CN113249280B - 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 - Google Patents
一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113249280B CN113249280B CN202110803578.0A CN202110803578A CN113249280B CN 113249280 B CN113249280 B CN 113249280B CN 202110803578 A CN202110803578 A CN 202110803578A CN 113249280 B CN113249280 B CN 113249280B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- streptococcus thermophilus
- stn26
- uric acid
- powder
- bacterial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种嗜热链球菌STN26、菌粉及在降尿酸产品中的应用,该嗜热链球菌STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCC No.22618,分类命名:嗜热链球菌Streptococcus thermophilus。使用该嗜热链球菌STN26制备的产品在应用时,能够有效降低尿酸水平、缓解痛风症状,效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,具体涉及一种嗜热链球菌STN26、菌粉及在降尿酸产品中的应用。
背景技术
尿酸是嘌呤代谢的产物,易形成结晶;当嘌呤代谢紊乱时,尿酸会在人体内随着血液流动在关节处沉淀从而导致痛风。
常见的对高尿酸的治疗方法有饮食运动、药物治疗和微生物治疗。其中,饮食运动是一种最为健康的方法,但是该方法的效果较差,且难以坚持。药物治疗方法的机理分为两种,一是促进肾脏对尿酸排泄,常用的西药为苯溴马隆,中药为土茯苓、四物汤和二妙散等,上述药剂通过抑制肾小管对尿酸的重吸收来降低血液中的尿酸;二是抑制肝脏和小肠代谢嘌呤产生尿酸,常用的西药为别嘌呤醇,中药为健脾化湿汤、痛风颗粒,上述药剂是一种黄嘌呤氧化酶抑制剂,通过与黄嘌呤氧化酶结合进而抑制次黄嘌呤氧化形成尿酸,减少尿酸进入血液;然而,由于药物治疗中使用的药剂为外部给药,这些药剂进入人体后,由于人体的适应能力不同,因此,会产生过敏、体内毒性等副作用,尤其是西药,在长期服用时,对人体的影响更为严重;中药虽然副作用小,但是疗效的稳定性较差。微生物治疗是一种相对安全的治疗方法,其机理是调节肠道菌群平衡,促进微生物分解肠道尿酸,进而达到降低血液中尿酸的作用;而目前常用的微生物制剂多数为口服制剂,口服制剂需经过胃后才进入肠道,由于胃液中的pH值过低,导致微生物的存活性较差,影响微生物在肠道内的定植,进而影响疗效。
可见,提供一种可长期对尿酸控制且使用安全的微生物具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的上述不足,本发明提供了一种嗜热链球菌STN26、菌粉及在降尿酸产品中的应用,该嗜热链球菌STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCCNo.22618,分类命名:嗜热链球菌Streptococcus thermophilus。使用该嗜热链球菌STN26制备的产品在应用时,能够有效降低尿酸水平、缓解痛风症状,效果显著。
本发明的技术方案如下:
一种嗜热链球菌STN26,该嗜热链球菌STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCC No.22618,分类命名:嗜热链球菌Streptococcus thermophilus。
进一步的,上述嗜热链球菌STN26采集于新疆伊犁州发酵酸奶。
一种嗜热链球菌STN26菌粉,制备过程为:
(1)菌株活化:取嗜热链球菌STN26,在MRS平板培养基上划线,于37℃条件下培养48h;
(2)菌株培养:取步骤(1)划线培养后的单菌落,接种于MRS液体培养基中,于37℃条件下培养24h,获得菌液;
(3)离心菌液,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于15%(w/w)的复原脱脂乳中,获得菌悬液,菌悬液的浓度为1.0-2.0×1010cfu/mL;将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉。
进一步的,在步骤(2)中,MRS液体培养基的组成为:蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠 5g、七水磷酸氢二钾 2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰 0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁 0.2g、蒸馏水 1000mL;将上述原料混合后,调pH为6.8,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可。
进一步的,在步骤(2)中,菌株的接种量为1%(v/v)。
上述嗜热链球菌STN26在制备降尿酸产品中的应用。该嗜热链球菌STN26具有强的过胃存活率和肠道定植能力,从而可长期的发挥作用,实现稳定的降低尿酸水平,达到缓解痛风症状的效果,经验证,效果显著。
进一步的,在上述应用中,所述产品包括上述嗜热链球菌STN26菌粉和低聚异麦芽糖,该产品中的菌体数量为100亿/g或150亿/g。
进一步的,所述产品为内服制剂。
相对于现有技术,本发明的有益效果在于:
1、本发明提供了一株嗜热链球菌STN26,该嗜热链球菌STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCC No.22618,分类命名:嗜热链球菌Streptococcus thermophilus。该菌株过胃存活率高、能够长期定植于肠道,从而可稳定的降低血液中的尿酸含量,缓解痛风症状。
2、本发明提供的嗜热链球菌STN26菌粉,制备过程简单、易于保藏和携带,具有方便服用、安全性高的优点。
3、本发明将嗜热链球菌STN26制备为口服产品应用于降尿酸和缓解痛风中,通过实验结果可以看出,该嗜热链球菌STN26过胃后存活率达84%以上,在肠道内的存活率达87%以上,且对Caco-2的粘附率为81%,表面该嗜热链球菌STN26具有良好的适应能力和定制能力,能够长时间保持良好的活性,利于长期稳定的降低血液中的尿酸、缓解痛风。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,对于本领域普通技术人员而言,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例5小鼠血清中尿酸含量对比图。
图2为实施例6小鼠血清中黄嘌呤氧化酶活性水平对比图。
图3为实施例7小鼠转运蛋白ABCG2/BCRP mRNA表达水平对比图。
图4为实施例8高尿酸病症患者的治疗效果对比图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案,下面将结合本发明的实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。
实施例1 菌株的分离鉴定
1、菌株筛选及纯化
(1)样品制备:
①取灭菌后的生理盐水(0.85%)至于无菌三角瓶中,然后将新疆伊利州牧民家里自然发酵的酸奶1ml加入其中,振荡,待用;
②对步骤①的溶液进行10倍梯度稀释,分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,待用;
(2)制备培养基:
MRS平板培养基的组成如下:
蛋白胨 10g、牛肉粉 5g、三水醋酸钠 5g、七水磷酸氢二钾 2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰 0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁 0.2g、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL;将上述原料混合后,自然pH,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可;将灭菌后的培养基倒入平皿中,放凉后待用;
(3)平板培养及挑选单菌落:将步骤②制备的梯度溶液分别采用涂布法接种于步骤(2)的MRS平板培养基上,于37℃、厌氧条件下培养48h;挑选单菌落,单菌落的形态为:直径1-2mm,菌落圆润、边缘整齐、微白色中间有凸起;
(4)分离纯化
将挑选的单菌落采用划线法接种于步骤(2)的MRS平板培养基上,于37℃、厌氧条件下培养48h,挑取单菌落,置于甘油管中-70℃保藏。
2、鉴定
对甘油管保藏的单菌落进行鉴定,鉴定单位:生工生物工程(上海)股份有限公司,鉴定过程中,使用的引物如下:
引物序列:
SEQ No:2:27F:5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3';
SEQ No:3:1492R:5'- GGTTACCTTGTTACGACTT-3';
鉴定结果为:该菌株为Streptococcus thermophilus,其分类单元为:Bacteria;Firmicutes;Bacilli;Lactobacillales;Streptococcaceae;Streptococcus。
将鉴定后的菌株命名为嗜热链球菌STN26,将该菌株送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏信息如下;
该嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCC No.22618。
该嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)STN26的基因序列如SEQ No:1所示。
实施例2 制备产品
(1)制备MRS液体培养基:
MRS液体培养基的组成为蛋白胨 10g、牛肉粉 5g、三水醋酸钠 5g、七水磷酸氢二钾 2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰 0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁 0.2g、蒸馏水 1000mL;将上述原料混合后,调pH为6.8,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可;
(2)制备菌粉:
取实施例1保藏的嗜热链球菌STN26接种于MRS平板培养基上,于37℃条件下活化培养48h,然后按照1%的接种量接种于MRS液体培养基中,在37℃条件下培养24h,获得菌液;
将菌液离心后,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于15%(w/w)的复原脱脂乳中,获得菌悬液,菌悬液的浓度为1.0-2.0×1010cfu/mL;将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉;
将菌粉与低聚异麦芽糖混合,制成产品;低聚异麦芽糖购自保龄宝生物股份有限公司;
产品为两个规格,规格A中菌体数量为100亿/g,规格B中菌体数量为150亿/g。
实施例3 嗜热链球菌STN26通过模拟胃肠消化液实验
1、模拟胃液制备与操作
(1)模拟胃液按照如下方法配制:用9.5%盐酸加蒸馏水稀释至pH值为1.5,每100mL加入1.0g胃蛋白酶,混匀后用0.22μm无菌滤膜过滤,现配现用。
(2)实验过程:
①称取规格B的产品1g,作为样品,待用;
②取步骤(1)的模拟胃液9mL置于试管中,预热至37℃,然后将步骤①的样品投入试管中,分别于37℃、80r/min条件下放置1h、2h、3h和4h,每个处理重复3次;
③检测:对处理后的样品溶液进行梯度稀释,使用倾注法做活菌计数,再计算存活率,结果见表1。
2、模拟肠液制备与操作
(1)模拟肠液按照如下方法配制:将6.8g的KH2PO4溶于500mL蒸馏水中,加入3g胆盐和10g胰蛋白酶,用浓度为4g/L的NaOH溶液调节溶液pH值至6.8,用蒸馏水定容至1L后,混匀后用0.22μm无菌滤膜过滤,现配现用。
(2)实验过程:
①称取规格A的产品1g,作为样品,待用;
②取步骤(1)的模拟肠液9mL置于试管中,然后将步骤①的样品投入试管中,分别于37℃、80r/min条件下放置1h、2h、3h和4h,每个处理重复3次;
③检测:对处理后的样品溶液进行梯度稀释,使用倾注法做活菌计数,再计算存活率,结果见表1。
本实施例中,存活率的计算公式如下:
存活率=(处理后菌数/原始菌数)×100%。
表1 体外模拟胃肠环境下STN26存活率数据表
结合表1可以看出,嗜热链球菌STN26在体外模拟胃肠环境下,4h的存活率仍在80%以上,高的存活率为该菌株在肠道内定植奠定良好的基础。
实施例4 STN26对Caco-2的粘附率对照实验
(1)购买DMEM培养液,该培养液购自Gibco公司;该DMEM培养液含10%热灭活胎牛血清和双抗(青霉素浓度100U/mL、链霉素100μg/mL);
(2)按照实施例2的方法进行嗜热链球菌STN26菌株活化,然后按照体积分数1%的接种量接种于MRS液体培养基中,37℃培养24h,获得菌液,离心收集菌体,离心条件为4000g、4℃、离心10min;用无菌PBS缓冲液洗涤3次,将菌体重悬于无菌PBS缓冲液中,制成浓度为2×108CFU/mL的STN26菌悬液,PBS缓冲液按照如下方法配制:
KH2PO4 0.27g、Na2HPO4 1.42g、NaCl 8g、KCl 0.2g,加去离子水约800mL充分搅拌溶解,加浓盐酸调pH至7.4,加去离子水定容至1L,于121℃灭菌20min,制得PBS缓冲液;
(3)实验过程:
①将Caco-2细胞置于步骤(1)的培养液中,于37℃、5%CO2、相对湿度95%的二氧化碳培养箱中孵育,每天换1次培养液,3-4天传代1次,18天后将细胞接种于24孔培养板中,接种密度为5×105CFU/mL,待细胞长至单层后进行黏附试验;
②将已长成单层的Caco-2细胞用无菌PBS缓冲液漂洗2次,每孔加入0.5mL的步骤(2)的菌悬液和0.5mL新鲜的培养液,于37℃、5%CO2、相对湿度95%的二氧化碳培养箱中孵育1h,然后用无菌PBS缓冲液漂洗细胞5次,以除去未粘附的嗜热链球菌STN26,收集漂洗液,每个处理做3个平行。
对漂洗液进行梯度稀释,使用倾注法做活菌计数(同实施例3),计算出粘附率,结果见表2,粘附率的计算公式如下:
粘附率=(初始菌数-漂洗下的菌数)/初始菌数×100%。
另外,对漂洗后Caco-2细胞上粘附的嗜热链球菌STN26的个数进行统计,过程为:用甲醛固定、革兰染色、镜检,倒置显微镜下计算20个随机视野下100个细胞上黏附的细菌数,以不加菌液细胞培养为对照,计算每个细胞黏附的平均细菌数,结果见表2。
表2 STN26在Caco-2细胞上的粘附率及粘附个数
项目 | 粘附率 | 粘附个数 |
结果 | 81% | 243个 |
结合表2可以看出,嗜热链球菌STN26具有较强的细胞定制能力,即该嗜热链球菌STN26在肠道内定植后,可长期稳定的产生作用。
实施例5 STN26对高尿酸血症小鼠的血清中尿酸的影响
取体重40±3g的健康雄性KM小鼠80只,适应性培养1周后,随机分为4组,每组20只,分别为对照组、模型组、STN26组(嗜热链球菌STN26)和药物组(别嘌呤醇),实验期间小鼠的进食和饮水不受任何因素的限制。
实验设置如下:
对照组:每天灌胃1次0.5mL无菌脱脂牛奶;
模型组:每天灌胃1次0.5mL无菌脱脂牛奶,1h后灌胃500mg/kg次黄嘌呤,腹腔注射100mg/kg氧嗪酸钾;
STN26组:每天灌胃1次嗜热链球菌STN26菌溶液0.5mL,1h后灌胃500mg/kg次黄嘌呤,腹腔注射100mg/kg氧嗪酸钾;
其中,该嗜热链球菌STN26菌溶液的制备过程为:取49mL无菌脱脂牛奶,向其中加入规格A的产品1g,搅拌至产品溶解,获得菌溶液;
药物组:每天灌胃1次0.5mL无菌脱脂牛奶,无菌脱脂牛奶中添加有5mg/kg别嘌呤醇,1h后灌胃500mg/kg次黄嘌呤,腹腔注射100mg/kg氧嗪酸钾。
实验检测:
实验15天后,小鼠禁食不禁水12h,腹腔注射0.1mL/10g 1%的戊巴比妥钠溶液麻醉后,摘眼球取血并辅以颈椎脱臼法处死。血液样本于 3500r/min离心15min,取上清后在-80℃冻存,用于血清中指标分析。尿酸含量采用尿酸检测试剂盒(北京索莱宝)方法检测,检测结果见图1。
结合图1可以看出,嗜热链球菌STN26组小鼠的尿酸浓度与模型组相比有明显下降,且与对照组和药物组相近,说明嗜热链球菌STN26具有降低血清中尿酸含量的性能,且降尿酸的效果与药物组的效果相近,可以说明,本发明的嗜热链球菌STN26具有预防高尿酸血症和痛风发生的性能。
实施例6 STN26对高尿酸血症小鼠的血清中黄嘌呤氧化酶活性的影响
实验动物分组及实验设置同实施例5,黄嘌呤氧化酶(XOD)的检测按照试剂盒(北京索莱宝)的方法进行。
结合图2可以看出, STN26组与对照组的黄嘌呤氧化酶活性相近,说明嗜热链球菌STN26能够将黄嘌呤氧化酶控制在正常水平,而模型组的黄嘌呤氧化酶活性一直处于高活性状态,实验结束时高出对照组和STN26组分别55.34%和70.21%,而药物组虽然能降低黄嘌呤氧化酶活性,但已经低于对照组高达67%,严重低于正常水平;综合来看,本发明提供的嗜热链球菌STN26能够将黄嘌呤氧化酶活性水平控制在正常范围内,且能够在不影响小鼠身体其他方面的前提下,有效预防高尿酸血症和痛风的发生。
实施例7 STN26对高尿酸血症小鼠的转运蛋白ABCG2/BCRP mRNA表达水平的影响
实验动物分组及实验设置同实施例5。
样品处理过程为:分离肠道组织,采用 Trizol 法应用相应的试剂盒(德国Invitrogen 公司)从小鼠肠道组织中提取 RNA;具体过程为:
(1)肠道组织在研钵中加液氮研磨成粉末后,按照每 100 mg 组织加入 1mlTrizol的量进行充分裂解,匀浆,获得裂解液;
(2)取100μl裂解液加入1ml Trizol,继续匀浆,匀浆彻底后转入EP管中,对EP管颠倒混匀之后放置室温5min,获得匀浆液;
(3)向步骤(2)的EP管中加氯仿,氯仿与匀浆液的体积比为1:5,本实施例中,添加氯仿的体积为0.2ml,手动震荡混匀,室温孵育2-3min,然后使用4℃离心机在12000g条件下离心15min;离心后的混合液体分为三层,即无色水相上层、中间层以及下层的红色酚氯仿,无色水相层中含有全部的RNA;
(4)将上层水相转移到干净无 RNA 酶级别的离心管中,加入等体积的异丙醇混合,在室温下孵育10min,再次使用4℃离心机在12000g条件下离心10min,获得RNA沉淀块,RNA 沉淀为胶状沉淀块,主要分布在管底部和侧壁上;
(5)撇去上清液,加预冷的75%乙醇(DEPC 水配制)1ml,清洗 RNA 沉淀块,混匀后,采用4℃离心机在7500g条件下离心5min,丢弃乙醇溶液,常温条件下放置 5-10min,干燥得RNA沉淀物。
(6)向步骤(5)的RNA沉淀物中加入无 RNA 酶的DEPC水40µl,完全溶解RNA沉淀物,获得RNA溶液,将RNA溶液放置在-80°C的冰箱保存备用。
检测过程:
回肠ABCG2 mRNA测定:按照反转录试剂盒(赛默飞,美国)说明书进行cDNA合成。用荧光染料SYBRGreen super mix(赛默飞,美国)混合样本,PCR体系为5μL mix、1μL cDNA、1μL正向和反向引物,用ddH2O补至总体积为10μL。在实时荧光定量基因扩增仪器CFX96TMReal-TimeSystem(Bio-Rad,USA)上进行检测,每个样本设立3个平行孔,并以GAPDH为内参,所得结果用2-ΔΔCq的方法进行分析;所用的引物为:
SEQ No:4:ABCG2 上游引物5’-CTGAGATCCTGAGCCTTTGG-3’;
SEQ No:5:ABCG2 下游引物5’-TGCCCATCACAACATCATCT-3’;
SEQ No:6:GAPDH 上游引物5’-AGATCCACAACGGATACATT-3’;
SEQ No:7:GAPDH 下游引物5’-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3’。
由图3可以看出,嗜热链球菌STN26能够显著提高高尿酸血症小鼠的回肠ABCG2的mRNA水平,且与对照组差别不大。而模型组和药物组则是明显处于低水平。回肠ABCG2在肠道尿酸排泄中发挥着重要作用,嗜热链球菌STN26能够通过提高回肠ABCG2的表达从而促进尿酸排出体外。
实施例8 STN26对高尿酸症病人的影响
病例:90例,性别男,年龄45-70岁的高尿酸症患者;
将90例患者随机分为3组,作为饮食对照组,药物组,STN26组。
实验过程:
饮食对照组:平时多吃水果蔬菜等低嘌呤食物,少吃高热量食物或饮品;
药物组:饮食参照饮食对照组的要求,并服用别嘌醇片(广药白云山医药集团股份有限公司);初始剂量一次50mg,一日2次,每周可递增50-100mg,至一日200-300mg,分2-3次服用,每2周验血和血尿酸水平,如已达水平则不增量。
STN26组:饮食参照饮食对照组的要求,每人每天午饭1h后服用规格B的产品1g。
对饮食对照组、药物组和STN26组均进行8周实验后,检测各组血尿酸含量,并以血尿酸下降比例划分显效、有效、无效水平。血尿酸下降20%或恢复正常为显效,10%≤血尿酸下降<20%为有效,血尿酸<10%为无效。
由图4可以看出,STN26组的显效率最高,其次是药物组。这说明嗜热链球菌STN26对高尿酸患者血尿酸水平有明显改善,能有效治疗高尿酸血症,从而预防痛风的发生。
尽管通过参考优选实施例的方式对本发明进行了详细描述,但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下,本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换,而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
序列表
<110>中科嘉亿营养医学(山东)微生态研究院有限公司
<120>一种嗜热链球菌STN26、菌粉及在降尿酸产品中的应用
<160> 7
<170>SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1484
<212> DNA
<213> 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)
<400> 1
ggctcaggacgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtagaacgctgaagagagga 60
gcttgctcttcttggatgagttgcgaacgggtgagtaacgcgtaggtaacctgccttgta 120
gcgggggataactattggaaacgatagctaataccgcataacaatggatgacacatgtca 180
tttatttgaaaggggcaattgctccactacaagatggacctgcgttgtattagctagtag 240
gtgaggtaatggctcacctaggcgacgatacatagccgacctgagagggtgatcggccac 300
actgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttcggcaa 360
tgggggcaaccctgaccgagcaacgccgcgtgagtgaagaaggttttcggatcgtaaagc 420
tctgttgtaagtcaagaacgggtgtgagagtggaaagttcacactgtgacggtagcttac 480
cagaaagggacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtcccgagcgttg 540
tccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggtttgataagtctgaagttaaaggct 600
gtggctcaaccatagttcgctttggaaactgtcaaacttgagtgcagaaggggagagtgg 660
aattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaggaacaccggtggcgaaagcgg 720
ctctctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcgtggggagcgaacaggattagata 780
ccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaggtgttggatcctttccgggattcag 840
tgccgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactca 900
aaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcg 960
aagaaccttaccaggtcttgacatcccgatgctatttctagagatagaaagttacttcgg 1020
tacatcggtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaa 1080
gtcccgcaacgagcgcaacccctattgttagttgccatcattcagttgggcactctagcg 1140
agactgccggtaataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttat 1200
gacctgggctacacacgtgctacaatggttggtacaacgagttgcgagtcggtgacggcg 1260
agctaatctcttaaagccaatctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaag 1320
tcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccgggccttgta 1380
cacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaaccttttg 1440
gagccagccgcctaaggtgggacagatgattggggtgaagtcgt 1484
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
agagtttgatcmtggctcag 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
ggttaccttgttacgactt 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
ctgagatcctgagcctttgg 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
tgcccatcacaacatcatct 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
agatccacaacggatacatt 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 7
tccctcaagattgtcagcaa 20。
序列表
<110> 中科嘉亿营养医学(山东)微生态研究院有限公司
<120> 一种嗜热链球菌STN26、菌粉及在降尿酸产品中的应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1484
<212> DNA
<213> 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)
<400> 1
ggctcaggac gaacgctggc ggcgtgccta atacatgcaa gtagaacgct gaagagagga 60
gcttgctctt cttggatgag ttgcgaacgg gtgagtaacg cgtaggtaac ctgccttgta 120
gcgggggata actattggaa acgatagcta ataccgcata acaatggatg acacatgtca 180
tttatttgaa aggggcaatt gctccactac aagatggacc tgcgttgtat tagctagtag 240
gtgaggtaat ggctcaccta ggcgacgata catagccgac ctgagagggt gatcggccac 300
actgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttcggcaa 360
tgggggcaac cctgaccgag caacgccgcg tgagtgaaga aggttttcgg atcgtaaagc 420
tctgttgtaa gtcaagaacg ggtgtgagag tggaaagttc acactgtgac ggtagcttac 480
cagaaaggga cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtc ccgagcgttg 540
tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggtttga taagtctgaa gttaaaggct 600
gtggctcaac catagttcgc tttggaaact gtcaaacttg agtgcagaag gggagagtgg 660
aattccatgt gtagcggtga aatgcgtaga tatatggagg aacaccggtg gcgaaagcgg 720
ctctctggtc tgtaactgac gctgaggctc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata 780
ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctaggtgtt ggatcctttc cgggattcag 840
tgccgcagct aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac gaccgcaagg ttgaaactca 900
aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960
aagaacctta ccaggtcttg acatcccgat gctatttcta gagatagaaa gttacttcgg 1020
tacatcggtg acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080
gtcccgcaac gagcgcaacc cctattgtta gttgccatca ttcagttggg cactctagcg 1140
agactgccgg taataaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat 1200
gacctgggct acacacgtgc tacaatggtt ggtacaacga gttgcgagtc ggtgacggcg 1260
agctaatctc ttaaagccaa tctcagttcg gattgtaggc tgcaactcgc ctacatgaag 1320
tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcac gccgcggtga atacgttccc gggccttgta 1380
cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taaccttttg 1440
gagccagccg cctaaggtgg gacagatgat tggggtgaag tcgt 1484
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
agagtttgat cmtggctcag 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
ctgagatcct gagcctttgg 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
tgcccatcac aacatcatct 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
agatccacaa cggatacatt 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 7
tccctcaaga ttgtcagcaa 20
Claims (7)
1.一种嗜热链球菌STN26,其特征在于,该嗜热链球菌STN26于2021年05月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,编号:CGMCC No.22618,分类命名:嗜热链球菌Streptococcus thermophilus。
2.一种嗜热链球菌STN26菌粉,其特征在于,制备过程为:
(1)菌株活化:取如权利要求1所述的嗜热链球菌STN26,接种于MRS平板培养基上,于37℃条件下培养48h;
(2)菌株培养:取步骤(1)活化后的菌株,接种于MRS液体培养基中,于37℃条件下培养24h,获得菌液;
(3)离心菌液,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于15%w/w的复原脱脂乳中,获得菌悬液,菌悬液的浓度为1.0-2.0×1010cfu/mL;将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉。
3.如权利要求2所述的嗜热链球菌STN26菌粉,其特征在于,在步骤(2)中,MRS液体培养基的组成为:蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL;将上述培养基组分混合后,调pH为6.8,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可。
4.如权利要求2所述的嗜热链球菌STN26菌粉,其特征在于,在步骤(2)中,菌株的接种量为1%v/v。
5.如权利要求1所述的嗜热链球菌STN26在制备降尿酸产品中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,该产品包括嗜热链球菌STN26菌粉和低聚异麦芽糖,该产品中的菌体数量为100亿/g或150亿/g。
7.如权利要求5或6所述的应用,其特征在于,所述产品为内服制剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110803578.0A CN113249280B (zh) | 2021-07-16 | 2021-07-16 | 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110803578.0A CN113249280B (zh) | 2021-07-16 | 2021-07-16 | 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113249280A CN113249280A (zh) | 2021-08-13 |
CN113249280B true CN113249280B (zh) | 2021-10-01 |
Family
ID=77180422
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110803578.0A Active CN113249280B (zh) | 2021-07-16 | 2021-07-16 | 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113249280B (zh) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114053313B (zh) * | 2022-01-17 | 2022-04-01 | 中科嘉亿营养医学(山东)微生态研究院有限公司 | 一种唾液乳杆菌jyls-372在制备解酒护肝产品中的应用 |
CN116077580A (zh) * | 2022-09-21 | 2023-05-09 | 彤博士健康产业河北有限公司 | 一种降尿酸组合物及其制备工艺 |
CN115851508B (zh) * | 2022-10-13 | 2024-01-09 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 一种降草酸、改善肾结石的嗜热链球菌jyst-26及其产品、应用 |
CN118185804A (zh) * | 2024-02-28 | 2024-06-14 | 广东中科卓原生物科技有限公司 | 一种嗜热链球菌活性产物及制备方法、应用、日化品 |
CN118634253A (zh) * | 2024-08-16 | 2024-09-13 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 嗜热链球菌stn26菌剂在制备预防或/和改善帕金森病伴随的便秘的制品中的应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102747004A (zh) * | 2007-11-29 | 2012-10-24 | 株式会社明治 | 具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌 |
CN106434461A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-02-22 | 内蒙古农业大学 | 一株嗜热链球菌菌株及其用途 |
-
2021
- 2021-07-16 CN CN202110803578.0A patent/CN113249280B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102747004A (zh) * | 2007-11-29 | 2012-10-24 | 株式会社明治 | 具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌 |
CN106434461A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-02-22 | 内蒙古农业大学 | 一株嗜热链球菌菌株及其用途 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Daisy Vedder et al.Dietary Interventions for Gout and E ect on Cardiovascular Risk Factors: A Systematic Review.《Nutrients》.2019, * |
传统发酵乳制品中嗜热链球菌的耐热性研究;白英等;《中国乳品工业》;20130625(第06期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113249280A (zh) | 2021-08-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN113249280B (zh) | 一种嗜热链球菌stn26、菌粉及在降尿酸产品中的应用 | |
CN112175864B (zh) | 动物双歧杆菌及其选育方法和应用 | |
CN114350577B (zh) | 一种改善便秘的动物双歧杆菌乳亚种BLa36及其培养方法与应用 | |
CN111996153B (zh) | 一种短双歧杆菌及其应用 | |
CN113943687B (zh) | 一种改善溃疡性结肠炎的罗伊氏乳杆菌jylb-291及其应用 | |
TWI731279B (zh) | 發酵乳桿菌gkf3、含其之組合物及改善精神失調之用途 | |
Zhao et al. | Lactobacillus plantarum YS-3 prevents activated carbon-induced constipation in mice | |
JP2005505298A (ja) | ラクトバシルス・ペントサス株を含む組成物およびそれらの使用 | |
CN114774313B (zh) | 鼠李糖乳杆菌LRa05在制备缓解便秘制品或调解肠道菌群制品方面的用途 | |
CN113913346B (zh) | 一种副干酪乳杆菌jn-1及其应用 | |
CN114381411B (zh) | 乳酸乳球菌jyll-60及其在制备提高免疫力的产品上的应用 | |
CN114717146B (zh) | 一种副干酪乳杆菌制备的缓解脂肪肝与肥胖的后生元及其应用 | |
CN116083324B (zh) | 一种能够改善或治疗肠易激综合征的动物双歧杆菌乳亚种ba79及其培养方法和应用 | |
CN116445356B (zh) | 一种调节肠道菌群及增强免疫力的动物双歧杆菌乳亚种ba67及其应用 | |
CN113755409B (zh) | 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用 | |
CN115895966B (zh) | 一株辅助缓解痛风的两歧双歧杆菌bl002及其应用 | |
CN114181864A (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌hf01及其应用 | |
CN117286078B (zh) | 一种改善胃肠道健康的植物乳植杆菌及其应用 | |
CN114686405A (zh) | 一株具有减少脂肪和缓解高血糖,调节肠道免疫力的两歧双歧杆菌及其应用 | |
CN116478874B (zh) | 一种改善慢性低度炎症的副干酪乳杆菌及其应用 | |
CN112029676B (zh) | 一种有利于提高免疫力的益生菌组合及其应用 | |
CN116970539A (zh) | 一种鼠联合乳杆菌、其组合物及用途 | |
CN116746683A (zh) | 防消化不良胀气、促吸收的动物双歧杆菌乳亚种bal-28及发酵产物、菌群cw和应用 | |
CN117089494A (zh) | 一种防治幽门螺杆菌感染的副干酪乳杆菌及其组合物与应用 | |
CN114921351B (zh) | 一株具有益生功能的毕赤酵母菌dpuy-f1及在缓解结肠炎症状中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |