CN108478611A - 一种修复烫伤药 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种修复烫伤药，属于药物技术领域。本发明以脂肪组织为原料，通过分离、培养，加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶对一部分成熟的脂肪细胞进行消化，其具有强大的自我更新能力、多向分化能力和跨胚层发育的可塑性，对表皮细胞、成纤细胞及血管内皮细胞具有增殖分化的作用，进而以新生细胞替代烫伤坏死细胞，并促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，恢复烫伤表面组织的活性，血管内皮生长因子则能调节血管生成，促进血管新生，对烫伤患处具有较好的修复再生性能。本发明解决了目前烫伤药止痛比效慢、液化期较长、创伤面愈合时间较长，患者治愈后留有不同程度的疤痕，对细胞的活性有一定的损伤的问题。

Description

一种修复烫伤药
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种修复烫伤药。
背景技术
烫伤药,药物技术领域产品之一。烫烧伤又称水灼伤，是一种常见的伤病。无论何时何地男女老幼皆可发生。临床上，一般分为：“水烫、油烫、烧伤（火烫）”三大类。病性与水、油、火和烫伤面积大小，深浅有关。一般水烫较轻，油烫较重，火伤更重。若烫伤面积过大、过深和头面胸部受伤过重，若不及时处理，合理治疗，常可危及生命。局部潮红疼痛，随之起水泡，甚至红肿及皮破肉烂。或皮焦肉卷，疼痛难忍，继而泡破溃烂，肉腐难脱。严重者还伴有全身症状，甚者毒火气攻心，多见神识昏迷。根据烫伤面积大小，深浅不同，一般分为1、2、3度，或轻症、重症和极重症。烫烧伤也是家庭住户大人﹑小孩最易发生的事故，特别小孩一不小心就会被火﹑开水烫伤，得不到及时救治造成伤口发炎﹑溃烂，烫伤严重时还会造成生命危险，特别是农村距离医疗机构较远，往往造成严重后果。
烧烫伤是日常生活中比较常见的意外情况之一，对患者的生理和心理都造成很大的影响，给病人带来一定的精神创伤和躯体损伤。特别是发生在特殊功能部位或是较大面积深度烧烫伤是十分危险的，后果将是严重的。
目前，用于治疗各种烧伤、烫伤的药剂比较多，治疗方法也多种多样。从中医角度，主要采用外敷包扎疗法，即在创面上涂中药膏和抗生素软膏，治疗时主要容易引起创面溃疡。在中药膏烧伤药中以湿润烧伤膏治疗效果为最好，是烧伤患者的首选，也得到了烧伤患者的好评。但在实际使用中，目前烫伤药止痛比较慢、液化期较长、创伤面愈合时间较长，患者治愈后留有不同程度的疤痕，对细胞的活性有一定的损伤。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前烫伤药止痛比较慢、液化期较长、创伤面愈合时间较长，患者治愈后留有不同程度的疤痕，对细胞的活性有一定的损伤的问题，提供一种修复烫伤药。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：一种修复烫伤药，按重量份数计包括如下组分，50~70份无菌水、2~5份积雪草、1~4份川芎素、2~5份青藤碱，其特征在于，还包括20~30份细胞修复再生助剂、15~30份防瘢痕助剂、40~50份抗菌成膜助剂；
所述细胞修复再生助剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，离心，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于35~38℃酶解，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合，调节pH至7~7.3，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取20~40份沉淀A、2~5份青霉素、2~6份链霉素、60~70份HG-DMEM细胞培养基、6~8份胎牛血清混合，于30~36℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂；
所述防瘢痕助剂的制备方法，包括如下步骤：
按质量份数计，取2~5份丹参素，2~6份丹皮酚，200~300份磷脂、100~150份胆固醇、30~40份无水乙醇，超声，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于30~40℃搅拌混合，过滤，取滤液A，即得防瘢痕助剂；
所述抗菌成膜助剂的制备方法，包括如下步骤：
A.取琼脂糖按质量比1：40~50加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合，冷却，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入乙醇溶液，离心，取沉淀B；
B.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于95~100℃搅拌混合，再加入沉淀B质量1~3%的硼氢化钠，搅拌混合，调节pH至7~7.2，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取8~12份干燥物、5~7份环氧氯丙烷、2~4份氢氧化钠、50~70蒸馏水，于50~60℃搅拌混合，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明以脂肪组织为原料，通过分离、培养，加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶对一部分成熟的脂肪细胞进行消化，而消化后剩余的部分是血管基质成分，内 含有大量的单核细胞，其中包括一部分脂肪干细胞，其具有强大的自我更新能力、多向分化能力和跨胚层发育的可塑性，对表皮细胞、成纤细胞及血管内皮细胞具有增殖分化的作用，通过刺激表皮生长因子，其受体酪氨酸磷酸化，从而达到修补和增生肌肤表层细胞的效果，促进细胞增殖分化，进而以新生细胞替代烫伤坏死细胞，而成纤细胞的分化能够改善细胞生长微环境，并促进弹性纤维和胶原蛋 白的合成，恢复烫伤表面组织的活性，血管内皮生长因子则能调节血管生成，促进血管新生，对烫伤患处具有较好的修复再生性能；
（2）本发明以丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚，加入磷脂、胆固醇，采用乙醇注入法制备纳米脂质体，丹参酮ⅡA、丹参素是丹参的主要药效成分之一，丹参酮ⅡA 对成纤维细胞增殖有一定的控制和诱导凋亡的作用，丹参素可以抑制成纤维细胞核转录因子NF-Kb的活性，并诱导成纤维细胞发生凋亡，抑制 NF-1的活性而调控胶原的合成与分泌，丹皮酚是牡丹皮的主要有效成分，丹皮酚可以抑制由TNF-α诱导引起的真皮成纤维细胞MMP-9mRNA及炎症因子IL-1β和IL-8 表达水平的上调，其复配可以改善血瘀和抑制烫伤皮肤表面温度上升作用，起协同作用，清热活血作用都有所增强，防止瘢痕增生，减缓烫伤疤痕生成；
（3）本发明以琼脂糖为原料，其分子量大、降解慢，用双氧水将琼脂糖降解, 以获得低分子量产物，同时对琼脂糖分子上的羟基进行活化改性，引入环氧基团，提高了琼脂糖的反应活性，加入明胶，其中的氨基与活化琼脂糖中的环氧基团发生化学反应成键，改善了明胶降解速度过快、胶体强度不高的缺点，而两者结合的凝胶强度较好并且凝胶亲水，涂抹后对烫伤皮肤创伤进行处理，达到了快速封闭创面，并与创面有效紧密贴合，对外界细菌产生屏蔽抑制作用，同时对伤口渗出液有效吸收，避免皮肤创面体液积聚，减少发生感染的可能性。
具体实施方式
脂肪组织：猪脂肪干细胞，来源于健康的猪体内取出的新鲜组织。
HG-DMEM细胞培养基：购于美国Gibco公司。
丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚：购于南京泽朗医药科技有限公司。
川芎素：购于成都亨法药业有限公司；青藤碱：购于宝鸡市永嘉天然植物开发有限公司。
细胞修复再生助剂：（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，于10000r/min离心5~10min，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于35~38℃酶解30~40min，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合1~2h，调节pH至7~7.3，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取20~40份沉淀A、2~5份青霉素、2~6份链霉素、60~70份HG-DMEM细胞培养基、6~8份胎牛血清混合，于30~36℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养5~8天，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂。
防瘢痕助剂：按质量份数计，取2~5份丹参素，2~6份丹皮酚，200~300份磷脂、100~150份胆固醇、30~40份无水乙醇，于20W超声20~30min，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入pH6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于30~40℃搅拌混合40~50min，依次过 0.8、0.45μm的微孔滤膜，取滤液A，即得防瘢痕助剂。
抗菌成膜助剂：A.取琼脂糖按质量比1：40~50份加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合2~3h，冷却至50~55℃，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合40~50min，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入质量分数为80%的乙醇溶液，离心，取沉淀B；
C.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于95~100℃搅拌混合1~2h，再加入沉淀B质量1~3%的硼氢化钠，搅拌混合50~60min，调节pH至7~7.2，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取8~12份干燥物、5~7份环氧氯丙烷、2~4份氢氧化钠、50~70份蒸馏水，于50~60℃搅拌混合2~3h，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
一种修复烫伤药，按质量份数计，包括20~30份细胞修复再生助剂、15~30份防瘢痕助剂、40~50份抗菌成膜助剂、50~70份无菌水、2~5份积雪草、1~4份川芎素、2~5份青藤碱。
实施例1
脂肪组织：猪脂肪干细胞，来源于健康的猪体内取出的新鲜组织。
HG-DMEM细胞培养基：购于美国Gibco公司。
丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚：购于南京泽朗医药科技有限公司。
川芎素：购于成都亨法药业有限公司；青藤碱：购于宝鸡市永嘉天然植物开发有限公司。
细胞修复再生助剂：（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，于10000r/min离心5min，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于35℃酶解30min，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合1h，调节pH至7，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取20份沉淀A、2份青霉素、2份链霉素、60份HG-DMEM细胞培养基、6份胎牛血清混合，于30℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养5天，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂。
防瘢痕助剂：按质量份数计，取2份丹参素，2份丹皮酚，200份磷脂、100份胆固醇、30份无水乙醇，于20W超声20min，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入pH6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于30℃搅拌混合40min，依次过 0.8、0.45μm的微孔滤膜，取滤液A，即得防瘢痕助剂。
抗菌成膜助剂：A.取琼脂糖按质量比1：40加入蒸馏水，于95℃搅拌混合2h，冷却至50℃，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合40min，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入质量分数为80%的乙醇溶液，离心，取沉淀B；
D.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于95℃搅拌混合1h，再加入沉淀B质量1%的硼氢化钠，搅拌混合50min，调节pH至7，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取8份干燥物、5份环氧氯丙烷、2份氢氧化钠、50份蒸馏水，于50℃搅拌混合2h，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
一种修复烫伤药，按质量份数计，包括20份细胞修复再生助剂、15份防瘢痕助剂、40份抗菌成膜助剂、50份无菌水、2份积雪草、1份川芎素、2份青藤碱。
实施例2
脂肪组织：猪脂肪干细胞，来源于健康的猪体内取出的新鲜组织。
HG-DMEM细胞培养基：购于美国Gibco公司。
丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚：购于南京泽朗医药科技有限公司。
川芎素：购于成都亨法药业有限公司；青藤碱：购于宝鸡市永嘉天然植物开发有限公司。
细胞修复再生助剂：（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，于10000r/min离心10min，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于38℃酶解40min，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合2h，调节pH至7.3，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取40份沉淀A、5份青霉素、6份链霉素、70份HG-DMEM细胞培养基、8份胎牛血清混合，于36℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养8天，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂。
防瘢痕助剂：按质量份数计，取5份丹参素，6份丹皮酚，300份磷脂、150份胆固醇、40份无水乙醇，于20W超声30min，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入pH6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于40℃搅拌混合50min，依次过 0.8、0.45μm的微孔滤膜，取滤液A，即得防瘢痕助剂。
抗菌成膜助剂：A.取琼脂糖按质量比1：50加入蒸馏水，于100℃搅拌混合3h，冷却至55℃，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合50min，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入质量分数为80%的乙醇溶液，离心，取沉淀B；
E.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于100℃搅拌混合2h，再加入沉淀B质量3%的硼氢化钠，搅拌混合60min，调节pH至7.2，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取12份干燥物、7份环氧氯丙烷、4份氢氧化钠、70份蒸馏水，于60℃搅拌混合3h，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
一种修复烫伤药，按质量份数计，包括30份细胞修复再生助剂、30份防瘢痕助剂、50份抗菌成膜助剂、70份无菌水、5份积雪草、4份川芎素、5份青藤碱。
实施例3
脂肪组织：猪脂肪干细胞，来源于健康的猪体内取出的新鲜组织。
HG-DMEM细胞培养基：购于美国Gibco公司。
丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚：购于南京泽朗医药科技有限公司。
川芎素：购于成都亨法药业有限公司；青藤碱：购于宝鸡市永嘉天然植物开发有限公司。
细胞修复再生助剂：（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，于10000r/min离心7.5min，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于36.5℃酶解35min，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合1.5h，调节pH至7.15，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取30份沉淀A、3.5份青霉素、4份链霉素、65份HG-DMEM细胞培养基、7份胎牛血清混合，于33℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养6.5天，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂。
防瘢痕助剂：按质量份数计，取3.5份丹参素，4份丹皮酚，250份磷脂、125份胆固醇、35份无水乙醇，于20W超声25min，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入pH6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于35℃搅拌混合45min，依次过 0.8、0.45μm的微孔滤膜，取滤液A，即得防瘢痕助剂。
抗菌成膜助剂：A.取琼脂糖按质量比1：45份加入蒸馏水，于97.5℃搅拌混合2.5h，冷却至52.5℃，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合45min，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入质量分数为80%的乙醇溶液，离心，取沉淀B；
F.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于97.5℃搅拌混合1.5h，再加入沉淀B质量1~3%的硼氢化钠，搅拌混合55min，调节pH至7.1，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取10份干燥物、6份环氧氯丙烷、3份氢氧化钠、60蒸馏水，于55℃搅拌混合2.5h，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
一种修复烫伤药，按质量份数计，包括25份细胞修复再生助剂、22.5份防瘢痕助剂、45份抗菌成膜助剂、60份无菌水、3.5份积雪草、2.5份川芎素、3.5份青藤碱。
对比例1
与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少细胞修复再生助剂。
对比例2
与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少细胞修复再生助剂和防瘢痕助剂。
对比例3
与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少细胞修复再生助剂、防瘢痕助剂和抗菌成膜助剂。
对比例4：南京市某公司生产的一种烫伤药
烫伤愈合试验：于全市医院烫伤患者中挑选140名烫伤程度和症状近似相同患者作为本次试验的志愿者。将志愿者随机分为7组实验组，每组20人，分别涂抹本发明实施例1~3所制备的修复烫伤药以及对比例的烫伤药，测试结果如下表1：
表1
综上所述，本发明所制备的修复烫伤药符合应用要求，值得大力推广使用。

Claims (1)

1.一种修复烫伤药，按重量份数计包括如下组分，50~70份无菌水、2~5份积雪草、1~4份川芎素、2~5份青藤碱，其特征在于，还包括20~30份细胞修复再生助剂、15~30份防瘢痕助剂、40~50份抗菌成膜助剂；
所述细胞修复再生助剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取脂肪组织按质量比1：10加入PBS缓冲液，离心，弃去中层液，合并上层液和沉淀，得混合物，取混合物按质量比100：1：1加入Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶，于35~38℃酶解，灭酶，得酶解物；
（2）取HG-DMEM细胞培养基按质量比10：3：80加入碳酸氢钠、去离子水，搅拌混合，调节pH至7~7.3，过滤，取滤液，取滤液按质量比10：1加入胎牛血清混合，离心，取沉淀A，按质量份数计，取20~40份沉淀A、2~5份青霉素、2~6份链霉素、60~70份HG-DMEM细胞培养基、6~8份胎牛血清混合，于30~36℃、质量分数为5%的二氧化碳浓度下培养，冷冻干燥，即得细胞修复再生助剂；
所述防瘢痕助剂的制备方法，包括如下步骤：
按质量份数计，取2~5份丹参素，2~6份丹皮酚，200~300份磷脂、100~150份胆固醇、30~40份无水乙醇，超声，得超声液，取丹参酮ⅡA按质量比1：100加入磷酸氢二钠-柠檬酸PBS缓冲液，得混合液，取超声液按质量比2：1注入混合液，通入氮气保护，于30~40℃搅拌混合，过滤，取滤液A，即得防瘢痕助剂；
所述抗菌成膜助剂的制备方法，包括如下步骤：
A.取琼脂糖按质量比1：40~50加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合，冷却，得冷却物，取冷却物按质量比10：1加入双氧水，搅拌混合，旋转蒸发，减压浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7加入乙醇溶液，离心，取沉淀B；
B.取沉淀B按质量比1：8加入蒸馏水混合，于95~100℃搅拌混合，再加入沉淀B质量1~3%的硼氢化钠，搅拌混合，调节pH至7~7.2，冷冻干燥，得干燥物，按质量份数计，取8~12份干燥物、5~7份环氧氯丙烷、2~4份氢氧化钠、50~70蒸馏水，于50~60℃搅拌混合，抽滤，取抽滤液减压浓缩，离心，取上清液按质量比3：2加入明胶，即得抗菌成膜剂。
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