰老、皮肤年轻化，保湿剂能够抑制酪氨酸酶和黑色素B16V细胞活性，进而达到美白效果。

Description

一种含干细胞外泌体的面霜及其制作方法

技术领域

本发明涉及化工合成技术领域，具体涉及一种含干细胞外泌体的面霜及其制作方法。

背景技术

皮肤直接与外界环境接触，对多种物理和化学性刺激有很强的耐受力，因而对机体具有重要的保护功能，并能阻挡异物和病原体侵入、防止体内组织液流失等。其中表皮的最外层为角质层，由多层扁平的角质细胞组成，细胞质内充满角蛋白，细胞膜增厚，故角质层的保护作用尤为明显。但由于皮肤是一个面积很大的器官，角质层与外界环境中各种有害因素接触机会明显增多，很容易受到理化因素的损伤。此外，由于使用去角质产品不当而导致的过度去角质、紫外晒伤、敏感炎性损伤、清洁过度、使用护肤品不当等原因，造成有相当一部分使用者角质层受损。因此，研发一款能够修复皮肤角质层的护肤品，并且达到有效快速的修复角质层受损的效果，对皮肤屏障受损的人群尤为重要。

现有的面霜主要的用途为美白皮肤和保湿，但效果一般，且部分面霜仅具有单一效果，使得市场推广较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含干细胞外泌体的面霜及其制作方法。

本发明要解决的技术问题：

现有的面霜主要的用途为美白皮肤和保湿，但效果一般，且部分面霜仅具有单一效果，使得市场推广较差。

本发明的目的能够通过以下技术方案实现：

一种含干细胞外泌体的面霜，包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液3-5份、卡波姆0.5-0.8份、甘油5-10份、维生素C1-2份、维生素E1-2份、去离子水20-30份、保湿剂1-3份、熊果苷1-5份、鲸蜡醇3-5份、微晶蜡2-5份、异透明质酸钠0.05-0.2份；

所述面霜由如下步骤制成：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为300-500r/min，温度为50-60℃的条件下，进行搅拌2-3h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为800-1000r/min，温度为75-80℃的条件下，继续搅拌1-1.5h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为75-80℃的条件下，进行搅拌3-5min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌20-30min后，冷却至室温，制得面霜。

进一步，所述的脂肪干细胞外泌体浓缩液由如下步骤制成：

步骤A1：将脂肪干细胞用含有体积分数10％的胎牛血清的DMEM-L培养基培养，待脂肪干细胞生长至70％时换用无血清的DMEM-L培养基，在温度为37℃，二氧化碳体积浓度8％的条件下，进行培养20-25h后，将培养基进行离心并用0.22μm滤膜过滤，将滤液在转速为4000-5000r/min的条件下，进行离心35-45min，去除底物得到脂肪干细胞外泌体浓缩液。

进一步，所述的保湿剂由如下步骤制成：

步骤B1：将甲壳素分散在去离子水中，加入溴化钠和2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，在转速为150-200r/min的条件下，进行搅拌至预处理甲壳素完全溶解后，加入pH值为10的次氯酸钠溶液，在温度为0℃的条件下，进行反应并保持反应液pH值为10，反应2-3h后，过滤去除过滤物，向滤液中加入乙醇晶体析出，将晶体干燥，制得氧化甲壳素；

步骤B2：将间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁加入反应釜中，在转速为150-200r/min，温度为35-45℃的条件下，进行反应4-6h，制得中间体1，将中间体1、锡粉、浓盐酸加入反应釜中，在转速为150-200r/min的条件下，进行反应2-3h后，调节反应液pH值为10，制得中间体2，将中间体2、氧化甲壳素、四氢呋喃加入反应釜中，在转速为200-300r/min的条件下，进行搅拌并加入1-羟基苯并三唑，进行反应5-6h后，去除四氢呋喃，制得改性甲壳素；

反应过程如下：

步骤B3：将明胶加入去离子水中，加入沙雷肽酶，在温度为37℃的条件下，进行酶解，酶解结束后沸水浴灭活后离心，收集上清液，将改性甲壳素、海藻糖、上清液加入反应釜中，在转速为200-300r/min温度为35-40℃的条件下，进行搅拌6-8min后，调节pH值为8-9，加入戊二醛溶液，在温度为35-40℃的条件下，进行固化1-1.5h后，过滤去除滤液，制得保湿剂。

进一步，步骤B1所述的甲壳素、溴化钠、2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物的用量质量比为1:0.125:0.0125。

进一步，步骤B2所述的间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁的用量摩尔比为1:1:0.2:3，中间体1、锡粉、浓盐酸的用量比为4.5g:8g:30mL，浓盐酸的质量分数为38％，中间体2、氧化甲壳素、1-羟基苯并三唑的用量质量比为1:3.5:1.5。

进一步，步骤B3所述的明胶和去离子水的用量质量比为5:100，沙雷肽酶的用量为1200u/g，改性甲壳素、海藻糖、上清液、戊二醛溶液用量比为5g:2g:30mL:20mL，戊二醛溶液的质量分数为5％。

一种含干细胞外泌体的面霜的制作方法，具体包括如下步骤：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为300-500r/min，温度为50-60℃的条件下，进行搅拌2-3h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为800-1000r/min，温度为75-80℃的条件下，继续搅拌1-1.5h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为75-80℃的条件下，进行搅拌3-5min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌20-30min后，冷却至室温，制得面霜。

本发明的有益效果：本发明在制备一种含干细胞外泌体的面霜的过程中，制得了脂肪干细胞外泌体浓缩液，外泌体膜蛋白能够被蛋白酶剪切，剪切的碎片能够作为配体与细胞膜上的受体结合，从而激活细胞内的信号通路，进而淡化皱纹、改善暗沉、提亮肤色、延缓衰老、皮肤年轻化，并制备了保湿剂，该保湿剂以甲壳素为原料，先对甲壳素进行氧化处理，制得氧化甲壳素，将间苯二酚和对硝基苯乙烯进行反应，制得中间体1，将中间体1用锡粉进行还原，将硝基转变为氨基，进而在1-羟基苯并三唑的作用下，氨基与氧化甲壳素上的羧基脱水缩合，制得改性甲壳素，将明胶酶解处理，将得到含有明胶肽的上清液，再与改性甲壳素和海藻糖共混，凝胶化制得保湿剂，该保湿剂以甲壳素为载体，甲壳素具有很好的吸水性，且表面中间体2和明胶肽能够抑制酪氨酸酶和黑色素B16V细胞活性，进而达到美白效果。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种含干细胞外泌体的面霜，包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液3份、卡波姆0.5份、甘油5份、维生素C1份、维生素E1份、去离子水20份、保湿剂1份、熊果苷1份、鲸蜡醇3份、微晶蜡2份、异透明质酸钠0.05份；

所述面霜由如下步骤制成：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为300r/min，温度为50℃的条件下，进行搅拌2h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为800r/min，温度为75℃的条件下，继续搅拌1h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为75℃的条件下，进行搅拌3min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌20min后，冷却至室温，制得面霜。

所述的脂肪干细胞外泌体浓缩液由如下步骤制成：

步骤A1：将脂肪干细胞用含有体积分数10％的胎牛血清的DMEM-L培养基培养，待脂肪干细胞生长至70％时换用无血清的DMEM-L培养基，在温度为37℃，二氧化碳体积浓度8％的条件下，进行培养20h后，将培养基进行离心并用0.22μm滤膜过滤，将滤液在转速为4000r/min的条件下，进行离心35min，去除底物得到脂肪干细胞外泌体浓缩液。

所述的保湿剂由如下步骤制成：

步骤B1：将甲壳素分散在去离子水中，加入溴化钠和2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，在转速为150r/min的条件下，进行搅拌至预处理甲壳素完全溶解后，加入pH值为10的次氯酸钠溶液，在温度为0℃的条件下，进行反应并保持反应液pH值为10，反应2h后，过滤去除过滤物，向滤液中加入乙醇晶体析出，将晶体干燥，制得氧化甲壳素；

步骤B2：将间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁加入反应釜中，在转速为150r/min，温度为35℃的条件下，进行反应4h，制得中间体1，将中间体1、锡粉、浓盐酸加入反应釜中，在转速为150r/min的条件下，进行反应2h后，调节反应液pH值为10，制得中间体2，将中间体2、氧化甲壳素、四氢呋喃加入反应釜中，在转速为200r/min的条件下，进行搅拌并加入1-羟基苯并三唑，进行反应5h后，去除四氢呋喃，制得改性甲壳素；

步骤B3：将明胶加入去离子水中，加入沙雷肽酶，在温度为37℃的条件下，进行酶解，酶解结束后沸水浴灭活后离心，收集上清液，将改性甲壳素、海藻糖、上清液加入反应釜中，在转速为200r/min温度为35℃的条件下，进行搅拌6min后，调节pH值为8，加入戊二醛溶液，在温度为35℃的条件下，进行固化1h后，过滤去除滤液，制得保湿剂。

实施例2

一种含干细胞外泌体的面霜，包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液4份、卡波姆0.6份、甘油7份、维生素C1.5份、维生素E1.5份、去离子水23份、保湿剂2份、熊果苷3份、鲸蜡醇4份、微晶蜡3份、异透明质酸钠0.08份；

所述面霜由如下步骤制成：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为300r/min，温度为60℃的条件下，进行搅拌2h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为1000r/min，温度为75℃的条件下，继续搅拌1.5h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为75℃的条件下，进行搅拌5min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌20n后，冷却至室温，制得面霜。

所述的脂肪干细胞外泌体浓缩液由如下步骤制成：

步骤A1：将脂肪干细胞用含有体积分数10％的胎牛血清的DMEM-L培养基培养，待脂肪干细胞生长至70％时换用无血清的DMEM-L培养基，在温度为37℃，二氧化碳体积浓度8％的条件下，进行培养25h后，将培养基进行离心并用0.22μm滤膜过滤，将滤液在转速为4000r/min的条件下，进行离心45min，去除底物得到脂肪干细胞外泌体浓缩液。

所述的保湿剂由如下步骤制成：

步骤B1：将甲壳素分散在去离子水中，加入溴化钠和2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，在转速为150r/min的条件下，进行搅拌至预处理甲壳素完全溶解后，加入pH值为10的次氯酸钠溶液，在温度为0℃的条件下，进行反应并保持反应液pH值为10，反应3h后，过滤去除过滤物，向滤液中加入乙醇晶体析出，将晶体干燥，制得氧化甲壳素；

步骤B2：将间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁加入反应釜中，在转速为150r/min，温度为45℃的条件下，进行反应4h，制得中间体1，将中间体1、锡粉、浓盐酸加入反应釜中，在转速为200r/min的条件下，进行反应2h后，调节反应液pH值为10，制得中间体2，将中间体2、氧化甲壳素、四氢呋喃加入反应釜中，在转速为300r/min的条件下，进行搅拌并加入1-羟基苯并三唑，进行反应5h后，去除四氢呋喃，制得改性甲壳素；

步骤B3：将明胶加入去离子水中，加入沙雷肽酶，在温度为37℃的条件下，进行酶解，酶解结束后沸水浴灭活后离心，收集上清液，将改性甲壳素、海藻糖、上清液加入反应釜中，在转速为300r/min温度为35℃的条件下，进行搅拌8min后，调节pH值为8，加入戊二醛溶液，在温度为40℃的条件下，进行固化1h后，过滤去除滤液，制得保湿剂。

实施例3

一种含干细胞外泌体的面霜，包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液4份、卡波姆0.7份、甘油8份、维生素C1.5份、维生素E1.5份、去离子水28份、保湿剂2份、熊果苷4份、鲸蜡醇4份、微晶蜡4份、异透明质酸钠0.15份；

所述面霜由如下步骤制成：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为500r/min，温度为50℃的条件下，进行搅拌3h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为800r/min，温度为80℃的条件下，继续搅拌1h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为80℃的条件下，进行搅拌3min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌30min后，冷却至室温，制得面霜。

所述的脂肪干细胞外泌体浓缩液由如下步骤制成：

步骤A1：将脂肪干细胞用含有体积分数10％的胎牛血清的DMEM-L培养基培养，待脂肪干细胞生长至70％时换用无血清的DMEM-L培养基，在温度为37℃，二氧化碳体积浓度8％的条件下，进行培养20h后，将培养基进行离心并用0.22μm滤膜过滤，将滤液在转速为5000r/min的条件下，进行离心35min，去除底物得到脂肪干细胞外泌体浓缩液。

所述的保湿剂由如下步骤制成：

步骤B1：将甲壳素分散在去离子水中，加入溴化钠和2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，在转速为200r/min的条件下，进行搅拌至预处理甲壳素完全溶解后，加入pH值为10的次氯酸钠溶液，在温度为0℃的条件下，进行反应并保持反应液pH值为10，反应2h后，过滤去除过滤物，向滤液中加入乙醇晶体析出，将晶体干燥，制得氧化甲壳素；

步骤B2：将间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁加入反应釜中，在转速为200r/min，温度为35℃的条件下，进行反应6h，制得中间体1，将中间体1、锡粉、浓盐酸加入反应釜中，在转速为150r/min的条件下，进行反应3h后，调节反应液pH值为10，制得中间体2，将中间体2、氧化甲壳素、四氢呋喃加入反应釜中，在转速为200r/min的条件下，进行搅拌并加入1-羟基苯并三唑，进行反应6h后，去除四氢呋喃，制得改性甲壳素；

步骤B3：将明胶加入去离子水中，加入沙雷肽酶，在温度为37℃的条件下，进行酶解，酶解结束后沸水浴灭活后离心，收集上清液，将改性甲壳素、海藻糖、上清液加入反应釜中，在转速为200r/min温度为40℃的条件下，进行搅拌6min后，调节pH值为9，加入戊二醛溶液，在温度为35℃的条件下，进行固化1.5h后，过滤去除滤液，制得保湿剂。

对比例1

本对比例与实施例1相比未加入脂肪干细胞外泌体浓缩液，其余步骤相同。

对比例2

本对比例与实施例2相比未加入保湿剂，其余步骤相同。

随机选取120名18-25岁男性和女性，分成5组，第一组到第四组分别涂抹实施例1-4制得的面霜，第五和第六组涂抹对比例制得的面霜，每天早晚洁面后使用，连续使用30天对肌肤水分上升比进行比较，并观察皮肤是否变白结果如下表1所示；

表1

由上表1可知实施例1-4制得的面霜使用后肌肤水分上升比为28.33-28.54％，而实施例2制得的面霜使用后肌肤水分上升比为10.29％，实施例1-4和对比例2制得的面霜使用后皮肤变白，而对比例1未出现明显的皮肤变白，表明本发明具有很好的肌肤保湿性，同时能够美白皮肤。

以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种含干细胞外泌体的面霜，其特征在于：包括如下重量份原料：脂肪干细胞外泌体浓缩液3-5份、卡波姆0.5-0.8份、甘油5-10份、维生素C1-2份、维生素E1-2份、去离子水20-30份、保湿剂1-3份、熊果苷1-5份、鲸蜡醇3-5份、微晶蜡2-5份、异透明质酸钠0.05-0.2份；

所述的保湿剂由如下步骤制成：

步骤B1：将甲壳素分散在去离子水中，加入溴化钠和2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，进行搅拌至预处理甲壳素完全溶解后，加入次氯酸钠溶液，反应后，过滤去除过滤物，向滤液中加入乙醇晶体析出，将晶体干燥，制得氧化甲壳素；

步骤B2：将间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁加入反应釜中，进行反应，制得中间体1，将中间体1、锡粉、浓盐酸加入反应釜中，进行反应后，调节反应液pH值，制得中间体2，将中间体2、氧化甲壳素、四氢呋喃加入反应釜中，进行搅拌并加入1-羟基苯并三唑，进行反应后，去除四氢呋喃，制得改性甲壳素；

步骤B3：将明胶加入去离子水中，加入沙雷肽酶，进行酶解，酶解结束后沸水浴灭活后离心，收集上清液，将改性甲壳素、海藻糖、上清液加入反应釜中，进行搅拌后，调节pH值，加入戊二醛溶液，进行固化后，过滤去除滤液，制得保湿剂。

2.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的面霜，其特征在于：所述的脂肪干细胞外泌体浓缩液由如下步骤制成：

步骤A1：将脂肪干细胞用含有体积分数10％的胎牛血清的DMEM-L培养基培养，待脂肪干细胞生长至70％时换用无血清的DMEM-L培养基，在温度为37℃，二氧化碳体积浓度8％的条件下，进行培养20-25h后，将培养基进行离心并用0.22μm滤膜过滤，将滤液在转速为4000-5000r/min的条件下，进行离心35-45min，去除底物得到脂肪干细胞外泌体浓缩液。

3.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的面霜，其特征在于：步骤B1所述的甲壳素、溴化钠、2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物的用量质量比为1:0.125:0.0125。

4.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的面霜，其特征在于：步骤B2所述的间苯二酚、对硝基苯乙烯、乙醚、氯化铁的用量摩尔比为1:1:0.2:3，中间体1、锡粉、浓盐酸的用量比为4.5g:8g:30mL，浓盐酸的质量分数为38％，中间体2、氧化甲壳素、1-羟基苯并三唑的用量质量比为1:3.5:1.5。

5.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的面霜，其特征在于：步骤B3所述的明胶和去离子水的用量质量比为5:100，沙雷肽酶的用量为1200u/g，改性甲壳素、海藻糖、上清液、戊二醛溶液用量比为5g:2g:30mL:20mL，戊二醛溶液的质量分数为5％。

6.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的面霜的制作方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

步骤S1：将脂肪干细胞外泌体浓缩液、卡波姆、甘油、维生素C、维生素E、去离子水加入搅拌釜中，在转速为300-500r/min，温度为50-60℃的条件下，进行搅拌2-3h，制得第一混合料；

步骤S2：将保湿剂、熊果苷、鲸蜡醇、微晶蜡、透明质酸钠加入搅拌釜中，在转速为800-1000r/min，温度为75-80℃的条件下，继续搅拌1-1.5h，制得第二混合料；

步骤S3：将第一混合料和第二混合料加入搅拌釜中，在转速为3000r/min，温度为75-80℃的条件下，进行搅拌3-5min后，降温至温度为60℃，加入保湿剂继续搅拌20-30min后，冷却至室温，制得面霜。