CN1132585C - 水溶性医用几丁糖制剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属医用生物材料，公开了一种水溶性医用几丁糖制剂及制备方法。本发明的几丁糖是从甲壳动物如虾、蟹的外壳中提取得到的，本发明的制剂水溶性好，生产成本低，并能用于预防组织粘连和防治退变性关节炎及用于眼科人工晶体植入手术。在临床上有较好的应用前景。

Description

水溶性医用几丁糖制剂及制备方法

技术领域

本发明属医用材料，具体涉及一种水溶性医用几丁糖制剂及制备方法。

背景技术

国际上几丁质主要用于工农业生产，仅有美国、日本等国将几丁质研制成人造皮及手术缝合线。但未见几丁糖其他临床应用报道。

国内外采用透明质酸钠预防组织粘连和用于眼科人工晶体植入手术。而几丁糖与透明质酸钠均属多糖类物质，作用类似，透明质酸钠从鸡冠提取，产量少、成本高、在体内吸收快、作用时间短；而几丁糖是从废弃虾、蟹外壳中提取，成本远低于透明质酸钠，且作用时间长，可成为透明质酸钠的替代产品。医用几丁糖能促使上皮细胞生长，抑制成纤维细胞生长，具有广谱的抑菌作用和聚糖的网络结构，因而它具有预防术后组织粘连、抑制疤痕形成和保护关节软骨等生理功能，近年来作为一种天然高分子医用材料已被广泛应用于医学临床领域。

医用几丁糖是用几丁质(chitin)制备得到。几丁质是一种广泛存在于自然界的天然高分子聚糖，一般从甲壳类动物如虾、蟹的外壳中提取制得的，故又称甲壳质。由于几丁质的水溶性极差，因而对其应用受到很大限制。

发明内容

本发明的目的是克服上述几丁质的不足之处，研制一种水溶性的几丁质衍生物。

本发明提供了一种水溶性医用几丁糖制剂，该制剂是由水溶性医用几丁糖与药用辅料组成的。

本发明的另一目的是提供了上述水溶性医用几丁糖制剂的制备方法，该方法包括下列步骤：

(1)虾壳精拣、清洗

去除虾头、脚和尾，并将虾壳每节分离，用清水清洗、沥干；

(2)虾壳碱—酸—碱浸泡

将已清洗、沥干的虾壳浸泡于1-10％NaOH溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，再浸泡于1-10％HCL溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，继而将已清洗、沥干的虾壳浸泡于10％NaOH溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，制得的几丁质置于甩水袋中进行脱水，于55-60℃烘箱内烘干备用；

(3)医用几丁质粉末制备

将备用的几丁质置于0.3％NaOH中煮沸，并保持微煮1小时，用蒸馏水洗清至中性，再置于蒸馏水煮沸30分钟，用蒸馏水冲洗并沥干，置于55-60℃烘箱内烘干，用不锈钢粉碎机进行粉碎，备用；

(4)医用几丁糖粗品制备：

按几丁质粉末∶NaOH∶H₂O∶十二烷基硫酸钠＝1∶5-15∶10-15∶0.1-0.5重量比的比例，经充分混合将碱化医用几丁质粉末用绢丝沥去医用几丁质粉末干重约10倍量体积的NaOH溶液，移入反应瓶中。加入医用几丁质粉末干重8-12倍量体积的异丙醇于12C左右水浴中，搅拌平衡1小时，另将氯乙酸溶解于异丙醇中(氯乙酸∶异丙醇＝5-15∶1-10)并置于分液漏斗内，缓慢地加入反应瓶中，控制滴加速度，使反应体系的温度不超过25℃，氯乙酸滴加完毕后，在搅拌状态下使其继续反应18-22小时；

(5)医用几丁糖的提纯

将反应完毕的医用几丁糖用80％左右酒精洗涤3-6次，用加有绢丝的布氏漏斗抽干，用50-300倍量(v/w)的蒸馏水溶解。

用10-20％NaOH溶液将溶液的pH调至6-7，于3#砂蕊漏斗中进行真空抽滤，向滤液中倒入2-5倍量(v/w)的95％的酒精溶液中，搅拌、沉淀，将医用几丁糖沉淀先后用95％酒精和无水乙醇各洗涤3次，进行真空干燥；

(6)医用几丁糖制剂的配制

用蒸馏水配制医用几丁糖除菌溶液，其浓度为0.1-1.5％，用0.22-0.3μ滤膜进行除菌过滤。另将适量的NaCL溶液经除菌过滤滤入除菌液中，使其NaCL含量在0.85％左右并摇匀，将医用几丁糖除菌溶液倒入2.5-3.5倍量(v/w)的95％酒精溶液中，搅拌、沉淀，将医用几丁糖沉淀先后用95％酒精，无水乙醇洗涤各3次，进行真空干燥，然后按处方量加入磷酸二氢钠，磷酸氢二钠、氯化钠和注射用水，最后进行灌装得成品。

通过上述方法制备的本发明水熔性医用几丁糖制剂的技术指标如下：1.外观                   无色、透明粘稠状液体，无任何肉眼可见的异物2.透光率(660nm)          0.1％溶液的透光率≥95.0％3.动力粘度               ≥500mpa.s4.ph值                   7.0±0.55.紫外吸收               230nm≤1.0

                     257nm≤1.06.重金属含量            10mg/kg7.无菌试验              应无菌，无菌有效期应不少于2年8.细菌内毒素试验        ≤0.5EU/mg9.急性毒性试验          应无急性毒性10.溶血试验             溶血率应不大于5％11.细胞毒性试验         细胞毒性反应为不大于1级，细胞形态应正常12.皮内刺激试验         应无皮内刺激反应13.皮肤致敏试验         皮肤致敏率应不大于8％14.短期皮下植入试验     皮下植入14日后组织相容性良好，

                    炎性反应程度应不大于III级

本发明的水溶性医用几丁糖制剂的常用规格为0.4、1、2.5、3或15ml以及250ml。

本发明的水溶性医用几丁糖制剂的动物试验和临床应用验证，结果如下：

1.动物试验：

医用几丁糖动物试验共用家兔46只、昆明种小鼠225只、白色豚鼠30只、SD大鼠172只、wistar大鼠30只，分别进行医用几丁糖毒理学、酶组织化学、伤口II期愈合、预防术后肠粘连、肌腱粘连及关节粘连等实验研究，同时对医用几丁糖进行了体外细胞培养和抑制细菌生长的试验研究。

a.医用几丁糖毒理学试验：

医用几丁糖制品进行了全身急性毒性、热源、溶血、细胞毒性、皮内刺激、皮肤致敏、短期肌肉植入、显性致死、致突变等项试验，试验结果表明本制品具有无毒性、无刺激性、无免疫源性、无热源反应、不溶血、无致突变及无致死性突变效应，它是一种相容性良好的新型体内植入性生物材料。

b.酶组织化学试验：

试验显示医用几丁糖无毒性、无刺激性、具有良好的生物相容性、组织反应小、吸收快。

c.伤口II期愈合试验：

试验显示医用几丁糖具有减少疤痕的作用。

d.肠粘连、肌腱粘连及关节粘连试验：

试验表明医用几丁糖具有预防肠粘连、肌腱粘连及关节粘连的作用。

e.体外细胞抑制生长试验：

试验表明医用几丁糖具有广谱的抗菌作用，尤其对革兰氏阳性细菌的抑菌作用更显著。

动物试验结果表明本制品是一种无毒、无刺激性、无免疫源性、生物相容性良好的新型生物医用材料，能促进上皮的细胞生长、抑制成纤维细胞生长、并具有广谱的抑菌作用。因而本品是一种理想的防止各种外科手术后阻隔剂。

2.临床应用验证：

在动物试验确认医用几丁糖是一种安全有效的新型生物医用材料的基础上，于人体临床进行了验证，我们在上海第二军医大学长征医院等临床单位进行250例临床观察(其中男141例，女109例，另设对照组175例)，具体如下表所示：

        表1  医用几丁糖临床应用

关节腔内注射	95例
		关节松解手术	30例
其他骨科松解手术	20例
		肌腱手术	35例
上腹部手术	50例
		妇产科手术	20例
关节镜检查，手术关节灌洗和扩散液	50例

临床应用结果表明，医用几丁糖具有预防术后组织粘连的作用，是一种可供临床应用的组织相容性良好、安全有效的新型生物医用材料。

本发明的水熔性医用几丁糖的毒理学研究和生物学特性研究结果如下：

1.几丁质毒理学研究

几丁糖是几丁质脱乙基后衍生而来的，首先我们对几丁质进行毒理学研究，包括：a)全身急性毒性试验；b)热源试验；c)原发性皮肤刺激试验；d)皮内注射试验；e)皮肤致敏试验；f)眼结膜刺激试验；g)溶血试验；h)细菌毒性试验；i)显性致死试验；j)致突变试验；k)短期肌肉植入试验。研究结果证明几丁质具有无毒性、无刺激性、无免疫抗原性、无热源反应、不溶血、无致突变及无致死性突变反应，是一种组织形容性良好的新的体内植入生物材料(论文1)

2.几丁糖毒理学检测

我们将研制的水溶性几丁糖送国家医药管理局医用高分子产品质量检测中心检测，全部检测项目均合格[补充附件一/(一)]。

               检验结果检验项目     技术要求                                           检验结果无菌         应无菌                                             合格细菌内毒素   细菌内毒素量不超过0.5EU/mg                         合格急性毒性     应无急性毒性                                       合格溶血         溶血率应不大于5％                                  1.7％合格细胞毒性     细胞毒性反应不大于1级，细胞形态应正常              0级合格皮内刺激     应无皮内刺激反应                                   合格皮肤致敏     皮肤致敏率应不大于8％                              0％合格皮下植入     植入14日组织相容性应良好，炎性反应程度不大于III级  合格

3.生物学特性研究

①几丁糖抑制细菌生长的实验研究

将几丁糖按等比稀释法加入细菌培养液中(选用金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠艾希氏菌、绿脓假单胞菌、白色念球菌等五种细菌)。在35℃恒温下培养18小时观察细菌生长情况，结果几丁糖对各种菌株均有抑制作用，说明几丁糖具有广谱的抑菌作用，特别对于革兰氏阳性细菌效果显著(论文2)

②几丁糖影响体外细胞生长的实验研究

将不同剂量的几丁糖溶液分别加入人表皮角化细胞和人成纤维细胞培养液中，培养72小时，用NAG酶反应定量测定法，测定细胞数，结果人表皮角化细胞数在一定浓度范围内，随几丁糖溶液剂量增加而增加，呈正比关系；而人成纤维细胞数随着几丁糖溶液剂量的增加而减少，呈反比关系。实验结果证实几丁糖具有促进人表皮角化细胞生长而抑制成纤维细胞生长的作用。

上述研究结果证实几丁糖是一种无毒、无刺激性、组织相容性良好的生物材料，植入体内是安全的。

本发明的水溶性医用几丁糖的临床应用研究结果如下：

根据几丁糖具有促进上皮细胞生长、抑制成纤维细胞生长的生物学特性，以及作为一种粘弹剂，缓释剂的特点，进行以下四个方面相关的应用基础研究，探索临床应用的可能性。

1.几丁糖预防组织粘连的研究

①几丁糖预防肌腱粘连的实验研究

将32只家兔后肢屈肌腱造成实验性损伤，实验组鞘内注入2％几丁糖溶液，对照组不放，石膏固定6周后处死，行粘连等级分级、肌腱滑动距离、末节趾间关节活动度及所耗功生物力学测试、光镜和透射电镜观察。结果经统计学处理，两组相差非常显著，说明几丁糖具有明显预防肌腱粘连作用。

②几丁糖预防关节粘连的实验研究

将32只家兔膝关节造成实验损伤，实验组关节腔内滴入2％几丁糖溶液，对照组不放，石膏固定，分别于3周和6周后处死，检查关节活动度，行大体、光镜及透射电镜观察。经统计学处理，两组结果相差非常显著，说明几丁糖具有明显预防关节粘连作用。

③几丁糖预防术后肠粘连的实验研究

选用SD大鼠60只，制成肠粘连动物模型，采用1％几丁糖、2％几丁糖和右旋糖酐溶液作腹腔灌注，并与对照组比较，2周后处死全部大鼠，剖腹观察腹腔粘连情况。结果几丁糖组大部分无粘连现象，少数仅有轻度粘连(I～II级)，而另二组均有严重肠粘连，大部分已引起不完全性肠梗阻。说明几丁糖溶液能有效地预防术后肠粘连。

上述研究结果说明几丁糖具有明显预防组织粘连的作用。其机理与几丁糖的润滑作用、生物屏障作用及抑制成纤维细胞生长、减少疤痕形成有关。

2.几丁糖防治关节软骨退变的研究

①几丁糖关节内注射对创伤性关节软骨的保护作用

将24只家兔造成膝关节Hulth退变模型，每3天关节内注射2％几丁糖或生理盐水，于4、8、12周处死，透射电镜观察。结果几丁糖组关节软骨退变程度较轻，而生理盐水组软骨退变明显。

②几丁糖对关节创伤后非生理位制动软骨退变的保护作用

将32只家兔膝关节造成实验性损伤，实验组关节腔内滴入2％几丁液，对照组不放，非生理位石膏固定3、6周后处死，检查关节活动度，摄X光片、光镜及电镜观察。结果实验组关节间隙正常、软骨面光滑、退变程度轻，而对照组关节间隙变窄、软骨面粗糙、退变程度重。

③几丁糖溶液灌注对关节软骨退变的保护作用

对18只家兔膝关节切开后分别用0.1％几丁糖、生理盐水持续灌注，并与空气暴露组对照。分别于术后1小时、3小时对关节软骨进行扫描电镜观察。结果：几丁糖组软骨正常，生理盐水组在术后1小时软骨正常，3小时有明显退变，而暴露组术后1小时软骨即有明显破坏。

上述实验结果说明几丁糖能有效地保护关节软骨、防止和减轻关节软骨的退变过程，从而为几丁糖用于防治退变性关节炎提供了实验依据。几丁糖保护关节软骨的机理与几丁糖理化性质有关，几丁糖是一种氨基多糖在理化性质上与关节内氨基多糖相似，具有粘弹性、缓吸收性，而氨基多糖是软骨及软骨基质构成与代谢的基础。

3.几丁糖眼内应用的实验研究

目前眼科人工晶体植入手术常规使用透明质酸钠作为眼内粘弹剂，几丁糖来源广，成本低，同样具有粘弹性，能否作为粘弹剂用于眼内手术？是否对眼内组织造成损害？为此，我们将几丁糖与进口透明质酸钠(Healon GV)进行对比研究，实验用新西兰白兔20只，左眼前房内注入几丁糖，右眼前房内注入进口透明质酸钠作为对照。观察球结膜充血、角膜混浊、前房渗出、眼压变化、角膜内皮活细胞染色及计数。结果两组无显著性差异(P＞0.05)，光镜、电镜观察细胞形态亦无明显异常。提示几丁糖在眼内的反应与进口透明质酸钠相似，可以作为眼内粘弹剂用于眼内手术。

4.几丁糖药物缓释的研究

几丁糖作为缓释剂国外已用于医药工业，本研究结合骨科临床工作需要，研究用于骨髓炎和骨肿瘤治疗的几丁糖缓释药。

①几丁糖庆大霉素缓释药的实验研究

鉴于几丁糖具有广谱抑菌作用和药物缓释作用，我们研制成几丁糖庆大霉素缓释药，并进行预防骨感染的实验研究，先将缓释药棒植入兔胫骨干骺端，检测术后不同时间血药浓度、局部骨组织和血肿中的庆大霉素浓度，结果血药浓度在24h出现，维持时间为3周，而局部骨组织和血肿中的庆大霉素在第10周时仍为金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度的数倍以上，说明几丁糖庆大霉素是一种良好的缓释药。然后按Norden法制丁糖组、庆大霉素组、对照组。术后观察动物一般情况、X线片、骨培养及细菌计数。结果几丁糖庆大霉素组骨感染率及细菌数明显低于其它各组，几丁糖组骨感染率虽无下降，但细菌计数明显少于对照组，而庆大霉素观察指标和对照组无差别。动物实验证实单纯几丁糖凝胶可减轻骨感染的发生。而几丁糖庆大霉素能有效预防骨感染的发生，几丁糖庆大霉素是一种良好的缓释药，随着几丁糖的吸收而逐渐缓释药物，其效果明显优于庆大霉素株链。

②几丁糖阿霉素缓释药的研究

骨肿瘤术后局部复发是临床较为棘手的问题，主要原因是手术不彻底，造成肿瘤组织残留。因此，骨肿瘤术后局部用药，以消灭残存肿瘤细胞，有非常现实的意义。目前，骨肿瘤术后局部用药多为化疗药物的直接应用或用明胶海绵吸附的局部应用，但因药物吸收快，毒副作用大，效果并不理想。利用几丁糖的药物缓释作用，研制成几丁糖阿霉素缓释药，通过药代动力学研究及该药的抑杀肿瘤的研究，证实在肿瘤局部刮除后，局部使用该药，既减少阿霉素全身毒副作用，又较长时间维持抑杀肿瘤的有效浓度，有利于提高骨肿瘤的治愈率。

几丁糖用于骨科、手外科、普外科、妇产科及眼科临床，用来预防术后肌腱粘连、关节粘连、神经粘连、肠粘连，防治退变性骨关节炎，以及眼科人工晶体植入手术。几丁糖庆大霉素缓释药和几丁糖阿霉素缓释药用于治疗慢性骨髓炎及骨巨细胞瘤，已临床应用1000余例，证明几丁糖临床应用是安全、有效的。国内21所医院应用1292例，同样获得满意的治疗效果。

5.预防组织粘连

①病例介绍：李某某，女性，22岁，住院号220508。因左手创伤后半年，示指伸屈活动障碍而行手术松解，术中见腱鞘损伤，屈肌腱与周围组织广泛粘连，切除损伤腱鞘，保留A2，A4两个滑车，彻底松解粘连，用2％几丁糖2ml涂布于肌腱周围，术后切口一期愈合，无任何不良反应。术后10天伸屈活动基本恢复正常。

②预防关节粘连

上海第九人民医院骨科在对20例胫骨平台骨折病人采用关节镜手术同时结合关节内注射2％几丁糖5ml，预防胫骨平台骨折后膝关节粘连，注射2周后，60％的病例膝关节活动度超过90°，注射4周后，90％超过90°，其中45％甚至超过135°。证实几丁糖具有良好预防关节粘连作用。

③医用几丁糖预防椎板切除后硬膜外粘连的临床对比研究

上海长海医院骨科在采用选择性脊神经根切断治疗下肢痉挛性脑瘫时，64例病人术中使用医用几丁糖硬膜外涂布预防粘连，15例未用作为对照，术后半年进行功能评定和MRI检查，结果医用几丁糖组明显优于对照组。

6.医用几丁糖与透明质酸钠用于白内障人工晶体植入手术临床对比研究

本组共80例，随机分成二组，医用几丁糖组40例，进口透明质酸钠40例，(Healon GV)比较手术后一周内眼压变化和术后1周及1月角膜内皮损失率以及矫正视力情况，经统计学处理，P＞0.05，二组结果无差异(见下表)。说明医用几丁糖与进口透明质酸钠在内眼手术中的反应相似，作为眼内粘弹剂有良好的应用前景，可安全、有效的用于白内障复明手术。

       表2手术前后眼压变化情况(X±S，n＝40)时间      几丁糖组      透明质酸钠组       t值     P值术前      2.22±0.18    2.20±0.18         5.02    ＞0.05术后12h   2.73±0.35    2.60±0.38         6.80    ＞0.05

1d    2.59±0.67    2.50±0.26         4.32    ＞0.05

2d    2.21±0.11    2.22±0.08         3.58    ＞0.05

7d    2.13±0.13    2.05±0.09         4.13    ＞0.05

表3手术前后角膜内皮细胞密度数(X±S，n＝40)，(个/mm2)组别          术前           术后1周        术后1月几丁糖组      2491.1±201.5  2003.8±208.5  2117.3±261.2透明质酸钠组  2489.5±285.3  1998.7±237.9  2075.2±295.3t检验P＞0.05

表4术后矫正视力＞0.5情况(X±S，n＝40)

          1天         1周         1月组别          眼数(％)    眼数(％)    眼数(％)几丁糖组      19(48.0)    27(67.5)    33(82.5)透明质酸钠组  21(52.5)    29(72.5)    34(85.0)X²检验P＞0.05

本发明的水溶性医用几丁糖的临床效果优于透明质酸钠，且其原料的来源十分丰富，生产成本低，是一种天然高分子医用材料，应用前景宽广。

具体实施方案实例1  制备医用几丁糖凝胶

1.虾壳用2％(w/v)NaOH浸泡24小时，用清水洗至中性，再用1％(w/v)HCL浸泡24小时，用清水洗至中性，然后烘干获得几丁质。

2.将烘干几丁质粉碎，以几丁质粉∶NaOH∶H₂O∶SDS＝1∶9∶12∶0.01，搅匀后冷藏放置16小时，再以几丁质粉∶异丙醇∶氯乙酸＝1∶10∶2.5，进行反应3小时，之后用95％乙醇洗涤，抽干。

3.反应用加100倍量的蒸馏水溶解，pH调至中性，再用3倍量乙醇作沉淀，收集沉淀，真空干燥。

4.干粉用无菌无热原蒸馏水溶解，采用0.3μ滤膜除菌过滤，加入NaCL使其为0.85％浓度，再用乙醇沉淀，收集沉淀，按所需浓度配成医用几丁糖凝胶。

实例2  制备医用几丁糖凝胶

1.虾壳用4％(w/v)NaOH浸泡24小时，用清水洗至中性，再用5％(w/v)HCL浸泡24小时，用清水洗至中性，然后烘干获得几丁质。

2.将烘干几丁质粉碎，以几丁质粉∶NaOH∶H₂O∶SDS＝1∶5∶10∶0.02，搅匀后冷藏放置16小时，再以几丁质粉∶异丙醇∶氯乙酸＝1∶8∶5，进行反应5小时，之后用95％乙醇洗涤，抽干。

3.反应用加200倍量的蒸馏水溶解，pH调至中性，再用3倍量乙醇作沉淀，收集沉淀，真空干燥。

4.干粉用无菌无热原蒸馏水溶解，采用0.3μ滤膜除菌过滤，加入NaCL使其为0.85％浓度，再用乙醇沉淀，收集沉淀，按所需浓度配成医用几丁糖凝胶。实例3  制备医用几丁糖凝胶

1.虾壳用5％(w/v)NaOH浸泡24小时，用清水洗至中性，再用5％(w/v)HCL浸泡24小时，用清水洗至中性，然后烘干获得几丁质。

2.将烘干几丁质粉碎，以几丁质粉∶NaOH∶H₂O∶SDS＝1∶12∶15∶0.05，搅匀后冷藏放置16小时，再以几丁质粉∶异丙醇∶氯乙酸＝1∶12∶6，进行反应3小时，之后用95％乙醇洗涤，抽干。

3.反应用加150倍量的蒸馏水溶解，pH调至中性，再用3倍量乙醇作沉淀，收集沉淀，真空干燥。

4.干粉用无菌无热原蒸馏水溶解，采用0.22μ滤膜除菌过滤，加入NaCL使其为0.85％浓度，再用乙醇沉淀，收集沉淀，按所需浓度配成医用几丁糖凝胶。实例4  制备医用几丁糖凝胶

1.虾壳用8％(w/v)NaOH浸泡24小时，用清水洗至中性，再用9％(w/v)HCL浸泡24小时，用清水洗至中性，然后烘干获得几丁质。

2.将烘干几丁质粉碎，以几丁质粉∶NaOH∶H₂O∶SDS＝1∶15∶15∶0.05，搅匀后冷藏放置16小时，再以几丁质粉∶异丙醇∶氯乙酸＝1∶15∶10，进行反应3小时，之后用95％乙醇洗涤，抽干。

3.反应用加200倍量的蒸馏水溶解，pH调至中性，再用3倍量乙醇作沉淀，收集沉淀，真空干燥。

4.干粉用无菌无热原蒸馏水溶解，采用0.22μ滤膜除菌过滤，加入NaCL使其为0.85％浓度，再用乙醇沉淀，收集沉淀，按所需浓度配成医用几丁糖凝胶。实例5  制备医用几丁糖凝胶

1.虾壳用3％(w/v)NaOH浸泡24小时，用清水洗至中性，再用4％(w/v)HCL浸泡24小时，用清水洗至中性，然后烘干获得几丁质。

2.将烘干几丁质粉碎，以几丁质粉∶NaOH∶H₂O∶SDS＝1∶10∶12∶0.05，搅匀后冷藏放置16小时，再以几丁质粉∶异丙醇∶氯乙酸＝1∶8∶5，进行反应3小时，之后用95％乙醇洗涤，抽干。

3.反应用加300倍量的蒸馏水溶解，pH调至中性，再用3倍量乙醇作沉淀，收集沉淀，真空干燥。

4.干粉用无菌无热原蒸馏水溶解，采用0.3μ滤膜除菌过滤，加入NaCL使其为0.85％浓度，再用乙醇沉淀，收集沉淀，按所需浓度配成医用几丁糖凝胶。

Claims (3)

1.一种水溶性医用几丁糖制剂，其特征在于该制剂是由水溶性几丁糖与药用辅料组成的。

2.一种如权利要求1所述的水溶性医用几丁糖制剂的制备方法，该方法包括下列步骤；

(1)虾壳精拣、清洗

去除虾头、脚和尾，并将虾壳每节分离，用清水清洗、沥干；

(2)虾壳碱—酸—碱浸泡

将已清洗、沥干的虾壳浸泡于1-10％NaOH溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，再浸泡于1-10％HCL溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，继而将已清洗、沥干的虾壳浸泡于10％NaOH溶液中，于15℃以下环境中放置20-24小时，用清水洗涤至中性、沥干，制得的几丁质置于甩水袋中进行脱水，于55-60℃烘箱内烘干备用；

(3)医用几丁质粉末制备

将备用的几丁质置于0.3％NaOH中煮沸，并保持微煮1小时，用蒸馏水洗清至中性，再置于蒸馏水煮沸30分钟，用蒸馏水冲洗并沥干，置于55-60℃烘箱内烘干，用不锈钢粉碎机进行粉碎，备用；

(4)医用几丁糖粗品制备：

按几丁质粉末∶NaOH∶H₂O∶十二烷基硫酸钠＝1∶5-15∶10-15∶0.1-0.5的比例，经充分混合将碱化医用几丁质粉末用绢丝沥去医用几丁质粉末干重约10倍量体积的NaOH溶液，移入反应瓶中。加入医用几丁质粉末干重8-12倍量体积的异丙醇于12℃左右水浴中，搅拌平衡1小时，另将氯乙酸溶解于异丙醇中(氯乙酸∶异丙醇＝5-15∶1-10)并置于分液漏斗内，缓慢地加入反应瓶中，控制滴加速度，使反应体系的温度不超过25℃，氯乙酸滴加完毕后，在搅拌状态下使其继续反应18-22小时；

(5)医用几丁糖的提纯

将反应完毕的医用几丁糖用80％左右酒精洗涤3-6次，用加有绢丝的布氏漏斗抽干，用50-300倍量(v/w)的蒸馏水溶解。

用10-20％NaOH溶液将溶液的pH调至6.9左右，于3#砂蕊漏斗中进行真空抽滤，向滤液中倒入2-5倍量(v/w)的95％的酒精溶液中，搅拌、沉淀，将医用几丁糖沉淀先后用95％酒精和无水乙醇各洗涤3次，进行真空干燥；

(6)医用几丁糖制剂的配制

用蒸馏水配制医用几丁糖除菌溶液，其浓度为0.1-1.5％，用0.22-0.3μ滤膜进行除菌过滤。另将适量的NaCL溶液经除菌过滤滤入除菌液中，使其NaCL含量在0.85％左右并摇匀。

将医用几丁糖除菌溶液倒入2.5-3.5倍量(v/w)的95％酒精溶液中，搅拌、沉淀，将医用几丁糖沉淀先后用95％酒精，无水乙醇洗涤各3次，进行真空干燥，然后按处方量加入磷酸二氢钠，磷酸氢二钠、氯化钠和注射用水，最后进行灌装得成品。

3.一种如权利要求1所述的水溶性医用几丁糖在制备预防组织粘连和防治退变性关节炎及眼科人工晶体植入手术制剂中的应用。