CN113227091A

CN113227091A - 作为am2受体抑制剂的杂环螺-化合物

Info

Publication number: CN113227091A
Application number: CN201980075441.9A
Authority: CN
Inventors: 加雷斯·理查兹; 蒂莫西·M·斯凯里; 约瑟·P·A·哈丽蒂; 让-奥利维尔·齐里姆瓦巴加博; 马修·J·托泽; 卡尔·理查德·吉普森; 罗德里克·艾伦·波特; 保罗·艾伦·格洛索普
Original assignee: University of Sheffield
Current assignee: University of Sheffield
Priority date: 2018-11-15
Filing date: 2019-11-15
Publication date: 2021-08-06
Also published as: EP3880679A1; KR20210102261A; AU2019380715A1; GB201818651D0; CA3119882A1; BR112021009381A2; JP2022507561A; WO2020099882A1; BR112021009381A8; US20220023281A1; SG11202104857PA

Abstract

披露了具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：其中HET、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L、L¹、X₁、X₂、X₃和q是如本文所定义的。这些化合物是肾上腺髓质素受体亚型2(AM₂)的抑制剂。还披露了这些化合物用于治疗AM₂调节的疾病，这些疾病包括增生性疾病如癌症；包含这些化合物的药物组合物；用于制备这些化合物的方法；和可用于制备这些化合物的中间体。

Description

作为AM2受体抑制剂的杂环螺-化合物

本发明涉及作为AM₂受体抑制剂的化合物和这些化合物在治疗由AM₂介导的病症中用作治疗剂的用途，例如在治疗增生性障碍，包括癌症如胰腺癌中的用途。还披露了包含这些化合物的药物组合物。

背景技术

肾上腺髓质素(AM)是具有重要生理学功能的激素，包括调节血压。然而，在许多疾病中AM下调，并且与多种多样的癌症例如胰腺癌的发展和进展有牵连(Adrenomedullin isinduced by hypoxia and enhances pancreatic cancer cell invasion[肾上腺髓质素被缺氧诱导并增强胰腺癌细胞侵袭].Keleg S,Kayed H,Jiang X,Penzel R,Giese T,Büchler MW,Friess H,Kleeff J.Int.J.Cancer[国际癌症期刊].2007年7月1日；121(1):21-32；Adrenomedullin and cancer[肾上腺髓质素和癌症].Zudaire E,Martínez A,Cuttitta F.Regulatory Peptides[调节肽].2003年4月15日；112(1-3):175-183；Adrenomedullin,a Multifunctional Regulatory Peptide[肾上腺髓质素，一种多功能调节肽].Hinson JP,Kapas S,Smith DM.Endocrine reviews[内分泌综述].2000；21(2):138-167)。

有两种肾上腺髓质素细胞表面受体复合物：肾上腺髓质素受体亚型1(AM₁)和肾上腺髓质素受体亚型2(AM₂)。这些受体是包含G蛋白偶联受体(GPCR)的异聚结构和称为受体活性改性蛋白(RAMP)的辅助蛋白质。更具体地，AM₁受体形成为降钙素样受体(CLR)和RAMP2的复合物。AM₂受体由CLR和RAMP3形成。AM₁受体对降钙素基因相关肽(CGRP)上的AM具有高度选择性。相比之下，AM₂受体显示对AM有较小的特异性，对βCGRP有明显的亲和力(Hay等人J.Mol.Neuroscience[分子神经科学杂志]2004；22(1-2):105-113)。CLR/RAMP1受体CGRP是降钙素基因相关肽(CGRP)的高亲和力受体，但它也以较低亲和力结合AM(Hay等人Pharmacological discrimination of calcitonin receptor:receptor activity-modifying protein complexes[降钙素受体的药理学区分：受体活性改性蛋白质复合物].Mol.Pharmacol.[分子药理学]2005；67:1655-1665；Poyner等人International Union ofPharmacology[国际药理学联合会].XXXII.The mammalian calcitonin gene-relatedpeptides,adrenomedullin,amylin,and calcitonin receptors[哺乳动物降钙素基因相关肽、肾上腺髓质素、糊精和降钙素受体].Pharmacol.Rev.[药理学综述]2002；54:233-246)。

虽然AM₁和AM₂共享相同的GPCR、CLR，两种受体的效果是完全不同的。肾上腺髓质素通过AM₁受体介导重要的生理学功能，包括调节血压(Biological action ofAdrenomedullin[肾上腺髓质素的生物学作用].Horio T&Yoshihara F.于:Nishikimi T.(编)；Adrenomedullin in Cardiovascular Disease[肾上腺髓质素于心血管疾病].Springer[施普林格],2005,ISBN-10 0-387-25404-8:DOI.org/10.1007/0-387-25405-6_5)。

相比之下，AM₂受体通过许多不同的机制参与了许多促肿瘤发生作用，包括：刺激癌细胞增殖、保护免受胁迫诱导的凋亡、促进血管生成和增加肿瘤侵袭性。

肿瘤分泌的肾上腺髓质素导致肿瘤周围的宿主组织中AM₂受体的上调。AM₂的宿主组织表达被认为是肿瘤促进血管生成和逃避宿主防御的机制的重要因素。这已在胰腺肿瘤中证明，AM₂表达随肿瘤严重程度增加而增加。研究表明，肿瘤或宿主中的AM₂表达减少或者肽或抗体对受体的拮抗作用导致癌细胞体外和体内生长的降低(Ishikawa T等人Adrenomedullin antagonist suppresses in-vivo growth of human pancreaticcancer cells in SCID mice by suppressing angiogenesis[肾上腺髓质素拮抗剂通过压制血管生成而压制人胰腺癌细胞的体内生长].Oncogene[原癌基因].2003年2月27日；22(8):1238-1242；Antolino等人Pancreatic Cancer Can be Detected by Adrenomedullinin New Onset Diabetes Patients(PaCANOD)[胰腺癌可以通过新发糖尿病患者中的肾上腺髓质素来检测(PaCANOD)].https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02456051；Antolino等人Adrenomedullin in pancreatic carcinoma:A case-control study of22patients[肾上腺髓质素于胰腺癌：22名患者的病例对照研究].Faculty of Medicineand Psychology[医学与心理学学院],Sapienza University of Rome[罗马智慧大学],罗马,意大利:DOI10.15761/ICST.1000175)。

已显示肾上腺髓质素及其受体的靶向在动物异种移植实验中是有效的。将AM肽拮抗剂(AM22-52)直接局部注射进入胰腺癌模型中的肿瘤，与对照相比，肿瘤大小显著减少(Adrenomedullin antagonist suppresses in-vivo growth of human pancreaticcancer cells in SCID mice by suppressing angiogenesis[肾上腺髓质素拮抗剂通过抑制血管生成而压制SCID小鼠中的人胰腺癌细胞的体内生长].Ishikawa T等人Oncogene[原癌基因].2003；22:1238-1242:DOI 10.1038/sj.onc.1206207)。

植入小鼠的过表达AM的胰腺细胞产生显著较大的肿瘤，而天然AM表达敲低的细胞具有较小的肿瘤。此外，具有AM敲低细胞的动物中的转移几乎不存在(Ishikawa T等人2003)。

在人癌症中，肿瘤周围的宿主组织中的AM₂受体上调。WO 2008/132453披露了针对hRAMP3的小鼠单克隆抗体在小鼠模型中降低肿瘤体积，表明在肿瘤中干扰AM的已知作用机制。

在临床试验中，无论肿瘤阶段、分化、可手术性和糖尿病的存在如何，在胰腺癌患者中观察到血清AM水平相比于对照升高(A Star of Connection Between PancreaticCancer and Diabetes:Adrenomedullin[胰腺癌和糖尿病之间的联系之星：肾上腺髓质素].

等人Journal of the Pancreas[胰腺期刊].2015；16(5):408-412)。因此，高血清AM通常认为是胰腺癌预后不良的指标。

伴随着2型糖尿病的非典型发展的升高的血清AM水平也已显示预测早期胰腺癌(Kaafarani I等人Targeting adrenomedullin receptors with systemic delivery ofneutralizing antibodies inhibits tumour angiogenesis and suppresses growth ofhuman tumour xenografts in mice[在小鼠中靶向肾上腺髓质素受体伴随中和抗体全身递送抑制肿瘤血管生成并压制人肿瘤异种移植物的生长].FASEB J.[FASEB期刊]2009年6月22日:DOI:10.1096/fj.08-127852)。

因此，抑制AM₂受体是在治疗诸如癌症等的增生性病症中的有吸引力的靶标，例如在治疗胰腺癌中。AM₂受体可以在调节细胞增殖和/或细胞凋亡和/或介导与宿主组织的相互作用(包括细胞迁移和转移)中发挥作用。

胰腺癌是一种毁灭性的疾病，其在诊断6个月内杀死大多数患者。在胰腺癌中少于20％的一年存活率与大多数被诊断第一次呈现出晚期疾病(此时间点没有有效的寿命延长治疗)的患者一致。在诊断在早期的情况下，手术切除是优选的治疗选项，肿瘤切除随后通常是化疗(例如细胞毒性疗法，包括吉西他滨或5-氟尿嘧啶和EGF受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼)。然而，由于早期诊断困难，大多数当前疗法和管理策略都集中在支持性化疗，对生命延长的预期非常有限。此外，胰腺癌从免疫学视角看是高度不寻常的，意味着当前疗法到免疫肿瘤学疗法如PDL-1抑制剂很大程度上对胰腺癌无效(From bench to bedside acomprehensive review of pancreatic cancer immunotherapy[胰腺癌免疫疗法的从实验室到临床综合评论].Kunk PR,Bauer TW,Slingluff CL,Rahma OE.Journal forImmunoTherapy of Cancer[癌症免疫疗法期刊].2016；4:14:DOI 10.1186/s40425-016-0119-z；Recent Advancements in Pancreatic Cancer Immunotherapy[胰腺癌免疫疗法的最新进展].Ma Y等人Cancer Research Frontiers[癌症研究前沿].2016年5月；2(2):252-276:DOI 10.17980/2016.252)。因此需要针对胰腺癌的新治疗。

WO 2008/127584描述了可用于治疗偏头痛和头痛的某些化合物，其被称为CGRP(降钙素基因相关肽)拮抗剂。

某些肽和抗体AM₂受体抑制剂是已知的，如AM_22-52(Robinson等人J.Pharmacologyand Exp.Therapeutics[药理学与实验治疗学杂志].2009；331(2):513-521)。

在本申请的优先权日期后公开的WO 2018/211275描述了作为AM₂受体抑制剂的化合物。

然而，仍然需要新的作为AM₂受体抑制剂的药剂。适合地，AM₂抑制剂对AM₂受体将是选择性的，特别地将对相关AM₁受体展现出几乎没有影响。选择性AM₂受体预期提供有益的治疗作用，例如抗癌作用，同时对AM₁受体介导的生理学作用几乎没有影响。

发明内容

根据本发明，提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O、S和N的环杂原子的4至9元饱和或部分饱和杂环基；

L不存在或是-C(R^A)₂-；

每个R^A独立地选自：H和C_1-3烷基；

X¹是N或CR⁶；

X₂和X₃各自独立地是N或CH，条件是X₁、X₂和X₃中不超过一个是N；

L¹不存在或选自：-O-和-N(R⁷)-

R¹选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基和Q¹-L²-，其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基或C_2-6炔基任选地被一个或多个R⁸取代；

Q¹选自：C_3-12环烷基、C_3-12环烯基、4至12元杂环基、C_6-10芳基和5至10元杂芳基，

其中所述环烷基、环烯基和杂环基任选地被一个或多个R⁹取代，并且

其中所述芳基和杂芳基任选地被一个或多个R¹⁰取代；

L²不存在或选自：C_1-6亚烷基、C_2-6亚烯基和C_2-6亚炔基，其中L²任选地被一个或多个R¹¹取代

R²在每次出现时独立地选自：卤基、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和-OR^A12，或

R²基团在该R²基团所附接的环原子和HET中的另一个可用环原子之间形成C_1-6亚烷基桥；

R³选自：H和C_1-4烷基；

R⁴和R⁵独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基，或

R⁴和R⁵与它们所附接的碳一起形成C_3-6环烷基；

R⁶选自：H、卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基；

R⁷选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和-OR^A1；

R⁸、R⁹和R¹¹在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、＝NR^A2、＝NOR^A2、-CN、-NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、-L³-Q²、-OR¹⁶、-S(O)_xR¹⁶(其中x是0、1或2)、-NR¹⁶R^B2、-C(O)R¹⁶、-OC(O)R¹⁶、-C(O)OR¹⁶、-NR^B2C(O)R¹⁶、-NR^B2C(O)OR¹⁶、-C(O)NR¹⁶R^B2、-OC(O)NR¹⁶R^B2、-NR^B2SO₂R¹⁶、-SO₂NR¹⁶R^B2、-NR^A2C(O)NR¹⁶R^B2、-NR^A2C(＝NR^A2)R^B2、-C(＝NR^A2)R^B2、-C(＝NR^A2)NR^A2R^B2、-NR^A2C(＝NR^A2)NR^A2R^B2、-NR^A2C(＝NCN)NR^A2R^B2、-ONR^A2R^B2和-NR^A2OR^B2，

其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基任选地被1个或多个R¹²取代，并且

其中R¹⁶选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R¹⁸取代；

R¹⁰在每次出现时独立地选自：

卤基、-CN、-NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、-L⁴-Q³、-OR¹⁷、-S(O)_xR¹⁷(其中x是0、1或2)、-NR¹⁷R^B3、-C(O)R¹⁷、-OC(O)R¹⁷、-C(O)OR¹⁷、-NR^B3C(O)R¹⁷、-NR^B3C(O)OR¹⁷、-C(O)NR¹⁷R^B3、-OC(O)NR¹⁷R^B3、-NR^B3SO₂R¹⁷、-SO₂NR¹⁷R^B3、-NR^A3C(O)NR¹⁷R^B3、-NR^A3C(＝NR^A3)R^A3、-C(＝NR^A3)R^B3、-C(＝NR^A3)NR^A3R^B3、-NR^A3C(＝NR^A3)NR^A3R^B3、-NR^A3C(＝NCN)NR^A3R^B3、-ONR^A3R^B3和-NR^A3OR^B3，

其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基任选地被1个或多个R¹³取代，并且

其中R¹⁷选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R¹⁹取代；

Q²和Q³在每次出现时独立地选自：C_3-12环烷基、C_3-12环烷基-C_1-3烷基、C_3-12环烯基、C_3-12环烯基-C_1-3烷基、4至12元杂环基、4至12元杂环基-C_1-3烷基、C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-3烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-3烷基，

其中所述C_3-12环烷基、C_3-12环烷基-C_1-3烷基、C_3-12环烯基、C_3-12环烯基-C_1-3烷基、4至12元杂环基和4至12元杂环基-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁴取代，并且

其中所述C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-3烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁵取代；

L³和L⁴独立地不存在或独立地选自：-O-、-CH₂O-、-NR^A4-、-CH₂NR^A4-、-S(O)_x-、-CH₂S(O)_x-(其中x是0、1或2)、-C(＝O)-、-CH₂C(＝O)-、-NR^A4C(＝O)-、-CH₂NR^A4C(＝O)-、-C(＝O)NR^A4-、-CH₂C(＝O)NR^A4-、-S(O)₂NR^A4-、-CH₂S(O)₂NR^A4-、-NR^A4S(O)₂-、CH₂NR^A4S(O)₂-、-OC(＝O)-、-CH₂OC(＝O)-、-C(＝O)O-和-CH₂-C(＝O)O-；

R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁸和R¹⁹在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、-CN、-NO₂、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-L⁵-Q⁴、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-OC(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-NR^B5C(O)R^A5、-NR^B5C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5、-NR^B5SO₂R^A5和-SO₂NR^A5R^B5；

其中所述C_1-4烷基任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤基、＝O、-CN、-OR^A6、-NR^A6R^B6和-SO₂R^A6；

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

卤基、-CN、-NO₂、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-L⁶-Q⁵、-OR^A7、-S(O)₂R^A7、-NR^A7R^B7、-C(O)R^A7、-OC(O)R^A7、-C(O)OR^A7、-NR^B7C(O)R^A7、-NR^B7C(O)OR^A7、-C(O)NR^A7R^B7、-NR^B7SO₂R^A7和-SO₂NR^A7R^B7-；

其中所述C_1-4烷基任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A8、-NR^A8R^B8和-SO₂R^A8；

Q⁴和Q⁵在每次出现时独立地选自：苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基和4至6元杂环基-C_1-3烷基，

其中Q⁴和Q⁵的所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基和4至6元杂环基-C_1-3烷基各自独立地任选地被1或2个选自以下的取代基取代：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、卤基、＝O、-CN、-OR^A9、-NR^A9R^B9、-SO₂R^A9和被1或2个选自以下的取代基取代的C_1-4烷基：卤基、-CN、-OR^A10、-NR^A10R^B10和-SO₂R^A10，并且

其中Q⁴和Q⁵的所述苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基-各自独立地任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-CN、-OR^A9、-NR^A9R^B9、-SO₂R^A9和被1或2个选自以下的取代基取代的C_1-4烷基：卤基、-CN、-OR^A10、-NR^A10R^B10和-SO₂R^A10；

L⁵和L⁶独立地不存在或独立地选自：-O-、-NR^A11-、-S(O)₂-、-C(＝O)-、-NR^A11C(＝O)-、-C(＝O)NR^A11-、-S(O)₂NR^A11-、-NR^A11S(O)₂-、-OC(＝O)-和-C(＝O)O-；

R^A1、R^A2、R^B2、R^A3、R^B3、R^A4、R^A5、R^B5、R^A6、R^B6、R^A7、R^B7、R^A8、R^B8、R^A9、R^B9、R^A10、R^B10、R^A11和R^A12各自独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基，

或取代基内的任何-NR^A2R^B2、-NR¹⁶R^B2、-NR^A3R^B3、-NR¹⁷R^B3、-NR^A5R^B5、-NR^A6R^B6、-NR^A7R^B7、-NR^A8R^B8、-NR^A9R^B9和-NR^A10R^B10可形成4至6元杂环基，其中所述4至6元杂环基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基；并且

q是选自0、1、2、3和4的整数。

还提供了包含本发明的化合物、或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。在一些实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM₂)介导的疾病或医学病症。

还提供了一种治疗有需要的受试者中由AM₂介导的疾病或医学病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

在某些实施例中，本发明的化合物用于治疗增生性疾病，例如癌症。在某些实施例中，本发明的化合物用于预防或抑制癌症进展，例如通过预防或抑制癌细胞迁移和/或预防或抑制癌症转移。

还提供了用于治疗癌症的本发明的化合物，其中AM和/或AM₂与该癌症的发展或进展有牵连。例如，在一些实施例中，本发明的化合物可用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌和肺癌。在特定实施例中，本发明的化合物用于治疗胰腺癌。在某些实施例中，本发明的化合物用于治疗患有癌症的患者，该癌症为例如胰腺癌，其中该患者中AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的表达相比于对照升高。例如，患者可以具有升高的AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的血清水平。

本发明的化合物可以单独使用或与本文所述的一种或多种抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

附图说明

图1显示了本文所例示的化合物SHF-1041在实例中描述的异种移植小鼠模型中的作用。将小鼠用CFPAC-1细胞(衍生自导管腺癌的细胞(例如ATCC))接种。该图显示了与对照相比在24天每日腹膜内(i.p.)给予5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量的SHF-1041后的％肿瘤体积生长。

具体实施方式

定义

除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的以下术语具有下文陈述的以下含义。

术语“治疗”(“treating”或“treatment”)是指成功治疗或减轻疾病、病变或病症的任何征候，包括任何客观或主观参数，例如症状的消除、缓解；减弱症状或使患者更能忍受病变或病症；减慢退化或衰退的速度；使退化终点不那么令人虚弱；改善患者的身体或心理健康。例如，本文的某些方法通过减少癌症的症状来治疗癌症。癌症的症状将是已知的或可由本领域普通技术人员确定。术语“治疗”及其词形变化形式包括预防病变、病症或疾病(例如预防与AM₂相关的癌症的一种或多种症状的发展)。

在与疾病(例如癌症)相关的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与……相关”意指该疾病(例如癌症)是由(全部或部分)或该疾病的症状是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的。例如，与AM₂受体通路活性相关的疾病或病症的症状可能是AM₂蛋白通路的活性水平的增加导致(完全或部分)的症状。如本文所用，在致病物的情况，被描述为与疾病相关的可能是用于治疗疾病的靶标。例如，与AM₂的活性水平增加相关的疾病可以用有效于降低AM₂的活性水平的药剂(例如，如本文所述的化合物)治疗。

如本文所定义的，提及蛋白质抑制剂(例如拮抗剂)相互作用时，术语“抑制(inhibition/inhibit/inhibiting等)”意指相对于不存在该抑制剂的情况下蛋白质通路的活性水平或功能，负面影响(例如降低)蛋白质(例如AM₂的组分)的蛋白质通路的活性水平或功能。在一些实施例中，抑制是指减少疾病或疾病症状(例如，与AM₂的活性水平增加相关的癌症)。在一些实施例中，抑制是指信号转导通路或与AM₂相关的信号传导通路的活性水平的降低。因此，抑制可包括至少部分、部分或全部阻断刺激，降低、预防或延迟活化，或灭活、脱敏或下调信号转导或酶活性或蛋白质(例如AM₂受体)的量。抑制可包括相对于非疾病对照，至少部分、部分或完全降低刺激，降低活化，或灭活、脱敏或下调信号转导或酶活性或蛋白质(例如AM₂蛋白质通路的组分)的量，该蛋白质可调节另一种蛋白质的水平或调节细胞存活、细胞增殖或细胞运动。

贯穿本说明书的描述和权利要求，词语“包括”和“包含”以及它们的变型意指“包括但不限于”，并且它们并不旨在(并且并不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。贯穿本说明书的描述和权利要求，除非上下文另有要求，否则单数涵盖复数。特别地，当使用不定冠词时，除非上下文另有要求，否则本说明书应被理解为考虑到复数以及单数。

术语“卤基”或“卤素”是指周期表第17族的其中一种卤素。特别地，该术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，该术语是指氟或氯。

术语C_m-n是指具有m至n个碳原子的基团。

术语“C_1-6烷基”是指含有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。“C_1-4烷基”类似地是指含有至多4个碳原子的此类基团。亚烷基基团是二价烷基基团，并且同样可以是直链或支链的，并且与分子的其余部分具有两个附接点。此外，亚烷基基团可以例如对应于本段中列出的那些烷基基团之一。例如，C_1-6亚烷基可以是-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH(CH₃)-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH(CH₃)CH₂-。烷基基团和亚烷基基团可以未经取代或被一个或多个取代基取代。本文描述了可能的取代基。例如，烷基或亚烷基的取代基可以是卤素(例如氟、氯、溴和碘)、OH、C₁-C₄烷氧基、-NR'R”氨基，其中R'和R”独立地是H或烷基。可替代地，可使用烷基基团的其他取代基。

术语“C_1-6卤烷基”，例如“C_1-4卤烷基”，是指被至少一个卤素原子取代的烃链，该卤素原子在每次出现时独立地选自例如氟、氯、溴和碘。卤素原子可以存在于烃链上的任何位置。例如，C_1-6卤烷基可以指氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氯乙基(例如1-氯甲基和2-氯乙基)、三氯乙基(例如1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基)、氟乙基(例如1-氟甲基和2-氟乙基)、三氟乙基(例如1,2,2-三氟乙基和2,2,2-三氟乙基)、氯丙基、三氯丙基、氟丙基、三氟丙基。卤烷基基团可以是例如-CX₃、-CHX₂、-CH₂CX₃、-CH₂CHX₂或-CX(CH₃)CH₃，其中X是卤基(例如F、Cl、Br或I)。氟烷基基团，即被至少一个氟原子取代的烃链(例如-CF₃、-CHF₂、-CH₂CF₃或-CH₂CHF₂)。

术语“C_2-6烯基”包括含有至少一个双键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。双键可以作为E或Z异构体存在。双键可以在烃链的任何可能位置。例如，“C_2-6烯基”可以是乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基和己二烯基。亚烯基基团是二价烯基基团，并且同样可以是直链或支链的，并且与分子的其余部分具有两个附接点。此外，亚烯基基团可以例如对应于本段中列出的那些烯基基团之一。例如，亚烯基可以是-CH＝CH-、-CH₂CH＝CH-、-CH(CH₃)CH＝CH-或-CH₂CH＝CH-。烯基基团和亚烯基基团可以未经取代或被一个或多个取代基取代。本文描述了可能的取代基。例如，取代基可以是上述作为烷基基团的取代基的那些。

术语“C_2-6炔基”包括含有至少一个三键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。三键可以在烃链的任何可能位置。例如，“C_2-6炔基”可以是乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。亚炔基基团是二价炔基基团，并且同样可以是直链或支链的，并且与分子的其余部分具有两个附接点。此外，亚炔基基团可以例如对应于本段中列出的那些炔基基团之一。例如，亚炔基可以是-C≡C-、-CH₂C≡C-、-CH₂C≡CCH₂-、-CH(CH₃)CH≡C-或-CH₂C≡CCH₃。炔基基团和亚炔基基团可以未经取代或被一个或多个取代基取代。本文描述了可能的取代基。例如，取代基可以是上述作为烷基基团的取代基的那些。

术语“C_3-12环烷基”包括含有3至12个碳原子的饱和烃环系统。环烷基可以是单环的或稠合的、桥接的或螺饱和烃环系统。术语“C_3-6环烷基”包括含有3、4、5或6个碳原子的饱和烃环系统。例如，C₃-C₁₂环烷基可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷(降莰烷)、双环[2.2.2]辛烷或三环[3.3.1.1]癸烷(金刚烷基)。例如，“C₃-C₆环烷基”可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.1.1]己烷或双环[1.1.1]戊烷。适合地，“C₃-c₆环烷基”可以是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

术语“C_3-12环烯基”包括含有3至12个碳原子的烃环系统和至少一个双键(例如1个或2个双键)。环烯基基团可以是单环的或稠合的、桥接的或螺烃环系统。例如，C_3-12环烯基可以是环丁烯基、环戊烯基、环己烯基，

术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”包括非芳族的饱和或部分饱和的单环的或稠合的、桥接的或螺双环的杂环环系统。单环杂环环可含有约3至12(适当地3至7个)环原子，在环中具有1至5(适合地1、2或3)个选自氮、氧或硫的杂原子。双环杂环在环中可以含有7至12个成员原子。双环杂环环可以是稠合环系统、螺环系统或桥环系统。杂环基基团可以是3-12元，例如3至9(例如，3至7)元非芳族单环或双环饱和或部分饱和基团，其在环系统中包含1、2或3个独立地选自O、S和N的杂原子(换句话说，形成环系统的原子中的1、2或3个选自O、S和N)。部分饱和意指该环可包含一个或两个双键。这特别适用于5至7元的单环环。双键典型地在两个碳原子之间，但可以在碳原子和氮原子之间。双环系统可以是螺稠合的，即环通过单个碳原子彼此连接；邻接稠合的，即环通过两个相邻的碳或氮原子彼此连接；或者它们可以共享桥头，即环通过两个非相邻的碳或氮原子(桥环系统)彼此连接。杂环基团的实例包括环醚，如环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二噁烷基和经取代的环醚。在环位置包含至少一个氮的杂环包括，例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢三嗪基、四氢吡唑基、四氢吡啶基、高哌啶基，高哌嗪基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚基等。典型的含硫杂环包括四氢噻吩基、二氢-1,3-二硫醇、四氢-2H-噻喃和六氢噻呯(hexahydrothiepine)。其他杂环包括二氢-氧杂硫醇基(oxathiolyl)、四氢噁唑基、四氢噁二唑基、四氢二噁唑基、四氢氧杂噻唑基、六氢三嗪基、四氢噁嗪基、四氢嘧啶基、二氧戊环基(dioxolinyl)、八氢苯并呋喃基、八氢苯并咪唑基和八氢苯并噻唑基。对于含硫的杂环，还包括含有SO或SO₂基团的氧化硫杂环。实例包括亚砜和砜形式的四氢噻吩基和硫代吗啉基，如四氢噻吩1,1-二氧化物和硫代吗啉基1,1-二氧化物。带有1或2个氧代(＝O)的杂环基基团的适合的值是例如2-氧代吡咯烷基、2-氧代咪唑烷基、2-氧代哌啶基、2,5-二氧代吡咯烷基、2,5-二氧代咪唑烷基或2,6-二氧代哌啶基。特定的杂环基基团是含有1、2或3个选自氮、氧或硫的杂原子的饱和单环3至7元杂环基，例如氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、吗啉基、四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、硫代吗啉基、硫代吗啉基1,1-二氧化物、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基或高哌嗪基。如技术人员将理解的，任何杂环可以经由任何适合的原子(如经由碳或氮原子)连接到另一个基团。例如，术语“哌啶代”或“吗啉代”是指经由环氮连接的哌啶-1-基或吗啉-4-基环。

术语“桥环系统”包括其中两个环共享多于两个原子的环系，参见例如AdvancedOrganic Chemistry[高等有机化学]，由Jerry March编辑，第4版，威利国际科学出版社(Wiley Interscience)，第131-133页，1992。适合地，桥形成在环系统中的两个非相邻的碳或氮原子之间。连接桥头原子的桥可以是键或包含一个或多个原子。桥接的杂环基环系统的实例包括氮杂-双环并[2.2.1]庚烷、2-氧杂-5-氮杂双环并[2.2.1]庚烷、氮杂-双环并[2.2.2]辛烷、氮杂-双环并[3.2.1]辛烷和奎宁环。

术语“螺双环环系统”包括其中两个环系统共享一个共同的螺碳原子的环系统，即杂环通过单个共同的螺碳原子与另一个碳环或杂环环连接。螺环环系统的实例包括3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷、6-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷、2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷和2-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷。

“杂环基-C_m-n烷基”包括共价附接到C_m-n亚烷基基团的杂环基基团，两者都在本文中进行了定义；并且其中杂环基-C_m-n烷基与该分子的其余部分通过亚烷基基团中的碳原子连接。基团“芳基-C_m-n烷基”、“杂芳基-C_m-n烷基”和“环烷基-C_m-n烷基”以相同的方式定义。

“被-NRR取代的-C_m-n烷基”和“被-OR取代的C_m-n烷基”类似地是指共价附接到C_m-n亚烷基基团的-NRR或-OR基团，其中该基团与该分子的其余部分通过亚烷基基团中的碳原子连接。

当整体应用于取代基时，术语“芳族”包括在环或环系统内的共轭π体系中具有4n+2个电子的单环或多环环系统，其中所有对共轭π体系起作用的原子都在同一平面内。

术语“芳基”包括芳族烃环系统。该环系在环内的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统起作用的原子都在同一平面内。例如，“芳基”可以是苯基和萘基。芳基系统本身可以被其他基团取代。

术语“杂芳基”包括掺入一个或多个(例如1-4个，特别是1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子的芳族单环或双环环。该环或环系在环内的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统起作用的原子都在同一平面内。

杂芳基基团的实例是含有五至十二个环成员，并且更通常是五至十个环成员的单环和双环基团。杂芳基基团可以是例如5元或6元单环环或者9元或10元双环环，例如由稠合的五元和六元环或两个稠合的六元环形成的双环结构。每个环可以含有至多约四个典型地选自氮、硫和氧的杂原子。典型地，杂芳基环将含有至多3个杂原子，更通常至多2个，例如单个杂原子。在一个实施例中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的，如在咪唑或吡啶的情况下那样，或基本上非碱性的，如在吲哚或吡咯氮的情况下那样。一般而言，存在于杂芳基基团(包括环的任何氨基基团取代基)中的碱性氮原子的数目将小于五。

杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、萘啶基、咔唑基、吩嗪基、苯并异喹啉基、吡啶并吡嗪基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、1H-吡唑并[4,3-d]-噁唑基、4H-咪唑并[4,5-d]噻唑基、吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、咪唑并[2,1-b]噻唑基和咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基。在环的位置包含至少一个氮的杂芳基基团的实例包括吡咯基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋喃氮基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基和蝶啶基。“杂芳基”还涵盖部分芳族的二环或多环环系统，其中至少一个环是芳族环，并且一个或多个其他环是非芳族的、饱和或部分饱和的环，条件是至少一个环含有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子。部分芳族杂芳基基团的实例包括例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基、2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、2,2-二氧代-1,3-二氢-2-苯并噻吩基、4,5,6,7-四氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基、1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪基和3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪基。

五元杂芳基基团的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基、噁唑基、噁二唑基、氧杂三唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基基团。

六元杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基和三嗪基。

包含与五元环稠合的六元环的双环杂芳基基团的特定实例包括但不限于：苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、嘌呤基(例如，腺嘌呤基、鸟嘌呤基)、吲唑基、苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、吡咯并吡啶、和吡唑并吡啶基基团。

含有两个稠合六元环的双环杂芳基基团的特定实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、色满基、硫代色满基、色烯基、异色烯基、色满基、异色满基、苯并二噁烷基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗪基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基和蝶啶基基团。

如本文所用，术语“氧代”或“＝O”意指与碳原子双键键合的氧。

术语“任选地取代”包括被取代的基团、结构或分子以及未被取代的基团、结构或分子。

当任选的取代基选自“一个或多个”基团时，应当理解，该定义包括选自指定基团之一的所有取代基或选自两个或更多个指定基团的取代基。

当一个部分被取代时，在化学上可能且与原子价要求一致的情况下，可以在该部分的任何点上取代。该部分可以被一个或多个取代基，例如1、2、3或4个取代基取代；任选地，基团上存在1或2个取代基。当存在两个或更多个取代基时，这些取代基可以是相同的或不同的。

取代基仅存在于它们在化学上可能的位置，本领域技术人员能够不费力地决定(实验上或理论上)在化学上可能的取代和在化学上不可能的取代。

邻位、间位和对位取代是本领域众所周知的术语。毫无疑问，“邻位”取代是相邻碳原具有取代基的取代模式，无论是单一基团(例如以下实例中的氟基基团)还是分子的其他部分，如以

结束的键所示。

“间位”取代是其中两个取代基在碳上，彼此隔开一个碳，即在取代的碳之间具有单个碳原子的取代模式。换句话说，第二个原子上有一个取代基，远离具有另一个取代基的原子。例如，下面的基团是间位取代的：

“对位”取代是其中两个取代基在碳上，彼此隔开两个碳，即在取代的碳之间具有两个碳原子的取代模式。换句话说，第三个原子上有一个取代基，远离具有另一个取代基的原子。例如，下面的基团是对位取代的：

提及形成4至6元杂环基的-NRR'基团是指R和R'与它们所附接的氮原子一起形成4至6元杂环基基团。例如，-NRR”如-NR^A2R^B2、-NR¹⁶R^B2、-NR^A3R^B3、-NR¹⁷R^B3、-NR^A5R^B5、-NR^A6R^B6、-NR^A7R^B7、-NR^A8R^B8、-NR^A9R^B9和-NR^A10R^B10基团可形成：

类似地，取代基内的-NRR'基团可以形成羰基连接的4至6元杂环基，例如-C(O)NRR'或基团可形成：

取代基如-OC(O)NRR'、-SO₂NRR'、-NRC(O)NRR'、-C(＝NR^A5)NRR'、-NRC(＝NR)NRR'和-NRC(＝NCN)NRR'内的-NRR'基团可在这些取代基内类似地形成4至6元杂环基。

HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O、S和N的环杂原子的4至9元饱和或部分饱和杂环基。提及“含有1个环氮”的杂环基是指HET中的N(R³)基团。因此，除了N(R³)之外，HET任选地还含有1个另外的环杂原子。

提及R²基团在该R²基团所附接的环原子和HET中的另一个可用环原子之间形成C_1-6亚烷基桥包括例如；

其中A是C_1-6亚烷基，例如C_1-4亚烷基。

亚烷基桥(例如上文的-A-)可以是直链或支链的，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH(CH₃)-或-C(CH₃)₂-。适合地，A是亚甲基或亚乙基。A可以是C_2-4亚烷基，特别是当HET是7、8或9元环时。其中亚烷基桥显示为本文的-A-，如同例如：

亚烷基桥的末端碳原子与HET中2个不同的可用环原子键合。优选地，亚烷基桥附接到HET中的非相邻环原子。除非另有说明，否则在R²基团在HET中形成亚烷基桥的情况下，q仍然是选自以下的整数：0、1、2、3和4(即在桥环系统中HET任选地被最多4个R²基团取代)。

如将认可的，提及“含有1个环氮杂原子”的HET是指NR³基团。在某些实施例中，除了NR³基团之外，HET任选地还含有1个另外的选自O、S和N的环杂原子。

短语“本发明的化合物”意指本文中总体上和具体地披露的那些化合物。因此，本发明的化合物包括式(I)(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)和(VIII)的化合物和实例中的化合物。

以

或“*”终止的键表示该键连接至结构中未示出的另一个原子。终止于环状结构内部而不是终止于环结构的原子处的键表示该键可以在化合价允许的情况下连接至环结构中的任何原子。

结合本发明的特定方面、实施例或者实例一起描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应被理解为可适用于本文所描述的任何其他方面、实施例或实例，除非与之不相容。在本说明书中所披露的所有特征(包括任何所附权利要求书、摘要以及附图)和/或如此披露的任何方法或过程的所有步骤可以按任何组合的形式组合，这类特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明并不限于任何前述实施例的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何所附权利要求书、摘要以及附图)中所披露的特征的任何新颖特征或任何新颖组合，或扩展到如此披露的任何方法或过程的步骤的任何新颖步骤或任何新颖组合。

读者的关注点是针对与本说明书同时或在本说明书之前连同本申请一起提交并且与本说明书一起开放以供公众检验的所有论文和文献，并且所有这类论文和文献的内容通过引用并入本文。

典型地选择构成本发明化合物的各种官能团和取代基，使得化合物的分子量不超过1000。更通常地，该化合物的分子量将小于750，例如小于700、或小于650、或小于600、或小于550。更优选地，分子量小于585，并且例如为575或更小。

本发明任何化合物的适合或优选特征也可以是任何其他方面的适合特征。

本发明考虑到本发明化合物的药学上可接受的盐。这些盐可以包括这些化合物的酸加成盐和碱式盐。这些盐可以是这些化合物的酸加成盐和碱式盐。

适合的酸加成盐由形成无毒的盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酚盐、1,5-萘二磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸/磷酸二氢盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

适合的碱式盐由形成无毒的盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、环匹罗司乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐以及锌盐。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。关于适合的盐的综述，参见"Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[药物盐手册：性质、选择和使用]",Stahl和Wermuth(Wiley-VCH[威利-VCH出版社],魏因海姆,德国,2002)。

本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过例如以下一种或多种方法制备：

(i)通过使本发明的化合物与所需的酸或碱反应；

(ii)通过从本发明化合物的适合前体中去除酸或碱不稳定的保护基，或通过使用所需的酸或碱将适合的环状前体例如内酯或内酰胺开环；或

(iii)通过与适当的酸或碱反应或借助于适合的离子交换柱将本发明化合物的一种盐转化为另一种盐。

这些方法典型地在溶液中进行。所得的盐可以沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。所得的盐中的电离度可以从完全电离到几乎未电离变化。

具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或者其原子在空间中的排列不同的化合物称为“异构体”。术语“立体异构体”是其原子在空间排列上不同的异构体。彼此不成镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，并且彼此是不能重叠的镜像的立体异构体称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心，例如，该不对称中心键合到四个不同的基团时，可能有一对对映异构体。对映异构体可以其不对称中心的绝对构型来表征，并且通过Cahn和Prelog的R-和S-测序规则、或通过分子旋转偏振光平面的方式被描述并指定为右旋或左旋的(即，分别作为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或其混合物存在。含有相等比例对映异构体的混合物称为“外消旋混合物”。当本发明的化合物具有两个或更多个立体中心时，可以考虑(R)和(S)立体异构体的任何组合。(R)和(S)立体异构体的组合可以产生非对映异构体混合物或单一非对映异构体。本发明的化合物可以作为单一立体异构体存在或者可以是立体异构体的混合物，例如外消旋混合物和其他对映异构体混合物，以及非对映异构体混合物。当混合物是对映异构体的混合物时，对映异构体过量可以是上文披露的任何对映异构体。当化合物是单一立体异构体时，化合物仍可含有其他非对映异构体或对映异构体作为杂质。因此，单一立体异构体不一定具有100％的对映异构体过量(e.e.)或非对映异构体过量(d.e.)，但是可以具有至少约85％的e.e.或d.e.，例如至少90％、至少95％或至少99％。

本发明的化合物可具有一个或多个不对称中心；因此，此类化合物可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或其混合物生成。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中对特定化合物的描述或命名旨在包括单独的对映异构体及其外消旋混合物或其他混合物。用于立体化学测定和立体异构体分离的方法在本领域中是众所周知的(参见“AdvancedOrganic Chemistry[高等有机化学]”中第4章的讨论，第4版，J.March，约翰·威利父子出版公司(John Wiley and Sons)，纽约(New York)，2001)，例如通过从光学活性原材料合成或通过拆分外消旋形式。本发明的一些化合物可以具有几何异构中心(E-和Z-异构体)。应当理解，本发明涵盖具有AM₂抑制活性的所有光学、非对映异构体和几何异构体及其混合物。

Z/E(例如顺式/反式)异构体可以通过本领域技术人员众所周知的常规技术分离，例如色谱和分步结晶。

必要时，用于制备/分离各个对映体的常规技术包括由适合的光学纯前体进行手性合成，或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或者盐或衍生物的外消旋体)。因此，本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(典型地是HPLC)在不对称树脂上以对映体富集形式获得，该色谱法具有由烃(典型地是庚烷或己烷)组成的流动相，该烃含有从0体积％至50体积％的异丙醇(典型地从2％至20％)，以及对于具体实例，从0体积％至5体积％的烷基胺(例如0.1％二乙胺)。浓缩洗脱液得到富集的混合物。

可替代地，该外消旋体(或外消旋前体)可以与一种适合的旋光化合物(例如，醇)反应，或在本发明的化合物包含酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸(如1-苯乙胺或酒石酸)反应。所得的非对映异构体混合物可以通过色谱和/或分部结晶分离，并且一种或全部两种非对映异构体通过技术人员众所周知的方式转化为相应的一种或多种纯对映异构体。

当任何外消旋体结晶时，两种不同类型的晶体都是可能的。第一种类型是上文提及的外消旋化合物(真正的外消旋体)，其中产生一种均匀形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映体。第二种类型是外消旋混合物或聚集物，其中以等摩尔量产生两种形式的晶体，每种形式包含单一对映体。

尽管存在于外消旋混合物中的两种晶型具有相同的物理特性，但与真正的外消旋体相比可能具有不同的物理特性。外消旋混合物可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离—参见例如E.L.Eliel和S.H.Wilen所著的“Stereochemistry of Organic Compounds[有机化合物的立体化学]”(威利出版社(Wiley)，1994年)。

本说明书中描述的化合物和盐可以是同位素标记的(或“放射性标记的”)。因此，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界典型地发现的原子质量或质量数的原子置换。可掺入的放射性核素的实例包括²H(对于氘也写为“D”)、³H(对于氚也写为“T”)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹³N、¹⁵N、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I、²⁵I、³²P、³⁵S等。使用的放射性核素将取决于该放射性标记衍生物的具体应用。例如，对于体外竞争测定，³H或¹⁴C通常有用。对于放射性成像应用，¹¹C或¹⁸F通常有用。在一些实施例中，放射性核素是³H。在一些实施例中，放射性核素是¹⁴C。在一些实施例中，放射性核素是¹¹C。并且在一些实施例中，放射性核素是¹⁸F。

同位素标记化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术、或通过类似于所述那些的方法使用合适的同位素标记试剂代替先前采用的非标记试剂来制备。

化合物中氢被氘选择性置换可调节化合物的代谢、化合物的PK/PD特性和/或化合物的毒性。例如，氘化可以增加体内化合物的半衰期或减少体内化合物的清除。氘化还可以抑制有毒代谢产物的形成，从而提高安全性和耐受性。应当理解，本发明涵盖具有式(I)的化合物的氘化衍生物。如本文所用，术语氘化衍生物指的是在特定位置至少有一个氢原子被氘置换的本发明化合物。例如，C_1-4-烷基基团中的一个或多个氢原子可能被氘置换以形成氘化的C_1-4-烷基基团。

某些本发明化合物可以以溶剂化形式以及非溶剂化形式(例如像水合形式)存在。应当理解，本发明涵盖具有AM₂抑制活性的所有这些溶剂化形式。

还应当理解，本发明的某些化合物可以展现出多态性，并且本发明涵盖具有AM₂抑制活性的所有此类形式。

本发明的化合物可以以许多不同的互变异构形式存在，并且提及本发明的化合物包括所有此类形式。为避免疑义，在化合物可以以几种互变异构形式中的一种存在，并且只明确描述或示出一种的情况下，所有其他形式仍然包括在本发明的化合物中。互变异构体形式的实例包括酮、烯醇和烯醇化物形式，例如，在以下互变异构体对中那样：酮/烯醇(在下文中示出)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇和硝基/酸式硝基。

本发明的化合物的体内作用可以部分地通过一种或多种代谢产物来发挥，这些代谢产物是在施用本发明的化合物后在人或动物体内形成的。

还应当理解，具有式(I)的化合物的适合的药学上可接受的前药也构成本发明的一个方面。因此，本发明的化合物涵盖这些化合物的前药形式，且本发明的化合物可以以前药物的形式施用(即在人体或动物体内分解以释放本发明化合物的化合物)。可以使用前药来改变本发明化合物的物理特性和/或药代动力学特性。当本发明的化合物含有改性基团(property-modifying group)可以附接的适合的基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括可以在本发明的化合物中的羧基基团或羟基基团处形成的可体内切割的酯衍生物和可以在本发明的化合物中的羧基基团或氨基基团处形成的可体内切割的酰胺衍生物。

因此，本发明包括当可通过有机合成获得时以及当可通过裂解其前药的方式在人或动物体内获得时如本文定义的本发明的那些化合物。因此，本发明包括通过有机合成手段产生的那些具有式(I)的化合物，并且还包括通过代谢前体化合物的方式在人体或动物体中产生的这类化合物，即，可以是合成产生的化合物或代谢产生的化合物的具有式(I)的化合物。

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药是基于合理的医学判断作为适合于向人或动物体施用而没有不希望的药理学活性并且没有异常毒性的药学上可接受的前药。

例如，在下列文献中，已经描述了各种形式的前药：-

a)Methods in Enzymology[酶学方法],第42卷,p.309-396,K.Widder等人编(学术出版社(Academic Press,1985)；

b)Design of Pro-drugs[前药设计],H.Bundgaard编(爱思唯尔出版社(Elsevier),1985)；

c)A Textbook of Drug Design and Development[药物设计和开发教科书],由Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编,第5章“Design and Application of Pro-drugs[前药的设计和应用]”,H.Bundgaard第113-191页(1991)；

d)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews[高级药物递送评论]，8，1-38(1992)；

e)H.Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志]，77,285(1988)；

f)N.Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull.[化学与药学通报],32,692(1984)；

g)T.Higuchi和V.Stella，“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems[前药作为新颖递送系统]”，A.C.S.Symposium Series[A.C.S.研讨会系列]，第14卷；以及

h)E.Roche(编辑)，“Bioreversible Carriers in Drug Design[药物设计中的生物可逆性载体]”，培格曼出版社(Pergamon Press)，1987。

具有化学式I的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羧基基团)是例如其可体内裂解的酯。包含羧基基团的本发明的化合物的可体内裂解的酯是例如在人或动物体中切割以产生母体酸的药学上可接受的酯。羧基的适合的药学上可接受的酯包括C_1-6烷基酯如甲基、乙基和叔丁基C_1-6烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯，C_1-6烷酰基氧基甲基酯如新戊酰氧基甲基酯，3-酞基酯，C_3-8环烷基羰基氧基-C_1-6烷基酯如环戊基羰基氧基甲基酯和1-环己基羰基氧基乙基酯，2-氧代-1,3-二氧戊环烯基甲基酯如5-甲基-2-氧代-1,3-二氧戊环烯-4-基甲基酯和C_1-6烷氧基羰基氧基-C_1-6烷基酯如甲氧基羰基氧基甲基酯和1-甲氧基羰基氧基乙基酯。

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羟基基团)是例如其可体内裂解的酯或醚。包含羟基基团的本发明的化合物的可体内裂解的酯或醚是例如在人或动物体中切割以产生母体羟基化合物的药学上可接受的酯或醚。羟基基团的适合的药学上可接受的酯形成基团包括无机酯，诸如磷酸酯(包括磷酰胺环酯)。羟基基团的其他适合的药学上可接受的酯形成基团包括：C_1-10烷酰基基团如乙酰基、苯甲酰基、苯基乙酰基和经取代的苯甲酰基和苯基乙酰基基团、C_1-10烷氧基羰基基团如乙氧基羰基、N,N-(C_1-6 烷基)₂氨甲酰基、2-二烷基氨基乙酰基和2-羧基乙酰基基团。苯乙酰基和苯甲酰基上的环取代基的实例包括：氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C_1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。羟基基团的适合的药学上可接受的醚形成基团包括α-酰氧基烷基基团诸如乙酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基基团。

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羧基基团)是例如，其可体内切割的酰胺，例如由胺(如氨、C_1-4烷基胺如甲胺、(C_1-4烷基)₂胺如二甲胺、N-乙基-N-甲胺或二乙胺、C_1-4烷氧基-C_2-4烷基胺如2-甲氧基乙胺、苯基-C_1-4烷基胺如苄基胺和氨基酸如甘氨酸)或其酯形成的酰胺。

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有氨基基团)是例如其可体内裂解的酰胺或氨基甲酸酯衍生物。来自氨基基团的适合的药学上可接受的酰胺包括例如用C_1-10烷酰基基团形成的酰胺，如乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基以及经取代的苯甲酰基和苯乙酰基基团。苯乙酰基和苯甲酰基上的环取代基的实例包括：氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C_1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。来自氨基基团的适合的药学上可接受的氨基甲酸酯包括例如酰氧基烷氧基羰基和苄氧基羰基基团。

化合物

以下段落适用于本发明的化合物。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物，HET通过HET中的环碳原子与式(I)中的-L-N(C(＝O)L¹R¹)-基团键合。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(II)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

a是选自0、1和2的整数；

b是选自1、2、3和4的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(III)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中b是选自1、2和3的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IV)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中b是选自1、2和3的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(V)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VI)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VII)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R⁸¹⁰选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基，

R⁸²⁰和R⁸³⁰各自独立地选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，

或R⁸²⁰和R⁸³⁰与它们所附接的碳原子一起形成C_3-6环烷基或含有1或2个选自O、S和N的杂原子的4至7元杂环基，

其中所述C_3-6环烷基或4至7元杂环基任选地被一个或多个R⁹取代。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIII)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R⁴是H或C_1-3烷基，并且R⁵是H。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R⁴是H或甲基，并且R⁵是H。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R⁴是C_1-3烷基(例如甲基)，并且R⁵是H。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R⁴和R⁵是H。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R³是H。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，q是0、1或2，并且R²是C_1-3烷基(例如甲基)。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，q是0。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，X₂和X₃是CH，并且X₁是CR⁶或N。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，X₁、X₂和X₃是CH。

在某些实施例中，本发明的化合物包括，例如，具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物，或其药学上可接受的盐，除非另有说明，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X₁、X₂、X₃、L、L¹、HET和q各自具有前文所定义的或后文段落(1)至(117)中任一项的任何含义：-

1.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元饱和或部分饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

2.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

3.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元部分饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

4.HET是含有1个环氮杂原子(即NR³)的4至7元饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

5.HET是含有1个环氮杂原子(即NR³)的4至7元部分饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

6.HET选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、高哌啶基、高哌嗪基和高吗啉基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的一个或多个环氮原子被R³取代；并且

(iii)HET任选地被1、2、3或4个R²取代，或R²基团在该R²基团所附接的环原子和HET中的另一个可用环原子之间形成C_1-4亚烷基桥。

7.HET选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和高哌啶基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的环氮原子被R³取代；并且

8.HET是高哌啶基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的环氮原子被R³取代；并且

9.HET是：

其中a是选自0、1和2的整数(适合地，a是1或2)，b是选自1、2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

10.HET是：

其中a是选自0、1和2的整数，b是选自1、2、3和4的整数，总和a+b为2至7，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

11.HET是：

其中b是选自1、2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

12.HET是：

其中b是选自2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

13.HET选自

其中A是C_1-4亚烷基，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

14.HET是

15.HET选自：

16.HET选自：

17.HET选自：

18.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

19.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

20.HET选自

21.HET选自：

22.HET选自：

23.HET是

24.HET选自：

其中A是C_1-4亚烷基(优选C_2-4亚烷基)，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

25.HET选自：

26.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

27.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

28.HET是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

29.HET选自：

30.HET选自：

31.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

32.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

33.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

34.Het是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

35.HET是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

36.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R³是H或甲基；q是选自0、1或2的整数；并且R²在每次出现时独立地选自：C_1-3烷基(例如甲基)。

37.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R³是H；q是选自0、1或2的整数；并且R²在每次出现时独立地选自：C_1-3烷基(例如甲基)。

38.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R³是H；并且q是0

39.R²在每次出现时独立地选自：＝O和C_1-4烷基。

40.R²在每次出现时独立地选自：C_1-3烷基。

41.q是选自0、1或2的整数。

42.q是0。

43.R³选自：H和C_1-3烷基。

44.R³选自：H和甲基。

45.R³是H。

46.L不存在或是-CH₂-。

47.L不存在。

48.L是-CH₂-。

49.L不存在，并且HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的。

50.L是-CH₂-，并且HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的。

51.L是-C(R^A)₂-(例如-CH₂-)，并且HET选自：

其中A是C_1-4亚烷基，并且*显示与L的附接点。

52.R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和Q¹-L²-，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R⁸取代；

Q¹选自：C_3-12环烷基、含有1或2个选自O、S和N的环杂原子的4至12元饱和或部分饱和杂环基，

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R⁹取代，

L²不存在或选自C_1-4亚烷基；

R⁸和R⁹在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6卤烷基、-L³-Q²、-OR¹⁶、-SO₂R¹⁶、-NR¹⁶R^B2、-C(O)R¹⁶、-OC(O)R¹⁶、-C(O)OR¹⁶、-NR^B2C(O)R¹⁶、-NR^B2C(O)OR¹⁶、-C(O)NR¹⁶R^B2、-NR^B2SO₂R¹⁶、-SO₂NR¹⁶R^B2和-NR^A2C(O)NR¹⁶R^B2，

其中所述C_1-6烷基和C_2-6烯基任选地被1个或多个R¹²取代，并且

Q²在每次出现时独立地选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基，

其中所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至7元杂环基和4至7元杂环基-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁴取代，并且

其中所述苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁵取代；

L³不存在或选自：-O-、-CH₂O-*、-NR^A4-、-CH₂NR^A4-*、-SO₂-、-CH₂SO₂-*、-C(＝O)-、-CH₂C(＝O)-*、-NR^A4C(＝O)-、-CH₂NR^A4C(＝O)-*、-C(＝O)NR^A4-、-CH₂C(＝O)NR^A4-*、-S(O)₂NR^A4-、-CH₂S(O)₂NR^A4-*、-NR^A4S(O)₂-、-CH₂NR^A4S(O)₂-*、-OC(＝O)-、-CH₂OC(＝O)-*、-C(＝O)O-和-CH₂-C(＝O)O-*，其中*显示与-Q²的附接点；

R¹²、R¹⁴和R¹⁸在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-L⁵-Q⁴、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-OC(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-NR^B5C(O)R^A5、-C(O)NR^A5R^B5、-NR^B5SO₂R^A5和-SO₂NR^A5R^B5；

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-L⁶-Q⁵、-OR^A7、-S(O)₂R^A7、-NR^A7R^B7、-C(O)R^A7、-OC(O)R^A7、-C(O)OR^A7、-NR^B7C(O)R^A7、-C(O)NR^A7R^B7、-NR^B7SO₂R^A7和-SO₂NR^A7R^B7，

其中Q⁴和Q⁵的所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基和4至6元杂环基-C_1-3烷基各自独立地任选地被1或2个选自以下的取代基取代：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、卤基和＝O，并且

其中Q⁴和Q⁵的所述苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基-各自独立地任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-CN、-OR^A9、-NR^A9R^B9和-SO₂R^A9；

L⁵和L⁶独立地不存在或独立地选自：-O-、-NR^A11-、-S(O)₂-、-C(＝O)-、-NR^A11C(＝O)-、-C(＝O)NR^A11-、-S(O)₂NR^A11-、-NR^A11S(O)₂-、-OC(＝O)-和-C(＝O)O-。

53.R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和Q¹-L²-，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R⁸取代；

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R⁹取代，

L²不存在或选自C_1-4亚烷基；

R⁸和R⁹在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、-CN、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、-L³-Q²、-OR^16A、-SO₂R¹⁶、-NR^16AR^B2、-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2、-SO₂NR^16AR^B2和-C(O)OR^16A，

其中所述C_1-6烷基任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)NR^A5R^B5和-C(O)OR^A5，

其中R¹⁶选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-OC(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-NR^B5C(O)R^A5、-C(O)NR^A5R^B5、-NR^B5SO₂R^A5和-SO₂NR^A5R^B5，

R^16A选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个或2个选自以下的取代基取代的C_1-6烷基：卤基、-CN、-S(O)₂R^A5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5和-SO₂NR^A5R^B5以及

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

其中所述4至7元杂环基具有1或2个选自O、S和N的杂原子，

L³不存在或选自：-O-、-NR^A4-、-SO₂-、-C(＝O)-、-NR^A4C(＝O)-、-C(＝O)NR^A4-、-S(O)₂NR^A4-和-NR^A4S(O)₂-；

R¹⁴在每次出现时独立地选自：

卤基、＝O、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5和-SO₂NR^A5R^B5；并且

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A7、-S(O)₂R^A7、-NR^A7R^B7、-C(O)R^A7、-C(O)OR^A7、-C(O)NR^A7R^B7和-SO₂NR^A7R^B7。

54.R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和Q¹-L²-，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R⁸取代；

Q¹选自：C_3-12环烷基、含有1或2个选自O、S和N的环杂原子的4至7元饱和或部分饱和杂环基，

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R⁹取代，

L²不存在或选自C_1-4亚烷基；

R⁸和R⁹在每次出现时独立地选自：

R^16A选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

Q²在每次出现时独立地选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、Q⁷、Q⁷-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基，

其中Q⁷选自：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基和吗啉基，

其中所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、Q⁷和Q⁷-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁴取代，并且

L³不存在或选自：-O-、-NR^A4-、-SO₂-、-C(＝O)-、-NR^A4C(＝O)-、-C(＝O)NR^A4-、-S(O)₂NR^A4-、-NR^A4S(O)₂-和-C(O)O-；

R¹⁴在每次出现时独立地选自：

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

55.R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_3-6环烷基和含有1或2个选自O、S和N的杂原子的4至7元饱和杂环基；

其中所述C_1-6烷基任选地被1或2个独立地选自以下的取代基取代：卤基和-OR^A5，

其中所述C_3-6环烷基和4至7元饱和杂环基任选地被1个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-L³-Q²、-C(O)R^A2和-C(O)NR^A2R^B2，

L³不存在或是-C(＝O)-，

其中所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基和4至6元杂环基-C_1-3烷基任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-C(O)R^A5和-C(O)NR^A5R^B5，

其中所述苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A7和-NR^A7R^B7。

56.R¹选自：C_1-6烷基、-C_1-4烷基-CN、-C_1-4烷基-OR^A2、C_1-6卤烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基；

其中所述4至6元杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基和吗啉基，

其中所述5或6元杂芳基选自：呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基，

其中所述C_3-6环烷基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：＝O、卤基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基，

其中所述杂环基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：＝O、卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-C(O)R^A5和-C(O)NR^A5R^B5，

其中所述苯基或杂芳基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5和-NR^A5R^B5。

57.R¹选自：C_1-4烷基和C_1-4卤烷基，其中所述C_1-4烷基任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A2和-NR^A2R^B2。

58.R¹是任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代的C_3-6环烷基：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和＝O。

59.R¹选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基通过环碳原子与基团-L¹-C(O)-键合，并且其中该氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基中的环氮原子任选地被选自以下的基团取代：

C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-C_2-4烷基-OR^A5、-C_2-4烷基-NR^A5R^B5、-C_1-4烷基-C(O)NR^A5R^B5、-C_1-4烷基-C(O)OR^A5、-S(O)₂R^B5、-C(O)R^16A、-C(O)NR^16AR^B2和R¹⁹¹；

并且所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基任选地在环碳上被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基；

R¹⁹¹选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶yl-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、吗啉基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-；

R^16A选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-(例如，R^16A可以不是H)；

其中R¹⁹¹和R^16A各自独立地任选地被一个或多个(例如1个或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5和-C(O)NR^A5R^B5。

60.L¹不存在，并且R¹选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基，其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基通过环氮原子与-C(O)-基团键合；并且其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基任选地在环碳上被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基。

61.R¹是4至7元杂环基，例如选自以下的饱和4至7元杂环基：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、＝O、-C(O)R^16A、-C(O)OR^16A、-C(O)NR^A2R^B2、-SO₂R^16A、-SO₂Q²²、-SO₂CH₂Q²²、-C(O)Q²²、-C(O)CH₂Q²²、-C(O)NR^A4Q²²、-C(O)NR^A4CH₂Q²²、-SO₂NR^A2R^B2、-SO₂NR^A4Q²²和-SO₂NR^A4CH₂Q²²；

R^16A选自：H、C_1-4烷基和被-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5取代的C_1-4烷基(例如R^16A可以不是H)，

Q²²选自：C_3-6环烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、苯基和5或6元杂芳基，

其中Q²²任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)NR^A5R^B5和-C(O)OR^A5。

62.R¹选自：苯基或含有环氮和任选地1或2个独立地选自：O、S和N的杂原子的5或6元杂芳基，并且其中R¹任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代：卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3和-SO₂R^A3。

63.R¹选自：苯基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、氧氮茂基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代：卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3和-SO₂R^A3。

64.R¹是具有下式的基团：

其中

R⁸¹⁰选自：卤基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-CN、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；

R⁸²⁰选自：卤基、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、Q¹⁰、Q¹¹和Q¹²；

R⁸³⁰选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基；

或R⁸²⁰和R⁸³⁰与它们所附接的碳原子一起形成C_3-6环烷基或4至12元杂环基，其中所述C_3-6环烷基或4至12元杂环基各自独立地任选地被一个或多个R⁹取代；

Q¹⁰选自：C_3-6环烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基，

Q¹¹选自：4至12元杂环基和4至12元杂环基-C_1-3烷基，

Q¹²选自：苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基、和5或6元杂芳基-C_1-3烷基；

其中Q¹⁰和Q¹¹各自独立地任选地被一个或多个R⁹取代，并且

其中Q¹²任选地被一个或多个R¹⁰取代。

65.R¹是具有下式的基团：

其中

R⁸²⁰和R⁸³⁰独立地选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基；

或R⁸²⁰和R⁸³⁰与它们所附接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：＝O、卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-SO₂R^A2、-C(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-C(O)NR^A2R^B2和-SO₂NR^A2R^B2。

66.R¹是具有下式的基团：

其中

R⁸¹⁰选自：卤基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-CN、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；并且

R⁸²⁰和R⁸³⁰独立地选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基。

67.R¹选自：

其中*显示与-L¹-C(O)-基团的附接点。

68.R¹选自：

其中

A是C_1-6亚烷基；

R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O、-OH、-OC_1-4烷基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基；

R⁸¹选自：H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_1-4卤烷基，和C_3-6环烷基-C_1-3烷基，

其中所述C_1-4烷基任选地被一个或多个(例如1个或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-NR^A5R^B5、-SO₂R^A5和C_3-6环烷基；

R⁹¹选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、-L³-Q²、-SO₂R¹⁶、-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2、-SO₂NR^16AR^B2和-C(O)OR^16A，

R¹⁶选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-OC(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-NR^B5C(O)R^A5、-C(O)NR^A5R^B5、-NR^B5SO₂R^A5和-SO₂NR^A5R^B5，

R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

Q²在每次出现时独立地选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基，

其中所述4至6元杂环基含有1或2个选自以下的杂原子：O、S和N，

其中所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基和4至6元杂环基-C_1-3烷基任选地被一个或多个R¹⁴取代，并且

L³不存在或选自：-SO₂-、-C(＝O)-、*-C(＝O)NR^A4-、*-S(O)₂NR^A4-、-NR^A4S(O)₂-和*-C(O)O-，其中*指示与R¹中的环氮的附接点；

R¹⁴在每次出现时独立地选自：卤基、＝O、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5和-SO₂NR^A5R^B5；并且

R¹⁵在每次出现时独立地选自：卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A7、-S(O)₂R^A7、-NR^A7R^B7、-C(O)R^A7、-C(O)OR^A7、-C(O)NR^A7R^B7和-SO₂NR^A7R^B7；并且

q1是选自以下的整数：0、1、2、3和4；

条件是，当L³不存在时，Q²通过Q²中的环碳原子与R¹中的环氮原子键合。

69.R¹选自：

其中R²¹、R⁸¹、R⁹¹和q1是如上文(68)中所定义的。

70.R¹是：

其中R²¹、R⁸¹、R⁹¹和q1是如上文(68)中所定义的。

71.R¹是如(68)至(70)中任一项所定义的，其中：

R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5

Q²选自：

Q⁶、Q⁶-C_1-3亚烷基-、Q⁷、Q⁷-C_1-3亚烷基-、Q⁸和Q⁸-C_1-3亚烷基-，

其中

Q⁶是C_3-6环烷基；

Q⁷选自：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基；

Q⁸选自：苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、氧氮茂基、噁二唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基；

其中所述Q⁶、Q⁶-C_1-3亚烷基-、Q⁷和Q⁷-C_1-3亚烷基-各自任选地被1至4个R¹⁴取代，并且Q⁸和Q⁸-C_1-3亚烷基-各自任选地被1至4个R¹⁵取代；

L³不存在或选自：-SO₂-、-C(＝O)-、*-C(＝O)NR^A4-、*-S(O)₂NR^A4-和*-C(O)O-，其中*指示与R¹中的环氮的附接点；

R¹⁵在每次出现时独立地选自：卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A7、-S(O)₂R^A7、-NR^A7R^B7、-C(O)R^A7、-C(O)OR^A7、-C(O)NR^A7R^B7和-SO₂NR^A7R^B7；

72.R¹是如(68)至(70)中任一项所定义的，其中：

R¹⁶选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-S(O)₂R^A5和-NR^A5R^B5，

R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_1-6烷基：-CN和-S(O)₂R^A5，并且

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5

Q²选自：

其中

Q⁶是C_3-6环烷基；

其中所述Q⁶、Q⁶-C_1-3亚烷基-各自任选地被1至4个R¹⁴¹取代，所述Q⁷和Q⁷-C_1-3亚烷基-各自任选地被1至4个R¹⁴²取代，并且所述Q⁸和Q⁸-C_1-3亚烷基-各自任选地被1至4个R¹⁵取代；

L³不存在或选自：-SO₂-、-C(＝O)-、*-C(＝O)NR^A4-和*-S(O)₂NR^A4-，其中*指示与R¹中的环氮的附接点；

R¹⁴¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基；

R¹⁴²在每次出现时独立地选自：卤基、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5和-SO₂NR^A5R^B5；

并且

73.R¹是如(68)至(72)中任一项所定义的，其中L³不存在或是-C(O)-。

74.R¹是如(68)至(73)中任一项所定义的，其中R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基。

75.R¹是如(68)至(74)中任一项所定义的，其中q1是0。

76.R¹是如(68)至(75)中任一项所定义的，其中R⁸¹选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基。

77.R¹是如(68)至(75)中任一项所定义的，其中R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基。

78.R¹是如(68)至(75)中任一项所定义的，其中R⁸¹是C_1-4烷基(例如甲基或乙基)。

79.R¹是如(68)至(75)中任一项所定义的，其中R⁸¹是H。

80.R¹是如(68)至(79)中任一项所定义的，其中R⁹¹是H或选自：

其中*指示R⁹¹基团与R¹中的环氮的附接点。

81.R¹是如(68)至(80)中任一项所定义的，其中R⁹¹不是H。

82.R¹是如(68)至(80)中任一项所定义的，其中R⁹¹是H。

83.L¹不存在，并且R¹选自：

其中R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基；

R⁹¹是如(71)、(72)、(80)、(81)或(82)中所定义的；并且

q1是选自0、1、2、3和4的整数。

84.R¹选自：

其中*显示与-L¹-C(O)-的附接点。

85.R¹选自：

其中*显示与-L¹-C(O)-的附接点

86.R¹是

87.L¹不存在。

88.L¹是-O-。

89.L¹是-N(R⁷)-。

90.L¹不存在，并且R¹是如(52)至(86)中任一项所定义的。

91.L¹是-O-，并且R¹是如上文(52)至(59)、(61)至(82)或(84)至(86)中任一项所定义的。

92.L¹是-N(R⁷)-，并且HET是如上文(52)至(58)、(61)至(82)或(84)至(86)中任一项所定义的。

93.R⁴选自：H和C_1-3烷基，并且R⁵是H。

94.R⁴是C_1-3烷基(例如R⁴是甲基)，并且R⁵是H。

95.R⁴和R⁵与它们所附接的碳一起形成C_3-6环烷基，例如环丙基或环丁基。

96.R⁴和R⁵都是C_1-4烷基。

97.R⁴和R⁵都是甲基。

98.R⁴和R⁵都是H。

99.X₁是N。

100.X₁是CR⁶

101.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：H、卤基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基。

102.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：卤基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基。

103.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：H、氟、甲基、乙基和CF₃。

104.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：F、甲基、乙基或CF₃。

105.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：卤基和C_1-4烷基。

106.X₁是CR⁶，并且R⁶选自：H和C_1-4烷基。

107.X₁是CR⁶，并且R⁶是H。

108.X₁是CR⁶，并且R⁶是C_1-4烷基。

109.X₁是CR⁶，并且R⁶是甲基。

110.X₁是CR⁶，并且R⁶是卤基。

111.X₁是CR⁶，并且R⁶是氟。

112.

是：

113.

是：

114.

是：

115.

是：

116.

是：

117.

是：

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

HET选自：

其中A是C_1-4亚烷基，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点；

R³是H或C_1-3烷基(优选地R³是H)；

R²是C_1-3烷基；

q是0、1或2(优选地q是0)；

L和L¹不存在；

R¹是如上文(52)至(86)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

HET选自：

R³是H或C_1-3烷基(优选地R³是H)；

R²是C_1-3烷基；

q是0、1或2(优选地q是0)；

L和L¹不存在；

R¹是如上文(52)至(86)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是如上文(54)所定义的；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是如上文(61)所定义的；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是如上文(68)所定义的；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是如上文(69)所定义的；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是如上文(84)所定义的；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹选自：

R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

Q²选自：

其中

Q⁶是C_3-6环烷基；

条件是，当L³不存在时，Q²通过Q²中的环碳原子与R¹中的环氮原子键合；

R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基；

R⁸¹选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；

q1是选自0、1和2的整数；

并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

适合地，在此实施例中，L³不存在或是-C(＝O)-。

适合地，在此实施例中，R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基。

适合地，在此实施例中，R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；并且L³不存在或是-C(＝O)-。

在此实施例中，R⁸¹可以不是H。

在此实施例中，R⁸¹可以是H。

在此实施例中，R⁹¹可以不是H。

在此实施例中，R⁹¹可以是H。

适合地，在此实施例中，R⁹¹选自：-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2；R¹⁶是C_1-4烷基；R^16A选自：H和C_1-4烷基；并且R^B2选自：H和C_1-4烷基。

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R¹是叔丁基；

L和L¹不存在；

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R⁴、R⁵、X₁、X₂和X₃是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，提供了具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物，其中基团：

是

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

a是选自0、1和2的整数；

b是选自1、2、3和4的整数；并且

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L¹、X₁、X₂、X₃和q是如针对式(I)所定义的。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

b是选自1、2、3和4的整数；并且

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L¹、X₁、X₂、X₃和q是如针对式(I)所定义的(包括上文(1)至(117)中的任何值)。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(Va)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X₁、X₂、X₃和q是如针对式(I)所定义的(包括上文(1)至(117)中的任何值)

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X₁、X₂、X₃和q是如针对式(I)所定义的，并且R⁸¹⁰、R⁸²⁰和R⁸³⁰是如针对式(VII)所定义的(包括上文(1)至(117)中的任何值)。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、X₁、X₂、X₃和q是如针对式(I)所定义的(包括上文(1)至(117)中的任何值)

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R¹选自：

R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5

Q²选自：

其中

Q⁶是C_3-6环烷基；

R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基；

R⁸¹选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；并且

q1是选自0、1和2的整数。

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，L³不存在或是-C(＝O)-。

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基(例如R⁸¹是甲基或乙基)。

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基；并且L³不存在或是-C(＝O)-。

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R⁹¹可以不是H。

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R⁹¹可以是H。

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R⁹¹可以选自：-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2；R¹⁶是C_1-4烷基；R^16A选自：H和C_1-4烷基；并且R^B2选自：H和C_1-4烷基

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_3-6环烷基和含有1或2个选自O、S和N的环杂原子的4至7元杂环基；

其中所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和4至7元杂环基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基-OH、-O(C_1-4烷基)、-C(＝O)(C_1-4烷基)、-C(＝O)NH(C_1-4烷基)、-C(＝O)N(C_1-4烷基)₂、Q²⁰、Q²⁰-C(＝O)-、Q²⁰NHC(＝O)-、Q²⁰N(C_1-4烷基)C(＝O)-，

Q²⁰选自C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-CH₂-、4-7元杂环基、4-7元杂环基-CH₂-、5或6元杂芳基、5或6元杂芳基-CH₂-、苯基和苄基，其中Q²⁰中的所述C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-CH₂-、4-7元杂环基、4-7元杂环基-CH₂-任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基；并且其中所述5或6元杂芳基、5或6元杂芳基-CH₂-、苯基和苄基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基。

适合地，在此实施例中，L¹不存在。适合地，在此实施例中，q是0。

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_3-6环烷基和杂环基，其中所述杂环基选自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和四氢吡喃基；

其中所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和杂环基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、-CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、-OH、-O(C_1-4烷基)、-C(＝O)(C_1-4烷基)、-C(＝O)NH(C_1-4烷基)、-C(＝O)N(C_1-4烷基)₂、Q²¹、Q²¹-C(＝O)-、Q²¹NHC(＝O)-、Q²¹N(C_1-4烷基)C(＝O)-，

Q²¹选自：杂环基、杂环基-CH₂-、5或6元杂芳基、5或6元杂芳基-CH₂-、苯基、苄基，其中由Q²¹表示的杂环基选自：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和四氢吡喃基；并且其中Q²¹任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基。

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，其中：

R¹是如上文(52)至(86)中任一项所定义的；

R²是C_1-3烷基或＝O；

R³是H；

X₁、X₂和X₃是CH；

R₄是H或C_1-3烷基，

R⁵是H；并且

q是选自以下的整数：0、1和2。

适合地，在这些实施例中，q是0。

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中：

R⁸¹⁰选自C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基，

或R⁸²⁰和R⁸³⁰与它们所附接的碳原子一起形成C_3-6环烷基或选自以下的4至7元杂环基：

氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、＝O、-C(O)R^16A、-C(O)OR^16A、-C(O)NR^A2R^B2、-SO₂R^16A、-SO₂Q²²、-SO₂CH₂Q²²、-C(O)Q²²、-C(O)CH₂Q²²、-C(O)NR^B2Q²²、-C(O)NR^B2CH₂Q²²、-SO₂NR^A2R^B2、-SO₂NR^B2Q²²和-SO₂NR^B2CH₂Q²²。

R^16A选自：C_1-4烷基和被-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-C(O)NR^A5R^B5取代的C_1-4烷基，

R⁸¹选自：C_1-6烷基和C_1-6卤烷基；并且

R⁸²和R⁸³各自独立地选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基。

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R⁸¹、R⁸²和R⁸³各自独立地选自：卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基。

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，基团-C(R⁸¹)(R⁸²)(R⁸³)是叔丁基。

在某些实施例中，在本文所述的具有式(VII)、(VIIa)、(VIII)或(VIIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，X₁、X₂和X₃可以是CH。

在某些实施例中，在本文所述的具有式(VII)、(VIIa)、(VIII)或(VIIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，可以是如下情况：

R²是C_1-3烷基或＝O；

R³是H；

X₁、X₂和X₃是CH；

R₄是H或C_1-3烷基；

R⁵是H；并且

q是选自以下的整数：0、1和2(例如q是0)。

在另一个实施例中，提供了选自列表1的化合物，或其药学上可接受的盐，或其前药：

列表1

以及

在另一个实施例中，提供了选自本文任一个实例的化合物，或其药学上可接受的盐，或其前药。

当在实例中描述的AM₂受体cAMP/激动剂-拮抗剂竞争测定中测试时，本发明的特定化合物是具有大于或等于7的pIC₅₀的那些。

药物组合物

根据另一方面，本发明提供了包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

用于选择和制备适合的药物组合物的常规程序在例如“Pharmaceuticals-TheScience of Dosage Form Designs[药物-剂型设计科学]”,M.E.Aulton,丘吉尔利文斯敦出版公司(Churchill Livingstone),1988中有所描述。

本发明的组合物可以为适于以下方式使用的形式：口服使用(例如作为片剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散性粉剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)，局部使用(例如作为霜剂、软膏剂、凝胶，或者水性或油性溶液剂或混悬剂)，通过吸入施用(例如作为细粉或液体气溶胶剂)，通过吹入施用(例如作为细粉)或肠胃外施用(例如作为用于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内给药的无菌水性或油性溶液剂，或者作为用于直肠给药的栓剂)。

本发明的组合物可以使用常规药物赋形剂，通过本领域众所周知的常规程序获得。因此，旨在口服使用的组合物可以包含例如一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。

用于病症的疗法中的本发明的化合物的有效量是足以在症状上缓解温血动物(特别是人)的病症症状或足以减缓病症进展的量。

与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量必定将取决于所治疗的宿主和特定施用途径而变化。例如，旨在向人类口服施用的配制品将通常含有例如与适当且便利的量的赋形剂(按总组合物的重量计可以从约5％变化至约98％)配混的0.1mg至0.5g(更适合地0.5mg至100mg，例如1mg至30mg)的活性剂。

本发明的化合物的用于治疗目的或预防目的的剂量的大小将根据病症的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径，根据众所周知的医学原理而自然地变化。

在使用本发明的化合物用于治疗目的或预防目的时，通常这样施用该化合物：使得如果需要分剂量，则接受在一定范围内的日剂量，例如选自0.1mg/kg体重至100mg/kg体重、1mg/kg体重至750mg/kg体重、1mg/kg体重至600mg/kg体重、1mg/kg体重至550mg/kg体重、1mg/kg体重至75mg/kg体重、1mg/kg体重至50mg/kg体重、1mg/kg体重至20mg/kg体重或5mg/kg体重至10mg/kg体重的日剂量。一般来讲，当采用肠胃外途径时，将施用较低的剂量。因此，例如，对于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内施用，通常将使用在例如0.1mg/kg至30mg/kg体重范围内的剂量。在某些实施例中，本发明的化合物是静脉内施用的，例如，日剂量为1mg/kg至750mg/kg、1mg/kg至600mg/kg、1mg/kg至550mg/kg或5mg/kg至550mg/kg，例如约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、180、200、225、250、275、300、350、400、450、500、540、550或575mg/kg。类似地，对于通过吸入施用，将使用例如0.05mg/kg体重至25mg/kg体重范围内的剂量。适合地，本发明的化合物口服施用，例如以片剂或胶囊剂型的形式。口服施用的日剂量可以是例如选自1mg至1000mg、5mg至1000mg、10mg至750mg或25mg至500mg的总日剂量。典型地，单位剂型将含有约0.5mg至0.5g的本发明化合物。在特定实施例中，本发明的化合物是通过胃肠外方式施用的，例如通过静脉内施用。在另一个特定实施例中，本发明的化合物是通过口服施用的。

治疗用途及应用

根据另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。

本发明的另一方面提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM₂)介导的疾病或医学病症。

还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在生产用于治疗由AM₂介导的疾病或医学病症的药物中的用途。

在本申请的以下部分中，提及用于治疗某些疾病或病症的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。应当理解，本文针对特定用途对化合物的任何提及也旨在提及(i)本发明的化合物或其药学上可接受的盐在生产用于治疗该疾病或病症的药物中的用途；以及(ii)治疗受试者中的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

AM₂介导的疾病或医学病症可以是本申请中列出的任何疾病或医学病症，例如增生性疾病，特别是癌症。

施用本发明的化合物的受试者可以是温血哺乳动物，例如人或动物。在特定实施例中，受试者或患者是人。在其他实施例中，受试者是动物，例如大鼠、小鼠、狗、猫、灵长类动物或马。

在本发明的背景下阐述了AM和AM₂受体与人和动物疾病的关联。本披露和相关的参考文献提供了本发明化合物的治疗用途的进一步支持。因此，关系AM、AM₂受体及其抑制的支持参考文献还形成本发明的化合物在治疗和预防本文所述的医学病症中的效用的披露内容的一部分。

AM₂的作用是在诸如癌症等疾病中具有不同作用。因此，AM₂的抑制可能是有利的。AM₂受体是由GPCR、降钙素样受体(CLR)和RAMP3形成的复合物。相关的AM₁受体由CLR和RAMP2形成，并介导多种重要的生理学功能，包括血压。因此，优选的是，本发明的化合物选择性地抑制AM₂，并且对AM₁的功能几乎没有影响。

RAMP1和RAMP3也与降钙素受体(CTR)相互作用以形成两种功能性糊精受体(AMY受体)。CTR和RAMP1形成AMY₁受体，而CTR和RAMP3形成AMY₃受体。糊精在血糖控制中具有重要作用，凭借其响应于血糖的变化与胰岛素的共同分泌以及其通过减缓胃排空、减缓消化酶和胆汁释放、和增加饱腹感以减少或抑制进一步的食物摄入来减缓血清葡萄糖的升高的特定功能。它还减少了胰高血糖素的分泌，从而减少了新葡萄糖的产生及其向血流中的释放。糊精还已知通过对成骨细胞的直接合成代谢效应刺激骨形成。糊精对糊精受体的作用实现了这些功能。其中，据信AMY₁R和AMY₃R负责这些稳态功能。AMY₂受体(由CTR和RAMP2形成)未知具有重要的生理学功能。阻断血糖控制不是理想的功能，并且在癌症患者中，食欲减少和未能维持正常血糖水平将被视为药物的不良影响。因此，本发明的优选化合物相比于AMY₁和/或AMY₃选择性地抑制AM₂。本发明的特定化合物预期提供适合于治疗用途的强效AM₂拮抗剂，而由于其在血压调节中的重要作用，因此对AM₁受体几乎没有拮抗作用。适合地，本发明的化合物对参与能量代谢的生理学调节的CTR/RAMP3 AMY₃受体几乎没有影响。

在实施例中，与AM₁、AMY₁和/或AMY₃中的一种或多种相比，本发明的化合物对AM₂有10倍、50倍或100倍的活性。在某些实施例中，与AM₁和/或AMY₃相比，本发明的化合物选择性地抑制AM₂。例如，在实例中描述的AM₂的基于细胞的测定中本发明的化合物的IC₅₀是使用表达AM₁、AMY₁或AMY₃受体的细胞系的一个或多个相应的测定中的IC₅₀的10分之一、50分之一或100分之一。

适合地，相比AM结合的其他受体，本发明的化合物选择性地抑制AM₂受体，例如展现出针对AM₂受体的选择性是AM结合的其他受体的5倍、10倍、50倍或100倍。

增生性疾病

本发明的另一方面提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗增生性疾病。增生性疾病可能是恶性的或非恶性的。

AM₂上调，并在原发性癌症和转移中起着关键作用。因此，在一个实施例中，提供了用于治疗癌症的本发明的化合物，该癌症可以是非转移性的或转移性的。适合地，癌症是实体瘤，但是本发明的化合物也可用于治疗血液(“液体”)癌症和与此类癌症相关的作用。有证据表明血液癌症表达AM，并且其在刺激血管生成中的作用在疾病进展中是重要的(Kocemba k等人The hypoxia target adrenomedullin is aberrantly expressed inmultiple myeloma and promotes angiogenesis,Leukemia[缺氧靶标肾上腺髓质素在多发性骨髓瘤中异常表达并在白血病中促进血管生成].2013；27:1729-1737:DOI 10.1038/leu.2013.76)。抑制肿瘤的微环境中的AM₂在预防或抑制与癌症如多发性骨髓瘤相关的血管生成和疾病进展上可能是有益的。

本发明的化合物可用于治疗和/或预防，例如：

癌，包括例如衍生自复层鳞状上皮的肿瘤(鳞状细胞癌)和在器官或腺体内产生的肿瘤(腺癌)。实例包括乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、食道癌(包括但不限于食道腺癌和鳞状细胞癌)、基底样乳腺癌、基底细胞癌(皮肤癌的一种形式)、鳞状细胞癌(各种组织)、头颈癌(包括但不限于鳞状细胞癌)、胃癌(包括但不限于胃腺癌、胃肠道间质瘤)、印戒细胞癌、膀胱癌(包括移行细胞癌(膀胱恶性肿瘤))、支气管癌、结直肠癌(包括但不限于结肠癌和直肠癌)、肛门癌、胃癌、肺癌(包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、肺腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、细支气管肺泡癌和间皮瘤)、神经内分泌肿瘤(包括但不限于胃肠道、乳腺和其他器官的类癌)、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、胰腺癌、乳腺癌(包括但不限于导管癌、小叶癌、炎性乳腺癌、透明细胞癌、粘液癌)、卵巢癌(包括但不限于卵巢上皮癌或表面上皮间质瘤，包括浆液性肿瘤、子宫内膜样肿瘤和粘液性囊腺癌、性索间质肿瘤)、肝胆管癌(包括但不限于肝细胞癌、胆管癌和血管瘤)、前列腺癌、腺癌、脑瘤(包括但不限于神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和髓母细胞瘤)、生殖细胞瘤、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、肾癌(包括但不限于肾细胞癌、透明细胞癌和威尔姆氏肿瘤(Wilm's tumor))、髓样癌、导管原位癌或胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、宫颈癌、子宫癌(包括但不限于子宫内膜腺癌、子宫乳头状浆液性癌、子宫透明细胞癌、子宫肉瘤和平滑肌肉瘤、苗勒型混合瘤(mixed mullerian tumor))、睾丸癌、成骨癌、上皮癌、肉瘤样癌、鼻咽癌、喉癌；口腔和口咽鳞状癌；

肉瘤，包括：骨肉瘤和骨源性肉瘤(骨)；软骨肉瘤(软骨)；平滑肌肉瘤(平滑肌)；横纹肌肉瘤(骨骼肌)；间皮肉瘤和间皮瘤(体腔的膜内衬)；纤维肉瘤(纤维组织)；血管肉瘤和血管内皮瘤(血管)；脂肪肉瘤(脂肪组织)；神经胶质瘤和星形细胞瘤(脑部发现的神经源性结缔组织)；粘液肉瘤(原始胚胎结缔组织)；脊索瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮细胞肉瘤、滑膜瘤、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、间叶性和混合性中胚层瘤(混合结缔组织类型)和其他软组织肉瘤；

神经系统实体瘤，包括髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质细胞瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤和神经鞘瘤；

黑素瘤、葡萄膜黑素瘤和视网膜母细胞瘤；

骨髓瘤和多发性骨髓瘤；

造血系统肿瘤，包括：骨髓性和粒细胞性白血病(髓样和颗粒性白血细胞系列的恶性肿瘤)；淋巴、淋巴细胞和淋巴母细胞性白血病(淋巴样和淋巴细胞血细胞系列的恶性肿瘤)；真性红细胞增多症和红细胞增多症(各种血细胞产物的恶性肿瘤，但以红细胞为主)；骨髓纤维化；以及

淋巴瘤，包括：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗实体瘤，例如上文列出的任何实体瘤。在特定实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌。

在另一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的激素依赖性前列腺癌。

在另一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的乳腺癌：管腔A型乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕酮受体阳性)、HER2阴性和低水平的蛋白质Ki-67)；管腔B型乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕酮受体阳性)和HER2阳性或HER2阴性伴随高水平的Ki-67)；三阴性乳腺癌(即，肿瘤是雌激素受体阴性、孕酮受体阴性和HER2阴性)；HER2阳性乳腺癌或正常样乳腺癌(Dai等人Am.J.CancerResearch[美国癌症研究期刊].2015；5(10):2929-2943的表1中所定义的分类)。

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、三阴性乳腺癌(即，肿瘤是雌激素受体阴性、孕酮受体阴性和HER2阴性)、激素难治性前列腺癌和非小细胞肺癌。

在实施例中，本发明的化合物提供了对癌症(例如本文披露的任何癌症)的抗癌作用，该抗癌作用选自以下中的一种或多种：抗增生作用、促凋亡作用、抗有丝分裂作用、抗血管生成作用、抑制细胞迁移、抑制或预防肿瘤侵袭和/或预防或抑制转移。

本发明的化合物可用于预防或抑制癌症的进展。本发明的化合物可用于减缓、延迟或停止癌症进展。典型地通过对癌症分期来确定癌症的进展。典型地通过向癌症分配从I到IV的数字来进行分期，I是孤立性癌症，且IV是疾病的晚期阶段，其中癌症已扩散到其他器官。分期通常考虑肿瘤的大小、是否已侵袭相邻器官、扩散到的淋巴结的数量以及癌症是否已经转移。预防或抑制癌症的进展对于预防癌症的扩散尤为重要，例如从I期到II期的进展，其中癌症局部扩散，或者从III期到IV期的进展，其中癌症转移到其他器官。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是原发性癌症，这可能是第二原发性癌症。

本发明的化合物可以用于预防或抑制第二原发性癌症的发生。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是对于化疗和/或放射疗法是难治的(有抗性)。该癌症可以从治疗开始就有抗性，或在治疗中变得有抗性。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是复发性癌症，其可以是局部、区域或远处复发性癌症。复发性癌症是初始治疗后和在无法检测到癌症的一段时间后恢复的癌症。相同的癌症可能在同一组织中或在身体的不同部分中恢复。

本发明的化合物可以用于预防或抑制癌症的复发。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中该癌症是转移性或继发性癌症。

本发明的化合物可以用于预防或抑制癌症转移。转移性癌症的治疗可以与以前用于治疗原发性肿瘤的疗法相同或不同。例如，在某些实施例中，可以手术切除原发性肿瘤，并且将本发明的化合物用于预防癌细胞的扩散，这些癌细胞可能在手术后保留或者可能已经逃逸出了该原发性肿瘤。在其他实施例中，可以使用放射疗法治疗原发性肿瘤。在又其他实施例中，可以通过化疗治疗原发性肿瘤。组合疗法通常用于治疗癌症以改善治疗，并且典型地最大化缓解的长度和深度。本文披露的任何组合疗法可以与本发明的化合物一起使用。

当原发性肿瘤已经转移并且已经建立了继发性肿瘤时，可以使用本发明的化合物治疗继发性肿瘤。这可能涉及治疗继发性肿瘤和预防继发性肿瘤转移。本文提及转移旨在包括本文披露的任何肿瘤的转移。通常，继发性肿瘤将处于与原发性肿瘤不同的组织中。例如，继发性肿瘤可以是骨中的继发性肿瘤。在特定实施例中，本发明的化合物用于治疗骨中的继发性肿瘤，例如用于治疗继发性骨肿瘤，其中原发性肿瘤是乳腺或前列腺肿瘤。

胰腺肿瘤

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗胰腺肿瘤，尤其恶性胰腺肿瘤。术语“胰腺肿瘤”包括可能是良性或恶性的外分泌和内分泌肿瘤。外分泌肿瘤是最普遍的胰腺癌形式，占病例的约95％。外分泌癌症包括，例如导管腺癌(PDAC)、腺泡细胞癌、乳头状肿瘤(例如导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN))、黏液性肿瘤(例如粘液性囊腺癌)、实体瘤和浆液性肿瘤。胰腺内分泌肿瘤是罕见的，并且由于胰腺内的胰岛细胞异常而发生。胰腺内分泌肿瘤的实例包括胃泌素瘤(卓-艾综合征)、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、生长抑素瘤、血管活性肠肽瘤(VIPoma，弗-莫综合征)、非功能性胰岛细胞肿瘤和多发性内分泌瘤1型(MEN1，也称为韦尔默综合征)。在特定实施例中，该化合物用于治疗胰腺癌，特别是选自以下的胰腺癌：胰腺导管腺癌、胰腺腺癌、腺泡细胞癌、导管内乳头状黏液性肿瘤伴随侵袭性癌、黏液性囊性肿瘤伴随侵袭性癌、胰岛细胞癌和神经内分泌肿瘤。在另一个特定实施例中，胰腺癌是胰腺腺癌。

本发明的化合物可以用于治疗其中肿瘤可切除的患者的胰腺癌。在该实施例中，将本发明的化合物作为肿瘤手术切除后的辅助疗法施用于患者。

在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗早期胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是晚期的胰腺癌(late stage pancreatic cancer)。在一些实施例中，该胰腺癌是晚期胰腺癌(advanced pancreatic cancer)。在一些实施例中，该胰腺癌是局部晚期胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是复发性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是非转移性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是转移性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是原发性胰腺癌。在一些实施例中，该原发性胰腺肿瘤已转移。在一些实施例中，该胰腺癌已在缓解后复发。在一些实施例中，该胰腺癌是进展性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是缓解期胰腺癌。

在一些实施例中，胰腺癌的治疗是辅助治疗。辅助治疗可以是如下治疗，其中患者曾具有胰腺癌史，并且通常(但不一定)对包括但不限于手术切除、放射疗法和/或化学疗法的疗法有反应；然而，由于他们的癌症史，患者被认为具有疾病发展的风险。在辅助设定的治疗或施药是指后续的治疗方式。

在一些实施例中，胰腺癌的治疗可能是新辅助治疗。“新辅助”意指本发明的化合物在针对胰腺癌的主要/确定性疗法之前用于治疗患者。在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中患者以前未针对胰腺癌进行过治疗。

在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，该患者先前已针对胰腺癌进行过治疗或者同时正在进行治疗。既往或同时治疗可包括化疗剂，例如选自以下的治疗：吉西他滨、吉西他滨与白蛋白结合型紫杉醇(AbraxaneTM)；5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、组合治疗亚叶酸钙(FOLFIRINOX)(亚叶酸(leucovorin)、5-FU、伊立替康和奥沙利铂)、奥沙利铂和5-FU(也称为FOLFOX)组合以及吉西他滨和卡培他滨组合。在一些实施例中，既往治疗包括吉西他滨和/或厄洛替尼。在一些实施例中，既往治疗包括5-FU。

在一些实施例中，本发明的化合物用于患有胰腺癌的患者的二线或三线治疗中。例如，其中患者曾用已失败或基本失败的第一和/或第二疗法进行过既往治疗。

本发明的化合物可以用于治疗胰腺癌，胰腺癌对于常规化疗是难治的，例如用于治疗对于吉西他滨和/或5FU而言难治的胰腺癌。

在一些实施例中，在治疗胰腺癌中，本发明的化合物与另一种抗癌剂组合使用。可以使用本文披露的任何组合治疗。

在实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中该患者已发展非典型2型糖尿病。

塞加里(Sézary)综合征

塞加里综合征是罕见的皮肤T细胞淋巴瘤。它是侵犯性癌症，其特征是皮肤病损，包括泛发性瘙痒红皮病和血液、皮肤和/或淋巴结中的癌症T细胞(塞加里细胞)的存在。患有塞加里综合征的受试者还有淋巴结肿大(淋巴结病)。患有塞加里综合征的患者的预后差，5年生存率为30％至40％(Agar等人J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学期刊],2010；28:4730e9)。

目前对塞加里综合征的治疗是有限的，包括常规化疗剂(例如抗代谢物，如吉西他滨、甲氨蝶呤(methotrexate)或喷司他丁(pentostatine)；拓扑异构酶抑制剂，如多柔比星及其脂质体形式，如多喜(doxil)；血管生成抑制剂如来那度胺(lenalidomide)；和烷基化剂，如环磷酰胺)；视黄醇(例如蓓萨罗丁(bexarotene))；HDAC抑制剂(例如罗米地辛(romidepsin)或伏立诺他(vorinostat))；免疫疗法，包括抗CD52抗体(例如阿仑单抗(alemtuzumab))；抗体-药物缀合物(例如本妥昔单抗(brentuximab vedotin))；干扰素-α或白介素-2疗法(例如地尼白介素-白喉毒素连接物(denileukin difitox))；光疗或放射疗法。仍然需要针对塞加里综合征的新治疗。

Prasad等人(Journal of Investigative Dermatology[研究皮肤病学杂志],2016,136,1490-1499)鉴定了某些体细胞点突变和体细胞拷贝数变异，包括RAMP3的复制。如本文所讨论的，RAMP3也是AM2受体的组分。如本发明的实例中所示，诸位发明人已经鉴定出AM2受体抑制剂化合物有效于降低塞加里细胞的活力。因此，本发明的化合物作为对塞加里综合征的治疗可以是有效的。

因此，还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防塞加里综合征。还提供了治疗或预防受试者中的塞加里综合征的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

在某些实施例中，本发明的化合物用作治疗塞加里综合征的单一疗法。在某些其他实施例中，本发明的化合物与另一种治疗剂组合使用，例如本文所述的一种或多种抗癌剂和/或放射疗法。在特定实施例中，本发明的化合物与一种或多种针对塞加里综合征的现有治疗组合使用，包括上述塞加里综合征治疗中的一种或多种。

良性增生性疾病

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗良性增生性疾病。良性疾病可以是良性肿瘤，例如血管瘤、肝细胞腺瘤、海绵状血管瘤、局灶性结节性增生、听神经瘤、神经纤维瘤、胆管腺瘤、胆管囊肿、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、结节性再生性增生、颗粒性结膜炎、化脓性肉芽肿、胎块、子宫纤维瘤、甲状腺腺瘤、肾上腺皮质腺瘤或垂体腺瘤

患者选择和生物标志物

许多癌症中的血清AM上调，例如人胰腺癌。与正常组织和胰腺炎相比，来自胰腺癌患者的组织切片中的AM也上调。另外，AM₂受体或其组分(即CLR和/或RAMP3)在大多数胰腺肿瘤中表达(Keleg等人，2007)。胰腺癌患者的含有AM的分泌外来体的数量增加。证据表明，这些含有AM的外来体导致副肿瘤性β细胞功能障碍，其与胰腺癌发展经常有关(Javeed等人，2015)。因此，预期本发明的化合物有益于治疗癌症，例如胰腺癌，其中与参考样品相比，生物学样品中的AM上调。生物学样品可以是例如血清样品或组织样品，例如肿瘤活组织检查。

预期本发明的化合物有益于治疗癌症，例如胰腺癌，其中与参考样品相比，生物学样品中的AM₂上调。预期本发明的化合物有益于治疗癌症，例如胰腺癌，其中生物学样品中的AM₂的组分，即CLR和/或RAMP3，与参考样品相比上调，无论是独立的还是一致的。生物学样品可以是例如血清样品或组织样品，例如肿瘤活组织检查。另外，在RAMP3的情况下，肿瘤周围的健康组织中的表达升高(Brekhman,V等人,The FASEB Journal.[FASEB期刊]2011；25(1):55-65)，组织样品可能来自肿瘤组织周围紧邻的健康组织。除了相对于参考样品RAMP3表达的升高之外，该组织可能不展示其他癌性或癌前病症迹象。

由于AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的表达与对照相比时的升高可指示癌症，特别是早期胰腺癌，基于其基因表达谱，患者可以细分为不同的临床有用的组。特别地，这些生物标志物中的一种或多种的表达升高是对本发明的化合物的治疗反应性的预测。关于确定将对用本发明的化合物进行的治疗产生良好反应的患者的能力使得能够以有效的方式向每个患者施用适当的治疗，而无需冗长的试验以及不必要的、不适当或不合时宜的治疗的误差和与之相关的副作用。

因此，本发明提供了预测或确定对用本发明的化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，该方法包括以下步骤：

(a)分析从受试者获得的生物学样品以确定一种或多种生物标志物的表达水平，其中这些生物标志物选自AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3；以及

(b)将在(a)中测定的这些生物标志物的表达水平与一个或多个参考值进行比较，其中与该一个或多个参考值相比，来自该受试者的一个或多个样品中的一种或多种生物标志物的表达水平的增加指示对用本发明化合物进行的治疗的治疗反应性和/或指示癌症的存在，例如早期胰腺癌。

将理解，可以选择指示癌症(例如早期胰腺癌)的任何生物标志物，即AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3，用于分析，无论独立地还是组合地，以确定对本发明的化合物的治疗反应性。

通常，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM的表达水平，并与一个或多个参考值进行比较。优选地，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM和/或AM₂的表达水平，并与一个或多个参考值进行比较。优选地，将分析血清样品中AM的表达水平，并与一个或多个参考值进行比较。

同样地，将分析样品(例如肿瘤样品或循环肿瘤细胞)中AM₂受体组分CLR或RAMP3的表达水平，并与一个或多个参考值进行比较。另外，可以分析循环肿瘤细胞游离肿瘤DNA，以便确定编码AM、AM₂、CLR或RAMP3的循环肿瘤细胞游离肿瘤DNA的存在，这可能揭示或提供该一种或多种生物标志物的潜在表达的提前指示。

来自受试者的一个或多个样品中的一种或多种生物标志物的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，来自受试者的血清样品中AM的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，来自受试者的血清样品中AM₂的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。更优选地，来自受试者的血清样品或肿瘤样品中AM和AM₂的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。

生物标志物

自始至终，据说来自受试者的一个或多个生物学样品中的生物标志物差异表达并指示例如早期胰腺癌，其中与一个或多个参考值相比，它们的表达水平显著上调。取决于各生物标志物，早期胰腺癌可以在生物学样品中通过表达水平的增加来诊断，关于样本均值和样本方差进行缩放，相对于一个或多个对照样品或一个或多个参考值的情况。显然，各种生物标志物的敏感性、受试者和样品的变化意指每种生物标志物附属着不同置信水平。当关于样品均值和样品方差缩放生物标志物表达水平后，可以说，本发明的生物标志物显著上调(或升高)，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，它们展现出2倍变化。优选地，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，所述生物标志物将展现出3倍或更多的变化。更优选地，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，本发明的生物标志物将展现出4倍或更多的变化。也就是说，在表达水平增加(相对于参考值上调)的情况下，生物标志物水平将是参考值或在一个或多个对照样品中观察到的情况的两倍。优选地，生物标志物水平将是一个或多个参考值的水平或一个或多个对照样品中的水平的3倍。更优选地，生物标志物水平将是一个或多个参考值的水平或一个或多个对照样品中的水平的4倍。

生物标志物参考序列

AM

如本文所用，“AM”表示“肾上腺髓质素”。可从GenBank数据库获得全长人AM mRNA转录物的参考序列，登录号NM_001124，版本NM_001124.2。

AM₂

如本文所用，“AM₂”表示“肾上腺髓质素受体亚型2”。可从GenBank数据库获得全长人AM₂ mRNA转录物的参考序列，登录号NM_001253845，版本NM_001253845.1。

CLR

如本文所用，“CLR”表示“降钙素样受体”。可从NCBI-GenBank数据库获得全长人CLR mRNA转录物变体1的参考序列，登录号NM_005795，版本NM_005795.5。可从GenBank数据库获得全长人CLR mRNA转录物变体2的参考序列，登录号NM_214095，版本NM_214095.1。

RAMP3

如本文所用，“RAMP3”表示“受体活性改性蛋白3”。可从NCBI-GenBank数据库获得全长人RAMP3 mRNA转录物的参考序列，登录号NM_005856，版本NM_005856.2。

本文披露的生物标志物的参考序列的所有登录号和版本号获得自NCBI-GenBank数据库(平面文件发布218.0)，可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/获得。

参考值

自始至终，术语“参考值”可以指预定的参考值，例如指定用于诊断或预测受试者对早期胰腺癌的易感性的置信区间或阈值。优选地，“参考值”可以指预定的参考值，指定用于预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性的置信区间或阈值。可替代地，可以从‘对照’生物学样品中相应的一种或多种生物标志物的表达水平来推导参考值，例如阳性(例如癌性或已知癌前)或阴性(例如健康)对照。此外，参考值可以是‘内部’标准或内部标准范围，例如蛋白质、转录物、标记或化合物的已知浓度。可替代地，参考值可以是用于校准表达值或者验证样品或测量技术的质量的内部技术控制。这可能涉及对样品内的已知组成型表达或以已知水平表达的一种或多种转录物的测量。因此，对本领域技术人员来说单独或组合应用这些已知技术是惯例，以便相对于标准品或其他转录物或蛋白质定量样品中的生物标志物的水平，或以便验证生物学样品、测定或统计分析的质量。

生物学样品

典型地，本发明的生物学样品将选自血清样品、组织样品或肿瘤组织样品。通常，本发明的生物学样品将是血清样品。在患有早期胰腺癌的受试者的血清中可能可检测到AM和/或AM₂表达水平的升高。在患有癌症(例如早期胰腺癌)的受试者的肿瘤样品的细胞中可能可检测到AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达水平的升高。这些细胞可以是，例如衍生自肿瘤的活组织检查或可以是循环肿瘤细胞。类似地，可以使用循环肿瘤细胞游离肿瘤DNA用于分析编码该一种或多种生物标志物中任一种的DNA的存在，特别是编码AM₂受体组分CLR和/或RAMP3的DNA的存在，这可能指示或预示该一种或多种生物标志物的潜在表达。在RAMP3表达的情况下，在从患有早期胰腺癌的受试者的肿瘤组织周围区域取出的组织样品中可能可检测到升高的RAMP3水平，其指示癌症，例如早期胰腺癌。另外，这种组织可以是无症状的。

适合地，本发明的方法可以利用从受试者中取出的一系列生物学样品以确定选自AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3的生物标志物的表达水平。

血清和/或组织和/或肿瘤组织样品中AM和/或AM₂表达水平与一个或多个参考值或参考血清和/或组织和/或肿瘤组织样品相比时的升高指示早期胰腺癌。肿瘤组织样品中CLR和/或RAMP3表达水平与一个或多个参考值或参考肿瘤组织样品相比时的升高指示早期胰腺癌。适合地，生物学样品中的AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达水平与一个或多个参考值或参考生物学样品相比时的升高可以在转录物(mRNA)和/或蛋白质水平上辨别。最便利地，生物学样品中的AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达水平与一个或多个参考值或对照生物学样品相比时的升高在转录物(mRNA)水平上可检测到。

适合地，生物标志物选自由以下组成的组：生物标志物蛋白；和编码该生物标志物蛋白的核酸分子。优选的是，该生物标志物是核酸分子，特别优选的是，它是mRNA分子。

优选的是，使用特异性结合配偶体研究生物学样品中的生物标志物的水平。适合地，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。用于任何给定生物标志物的结合配偶体的适合类别对于技术人员将是显而易见的。

适合地，可以通过直接评估靶分子和结合配偶体之间的结合来检测生物学样品中的生物标志物的水平。

便利地，使用附接于结合配偶体的报告部分检测生物学样品中的生物标志物的水平。优选地，报告部分选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。

结合配偶体

可以使用与生物标志物或其片段特异性结合或杂交的结合配偶体来研究生物学样品中的生物标志物的表达水平。关于本发明，术语‘结合配偶体’可包括能够与相关的生物标志物和/或其核苷酸或肽变体以高亲和力特异性结合的任何配体。所述配体包括但不限于核酸(DNA或RNA)、蛋白质、肽、抗体、抗体-缀合物、合成亲和力探针、碳水化合物、脂质、人造分子或小有机分子如药物。在某些实施例中，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。在检测mRNA的情况下，核酸代表高度适合的结合配偶体。

在本发明的上下文中，应将与生物标志物特异性结合的结合配偶体视为需要该结合配偶体应能够与至少一种这样的生物标志物以与非生物标志物的分子非特异性结合的方式可区分的方式结合。适合的区分可以例如基于此类结合的幅度上的可区别差异。

在本发明的方法的优选实施例中，生物标志物是核酸，优选mRNA分子，并且结合配偶体选自包括以下的组：互补核酸或适体。

适合地，结合配偶体可以是核酸分子(典型地是DNA，但可以是RNA)，其具有与其靶向的相关mRNA或cDNA的序列互补的序列。这种核酸通常称为‘探针’(或报告分子或寡聚物)，其结合的互补序列通常被称为‘靶标’。通常通过检测荧光团标记的、银标记的或化学发光标记的靶标来检测和定量探针-靶杂交，以确定靶标中核酸序列的相对丰度。

探针的长度可以是25至1000个核苷酸。然而，30至100个核苷酸的长度是优选的，并且长度为约50个核苷酸的探针通常成功地用在完整转录组分析中。

虽然可能难以确定适合的探针(例如在非常复杂的阵列中)，但有许多可用的完整转录组阵列的商业来源，并且使用公开可用的序列信息来开发定制阵列以检测任何给定的特定mRNA组是惯例。用于转录组分析的微阵列的商业来源包括Illumina和Affymetrix。

将理解，按惯例可以针对AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)或其变体的任何序列区域设计有效的核苷酸探针序列，以便特异性检测和测量其表达。本领域技术人员将理解，除其他之外，根据用于测量转录物丰度的平台、探针结合的序列区域和使用的杂交条件，所选择的特定引物的有效性将变化。

可替代地，生物标志物可以是蛋白质，并且适合地，结合配偶体可以选自包括以下的组：抗体、抗体-缀合物、抗体片段或适体。这种结合配偶体将能够特异性地结合AM、AM₂、CLR或RAMP3蛋白，以便检测和测量其表达。

编码上述的本发明的生物标志物的任何特异性结合配偶体的多核苷酸可以是分离的和/或纯化的核酸分子，并且可以是RNA或DNA分子。

自始至终，如本文所用，术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或者正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并涵盖天然存在的核苷酸的类似物，其以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交。这种多核苷酸可以衍生自智人，或者可以是合成的，或者可以衍生自任何其他生物。

通常，用作本发明中的结合配偶体的多肽序列和多核苷酸可以是分离的或纯化的。“纯化”意指它们基本上不含其他细胞组分或材料或培养基。“分离”意指它们也可以在天然序列侧翼不含天然存在的序列，例如在核酸分子的情况下，分离可能意指它不含5'和3'调节序列。

在本发明的方法的优选实施例中，核酸是mRNA。本领域已知许多适合的用于定量测量给定生物学样品中的mRNA转录物水平的技术。这些技术包括但不局限于：“Northern”RNA印迹、实时聚合酶链式反应(RTPCR)、定量聚合酶链式反应(qPCR)、数字PCR(dPCR)、多重PCR、逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)或者高通量分析如杂交微阵列、下一代测序(NGS)或直接mRNA定量(例如通过“纳米孔”测序)。可替代地，可以使用“基于标签”技术，其包括但不限于基因表达的系列分析(SAGE)。通常，可通过珠阵列微阵列技术或通过RNA-Seq，通过与杂交微阵列或“芯片”上的特异性互补核苷酸探针杂交来确定给定生物学样品中的生物标志物mRNA转录物的水平，其中序列数据与参考基因组或参考序列匹配。

在核酸是mRNA的优选实施例中，本发明提供了一种预测或确定对本发明的化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，其中一种或多种生物标志物转录物的水平通过PCR测定。各种适合的基于PCR扩增的技术是本领域众所周知的。PCR应用是本领域的惯例，并且技术人员将能够选择适当的聚合酶、缓冲剂、报告部分和反应条件。优选地，mRNA转录物丰度将通过qPCR、dPCR或多重PCR测定。按惯例可以通过本领域众所周知的方法，针对AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)或其变体的生物标志物转录物的任何序列区域设计核苷酸引物序列。因此，本领域技术人员将理解，可以针对选自AM、AM₂、CLR或RAMP3的生物标志物的转录物或cDNA的不同区域来设计有效引物，并且除其他之外，根据所选择的区域、用于测量转录物丰度的平台、生物学样品和使用的杂交条件，所选择的特定引物的有效性将变化。因此，将理解，提供它们允许特异性扩增相关的cDNA，原则上可以根据本发明使用靶向转录物的任何区域的引物。然而，本领域技术人员将认识到，在设计适当的引物序列以检测生物标志物表达时，需要引物序列能够选择性地并且特异性地结合与AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)或其片段或变体相应的生物标志物的cDNA序列。适合的结合配偶体优选适配于特异性结合生物标志物的cDNA转录物的核酸引物，如上文所讨论的。取决于所涉及的样品，优选地，将提供特异性靶向AM、AM₂、CLR或RAMP3的引物。

本领域已知的许多不同技术适合于检测靶序列的结合以及蛋白质相互作用的高通量筛选和分析。根据本发明，适当的技术包括(独立地或组合地)但不限于；共免疫沉淀、双分子荧光互补(BiFC)、双表达重组酶(DERB)单载体系统、亲和电泳、下拉测定、标记转移、酵母双杂交筛、噬菌体展示、体内交联、串联亲和纯化(TAP)、ChIP测定、化学交联随后高质量MALDI质谱、strep-蛋白相互作用实验(SPINE)、定量免疫沉淀组合敲低(QUICK)、邻位连接测定(PLA)、生物层干涉法、双偏振干涉法(DPI)、静态光散射(SLS)、动态光散射(DLS)、表面等离子体共振(SPR)、荧光相关光谱、荧光共振能量转移(FRET)、等温滴定量热法(ITC)、微尺寸热泳(MST)、染色质免疫沉淀测定、电泳迁移率变动测定、下拉测定、微孔板捕获和检测测定、报告分子测定、RNA酶保护测定、FISH/ISH共定位、微阵列、微球阵列或基于硅纳米线(SiNW)的检测。如果要定量生物标志物蛋白水平，则优选使用附接荧光报告分子的抗体分析结合配偶体和生物标志物蛋白之间的相互作用。

在本发明的某些实施例中，可以通过直接评估生物标志物与其结合配偶体的结合来检测特定生物标志物的表达水平。根据本发明的该实施例的这种方法的适合实例可以利用诸如电阻抗光谱(EIS)等的技术，以直接评估结合配偶体(例如抗体)与靶生物标志物(例如生物标志物蛋白)的结合。

在本发明的某些实施例中，该结合配偶体可以是抗体、抗体缀合物或抗体片段，并且靶分子的检测利用免疫学方法。在方法或装置的某些实施例中，免疫学方法可以是酶联免疫吸附测定(ELISA)或利用横流装置。

本发明的方法可以进一步包括定量指示来自受试者的生物学样品中存在的生物标志物的表达的靶分子的量。本发明的其中已经定量存在的靶分子的量并且已知患者样品的体积的适合方法可以进一步包括确定该患者样品中存在的靶分子的浓度，其可用作对受试者的病症进行定性评估的基础，这反过来又可用于表明受试者的适当疗程，例如用一种或多种本发明化合物进行治疗。

报告部分

在本发明的某些实施例中，可以确定生物学样品中蛋白质的表达水平。在一些情况下，可以直接(例如，用GFP)或通过目的蛋白质的酶促作用(POI)产生可检测的光学信号来确定表达。然而，在一些情况下，可以选择确定物理表达，例如，通过抗体探测，并依靠单独的测试来验证物理表达是否伴随着所需的功能。

在本发明的某些实施例中，将可通过高通量筛选方法在生物学样品中检测特定生物标志物的表达水平，例如，依赖于光信号的检测，例如使用报告部分。为此目的，特异性结合配偶体可能需要掺入标签，或用可移除标签来标记，该标签允许检测表达。这种标签可以是，例如荧光报告分子。这种标签可以为生物标志物表达的可视化提供适合的标志物，因为它的表达可以简单地通过体外或阵列上的荧光测量直接测定。可替代地，它可以是可用于产生光信号的酶。用于检测表达的标签也可以是抗原肽标签。类似地，报告部分可以选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。其他类的标签可用于标记包括可以是小分子的有机染料分子、放射性标记和自旋标记的核酸结合配偶体。

便利地，可以通过在高严格或非常高严格条件下测量互补核苷酸探针与目的生物标志物的特异性杂交来定量一种或几种生物标志物的水平。

便利地，可通过检测荧光团标记的、银标记的或化学发光标记的探针来检测和定量探针-生物标志物杂交，以确定样品中生物标志物核酸序列的相对丰度。可替代地，可以通过RNA测序或纳米孔测序技术直接测定生物标志物mRNA转录物丰度的水平。

本发明的方法可以利用选自由以下组成的组的分子：生物标志物蛋白；和编码该生物标志物蛋白的核酸。

核苷酸和杂交条件

自始至终，如本文所用，术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或者正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并涵盖天然存在的核苷酸的类似物，其以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交。

本领域技术人员将针对与AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)或其片段或变体相应的生物标志物转录物或cDNA序列的任何序列区域设计核苷酸探针序列视为惯例。对于通过基于PCR的技术确定表达水平检测所使用的核苷酸引物也是这种情况。

当然，本领域技术人员将认识到，在设计适当的探针序列以检测生物标志物表达时，需要探针序列能够选择性地并且特异性地结合与AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)或其片段或变体相应的生物标志物的转录物或cDNA序列。因此，探针序列将与该核苷酸序列杂交，优选在严格条件下，更优选地在非常高严格条件下。术语“严格条件”可以理解为描述杂交和洗涤的一组条件，并且本领域技术人员将熟悉各种严格杂交条件。当两个互补核酸分子彼此经历一个量的被称为沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对的氢键合时，发生核酸分子的杂交。杂交的严格性可以根据核酸周围的环境(即化学/物理/生物学)条件、温度、杂交方法的性质、以及所用核酸分子的组成和长度而变化。关于达到特定严格程度所需的杂交条件的计算是在如下中讨论的：Sambrook等人(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆实验指南],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],冷泉港,纽约)；和Tijssen(1993,Laboratory Techniques inBiochemistry and Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Acid ProbesPart I,Chapter 2[生物化学和分子生物学实验室技术-使用核酸探针的杂交，第2章第I部分],爱思唯尔,纽约)。Tm是核酸分子的50％的给定链与其互补链杂交的温度。

在本文中针对杂交条件的任何参考文献中，以下是示例性而非限制性的：

非常高严格(允许共享至少90％同一性的序列杂交)

杂交：5x SSC，在65℃下，持续16小时

洗涤两次：2x SSC，在室温(RT)下，每次持续15分钟

洗涤两次：0.5x SSC，在65℃下，每次持续20分钟

高严格(允许共享至少80％同一性的序列杂交)

杂交：5x-6x SSC，在65℃-70℃下，持续16-20小时

洗涤两次：2x SSC，在RT下，每次持续5-20分钟

洗涤两次：1x SSC，在55℃-70℃下，每次持续30分钟

低严格(允许共享至少50％同一性的序列杂交)

杂交：6x SSC，在RT至55℃，持续16-20小时

洗涤至少两次：2x-3x SSC，在RT至55℃，每次持续20-30分钟。

在另一方面，本发明涉及治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的AM₂抑制剂，例如本发明的化合物，其中所述受试者患有与AM和/或CLR和/或RAMP3表达相关的癌症。不希望受理论束缚，肿瘤的AM表达可以与健康组织中的AM₂受体相互作用，导致例如转移和/或血管生成和癌症进展。因此，AM和/或CLR和/或RAMP3可以在肿瘤或健康组织中表达，例如在肿瘤周围的健康组织中。

任选地，该方法可以包括在所述受试者的生物学样品中确定AM和/或CLR和/或RAMP3的水平，并在确定AM和/或CLR和/或RAMP3在生物学样品中表达或以相对于一个或多个参考值增加的水平表达时向所述受试者施用本发明的化合物。

在另一方面，本发明涉及鉴定对AM₂抑制剂(例如本发明的化合物)的反应性或敏感性的可能性增加的受试者的方法，该方法包括确定该受试者的生物学样品中AM、CLR和RAMP3中的一种或多种的水平；

其中与一个或多个参考值相比，AM、CLR和/或RAMP3水平增加，表明受试者对AM₂抑制剂的反应性或敏感性可能性增加。

组合疗法

本发明的化合物可以单独使用以提供治疗作用。本发明的化合物也可以与一种或多种额外的抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

此类化学疗法可以包括以下类别的抗癌剂中的一种或多种：

(i)抗增生药/抗肿瘤药及其组合，如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺、氮芥、尿嘧啶芥、苯达莫司汀(bendamustin)、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、盐酸氮芥(chlormethine)、白消安(busulphan)、替莫唑胺(temozolamide)、亚硝基脲、异环磷酰胺(ifosamide)、美法仑(melphalan)、哌泊溴烷(pipobroman)、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基硫代磷胺、卡莫司汀(carmustine)、洛莫斯汀(lomustine)、链脲佐菌素(stroptozocin)和达卡巴嗪(dacarbazine))；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸剂，如氟嘧啶(如5-氟尿嘧啶和喃氟啶(tegafur))、雷替曲塞(raltitrexed)、甲氨蝶呤、培美曲塞(pemetrexed)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytarabine)、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、喷司他丁，及吉西他滨和羟基脲)；抗生素(例如蒽环类，如阿霉素(adriamycin)、博来霉素(bleomycin)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunomycin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素-C(mitomycin-C)、放线菌素D(dactinomycin)和光辉霉素(mithramycin))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱(像长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨)和紫杉烷(像紫杉醇和泰索帝)以及polo激酶抑制剂)；蛋白酶体抑制剂，例如卡非佐米(carfilzomib)和硼替佐米(bortezomib)；干扰素疗法；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素(如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide))、安吖啶(amsacrine)、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone)和喜树碱(camptothecin))；博来霉素、放线菌素D、正定霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、ara-C、紫杉醇(Taxol^TM)、白蛋白结合型紫杉醇(nab paclitaxel/albumin-bound paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、光辉霉素、脱氧助间型霉素(deoxyco-formycin)、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-α)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、DNA去甲基化剂(例如，阿扎胞苷(azacitidine)或地西他滨(decitabine))；以及组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂(例如伏立诺他、MS-275、帕比司他(panobinostat)、罗米地辛、丙戊酸、莫西司他(mocetinostat)(MGCD0103)和普拉司他(pracinostat)SB939)；

(ii)细胞生长抑制剂，如抗雌激素药(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和吲哚昔芬(iodoxyfene))、抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)以及5α-还原酶抑制剂(如非那雄胺)；和诺维本(navelbene)、CPT-ll、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、来罗噻吩(reloxafme)、环磷酰胺、异环磷酰胺和屈洛昔芬(droloxafine)；

(iii)抗侵袭剂，例如达沙替尼(dasatinib)和博舒替尼(bosutinib)(SKI-606)，以及金属蛋白酶抑制剂、尿激酶纤溶酶原激活因子受体功能抑制剂或乙酰肝素酶的抗体；

(iv)生长因子功能的抑制剂：例如，此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体，例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]、抗EGFR抗体帕尼单抗(panitumumab)、抗erbB1抗体西妥昔单抗(cetuximab)、酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼、厄洛替尼、6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)、阿法替尼(afatinib)、凡德他尼(vandetanib)、奥希替尼(osimertinib)和罗西替尼(rociletinib))，erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼(lapatinib))和共刺激分子如CTLA-4、4-lBB和PD-l的抗体，或细胞因子(IL-I0、TGF-β)的抗体；肝细胞生长因子家族的抑制剂；胰岛素生长因子家族的抑制剂；细胞凋亡蛋白调节因子的调节剂(例如Bcl-2抑制剂)；血小板衍生生长因子家族的抑制剂，如伊马替尼和/或尼罗替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂诸如法尼基转移酶抑制剂，索拉非尼、替吡法尼和洛那法尼)、通过MEK和/或AKT激酶进行的细胞信号传导的抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、Plt3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体激酶抑制剂例如多妥珠单抗(dalotuzumab)；极光激酶抑制剂和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，如CDK2和/或CDK4抑制剂；CCR2、CCR4或CCR6拮抗剂；RAF激酶抑制剂，如WO 2006043090、WO 2009077766、WO 2011092469或WO 2015075483中描述的那些；和Hedgehog抑制剂，例如维莫德吉(vismodegib)。

(v)抗血管生成剂，如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成剂，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(bevacizumab)(Avastin^TM)]；沙利度胺(thalidomide)；来那度胺；以及例如，VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，如凡德他尼(vandetanib)、瓦他拉尼(vatalanib)、舒尼替尼(sunitinib)、阿西替尼(axitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)和卡博替尼(cabozantinib)；

(vi)基因疗法途径，包括例如置换异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法；

(vii)免疫疗法途径，包括例如抗体疗法，如阿仑单抗、利妥昔单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)

和奥法木单抗；干扰素，如干扰素α；白介素，如IL-2(阿地白介素)；白介素抑制剂，例如IRAK4抑制剂；癌症疫苗，包括预防疫苗和治疗疫苗，如HPV疫苗，例如Gardasil、Cervarix、Oncophage和Sipuleucel-T(Provenge)；gp100；基于树突细胞的疫苗(如Ad.p53 DC)；toll样受体调节剂，例如TLR-7或TLR-9激动剂；PD-1、PD-L1、PD-L2和CTL4-A调节剂(例如纳武单抗(Nivolumab))、抗体和疫苗；其他IDO抑制剂(如吲哚莫德(indoximod))；抗PD-1单克隆抗体(如MK-3475和纳武单抗)；抗PDL1单克隆抗体(如MEDI-4736和RG-7446)；抗PDL2单克隆抗体；和抗CTLA-4抗体(如伊匹单抗(ipilumumab))，CAR-T细胞疗法；以及

(viii)细胞毒性剂，例如氟达拉滨(福达华)、克拉屈滨(cladribine)、喷司他丁(Nipent^TM)；

(ix)靶向疗法，例如PI3K抑制剂，例如艾代拉里斯(idelalisib)和哌立福辛(perifosine)；SMAC(第二线粒体来源的半胱天冬酶激活因子)模拟物，也称为凋亡蛋白抑制剂(IAP)拮抗剂(IAP拮抗剂)。这些药剂起到阻抑IAP，例如XIAP、cIAP1和cIAP2的作用，从而重新建立细胞凋亡通路。特定的SMAC模拟物包括Birinapant(TL32711，泰特拉洛吉克药业公司(TetraLogic Pharmaceuticals))、LCL161(诺华公司(Novartis))、AEG40730(埃格拉医疗公司(Aegera Therapeutics))、SM-164(密歇根大学(University of Michigan))、LBW242(诺华公司)、ML101(桑福德-伯纳姆医学研究所(Sanford-Burnham MedicalResearch Institute))、AT-406(阿森达治疗公司(Ascenta Therapeutics)/密歇根大学)、GDC-0917(基因泰克公司(Genentech))、AEG35156(艾格拉治疗公司(AegeraTherapeutic))和HGS1029(人类基因组科学公司(Human Genome Sciences))；以及靶向泛素蛋白酶体系统(UPS)的药剂，例如硼替佐米、卡非佐米(carfilzomib)、马里佐米(marizomib)(NPI-0052)和MLN9708；CXCR4拮抗剂，例如普乐沙福(plerixafor)或BL-8040；

(x)PARP抑制剂，例如尼拉帕尼(niraparib)(MK-4827)、他拉唑帕尼(talazoparib)(BMN-673)、维利帕尼(veliparib)(ABT-888)；奥拉帕尼(olaparib)、CEP9722和BGB-290

(xi)嵌合抗原受体、抗癌疫苗和精氨酸酶抑制剂；

(xii)降解透明质酸的药剂，例如透明质酸酶PEGPH20

额外的抗癌剂可以是单一药剂或本文列出的其他药剂中的一种或多种。

可以与本发明的化合物一起使用的特定抗癌剂包括例如厄洛替尼、卡博替尼、贝伐单抗、多妥珠单抗、奥拉帕尼、PEGPH20、维莫德吉、紫杉醇(包括白蛋白结合型紫杉醇)、吉西他滨、奥沙利铂、伊立替康、亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一些实施例中，该另外的抗癌剂选自卡培他滨、吉西他滨和5-氟尿嘧啶(5FU)。

此类组合治疗可以通过同时、依序或单独地将该治疗的各个组分给药的方式来实现。此类组合产品采用在上文所述的治疗有效剂量范围内的本发明化合物，以及在其批准的剂量范围内的其他药物活性剂。

在此，在使用术语“组合”的情况下，应当理解，这是指同时施用、单独施用或顺序施用。在本发明的一个方面，“组合”是指同时施用。在本发明的另一个方面，“组合”是指单独施用。在本发明的另一方面，“组合”是指顺序施用。在依序施用或单独施用的情况下，延迟施用第二组分不应当导致该组合的有益作用丧失。

在其中使用组合治疗的一些实施例中，当组合时，本发明的化合物的量和其他药物活性剂的量在治疗上有效地治疗患者的靶向障碍。在这种背景下，组合量是“治疗有效量”，如果将它们组合则足以减少或完全减轻该障碍的症状或其他不利影响；治愈该障碍；反转、完全停止、或减缓该障碍的进展；或降低该障碍变得更糟的风险。典型地，此类量可以由本领域技术人员通过例如从本说明书中针对本发明的化合物描述的剂量范围和其他药物活性化合物的批准或以其他方式公开的剂量范围开始确定。

根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的本发明的化合物和如上文所定义的额外的抗癌剂，用于癌症的联合治疗。

根据本发明的另一方面，提供了包含如上文所定义的本发明的化合物和如上文所定义的额外的抗癌剂的药物产品，用于癌症的联合治疗。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括与上文所定义的额外的抗癌剂同时、依序或单独地向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，与上文所定义的额外的抗癌剂同时、依序或单独使用，用于治疗癌症。

本发明的化合物也可以与放射疗法组合使用。适合的放射疗法包括例如X射线疗法、质子束疗法或电子束疗法。放射治疗还可以涵盖使用放射性核素剂，例如¹³¹I、³²P、⁹⁰Y、⁸⁹Sr、¹⁵³Sm或²²³Ra。此类放射性核素疗法是众所周知的并且可商购。

根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，与放射疗法联合用于治疗癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括与放射疗法同时、依序或单独地向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。

生物学测定

这些化合物的生物学作用可以使用本文在实例中所述的一种或多种测定来评估。

合成

在下文所述的合成方法的描述中以及在用于制备原材料的参考合成方法中，应当理解，本领域技术人员可以选择所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理程序的选择。

有机合成领域的技术人员应当理解，存在于分子各部分上的官能度必须与所用试剂和反应条件相容。

可以通过有机化学的标准程序获得必要的原材料。结合以下代表性过程变型并在所附实例中描述了此类原材料的制备。可替代地，必需的原材料可以通过与所示的在有机化学家的普通技术范围内的那些类似的程序获得。

将理解，在以下定义的过程中合成本发明化合物期间，或在某些原材料的合成期间，可能需要保护某些取代基基团以防止其不希望的反应。熟练的化学家将理解，何时需要此类保护，以及怎样才能将此类保护基团置于合适的位置并且随后去除。

关于保护基团的实例，参见关于该主题的许多一般文本之一，例如西奥多拉格林(Theodora Green)的“有机合成中的保护基团(Protective Groups in OrganicSynthesis)”(出版者：约翰威利国际出版公司(John Wiley&Sons))。保护基团可以通过文献中描述的或熟练的化学家已知的任何便利的、适合于去除所讨论的保护基团的方法除去，选择此类方法以便在分子中其他地方的基团的最小扰动的情况下来实现保护基团的去除。

因此，如果反应物包括例如基团，如氨基、羧基或羟基，则可能需要在本文提及的一些反应中保护该基团。

举例来说，氨基或烷基氨基基团的适合的保护基团是例如酰基基团(例如烷酰基基团如乙酰基或三氟乙酰基)、烷氧基羰基基团(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基基团)、芳基甲氧基羰基基团(例如苄氧基羰基)、或芳酰基基团(例如苯甲酰基)。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以通过用适合的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)进行水解来除去酰基基团如烷酰基或烷氧基羰基基团或芳酰基基团。可替代地，可以例如通过用适合的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来去除酰基基团如叔丁氧基羰基基团，并且可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢，或通过用路易斯酸例如BF₃.OEt₂处理来去除芳基甲氧基羰基基团如苄氧基羰基基团。伯氨基基团的适合的替代性保护基团是例如邻苯二甲酰基基团，其可以通过用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺)或用肼进行处理而去除。

羟基基团的适合的保护基团是例如酰基基团(例如烷酰基基团如乙酰基、芳酰基基团例如苯甲酰基)、或芳基甲基基团(例如苄基)。上述保护基团的脱保护条件将必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用适合的碱(如碱金属氢氧化物例如氢氧化锂、或氢氧化钠，或氨)进行水解来去除酰基基团如烷酰基或芳酰基基团。可替代地，可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢来除去芳基甲基基团如苄基基团。

羧基基团的适合的保护基团是例如酯化基团，例如甲基或乙基基团(其可以例如通过用碱如氢氧化钠进行水解而除去)，或例如叔丁基基团(其可以例如通过用酸例如有机酸如三氟乙酸进行处理而除去)，或例如苄基基团(其可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢而除去)。

树脂也可以用作保护基团。

一般合成途径

还提供了制备具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括偶联具有式(IX)的化合物或其盐：

其中HET、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L、L¹和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时用具有式(X)的化合物或其盐保护任何官能团：

其中X₁、X₂和X₃具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时保护任何官能团；

并且此后任选地进行以下程序中的一个或多个：

·将具有式(I)的化合物转化为另一种具有式(I)的化合物

·除去任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施例中，在具有式(X)的化合物中，X₂和X₃是CH；X₁是CR⁶，其中R⁶具有本文所定义的任何含义(例如R⁶是H)，不同的是必要时保护任何官能团。

可以使用众所周知的方法进行偶联反应，例如通过使具有式(IX)的酸或其活化的衍生物在适合的偶联剂存在下与具有式(X)的胺反应，例如：碳二亚胺(例如二环己基碳二亚胺(DCC)或N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCl))，任选地与添加剂如羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基7-氮杂苯并三唑(HOAt)组合；脲盐或铵盐，例如1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵四氟硼酸盐(TBTU)。

具有式(IX)的酸可以通过例如形成酰卤而活化。当具有式(IX)的化合物处于酰卤的形式时，可以使化合物与具有式(X)的胺直接反应，而不需要偶联剂。

适合地，该反应在适合的溶剂(例如DMF)中并且在碱、优选叔胺如N,N-二异丙基乙胺存在下进行。

具有式(IX)和(X)的化合物可以使用类似于实例中描述的那些的方法制备。

还提供了制备具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括偶联具有式(XI)的化合物或其盐：

其中HET、R²、R³、R⁴、R⁵、L、X₁、X₂、X₃和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时用具有所述式的化合物用下式的酸或其活化衍生物(例如酰卤)对任何官能团进行保护：R¹L¹C(O)OH，其中R¹和L¹具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时对任何官能团进行保护；

并且此后进行以下程序中的一个或多个：

·将具有式(I)的化合物转化为另一种具有式(I)的化合物

·除去任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

适合地，L不存在。

关于具有式(IX)和(X)的化合物的偶联，可以使用类似于上述那些的方法进行偶联。

适合地，在溶剂例如极性质子溶剂如N,N-二甲基甲酰胺存在下进行反应。适合地，在有机叔胺碱如N,N-二异丙基乙胺存在下进行反应。具有式(XI)的化合物可以使用类似于实例中描述的那些的条件制备。具有式R¹L¹C(O)R”的化合物是可商购的或可以使用众所周知的方法制备。

具有式(I)的化合物(其中R³是H)可以通过脱保护具有式(XII)的化合物或其盐来制备：

其中HET、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L、L¹、X₁、X₂、X₃和q具有本文所定义的任何含义；并且Pg是氨基保护基团。

适合的氨基保护基包括例如本文披露的那些，例如叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。优选地，Pg是BOC。可以通过常规方法除去氨基保护基团，例如用适合的酸或碱处理。

本文所述的某些中间体是新颖的并形成本发明的另一方面。因此，还提供了具有式(IX)、(XI)或(XII)的化合物。

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXa)的化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L、L¹和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时保护任何官能团。

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXb)的化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时保护任何官能团。

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXc)的化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时保护任何官能团；并且Pg是如本文所定义的氨基保护基团(例如BOC)。

在一些实施例中，具有式(XI)的化合物是具有式(XIa)的化合物：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、L和q具有本文所定义的任何含义，不同的是必要时保护任何官能团；并且Pg是如本文所定义的氨基保护基团(例如BOC)。

在一些实施例中，具有式(XII)的化合物是具有式(XIIa)的化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、L、L¹、X₁、X₂、X₃和q具有本文所定义的任何含义，并且Pg是如本文所定义的氨基保护基团(例如BOC)。

在某些实施例中，在具有式(IX)、(IXa)、(IXb)、(IXc)(XI)、(XIa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，L和L¹不存在。

在某些实施例中，在具有式(IX)、(IXa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，R¹具有上文(52)至(86)所定义的任何值。

在某些实施例中，在具有式(XI)和(XII)的化合物中，HET具有上文(1)至(38)所定义的任何值。

在某些实施例中，在具有式(XI)、(XIa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，

是：

实例

缩写：

BINAP-2,2'-二(二苯基膦)-1,1'-联萘基

Bn-苄基

Boc-叔丁氧羰基

CBz-苄氧基羰基

CPME-环戊基甲醚

DCM-二氯甲烷

DEA-二乙胺

DIEA-N,N-二异丙基乙胺

DIPA-二异丙胺

DMAc-二甲基乙酰胺

DMF-N,N-二甲基甲酰胺

DMP-戴斯-马丁过碘烷

DMSO-二甲亚砜

EDCI-1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

ee-对映异构体过量

eq.-当量

Ghosez试剂-1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺

HATU-1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐

HOAt-1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HPLC-高效液相色谱法

IPA-异丙醇

LC-MS-液相色谱-质谱联用仪

LDA-二异丙氨基锂

MeCN-乙腈

MS-质谱法

NBS-N-溴代琥珀酰亚胺

NMM-N-甲基吗啉

NMR-核磁共振

o/n-过夜

Pd/C-钯碳

Piv-新戊酰基

Prep-制备型

pTSA-对甲苯磺酸

Py-吡啶

rt-保留时间

RT-室温

SEM-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基

SPE-固相萃取

Su-琥珀酰亚胺

TBAB-四丁基溴化铵

TEA-三乙胺

TFA-三氟乙酸

TFAA-三氟乙酸酐

THF-四氢呋喃

TLC-薄层色谱

试剂和条件

除非给定合成，否则从商业来源获得试剂和原材料。除非另有说明，否则所有反应均在氮气或氩气的惰性气氛下进行。

化合物名称

例示化合物使用CambridgeSoft的ChemDraw Ultra 12.0命名。其他化合物，特别是商业试剂，使用ChemDraw Ultra 12.0生成的名称或在线数据库和目录中常见的名称。

分析方法

方法1：(5-95AB_R_220&254)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

30x2.1mm,5μm S/N：H17-247175；运行时间：1.55min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A 0.8min，保持在95％B至1.21min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.55min，1.5mL/min，50℃。

方法2：(5-95AB_R_220&254.M)：仪器：Agilent 1200\G6110A；柱：

Flash RP-18e 25x2.0mm；运行时间：1.50min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A 0.8min，保持在95％B至1.20min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.50min，1.5mL/min，50℃。

方法3：(WUXIAB00.M)：仪器：Agilent 1200LC&Agilent 6110MSD；柱：AgilentZORBAX 5μm SB-Aq,2.1x50mm；运行时间：4.50min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以0％B运行至0.4min。梯度：0％-80％B与A 3.4min。梯度：80％-100％B与A 3.9min；在3.91min 0％B，并在0-3.91min保持在0％B至4.50min，流速：1.5mL/min；3.91-4.5min，流速：0.6mL/min；50℃。

方法4：(0-60AB_4MIN_220&254.lcm)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

30x2.1mm,5μm S/N：H17-247175；运行时间：1.55min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以0％B运行。梯度：0％-60％B与A3min，保持在60％B至3.5min；在3.51min 0％B，并保持在0％B至4.00min，0.8mL/min，50℃。

方法5：(0-60AB_0_R_220&254.lcm)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

30x2.1mm,5μm S/N：H17-247175；运行时间：1.55min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以0％B运行。梯度：0％-60％B与A0.6min，保持在60％B至1.21min；在1.21min 0％B，并保持在0％B至1.55min，1.5mL/min，50℃。

方法6：(5-95AB_4min_220&254)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

30x2.1mm,5μm S/N：H17-247175；运行时间：1.55min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A 3.0min，保持在95％B至3.5min；在3.51min 5％B，并保持在5％B至4.00min，0.8mL/min，50℃。

方法7：(5-95AB_R_220&254_50)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

Flash RP-18E 25-2MM；运行时间：1.55min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA (v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A 0.8min，保持在95％B至1.21min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.55min，1.5mL/min，50℃。

方法8：(WUXIAB10.M)：仪器：Agilent 1200LC&Agilent 6110MSD；柱：AgilentZORBAX 5μm SB-Aq,2.1x50mm；运行时间：4.50min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以10％B运行至0.4min。梯度：10％-100％B与A3.4min，保持在100％B至3.9min；在3.91min 10％B，并在0-3.91min保持在10％B至4.50min，流速：0.8mL/min；3.91-4.5min，流速：1.0mL/min；50℃。

方法9：(WUXIAB01.M)：仪器：Agilent 1200LC&Agilent 6110MSD；柱：AgilentZORBAX 5μm SB-Aq,2.1x50mm；运行时间：4.50min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以1％B运行至0.4min。梯度：1-90％B与A3.4min。梯度：90-100％B与A3.9min；在3.91min 1％B，并在0-3.91min保持在1％B至4.50min，流速：0.8mL/min；3.91-4.5min，流速：1.0mL/min；50℃。

方法10：(5-95CD_R_220&254_POS)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：Xbridge C1830x3.0mm,5μm；运行时间：1.50min；溶剂A)水中0.025％氢氧化铵(v/v)B)乙腈。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A1.2min，保持在95％B至1.60min；在1.61min 5％B，并保持在5％B至2.0min，2.0mL/min，40℃。

方法11：(5-95AB_R_220&254_50)：仪器：Agilent 1200\G6110A；柱：Kinetexat5μmEVO C18 30x2.1mm；运行时间：1.50min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A0.8min，保持在95％B至1.20min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.50min，1.5mL/min，50℃。

方法12：(0-60AB_R_220&254)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

Flash RP-18E 25-2MM；运行时间：1.5min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以0％B运行。梯度：0％-60％B与A 0.8min，保持在60％B至1.21min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.55min，1.5mL/min，50℃。

方法13：(0-60AB_0_R_220&254)：仪器：Agilent 1100\G1956A；柱：

5μmEVO C18 30x2.1mm；运行时间：1.5min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以0％B运行。梯度：0％-60％B与A 0.8min，保持在60％B至1.21min；在1.21min 5％B，并保持在5％B至1.5min，1.5mL/min，50℃。

方法14：(5-95AB_4MIN_220&254)：仪器：Agilent 1200\G6110A；柱：Kinetex@5μmEVO C18 30x2.1mm；运行时间：4.0min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.01875％TFA(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A3.0min，保持在95％B至3.5min；在3.51min5％B，并保持在5％B至4.00min，0.8mL/min，50℃。

方法15：(0-60AB_4MIN_220&254)：仪器：Agilent 1200\G6410B；柱：ZorbaxExtend C-18,2.1x50mm,5μm；运行时间：4.0min；溶剂A)水中0.0375％TFA(v/v)B)乙腈中0.0188％TFA(v/v)。梯度以10％B运行。梯度：10-80％B与A 4.2min。梯度：80％-90％B与A5.3min；在5.31min 10％B，并保持在10％B至7min，1mL/min，40℃。

方法16：(5-95CD_4MIN_220&254_POS)：仪器：SHIMADZU LC-MS-2020；柱：

EVO C18 2.1x30mm,5μm；运行时间：4.0min；溶剂A)水中0.025％氢氧化铵(v/v)B)乙腈。梯度以5％B运行。梯度：5％-95％B与A 3.0min，保持在95％B至3.5min；在3.51min5％B，并保持在5％B至4.0min，0.8mL/min，40℃。

方法17：(10-80CD_2MIN_220&254)：仪器：Agilent 1200\G6110A；柱：XBridge C182.1x50mm,5μm；运行时间：2.0min；溶剂A)水中0.025％氢氧化铵(v/v)B)乙腈。梯度以10％B运行。梯度：10％-80％B与A1.2min，保持在95％B至1.6min；在1.61min 10％B，并保持在10％B至2.0min，1.2mL/min，40℃。

在Shimadzu LC-30AD仪器上进行超临界流体色谱(SFC)分析。柱：kromasil 3-Cellucoat 50×4.6mm，粒径3μm。方法：流动相溶剂A：二氧化碳，相溶剂B：甲醇(0.05％DEA)，A中B 0％至95％，流速：3.0mL/min；波长：220nm

NMR

使用运行ACD/Spectrus处理器的Bruker Avance 400MHz光谱仪获得所有NMR光谱。

中间体A的合成

方案1

1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶1.2

将7-氮杂吲哚1.1(95g，804mmol)在二甲基甲酰胺(500mL)中的溶液冷却至0℃，然后以几小份添加氢化钠(38.6g，965mmol)，保持内部温度在10℃以下。将悬浮液在0℃-5℃下搅拌1h。然后在5℃-10℃逐滴添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(171mL，965mmol)。将黄色悬浮液在室温下搅拌18h。通过缓慢添加水淬灭混合物直至停止起泡，然后用另外的水稀释至总共1.5L。将混合物用乙酸乙酯萃取(2x1.5L)。将合并的有机萃取物用水(2x1L)和盐水(2x1L)洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发，以提供呈琥珀色油的化合物1.2(199g，99％产率，96％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.08(s,1H),0.89(m,2H),3.52(m,2H),5.68(s,2H),6.50(dd,1H),7.08(dd,1H),7.34(d,1H),7.90(dd,1H),8.33(dd,1H)。LC-MS(249[M+H]⁺)。

3,3-二溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮1.3

使用冰/水浴将三溴化吡啶鎓(646g，2.02mol)在1,4-二噁烷(900mL)中的机械搅拌悬浮液冷却至10℃-15℃，并逐滴添加1.2(100g，403.2mmol)在1,4-二噁烷(500mL)中的溶液(注意：未观察到显著的放热，但反应保持冷却以最小化聚合物副产物的形成)。在10℃-15℃下搅拌2h后，将混合物在水(1.5L)和乙酸乙酯(1.5L)之间分配。收集乙酸乙酯层并用水(2x1L)、饱和碳酸氢钠水溶液(1L)、硫代硫酸钠溶液(1M溶液，1L)和盐水(2x1L)洗涤。将乙酸乙酯层用硫酸镁干燥并蒸发，以提供化合物1.3(144g，85％产率，89％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.03(s,9H),0.97(dd,2H),3.70(dd,2H),5.32(s,2H),7.15(dd,1H),7.87(dd,1H),8.30(dd,1H)。LC-MS(421,423,425[M+H]⁺)。

1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮1.4

向1.3(144g，341mmol)在四氢呋喃(2L)中的机械搅拌的溶液中添加饱和氯化铵水溶液(0.5L)。将悬浮液在冰/盐/水浴中冷却至5℃-10℃，并按份添加锌粉(223g，3.41mol)。在添加了一半的锌后，内部温度在24℃达到峰值，在添加剩余的锌后没有注意到进一步显著的放热。在室温下搅拌2h后，将混合物通过

垫过滤，以除去多余的锌，用乙酸乙酯(1L)洗涤。将滤液用水(1.2L)稀释，实现溴化锌盐的沉淀。将该悬浮液通过另一个

垫过滤。将有机层与滤液分离，用水(0.8L)和盐水(2x0.8L)洗涤，用硫酸镁干燥，并蒸发，以给出深红色油。将粗材料通过干柱快速色谱法(庚烷中0％-30％乙酸乙酯/)进行纯化，以提供化合物1.4(53.7g，55％产率，88％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.03(s,9H),0.98(dd,2H),3.59(s,2H),3.69(dd,2H),5.25(s,2H),6.97(dd,1H),7.50(dd,1H),8.22(d,1H)。LC-MS(265[M+H]⁺)。

(4-硝基-1,2-亚苯基)二甲醇1.8

将硼烷-四氢呋喃络合物(THF中1M，1.23L，1.23mol)的机械搅拌溶液冷却至0℃。在45min的时间段内逐滴添加4-硝基邻苯二甲酸(100g，472mmol)在四氢呋喃(1L)中的溶液，将内部温度保持在10℃以下。然后去除冷却水浴，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将经搅拌的混合物再次冷却至0℃，并缓慢添加甲醇以破坏过量的硼烷(直至不再观察到泡腾)。将混合物浓缩至25％-30％的体积，然后通过添加水稀释至1L。将混合物通过添加2M水性氢氧化钠调节至pH 10，然后用乙酸乙酯(5x1L)萃取。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，并蒸发，以提供化合物1.8(85.5g，98％产率，98％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ4.60(m,4H),5.44(q,2H),7.67(d,1H),8.09(dd,1H),8.23(dd,1H)。LC-MS(182[M-H]^-)。

1,2-双(溴甲基)-4-硝基苯1.9

将二醇1.8(95.5g，522mmol)在二噁烷(2L)中的悬浮液冷却至0℃，并逐滴添加三溴化磷(54mL，574mmol)。然后除去冷却，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物仔细倒入饱和碳酸氢钠(1.5L)的搅拌溶液中，并用乙酸乙酯(3x1L)萃取。将有机萃取物用硫酸镁干燥，并蒸发，以提供化合物1.9(154g，96％产率，98％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ4.66(s,2H),4.67(s,2H),7.56(d,1H),8.16(dd,1H),8.25(d,1H)。

5-硝基-1'-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮1.5

向化合物1.4(55g，208mmol)在二甲基甲酰胺(1.65L)中的机械搅拌溶液中添加1.9(70.8g，229mmol)。然后按一份添加碳酸铯(238g，729mmol)。将该悬浮液在室温下搅拌16h，然后通过

垫过滤，用乙酸乙酯(2L)洗涤滤饼。将滤液用水(3x1L)和盐水(1L)洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发至深红色油(96g)。将这通过干柱快速色谱法纯化(用9:1庚烷/乙酸乙酯洗脱，随后用17:3庚烷/乙酸乙酯、8:2庚烷/乙酸乙酯、3:1庚烷/乙酸乙酯、7:3庚烷/乙酸乙酯和13:7庚烷/乙酸乙酯洗脱)，给出黄色/橙色粉末(60.1g)，将其用二乙醚研磨，得到化合物1.5(45g，53％产率，97％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.01(s,9H),0.99(dd,2H),3.18(dd,2H),3.71(m,4H),5.30(s,2H),6.88(dd,2H),7.08(dd,1H),7.43(d,1H),8.09(m,2H),8.23(dd,1H)。LC-MS(411[M+H]⁺)。

5-氨基-1'-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮1.6

向1.5(70g，170.3mmol)在四氢呋喃(1.1L)中的机械搅拌的溶液中添加饱和氯化铵溶液(300mL)，随后按三份添加锌粉(111g，1.70mol)。内部温度最初从22℃升至33℃，然后在1h内缓慢冷却至环境温度。2.5h后LC-MS分析指示产物和羟胺/亚硝基中间体的混合物。添加另外的35g锌粉和100mL饱和氯化铵溶液。在另外3.5h后，完成还原。将混合物通过

垫过滤，用乙酸乙酯(1L)洗涤滤饼。将滤液用水(3x1L)洗涤，用硫酸镁干燥，并蒸发，以给出橙色固体，将其用二乙醚研磨，以提供呈淡黄色粉末的化合物1.6(48.8g)。将研磨液体通过快速色谱法(洗脱1:1庚烷/乙酸乙酯)再纯化，并进一步用二乙醚研磨，给出另外的3g 1.6，给出总共51.8g化合物1.6(80％产率，95％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.02(s,9H),0.98(m,2H),2.91(d,2H),3.56(dd,2H),3.69(m,2H),5.29(s,2H),6.59(m,2H),6.82(dd,1H),7.02(d,1H),7.09(dd,1H),8.18(dd,1H)。LC-MS(382[M+H]⁺)。

中间体A

5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

将1.6(51.8g，136mmol)在新鲜制备的甲醇中的氯化氢[制备至大约15％浓度(w/v)]的溶液加热至回流持续6h。一旦反应完成，就停止加热，并使溶液冷却至室温过夜。将混合物在真空下浓缩至浓橙色液体，然后用300mL水稀释，并用饱和碳酸钠溶液将pH调节至9。将水性混合物用二氯甲烷(3x500mL)和9:1二氯甲烷/甲醇(3x500mL)萃取。将合并的有机物用硫酸镁干燥并蒸发至橙色固体，将其用2:1二氯甲烷/乙酸乙酯(约60mL)研磨，以提供呈淡橙色粉末的中间体A(21.5g，63％产率，97％纯度)。1H NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ2.84(dd,2H),3.18(dd,2H),4.94(s,NH₂),6.41(m,2H),6.81(dd,1H),6.86(d,1H),7.08(dd,1H),8.01(dd,1H),11.03(s,NH)。LC-MS方法10:rt 0.751(252[M+H]⁺)。

中间体B的合成

方案2

将3,5-双(三氟甲基)苄基溴(5.00g，17.0mmol)和辛可尼定(5.50g，17.8mmol)在异丙醇中的溶液在回流下加热3.5h。在冷却至室温后，将反应混合物伴随搅拌缓慢倒入二乙醚(250mL)中。将沉淀的固体过滤，用二乙醚(150mL)和戊烷(100mL)洗涤，以得到化合物2.1(8.60g，84％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.48(m,1H),1.91(m,1H),2.12(m,1H),2.31(m,2H),2.76(s,br,1H),3.41(t,1H),3.50(dd,1H),3.71(m,1H),4.02(t,1H),4.58(m,1H),5.03(d,1H),5.19(m,2H),5.37(d,1H),5.71(ddd,1H),6.67(s,1H),7.98(dddd,2H),8.15(dd,1H),8.27(s,1H),8.34(d,1H),8.98(d,1H)；[α]_D ²³＝-139.5°(c 8.9,MeOH)。

方案3

N-叔丁基-3-甲基-吡啶-2-胺3.2

将化合物3.1(20.00g，116mmol)和叔丁醇钠(22.35g，232mmol)在甲苯(200mL)中的混合物在真空下脱气，并用氮气吹扫三次。在25℃下添加2-甲基丙-2-胺(12.75g，174mmol)、Pd₂(dba)₃(266mg，0.29mmol)和BINAP(434mg，0.70mmol)，并将混合物在真空下脱气并用氮气吹扫三次。将混合物在25℃下搅拌10min，然后在氮气下伴随搅拌加热至100℃持续16h。将混合物倒入水(400mL)中并用乙酸乙酯(3x400mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x400mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物用乙酸乙酯(200mL)溶解并倒入水(200mL)中。将混合物通过添加1M盐酸调节至pH3，并用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。弃去有机相，并将水相用饱和水性碳酸氢钠调节至pH9。将水相用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。将有机相合并，用盐水(200mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至50:1稀释，以提供呈黄色油的化合物3.2(28.30g，73％产率，98.9％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.50(s,9H),2.04(s,3H),4.00(br.s,1H),6.44-6.48(m,1H),7.17(dd,1H),8.00(d,1H)。LC-MS方法1:rt 0.214min(165.2[M+H]⁺)。

甲基1-叔丁基-2-羟基-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸酯3.3

在氮气下，在-40℃下向化合物3.2(27.5g，167mmol)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中逐滴添加2.5M n-BuLi(73.67mL，184mmol)。将混合物在-10℃下搅拌0.5h。然后将氯甲酸甲酯(17.40g，184mmol)在-40℃下缓慢添加到混合物中。将混合物在10℃下搅拌1.5h。将反应的反应温度保持在-40℃，并逐滴添加2.5M n-BuLi(46.88mL，117mmol)。将混合物在-40℃下搅拌0.5h。在氮气下，在-40℃下向混合物中添加二异丙胺(23.72g，234mmol)，随后添加2.5M n-BuLi(107.16mL，267mmol)。将混合物在-40℃下搅拌0.5h，并且然后在20℃下再搅拌10h。在反应完成后，将混合物冷却至0℃并添加氯甲酸甲酯(20.57g，218mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h。将混合物通过添加1M盐酸调节至pH 3至4。将混合物用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。合并萃取物，用盐水(100mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1稀释，以得到呈红色固体的化合物3.3(36g，78％产率，97％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.92(s,9H),3.96(s,3H),7.08(dd,1H),7.89(d,1H),8.14(dd,1H),11.80(br.s,1H)。LC-MS方法1:rt 0.887min,(249.1[M+H]⁺)。

方案4

二甲基4-硝基苯-1,2-二甲酸酯4.1

向4-硝基邻苯二甲酸(50.0g，237mmol)在甲醇(500mL)中的溶液中添加甲磺酸(34.14g，355mmol)。将混合物在80℃下搅拌16h。将混合物在真空下浓缩并且将残余物溶于乙酸乙酯(500mL)。将溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(2x500mL)、盐水(500mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物4.1(102.0g，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.97(d,6H),7.86(d,2H),8.41(dd,1H),6.64(d,1H)。

二甲基4-氨基苯-1,2-二甲酸酯4.2

在氮气下，向化合物4.1(37g，155mmol)在甲醇(500mL)中的溶液中添加10％Pd/C(2g)。然后将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。将所得混合物在20℃下搅拌10h。将反应混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩，以提供呈黄色固体的化合物4.2(30g，粗产物)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ3.78(s,3H),3.84(s,3H),6.66-6.70(m,2H),7.62(d,1H)。LC-MS方法1:rt 0.723min,(178.1,[M-OMe+H]⁺；232.1(M+Na)⁺)。

二甲基4-(二苄基氨基)苯-1,2-二甲酸酯4.3

向化合物4.2(90.0g，430mmol)在二甲基乙酰胺(500mL)中的溶液中添加碘化钠(12.9g，86.0mmol)、碳酸钾(208.10g，1.51mol)和苄基氯(163.4g，1.29mol)。将混合物在90℃下搅拌15h。过滤反应混合物，并将滤液倒入水(1L)中。将混合物用乙酸乙酯萃取(3x1L)。将有机相合并，用盐水(3x1L)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝50:1至25:1研磨，以提供呈黄色油的化合物4.3(180.0g，97％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.95(s,3H),3.79(s,3H),4.62(s,4H),6.74(dd,1H),6.83(d,1H),7.20(d,4H),7.28-7.35(m,4H),7.36-7.38(m,2H),7.74(d,1H)。LC-MS方法1:rt 1.038min,(390.3[M+H]⁺)。

[4-(二苄基氨基)-2-(羟基甲基)苯基]甲醇4.4

在-20℃下，在1h内按份向化合物4.3(44.0g，113mmol)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中添加氢化铝锂(7.74g，204mmol)，并将混合物在10℃下搅拌16h。通过将混合物冷却至0℃并添加水(10mL)、10％水性氢氧化钠(10mL)、水(10mL)和硫酸钠(50g)来淬灭反应。将混合物过滤并收集滤液。将滤饼用四氢呋喃(5x100mL)洗涤。将有机相合并，在减压下浓缩，以提供呈浅黄色固体的化合物4.4(35.2g，93％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.97(br.s,2H),4.57(s,2H),4.59(s,2H),4.69(s,4H),6.65(dd,1H),6.77(d,1H),7.12(d,1H),7.24-7.27(d,2H),7.28-7.29(m,2H),7.33-7.39(m,6H)。LC-MS方法1:rt 0.855min,(334.1[M+H]⁺)。

[4-(二苄基氨基)-2-(羟基甲基)苯基]甲醇4.5

将亚硫酰氯(83.1g，698mmol)在乙腈(228mL)中的溶液冷却至0℃，并按份添加化合物4.4(76.0g，228mmol)，同时保持内部温度低于18℃。将反应混合物在25℃下搅拌10min。将混合物用MTBE(1L)稀释，并在0℃下静置2h。通过过滤收集晶体，并在真空下干燥，以给出呈黄色固体的化合物4.5(68.0g，74％产率，HCl盐)。1H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.43-4.77(m,8H),6.62-6.63(m,1H),6.87(s,1H),7.22-7.32(m,11H)。LC-MS方法1:rt1.012min,(352.2[M+H]⁺)。

方案5

(R)-1'-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮5.1

在室温下向NaOH(72g，1.80mol)在水(60mL)中的溶液中添加甲苯(130mL)和化合物4.5(4.7g，12.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，同时使氩气鼓泡通过溶液持续5min。在10min内按三份添加化合物3.3(3.00g，12.1mmol)。继续使氩气鼓泡通过搅拌溶液持续15min，并在室温下按一份添加化合物2.1(700mg，1.2mmol)。在氩气鼓泡的情况下，将该混合物在室温下搅拌3h。添加水(约300mL)[注意：放热反应]，并将混合物搅拌约15min，同时温热至室温。分离两层，将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并蒸发，以给出粗产物，具有约90％纯度，83％ee。将该产物在60℃下溶于甲苯(60mL)中。一旦完全溶解，将混合物温热至室温，并添加MeOH(180mL)。将混合物在室温下搅拌16h，并将所得晶体通过过滤收集，用MeOH洗涤，以给出产物(61％，96％ee)。使用甲苯(50mL)和MeOH(120mL)重结晶产物，以给出化合物5.1(3.1g，52％产率，>99％ee)。¹H NMR(CDCl_3,400MHz)δ8.14(m,1H),7.30(m,10H),7.05(m,2H),6.78(m,1H),6.67(s,br,2H),4.67(s,br,4H),3.48(d,2H),2.87(dd,2H),1.82(s,9H)；LC-MS方法1:rt 1.215min,(488.27[M+H]⁺)；手性HPLC：

Lux 3μm纤维素-1柱；正己烷:异丙醇，95:5；流速＝1.0mL/min；在254nm处检测。

(3R)-5'-(二苄基氨基)螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-2-酮5.2

将化合物5.1(26.8g，55.0mmol)在20℃下用甲磺酸(67.00mL)溶解，并添加甲苯(10mL)。将所得混合物在90℃下搅拌3h。LC-MS显示出原材料完全消耗并检测所需的MS。将混合物倒入水(100mL)中并用碳酸钠调节至pH10。将混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1研磨，以提供呈黄色固体的化合物5.2(20g，83％产率)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ2.96(d,2H),3.22(d,2H),4.67(s,4H),6.54(dd,1H),6.63(s,1H),6.68(dd,1H),6.98(d,1H),7.19-7.35(m,11H),8.09(d,1H),11.03(s,1H)。LC-MS方法2:rt 0.884min,(432.2[M+H]⁺)。

中间体B

(R)-5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

向化合物5.2(20g，46.35mmol)在甲醇(200mL)中的溶液中添加10％Pd/C(1.5g)和甲磺酸(7.15g，74.4mmol)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气球囊下，将混合物在20℃下搅拌16h，过滤，并在减压下浓缩滤液，给出残余物。将残余物用四氢呋喃(100mL)溶解，添加饱和水性碳酸钠直至pH＝8，并将混合物过滤，以给出粉红色固体。将固体溶解在四氢呋喃(100mL)中，用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色固体的中间体B(10.78g，83％产率，90.2％纯度)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ2.92(dd,2H),3.33(dd,2H),4.95(s,2H),6.44-6.48(m,2H),6.84-6.92(m,2H),7.13(d,1H),8.05(d,1H),11.04(s,1H)。LC-MS方法10:rt0.751min,(252.11[M+H]⁺)；手性HPLC：

Lux 3μm纤维素-1柱；正己烷:异丙醇，40:60；流速＝0.5mL/min；在220nm处检测。

方案6

叔丁基3-[(2-甲氧基-2-氧代-乙基)氨基]哌啶-1-甲酸酯6.2

将化合物6.1(1.00g，5.02mmol)、2-氨基乙酸甲酯(756mg，6.02mmol，HCl盐)和乙酸钠(617mg，7.53mmol)在甲醇(10mL)中的混合物在20℃下搅拌2h，添加氰基硼氢化钠(946mg，15.06mmol)并继续搅拌12h。将反应混合物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1洗脱，以提供呈黄色油的化合物6.2(580mg，42％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.46(s,9H),1.63-1.80(m,3H),1.87-1.96(m,1H),2.43-3.04(m,3H),3.41-3.53(m,2H),3.74(s,3H),3.75-3.82(m,1H),3.84-4.11(m,1H)。

叔丁基3-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯6.3

在0℃下向化合物6.2(580mg，2.13mmol)和DIEA(1.48mL，8.52mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中逐滴添加2,2-二甲基丙酰氯(308mg，2.56mmol)。将混合物在氮气下在20℃下搅拌30min，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1洗脱，以提供呈白色固体的化合物6.3(580mg，76％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.32(s,9H),1.45(s,9H),1.50-1.62(m,2H),1.75-1.84(m,1H),1.97-2.05(m,1H),2.44-2.75(m,2H),3.72(s,3H),3.75-3.95(m,2H),3.97-4.09(m,1H),4.12-4.35(m,2H)。

2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸6.4

在20℃下向化合物6.3(300mg，0.84mmol)在四氢呋喃(3mL)和甲醇(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(141mg，3.37mmol)在水(1mL)中的溶液。然后将所得混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将水相用1M盐酸调节至pH4。将所得混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈无色胶的化合物6.4(280mg，97％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.33(s,9H),1.47(s,9H),1.51-1.67(m,2H),1.74-1.84(m,1H),1.96-2.04(m,1H),2.44-2.80(m,2H),3.90(q,2H),3.99-4.09(m,1H),4.13-4.34(m,2H)。

叔丁基3-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯6.5

在20℃下向化合物6.4(68mg，0.20mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)和HOAt(35mg，0.26mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIEA(90mg，0.70mmol)。添加中间体A(50mg，0.20mmol)并将混合物在20℃下搅拌12h。将反应混合物添加到水(15mL)中并过滤。将沉淀物用水(10mL)洗涤，用MeCN(20mL)溶解并在真空下浓缩，以给出呈黄色固体的化合物6.5(84mg，66％产率，90.1％纯度)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ1.22(s,9H),1.39(s,9H),1.62-1.91(m,4H),2.51-2.54(m,4H),3.05(t,2H),3.76-4.00(m,4H),4.01-4.17(m,1H),6.85(dd,1H),7.10-7.24(m,2H),7.31(t,1H),7.66(d,1H),8.06(dd,1H),9.92(s,1H),11.08(s,1H)。LC-MS方法6:rt 2.302min,[M+Na]⁺＝598.4。

实例1

N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-(哌啶-3-基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物6.5(70mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(274mg，1.22mmol)。将混合物在20℃下搅拌16h。将反应混合物溶于甲醇(20mL)中。将饱和水性碳酸钠添加到混合物中直至pH＝8。然后将所得混合物用乙酸乙酯(4x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x30mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Gemini 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.05％氢氧化氨v/v)，溶剂B：MeCN]；B％：29％-59％，12min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例1(14mg，24％产率，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),1.56-1.76(m,2H),1.78-1.86(m,1H),1.94-2.02(m,1H),2.46(td,1H),2.69(t,1H),2.88-2.97(m,1H),3.06(dd,2H),3.11-3.18(m,1H),3.51(dd,2H),3.92-4.09(m,2H),4.16-4.27(m,1H),6.88(dd,1H),7.12(dd,1H),7.22(d,1H),7.34-7.40(m,1H),7.55(s,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法16:rt 1.891min,[M+H]⁺476.3。

方案7

(S)-叔丁基3-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1-甲酸酯7.2

向(S)-3-氨基-1-boc-哌啶(7.1)(800mg，3.99mmol)和三乙胺(0.7mL)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(700mg，4.19mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至2:1)，以得到呈无色油的化合物7.2(1.00g，87％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.19-1.30(m,4H),1.38(s,9H),1.54-1.65(m,2H),1.83-1.86(m,1H),2.47-2.50(m,3H),3.33-3.43(m,2H),3.70(dt,1H),3.78-4.02(m,1H),4.12(q,2H)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯7.3

向化合物7.2(280mg，0.98mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(253mg，1.96mmol)和新戊酰氯(141mg，1.17mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用二氯甲烷(20mL)稀释并用水(20mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物7.3(360mg，99％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.25(t,3H),1.33(s,9H),1.45(s,9H),1.53-1.56(m,2H),1.78-1.80(m,1H),2.01-2.03(m,1H),2.46-2.52(m,1H),2.58-2.68(m,1H),3.84(d,2H),4.05-4.14(m,2H),4.17(q,2H),4.24-4.27(m,1H)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸7.4

向化合物7.3(360mg，0.97mmol)在甲醇(10mL)和水(2mL)中的溶液中添加水合氢氧化锂(122mg，2.92mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将水相用1M盐酸调节至pH＝3-4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物7.4(300mg，90％产率)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ1.33(s,9H),1.45(s,9H),1.59-1.68(m,2H),1.79-1.83(m,1H),1.99-2.05(m,1H),2.56-2.74(m,2H),3.85-3.98(m,2H),4.02-4.22(m,3H)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯7.5

向化合物7.4(80mg，0.23mmol)和中间体B(59mg，0.23mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加EDCI(90mg，0.47mmol)、HOAt(64mg，0.47mmol)和二异丙基乙胺(60mg，0.47mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，用乙酸乙酯(25mL)稀释，并用水(20mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Gemini 150x25mm.5μm；流动相：[溶剂A：水(0.05％氢氧化氨v/v)，溶剂B：MeCN]；B％：42％-72％，12min)。在用乙酸乙酯萃取后，获得呈白色固体的化合物7.5(50mg，37％产率，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),1.46(s,9H),1.54-1.57(m,1H),1.79-1.82(m,2H),2.01-2.04(m,1H),2.61-2.72(m,1H),2.83-2.93(m,1H),3.07(dd,2H),3.52(dd,2H),4.03-4.25(m,4H),4.28-4.31(m,1H),6.88(dd,1H),7.13(dd,1H),7.23(d,1H),7.38(d,1H),7.56(s,1H),8.05(dd,1H)。

实例2

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)棕榈酰胺

向化合物7.5(50mg，0.087mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(293mg，1.30mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用甲醇(5mL)稀释，用饱和水性碳酸氢钠调节至pH8-9，并用乙酸乙酯(3x25mL)萃取。将有机相合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈黄色固体的实例2(5.6mg，TFA盐，98.6％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.33(s,9H),1.84-2.10(m,4H),2.92(t,1H),3.08(d,2H),3.36(m,1H),3.49-3.53(m,2H),3.58-3.59(m,1H),4.10-4.20(m,2H),4.65-4.71(m,2H),6.89(dd,1H),7.14(dd,1H),7.24(d,1H),7.40(d,1H),7.54(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法8:rt 1.941min,(476[M+H]⁺),纯度98.6％。

实例3

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((R)-哌啶-3-基)棕榈酰胺

以类似于实例2的方式由(R)-3-氨基-1-boc-哌啶制备实例3。将最终化合物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-38％，8min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例3(58mg，TFA盐，64％产率，96.5％纯度，94.31％ee)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.33(s,9H),1.77-2.15(m,4H),2.85-2.95(m,1H),3.06-3.10(dd,2H),3.15-3.26(m,1H),3.33-3.40(m,1H),3.48-3.58(m,3H),3.98-4.42(m,3H),6.91(dd,1H),7.16-7.17(m,1H),7.23(d,1H),7.34-7.36(m,1H),7.59(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法6:rt 1.355min,[M+H]⁺＝476.3。

中间体C的合成

方案8

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]哌啶-1-甲酸酯8.1

在0℃下向化合物7.2(3.50g，12.22mmol)和DIEA(3.95g，30.56mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中添加三氟乙酸酐(3.08g，14.67mmol)。将混合物在20℃下搅拌0.5h，倒入水(60mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(40mL)和盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物8.1(3.60g，产率77％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29(t,3H),1.46(s,9H),1.52-1.59(m,2H),1.77-1.82(m,1H),2.01-2.09(m,1H),2.53(t,1H),2.68(t,1H),3.83-3.93(m,1H),3.96-4.14(m,4H),4.23-4.29(m,2H)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]乙酸8.2

在20℃下向化合物8.1(3.60g，9.41mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加氢氧化钠(377mg，9.41mmol)在水(10mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(60mL)中并用乙酸乙酯(80mL)洗涤。将水相用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x80mL)萃取。将有机相合并，用盐水(60mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物8.2(1.70g，51％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.46(s,9H),1.54-1.63(m,2H),1.76-1.84(m,1H),1.93-2.04(m,1H),2.49-2.80(m,2H),3.85-3.93(m,1H),3.96-4.12(m,3H),4.17-4.25(m,1H)。

(S)-叔丁基3-(2,2,2-三氟-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰胺基)哌啶-1-甲酸酯8.3

在20℃下向化合物8.2(627mg，1.77mmol)、EDCI(441mg，2.30mmol)和HOAt(313mg，2.30mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(687mg，5.31mmol)和中间体B(445mg，1.77mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:3洗脱，以给出呈黄色固体的化合物8.3(910mg，86％产率，98％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.43-1.49(m,9H),1.51-1.58(m,1H),1.74-1.91(m,2H),2.01-2.09(m,1H),2.61-2.76(m,1H),2.87-3.00(m,1H),3.02-3.14(m,2H),3.52(dd,2H),3.82-3.93(m,1H),3.96-4.06(m,1H),4.20-4.39(m,3H),6.88(dd,1H),7.10-7.18(m,1H),.7.20-7.28(m,1H),7.38(d,1H),7.57(d,1H),8.05(d,1H)。LC-MS方法1:rt0.916min,(588.3[M+H]⁺)。

中间体C

叔丁基(3S)-3-[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-yl]氨基]乙基]氨基]哌啶-1-甲酸酯

在20℃下向化合物8.3(1.30g，1.52mmol)在甲醇(20mL)和水(6mL)中的混合物中添加碳酸钾(632mg，4.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用乙酸乙酯(30mL)稀释并倒入水中(30mL)。添加1M盐酸直至pH＝3。除去有机相。将水相用碳酸氢钠碱化直至pH＝8并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x30mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1洗脱，以给出呈白色固体的中间体C(6 50mg，86％产率，99.5％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.39-1.53(m,11H),1.69-1.80(m,1H),1.96-2.01(m,1H),2.53-2.62(m,1H),2.70-2.93(m,1H),2.94-3.03(m,1H),3.08(dd,2H),3.45(s,2H),3.52(dd,2H),3.66-3.82(m,1H),3.86-4.02(m,1H),6.88(dd,1H),7.15(dd,1H),.7.25(d,1H),7.42(d,1H),7.60(s,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法1:rt 0.699min,(492.2[M+H]⁺)。

一般途径A

方案9

步骤1a：在室温下向羧酸(1.5至2.0当量)在DMF(1至5mL)中的溶液中添加EDCI(1.5至2.0当量)、HOAt(1.5至2.0当量)和DIEA(1.5至2.0当量)。然后添加中间体C(25-70mg，0.075-0.105mmol，1当量)。将所得混合物在室温下搅拌2至16h。TLC或LC-MS检测到反应。当反应结束时，将混合物倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将合并的有机相用1M盐酸(10mL)、盐水(10mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将粗产物直接用于下一步骤或通过硅胶柱色谱法纯化。

步骤1b：在室温下向羧酸(2.0至4.0当量)在二氯甲烷(1至5mL)中的溶液中添加Ghosez试剂(1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺)。将混合物搅拌4h，并在0℃下添加到中间体C(25-70mg，0.075-0.105mmol)和TEA(4.0至8.0当量)的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌16h。TLC或LC-MS检测到反应。当反应结束时，将混合物倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机相合并，用1M盐酸(10mL)、盐水(10mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将粗产物直接用于下一步骤或通过硅胶柱色谱法纯化。

步骤2：将在TFA/DCM(1/5，1至5mL)溶液中的来自步骤1的产物搅拌0.5至2h。通过TLC或LC-MS监测反应。当反应结束时，将混合物在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并冻干以提供终产物。

实例4

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1a，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，10min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例4(27mg，56％产率，TFA盐，99.7％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.84-1.93(m,4H),2.15-2.31(m,6H),2.41-2.52(m,1H),2.88-2.92(m,1H),3.06-3.18(m,3H),3.35-3.56(m,4H),3.99-4.18(m,1H),4.39-4.57(m,2H),6.91-6.93(m,1H),7.15-7.27(m,2H),7.40-7.42(m,1H),7.52-7.58(m,1H),8.05-8.07(m,1H)。LC-MS方法4:rt 1.884min,(486.1[M+H]⁺)。

实例5

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)环戊烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1a，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例5(27mg，42％产率，TFA盐，95.6％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.59-2.02(m,12H),2.85-2.93(m,1.5H),3.05-3.17(m,3.5H),3.33-3.55(m,4H),4.03-4.19(m,1H),4.34-4.51(m,2H),6.89-6.93(m,1H),7.15-7.26(m,2H),7.40(t,1H),7.55(d,1H),8.06(d,1H)。LC-MS方法4:rt1.973min,(488.2[M+H]⁺)。

实例6

2-氟-2-甲基-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-N-[(3S)-3-哌啶基]丙酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，10min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例6(20mg，40％产率，TFA盐，99.3％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.55-1.73(m,6H),1.77-2.13(m,4H),2.85-2.96(m,1H),3.04-3.13(m,2H),3.14-3.28(m,1H),3.32-3.37(m,1H),3.46-3.60(m,3H),4.04-4.21(m,1H),4.35-4.48(m,1.5H),4.68-4.79(m,0.5H),6.87-6.94(m,1H),7.13-7.21(m,1H),7.21-7.27(m,1H),7.34-7.44(m,1H),7.51-7.59(m,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法6:rt 1.519min,(480.3[M+H]⁺)。

实例7

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例7(23mg，44％产率，TFA盐，99.2％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.33-1.46(m,4H),1.88-2.01(m,4H),2.91-2.99(m,1H),3.03-3.25(m,3H),3.36-3.57(m,4H),4.05-4.25(m,1.5H),4.62-4.78(m,1.5H),6.92(dd,1H),7.18(d,1H),7.23-7.31(m,1H),7.41(d,1H),7.52-7.71(m,1H),8.08(dd,1H)。LC-MS方法8:rt 1.944min,(528.2[M+H]⁺)。

实例8

1-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)环丁烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例8(12mg，22％产率，TFA盐，99.1％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.46-1.52(d,3H),1.68-2.09(m,8H),2.46-2.60(m,2H),2.90(t,1H),3.05-3.19(m,3H),3.32-3.58(m,4H),3.89-4.15(m,3H),6.89(dd,1H),7.22(t,1H),7.26(t,1H),7.45(t,1H),7.59(d,1H),8.06(d,1H)。LC-MS方法6:rt 1.570min,(488.3[M+H]⁺)。

实例9

3,3,3-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例9(30mg，38％产率，TFA盐，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.59(s,6H),1.73-1.89(m,1H),1.91-2.13(m,3H),2.91(td,1H),3.09(dd,2H),3.21-3.29(m,1H),3.33-3.38(m,1H),3.46-3.61(m,3H),4.00-4.48(m,3H),6.90(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(d,1H),7.40(dd,1H),7.55(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.988min,(430.1[M+H]⁺)。

实例10

2-氰基-2-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙烯酰胺

一般途径A，使用中间体C(60mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例10(14mg，38％产率，TFA盐，97.2％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.58-1.73(m,6H),1.82-2.29(m,4H),2.85-3.00(m,1H),3.08(d,2H),3.18-3.29(m,1H),3.34-3.44(m,1H),3.52(dd,2H),3.57-3.74(m,1H),4.00-4.29(m,2H),4.50-4.72(m,1H),6.90(dd,1H),7.15(d,1H),7.24(d,1H),7.36-7.44(m,1H),7.49-7.61(m,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.764min,[M+H]⁺487.1。

实例11

2-甲氧基-2-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙烯酰胺

一般途径A，使用中间体C(60mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例11(31mg，53％产率，TFA盐，98.3％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.35-1.52(m,6H),1.75-2.18(m,4H),2.91(t,1H),3.01-3.24(m,4H),3.34-3.42(m,3H),3.47-3.66(m,3H),3.90-4.28(m,2H),4.65-4.77(m,0.5H),5.24-5.33(m,0.5H),6.90(t,1H),7.11-7.29(m,2H),7.39(d,1H),7.56(d,1H),8.06(d,1H)。LC-MS方法6:rt 1.499min,[M+H]⁺。

一般途径B

方案10

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.2a

向1-(三氟甲基)环丁烷甲酸(10.1a)(150mg，0.89mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中添加草酰氯(0.2mL)和DMF(6.39mg，0.087mmol)。将混合物在15℃下搅拌1h并在15℃下浓缩。将残余物用二氯甲烷(2mL)溶解，并在0℃下添加到化合物7.2(150mg，0.52mmol)和三乙胺(0.3mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将混合物在15℃下搅拌2h，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至3:1)，以得到呈白色固体的化合物10.2a(130mg，57％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29(t,3H),1.47(s,9H),1.50-1.60(m,2H),1.74-1.95(m,2H),1.99-2.18(m,2H),2.43-2.67(m,4H),2.72-2.86(m,2H),3.44-3.50(m,1H),3.90-3.99(m,2H),4.06-4.35(m,4H)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)乙酸10.3a

向化合物10.2a(130mg，0.31mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化钠(62mg，1.54mmol)。将混合物在15℃下搅拌6h，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物10.3a(110mg，87％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.46(s,9H),1.50-1.58(m,2H),1.73-1.81(m,1H),1.83-1.93(m,1H),1.95-2.02(m,1H),2.12-2.17(m,1H),2.43-2.84(m,6H),3.43-3.51(m,1H),4.00(s,2H),4.10-4.35(m,2H)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4a

向化合物10.3a(100mg，0.24mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(79mg，0.61mmol)、HOAt(43mg，0.32mmol)、EDCI(61mg，0.32mmol)和中间体B(61mg，0.24mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h，倒入水(50mL)中并且用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色固体的化合物10.4a(130mg，粗品)。LC-MS方法10:rt 0.981min,(664.4[M+Na]⁺)。

实例12

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺10.5a

向化合物10.4a(100mg，0.16mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在25℃下搅拌30min并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：15％-45％，5min)。在冷干后，获得呈白色固体的化合物10.5a(89.10mg，84.9％产率，TFA盐，97.4％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.72-2.24(m,6H),2.51-2.68(m,2H),2.75-2.96(m,3H),3.08-3.16(m,2H),3.19-3.22(m,0.5H),3.34-3.40(m,1H),3.51-3.57(m,3H),3.63-3.67(m,0.5H),3.85-3.96(m,1H),4.09-4.28(m,2H),6.92(dd,1H),7.17-7.19(m,1H),7.25-7.30(m,1H),7.40-7.44(m,1H),7.55-7.64(m,1H),8.07-8.08(m,1H)。LC-MS方法4:rt 2.001min,(542.1[M+H]⁺)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.2b

在20℃下向4,4,4-三氟-2,2-二甲基-丁酸(10.1b)(370mg，2.17mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加1-氯-N,N,2-三甲基-丙-1-烯-1-胺(406mg，3.04mmol)。将混合物在20℃下搅拌4h，并在20℃下添加到化合物7.2(623mg，2.17mmol)和三乙胺(660mg，6.52mmol)在DCM(6mL)中的溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：52％-82％，9min)。在冻干后，获得呈无色油的化合物10.2b(35mg，3％产率，92％纯度)。LC-MS方法1:rt 1.006min,[M+Na]⁺461.3。

钠(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酰胺基)乙酸酯10.3b

在20℃下向化合物10.2b(35mg，0.080mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(6.39mg，0.16mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用1M盐酸调节至pH8，并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体的化合物10.3b(Na盐)(35mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。LC-MS方法1:rt 0.881min,[M+H]⁺433.1

(S)-叔丁基3-(4,4,4-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丁酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4b

在20℃下向化合物10.3b(Na盐)(35mg，0.081mmol)、EDCI(23mg，0.12mmol)和HOAt(16mg，0.12mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIEA(21mg，0.16mmol)，随后添加中间体B(20mg，0.081mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(20mL)和盐水(4x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型TLC纯化(乙酸乙酯)，以提供呈白色固体的化合物10.4b(20mg，37％产率，96.7％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.947min,[M+H]⁺644。

实例13

4,4,4-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丁酰胺10.5b

在20℃下向化合物10.4b(20mg，0.031mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(320μL)。将混合物搅拌30min并在真空下浓缩，以给出残余物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈灰白色固体的化合物10.5b(5mg，23％产率，TFA盐，96.7％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.43(s,6H),1.73-1.89(m,1H),1.92-2.13(m,3H),2.58-2.76(m,2H),2.91(t,1H),3.09(dd,2H),3.33-3.40(m,2H),3.45-3.59(m,3H),3.90-4.49(m,3H),6.89(dd,1H),7.15(d,1H),7.24(d,1H),7.40(d,1H),7.56(s,1H),8.06(d,1H)。LC-MS(长酸性方法3)：方法9rt 2.445min,[M+H]⁺544.3。

根据方案10A制备羧酸10.1c，并用于通过一般途径B合成实例14

方案10A

甲基4-乙基四氢-2H-吡喃-4-甲酸酯10A.2

在氮气下，在-70℃下向化合物10A.1(3.00g，20.8mmol)在THF(30mL)中的溶液中逐滴添加2M LDA(13.53mL)。在氮气下，将混合物在-70℃下搅拌1h。在-70℃下将碘乙烷(4.87g，31.2mmol)逐滴添加到混合物中。将所得混合物在-70℃下搅拌30min，使其温热至20℃并再搅拌2h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1洗脱，以提供呈无色油的化合物10A.2(3.50g，98％产率)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ0.79(t,3H),1.41-1.50(m,2H),1.55(q,2H),2.04(dd,2H),3.40(td,2H),3.69(s,3H),3.80(dt,2H)。

4-乙基四氢吡喃-4-甲酸10.1c

在20℃下向化合物10A.2(3.50g，20.3mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加氢氧化钠(813mg，20.3mmol)在水(10mL)中的溶液。将混合物加热至80℃并搅拌16h。将其倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物10.1c(2.10g，65％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.90(t,3H),1.47-1.57(m,2H),1.63(q,2H),2.06(dd,2H),3.52(td,2H),3.87(dt,2H)。

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-(4-乙基四氢吡喃-4-羰基)氨基]哌啶-1-甲酸酯10.2c

在20℃下向化合物10.1c(414.3mg，2.62mmol)和DMF(7.66mg，0.10mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加亚硫酰氯(1.87g，15.7mmol)，并搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物用二氯甲烷(3mL)溶解，并在0℃下添加到化合物7.2(300mg，1.05mmol)和三乙胺(636mg，6.29mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机相用0.1M盐酸(30mL)、盐水(2x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:3洗脱，以提供呈无色油的化合物10.2c(90mg，17％产率，83.2％纯度)。¹HNMR(CD₃OD,400MHz)δ0.95(t,3H),1.29(t,3H),1.46(s,9H),1.59-1.80(m,9H),1.89-1.98(m,1H),2.11-2.30(m,2H),2.42-2.80(m,2H),3.59-3.71(m,2H),3.76-3.96(m,4H),3.98-4.08(m,1H),4.19(q,2H)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(4-乙基四氢吡喃-4-羰基)氨基]乙酸10.3c

在20℃下向化合物10.2c(90mg，0.18mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加氢氧化钠(35mg，0.88mmol)在水(1mL)中的溶液。将混合物搅拌2h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物10.3c(70mg，95％产率，95.1％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.864min,(421.2[M+Na]⁺)。

(S)-叔丁基3-(4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4c

在20℃下向化合物10.3c(70mg，0.18mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)和HOAt(36mg，0.26mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(68mg，0.53mmol)，随后添加中间体B(44mg，0.18mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(20mL)、盐水(2x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物10.4c(90mg，73％产率，90.3％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ0.96(t,3H),1.47(s,9H),1.51-1.62(m,3H),1.70-1.84(m,4H),1.89-1.97(m,1H),2.15-2.22(m,1H),2.25-2.35(m,1H),2.56-2.75(m,1H),2.87-2.98(m,1H),3.07(dd,2H),3.52(dd,2H),3.63-3.84(m,4H),3.92-4.11(m,4H),4.20(d,1H),6.88(dd,1H),7.14(dd,1H),7.23(d,1H),7.37(dd,1H),7.58(s,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法1:rt 0.934min,(632.4[M+H]⁺)。

实例14

4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺10.5c

在20℃下向化合物10.4c(70mg，0.11mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加TFA(0.4mL)，将混合物搅拌30min并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，10min)。在冷干后，获得呈白色固体的化合物10.5c(41mg，57％产率，TFA盐，99.8％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ0.93(t,3H),1.51-1.66(m,2H),1.70-2.11(m,6H),2.12-2.27(m,2H),2.91(td,1H),3.09(dd,2H),3.15-3.30(m,1H),3.34-3.40(m,1H),3.46-3.57(m,3H),3.63(q,2H),3.72-3.84(m,2H),3.91-4.60(m,3H),6.91(dd,1H),7.17(d,1H),7.24(d,1H),7.39(d,1H),7.56(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.820min,(532.2[M+H]⁺)。

中间体D和E的合成

方案11

4-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-1-甲酸酯11.2a

向化合物11.1a(730mg，2.63mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加DMF(19mg，0.26mmol)和亚硫酰氯(1.91mL)。将混合物在15℃下搅拌1h并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(5mL)中，并添加到化合物7.2(660mg，2.30mmol)和三乙胺(727mg，7.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。将混合物在10℃下搅拌32h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过反相快速色谱法纯化[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]B％：0至95％，以得到呈无色油的化合物11.2a(400mg，30％产率，93.9％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.27(t,3H),1.34(s,3H),1.45(s,9H),1.51-1.60(m,6H),1.78-1.95(m,2H),2.13-2.25(m,2H),2.53-2.68(m,2H),3.29(br.s,2H),3.74-3.95(m,4H),3.95-4.05(m,1H),4.18(q,2H),5.12(s,2H),7.31-7.36(m,5H)。

(S)-2-(1-((苄基氧基)羰基)-N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4-甲基哌啶-4-甲酰胺基)乙酸11.3a

向化合物11.2a(760mg，1.39mmol)在四氢呋喃(3mL)、甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(111mg，2.79mmol)。将混合物在70℃下搅拌30min，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色油的化合物11.3a(720mg，96％产率，95.7％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.848min,(518.4[M+H]⁺)。

苄基4-(((S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-1-甲酸酯11.4a

向化合物11.3a(720mg，1.39mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(539mg，4.17mmol，3当量)、HOAt(246mg，1.81mmol，1.3当量)、EDCI(347mg，1.81mmol，1.3当量)和中间体B(400mg，1.59mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.225％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：45％-75％，10min)。在用乙酸乙酯(3x50mL)萃取后，获得呈白色固体的化合物11.4a(460mg，44％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.39(s,3H),1.44(s,9H),1.50-1.61(m,3H),1.81-1.90(m,3H),2.14-2.27(m,2H),2.60-2.95(m,2H),3.03(dd,2H),3.30-3.36(m,2H),3.62(dd,2H),3.75-3.88(m,2H),3.93-4.04(m,2H),4.06-4.20(m,3H),5.12(s,2H),6.84(dd,1H),7.10(dd,1H),7.17-7.19(m,1H),7.21-7.26(m,1H),7.33-7.36(m,5H),7.50(br.s,1H),8.07-8.09(m,1H),8.62-9.00(m,2H)。

中间体D

(S)-叔丁基3-(4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯

向化合物11.4a(500mg，0.67mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加TFA(76mg，0.67mmol)和10％Pd/C(50mg)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液浓缩，以得到呈白色固体的中间体D(410mg，99％产率，TFA盐，99.3％纯度)。1H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.45(s,3H),1.49(s,9H),1.55-1.84(m,6H),1.97(m,1H),2.41(d,1H),2.44-3.06(m,4H),3.11(d,2H),3.25-3.31(m,1H),3.38-3.41(m,1H),3.54(dd,2H),4.03-4.21(m,5H),6.91(dd,1H),7.16(dd,1H),7.26(d,1H),7.40(d,1H),7.65(s,1H),8.08(dd,1H)。LC-MS方法1:rt 0.744min,(617.5[M+H]⁺)。

实例15

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺

向化合物中间体D(40mg，0.065mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)。将混合物在25℃下搅拌30min，浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：LunaC18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-27％，7min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例15(21mg，43％产率，双-TFA盐，99.0％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.46(s,3H),1.70-2.05(m,6H),2.36-2.41(m,2H),2.91-2.96(m,1H),3.10(dd,2H),3.17-3.31(m,5H),3.38-3.41(m,1H),3.53(dd,3H),4.11-4.47(m,3H),6.91(dd,1H),7.16(dd,1H),7.25(d,1H),7.39(d,1H),7.60(s,1H),8.08(dd,1H)。LC-MS方法6:rt 1.013min,(517.3[M+H]⁺)。

中间体E

上文详细描述的程序适用于中间体E的类似合成，下文给出了针对其的数据和关键程序细节。

苄基4-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基甲酰基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸酯11.2b

通过硅胶柱色谱法进行最终纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝12:1至3:1洗脱，给出呈黄色油的化合物11.2b。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.96(t,3H),1.27(t,3H),1.44-1.47(m,9H),1.55-1.80(m,9H),1.89-1.94(m,1H),2.20-2.32(m,2H),2.51-2.69(m,2H),3.10-3.30(m,2H),3.86-4.03(m,5H),4.20(q,2H),5.12(s,2H),7.28-7.38(m,5H)。

2-[(1-苄基氧基羰基-4-乙基-哌啶-4-羰基)-[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]氨基]乙酸11.3b

获得呈黄色固体的粗品11.3b。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.94(t,3H),1.38-1.47(m,12H),1.56-1.75(m,5H),1.93(dd,2H),2.23(dd,2H),2.50-2.75(m,2H),3.05-3.25(m,2H),3.83-4.05(m,5H),5.12(s,2H),7.28-7.38(m,5H)。

苄基4-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基甲酰基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸酯11.4b

通过硅胶柱色谱法进行纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝3:1至0:1洗脱，给出呈黄色油的化合物11.4b。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.94(t,3H),1.40-1.47(m,12H),1.66-1.94(m,7H),2.23-2.36(m,2H),2.50-2.70(m,1H),2.99-3.08(m,3H),3.15-3.25(m,2H),3.58-3.64(m,2H),3.95-4.11(m,5H),5.11(s,2H),6.82(dd,1H),7.09(dd,1H),7.15-7.17(m,1H),7.29-7.37(m,5H),7.44-7.52(m,1H),8.02(s,1H),8.06(d,1H),8.81(br.s,1H)。

中间体E

叔丁基(3S)-3-[(4-乙基哌啶-4-羰基)-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]哌啶-1-甲酸酯

将中间体E不经纯化作为黄色油分离出来。

一般途径C

方案12

实例16

1-乙酰基-4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2a

向乙酸(10mg，0.16mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(52mg，0.40mmol)、EDCI(32mg，0.16mmol)和HOAt(22mg，0.16mmol)。添加中间体D(50mg，0.81mmol)，并将混合物在20℃下搅拌12h，用水(10mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物12.1a，将其溶于二氯甲烷(1mL)中并添加三氟乙酸(0.2mL)。将混合物在20℃下搅拌5min，在真空下浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：15％-32％，7min)。在冻干后，获得呈白色固体的化合物12.2a(24mg，45％产率，TFA盐，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.41(s,3H),1.53-1.58(m,2H),1.78-1.90(m,1H),1.97-2.15(m,6H),2.17-2.30(m,2H),2.91-2.97(m,1H),3.10(dd,2H),3.16-3.30(m,2H),3.38(d,1H),3.47-3.57(m,4H),3.68-3.71(m,1H),3.97-4.52(m,4H),6.91(dd,1H),7.16-7.18(m,1H),7.26(d,1H),7.40-7.43(m,1H),7.57(s,1H),8.07(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.777min,(559.2[M+H]⁺)。

实例17

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-甲基吡啶基-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2b

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法并从中间体D(50mg)起始，制备化合物12.2b。直接使用化合物12.1b而不经纯化。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：LunaC18 150x25mm 5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：17％-34％，7min)，并且冻干，得到呈白色固体的12.2b(23mg，34％产率，TFA盐，100.0％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.44(s,3H),1.56-1.71(m,2H),1.80-1.91(m,1H),1.96-2.21(m,4H),2.29-2.37(m,1H),2.93(t,1H),3.11(d,2H),3.35-3.60(m,8H),4.00-4.55(m,4H),6.92(dd,1H),7.17-7.19(m,1H),7.25(d,1H),7.41(d,1H),7.53-7.61(m,3H),7.98(td,1H),8.08(dd,1H),8.60(d,1H)。LC-MS方法4:rt 1.860min,(622.2[M+H]⁺)。

实例18

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-(2-(哌嗪-1-基)乙酰基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2c

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法并从中间体D(50mg)起始，制备化合物12.2c。直接使用化合物12.1c而不经纯化。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm 10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：1％-27％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的12.2c(29mg，36％产率，三-TFA盐，97.6％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.40(s,3H),1.48-1.64(m,2H),1.82-2.10(m,4H),2.14-2.31(m,2H),2.86-2.98(m,1H),3.07-3.26(m,7H),3.35-3.64(m,11H),3.70-4.21(m,5H),4.33-4.56(m,1H),6.89-6.92(m,1H),7.16-7.25(m,2H),7.35-7.40(m,1H),7.55-7.59(m,1H),8.05(d,1H)。LC-MS方法4:rt 1.472min,(643.3[M+H]⁺)。

实例19

1-乙酰基-4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法，从中间体E起始，制备标题化合物。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Luna C18 250x50mm10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：7％-32％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的产物(TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ0.90-0.99(m,3H),1.39-1.57(m,2H),1.69-1.88(m,3H),1.96-2.13(m,6H),2.20-2.40(m,2H),2.89-2.94(m,1H),3.14-3.11(m,3H),3.32-3.35(m,5H),3.51-3.55(m,2H),3.65-3.77(m,1H),3.95-4.60(m,3H),6.89(dd,1H),7.14(dd,1H),7.20-7.27(m,1H),7.35-7.43(m,1H),7.49-7.60(m,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法8:rt1.955min,(573.3[M+H]⁺)。

一般路径D

方案13

(S)-叔丁基3-(4-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯13.1a

在0℃下向中间体D(70mg，0.11mmol)和三乙胺(46mg，0.45mmol)在THF(1.5mL)中的溶液中添加三光气(30mg，0.10mmol)。将混合物在20℃下搅拌30min。在0℃下，添加甲胺(31mg，0.45mmol，HCl盐)和三乙胺(57mg，0.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌10min，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：33％-50％，7分钟)，以给出呈白色固体的化合物13.1a(35mg，41％产率，89.9％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.801min,(674.2[M+H]⁺)。

实例20

N1,4-二甲基-N4-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-N4-[(3S)-3-哌啶基]哌啶-1,4-二甲酰胺13.2a

向化合物13.1a(35mg，0.052mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。将混合物在25℃下搅拌30min，浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：6％-33％，10min)。冻干得到呈白色固体的化合物13.2a(13mg，43产率，TFA盐，98.6％纯度)。¹HNMR(CD₃OD,400MHz)δ1.38(s,3H),1.45-1.61(m,2H),1.73-1.91(m,1H),1.95-2.51(m,5H),2.70(s,3H),2.86-2.97(m,1H),3.08(d,2H),3.17-3.29(m,3H),3.36-3.40(m,1H),3.47-3.67(m,5H),4.07-4.43(m,3H),6.90(t,1H),7.16(d,1H),7.24(d,1H),7.39(d,1H),7.55(s,1H),8.05(d,1H)。LC-MS方法6:rt 1.457min,(574.4[M+H]⁺)。

实例21

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-4-甲酰胺13.2b

根据一般途径D，使用针对化合物13.2a描述的方法并使用吡咯烷作为胺组分(RR'NH)，制备化合物13.2b。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Synergi C18150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：3％-39％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的化合物13.2b(23mg，56％产率，TFA盐，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.38(s,3H),1.50-1.66(m,2H),1.76-1.96(m,6H),2.02-2.16(m,4H),2.92(t,1H),3.08(d,2H),3.16-3.25(m,3H),3.35-3.48(m,6H)3.49-3.55(m,4H),4.12-4.41(m,3H),6.87-6.91(m,1H),7.14(d,1H),7.23(d,1H),7.39(d,1H),7.55(s,1H),8.02-8.07(m,1H)。LC-MS方法4:rt2.028min,(614.2[M+H]⁺)。

一般途径E

方案14

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯14.1a

在0℃下向化合物7.2(150mg，0.52mmol)和三乙胺(185mg，1.83mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加三光气(155mg，0.52mmol)在四氢呋喃(1mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌30min。然后在0℃下添加吡咯烷(149mg，2.10mmol)，然后添加三乙胺(159mg，1.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:2)，以提供呈无色油的化合物14.1a(175mg，69％产率，79.1％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.27(t,3H),1.45(s,9H),1.49-1.61(m,2H),1.72-1.75(m,1H),1.81-1.87(m,4H),1.98(d,1H),2.54(t,1H),2.73(t,1H),3.35-3.41(m,5H),3.47-3.51(m,1H),3.80-3.99(q,2H),4.03-4.09(m,1H),4.18(q,2H)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)吡咯烷-1-甲酰胺基)乙酸14.2a

在20℃下向化合物14.1a(175mg，0.36mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(58mg，1.44mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将混合物搅拌1h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物14.2a(143mg，88％产率，79.1％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.818min,(356.2[M+H]⁺)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯14.3a

在20℃下向化合物14.2a(80mg，0.18mmol)、EDCI(51mg，0.27mmol)和HOAt(36mg，0.27mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(69.03mg，0.53mmol)，随后添加中间体B(45mg，0.18mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物14.3a(100mg，70％产率，73.7％纯度)。LC-MS方法1rt 0.829min,(589.4[M+H]⁺)。

实例22

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)吡咯烷-1-甲酰胺14.4a

在20℃下向化合物14.3a(50mg，0.085mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加溴化锌(478mg，2.12mmol)。将混合物搅拌15h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冷干后，获得呈黄色固体的化合物14.4a(7mg，14％产率，TFA盐，98.5％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.78-1.94(m,6H),2.03-2.06(m,2H),2.89(t,1H),3.08(dd,2H),3.09(t,1H),3.31-3.33(m,1H),3.37-3.40(m,4H),3.48-3.55(m,3H),3.91-3.97(m,1H),4.11(s,2H),6.90(dd,1H),7.16(dd,1H),7.24(d,1H),7.39(d,1H),7.55(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4rt 1.817min,(489.1[M+H]⁺)。

叔丁基4-乙酰基哌嗪-1-甲酸酯

在0℃下向叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(1.00g，5.37mmol)和三乙胺(815mg，8.05mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加乙酰氯(464mg，5.91mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中并且用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)、饱和碳酸氢钠(20mL)洗涤。将所得有机相用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈无色油的标题化合物(1.40g)，并不经进一步纯化而使用。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.47(s,9H),2.22(s,3H),3.39-3.44(m,6H),3.57-3.60(m,2H)。

1-乙酰基哌嗪盐酸盐

将4M HCl/二噁烷(20mL)中的叔丁基4-乙酰基哌嗪-1-甲酸酯(1.40g，6.13mmol)在20℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，以给出呈白色固体的标题化合物(1.00g，99％产率，HCl盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.16(s,3H),2.22-2.30(m,4H),3.82-3.84(m,4H)。

实例23

4-乙酰基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺14.4b

根据一般途径E，使用1-乙酰基哌嗪作为RR'NH和针对化合物14.4a详述的程序来制备化合物14.4b。将终产物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：2％-32％，9min)，随后冻干，以得到呈黄色胶的化合物14.4b(TFA盐，96.8％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.81-2.04(m,4H),2.10(s,3H),2.89(t,1H),3.11(dd,2H),3.16-3.26(m,4H),3.33-3.34(m,2H),3.48-3.61(m,7H),3.87-3.93(m,1H),4.13(s,2H),6.89(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(d,1H),7.38-7.40(m,1H),7.56(s,1H),8.06(d,1H)。LC-MS(长酸性方法1)：rt 1.795min,(546.2[M+H]⁺)。

方案15

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.2

在20℃下向化合物15.1(1.00g，5.37mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(986mg，5.91mmol)，随后添加三乙胺(1.36g，13.42mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(60mL)中并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x60mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:1洗脱，以提供呈无色油的化合物15.2(1.04g，71％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29(t,3H),1.46(s,9H),1.72-1.79(m,1H),1.96-2.05(m,1H),3.05-3.20(m,1H),3.28-3.39(m,2H),3.39-3.43(m,2H),3.44-3.56(m,2H),4.19(q,2H)。

叔丁基(3S)-3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.3

在20℃下向化合物15.2(500mg，1.84mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加DIEA(711mg，5.51mmol)，随后添加2,2-二甲基丙酰氯(266mg，2.20mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用0.2M盐酸(2x40mL)、饱和碳酸氢钠(40mL)和盐水(2x50mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物15.3(610mg，93％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29(t,3H),1.33(s,9H),1.47(s,9H),1.87-2.01(m,1H),2.10-2.19(m,1H),3.15(dd,1H),3.22-3.36(m,1H),3.44-3.71(m,2H),3.72-3.86(m,1H),3.87-4.01(m,1H),4.19(q,2H),4.81-4.93(m,1H)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基吡咯烷-3-基]-(2,2-二甲基丙酰基)氨基]乙酸15.4

向化合物15.3(300mg，0.84mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加氢氧化锂水合物(177mg，4.21mmol)在水(2mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌12h，用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL)萃取。将水相用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物15.4(270mg，98％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.34(s,9H),1.47(s,9H),1.91-2.04(m,1H),2.11-2.18(m,1H),3.14-3.24(m,1H),3.25-3.36(m,1H),3.48-3.75(m,2H),3.91(q,2H),4.81-4.92(m,1H)。

叔丁基(3S)-3-[2,2-二甲基丙酰基-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.5

在20℃下向化合物15.4(82mg，0.25mmol)、EDCI(69mg，0.36mmol)和HOAt(42mg，0.31mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(123mg，0.96mmol)，随后添加中间体A(60mg，0.24mmol)。然后将混合物在25℃下搅拌6h，倒入水(20mL)中并过滤。将滤饼溶于乙酸乙酯(20mL)中并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物15.5(80mg，51％产率)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),1.45(s,9H),2.06-2.25(m,2H),3.08(dd,2H),3.34-3.41(m,2H),3.47-3.59(m,3H),3.64(dd,1H),3.95-4.08(m,2H),4.92-5.06(m,1H),6.88(dd,1H),7.12(dd,1H),7.23(d,1H),7.38(d,1H),7.57(s,1H),8.05(dd,1H)。

实例24

N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-吡咯烷-3-基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物15.5(80mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(412mg，1.83mmol)，并搅拌20h。将混合物溶于甲醇(20mL)中，倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，并用乙酸乙酯(8x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(40mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-38％，8min)和制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-48％，9min)纯化。在冻干后，获得呈白色固体的实例24(27mg，38％产率，TFA盐，99.3％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.29(s,9H),2.15-2.30(m,1H),2.37-2.51(m,1H),3.03-3.06(m,3H),3.38-3.75(m,5H),3.87-4.72(m,3H),6.87-6.94(m,1H),7.14-7.20(m,1H),7.25(d,1H),7.35-7.42(m,1H),7.59(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法6:rt 1.385min,(462.1[M+H]⁺)。

方案16

叔丁基3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.2

向化合物16.1(200mg，0.93mmol)在THF(2mL)中的溶液中添加三乙胺(284mg，2.80mmol)和2-溴乙酸乙酯(172mg，1.03mmol)。将混合物在30℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝30:1至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物16.2(180mg，产率64％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.28(t,3H),1.45-1.47(m,9H),1.51-1.63(m,2H),1.72-1.89(m,4H),2.61-2.91(m,2H),3.11-3.20(m,1H),3.45-3.49(m,2H),3.54-3.80(m,2H),4.20(q,2H)。

叔丁基3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.3

向化合物16.2(180mg，0.60mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(387mg，3.00mmol)和新戊酰氯(94mg，0.78mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并且用二氯甲烷(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物16.3(220mg，粗品)。

叔丁基3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.4

向化合物16.3(220mg，0.57mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加水合氢氧化锂(120mg，2.86mmol)在水(2mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌2h，用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。丢弃有机层。然后将水相通过1M盐酸(5mL)酸化并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x30mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物16.4(180mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.34(s,9H),1.47(s,9H),1.58-1.69(m,2H),1.78-1.91(m,4H),3.15-3.35(m,2H),3.41-3.50(m,1H),3.85-3.93(m,3H),4.22-4.32(m,1H)。

叔丁基3-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.5

向化合物16.4(100mg，0.28mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(142mg，1.40mmol)、EDCI(81mg，0.42mmol)和HOAt(58mg，0.42mmol)。然后添加中间体A(71mg，0.28mmol)并将混合物在25℃下搅拌12h。将反应用水(10mL)淬灭，并将混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝0:1)，以给出呈黄色固体的化合物16.5(102mg，61％产率，99.2％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.39(s,9H),1.46(s,9H),1.59-1.67(m,2H),1.83-1.97(m,4H),2.99-3.09(m,2H),3.15-3.40(m,2H),3.58-3.66(m,3H),3.87-4.01(m,2H),4.15-4.40(m,2H),6.81-6.84(m,1H),7.05-7.10(m,1H),7.17-7.20(m,1H),7.22-7.25(m,1H),7.46-7.67(m,1H),7.87-7.93(m,1H),8.09-8.13(m,1H),8.91-9.01(m,1H)。LC-MS方法7:rt 0.953min,(590.4[M+H]⁺)。

实例25

N-(氮杂环庚烷-3-基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物16.5(100mg，0.17mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(573mg，2.54mmol)，并将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用甲醇(2mL)溶解，并添加水(10mL)。将混合物用饱和碳酸氢钠(3mL)碱化，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：23％-53％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例25(30mg，30％产率，TFA盐，99.7％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.28(s,9H),1.35-1.55(m,1H),1.77-1.87(m,1H),1.90-2.05(m,3H),2.17-2.20(m,1H),2.83-3.00(m,1H),3.11(d,2H),3.33-3.34(m,1H),3.40-3.46(m,1H),3.48-3.55(m,4H),3.75-3.90(m,1H),4.21(d,1H),6.87-6.91(m,1H),7.13-7.20(m,1H),7.25(d,1H),7.35-7.40(m,1H),7.58(d,1H),8.06(dd,1H)。LC-MSrt 2.068min,(490.3[M+H]⁺)。

方案17

叔丁基4-氨基氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.1

向化合物17.1(500mg，2.34mmol)和25％水性氢氧化铵(2.46g，17.58mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(80mg)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气氛(15psi)下，将所得混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用甲醇(30mL)稀释，过滤，并将滤液在真空下浓缩，以给出呈黄色油的化合物17.2(480mg，95％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.47(s,9H),1.51-1.66(m,3H),1.73-1.95(m,3H),2.87-2.96(m,1H),3.12-3.35(m,2H),3.39-3.44(m,1H),3.49-3.60(m,1H)。

叔丁基4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.3

在20℃下向叔丁基4-氨基氮己烷-1-甲酸酯17.2(250mg，1.17mmol)和三乙胺(295mg，2.92mmol)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(214mg，1.28mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1)，以得到呈黄色油的化合物17.3(210mg，59.9％产率)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)1.29(t,3H),1.46(s,9H),1.49-1.57(m,2H),1.70-1.95(m,4H),2.57-2.64(m,1H),3.18-3.40(m,2H),3.41(s,2H),3.43-3.57(m,2H),δ4.20(q,2H)。

叔丁基4-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.4

在20℃下向化合物17.3(210mg，0.70mmol)和N,N-二异丙基乙胺(226mg，1.75mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加2,2-二甲基丙酰氯(101mg，0.84mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.2M盐酸(30mL)和盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤和浓度得到呈黄色胶的化合物17.4(260mg，97％产率，100％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.27-1.28(m,3H),1.30(d,9H),1.48(d,9H),1.57-1.72(m,3H),1.85-1.92(m,1H),1.98-2.03(m,1H),2.09-2.20(m,1H),3.09-3.19(m,1H),3.38-3.50(m,2H),3.59-3.83(m,3H),4.12-4.21(m,3H)。

2-[(1-叔-丁氧基羰基氮杂环庚烷-4-基)-(2,2-二甲基丙酰基)氨基]乙酸17.5

向17.4(260mg，0.68mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加氢氧化钠(162mg，4.06mmol)在水(1mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌4h，倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将水相用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到呈黄色胶的化合物17.5(210mg，0.59mmol，87％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.31(d,9H),1.48(s,9H),1.66-1.97(m,5H),2.09-2.20(m,1H),3.07-3.15(m,1H),3.40-3.50(m,2H),3.63-3.95(m,3H),4.12-4.24(m,1H)。

叔丁基4-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.6

在20℃下向化合物17.5(104mg，0.29mmol)、EDCI(80mg，0.42mmol)和HOAt(49mg，0.36mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(126mg，0.98mmol)和中间体A(70mg，0.28mmol)。将混合物在20℃下搅拌3h，倒入水(20mL)中并过滤。将沉淀物通过过滤收集，溶于乙酸乙酯(40mL)中，并用无水硫酸钠干燥。过滤和在真空下浓缩得到呈黄色固体的化合物17.6(140mg，77％产率，90％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(d,9H),1.48(d,9H),1.93-1.69(m,4H),2.12-2.04(m,1H),2.28-2.16(m,1H),.3.06(dd,2H),3.20-3.12(m,1H),3.44-3.35(m,1H),3.51(dd,2H),3.75-3.57(m,2H),4.03-3.87(m,2H),4.30-4.17(m,1H),6.88(dd,1H),7.12(dd,1H),7.22(d,1H),7.40-7.38(m,1H),7.56(d,1H),8.05(dd,1H)。

LC-MS方法1:rt 0.946min,(612[M+Na]⁺)。

实例26

N-(氮杂环庚烷-4-基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物17.6(140mg，0.21mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加溴化锌(723mg，3.21mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，溶于甲醇(15mL)中，倒入饱和碳酸氢钠(30mL)中并用乙酸乙酯(8x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)，以得到呈白色固体的实例26(32mg，25％产率，TFA盐，98.7％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(s,9H),1.99-1.79(m,2H),2.25-2.04(m,3H),2.38-2.26(m,1H),3.08(dd,2H),3.28-3.15(m,2H),3.37-3.34(m,1H),3.46-3.39(m,1H),3.52(dd,2H),4.01(br s,2H),4.44(br s,1H),6.91(dd,1H),7.17(d,1H),7.23(d,1H),7.38(t,1H),7.57(d,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法1:rt 0.717min。

有关实例27、28和29的注释：相对立体化学通过框加粗(block bold)键和虚键指示，并且绝对立体化学由楔形加粗(wedge bold)键和虚键指示。因此，哌啶环周围的立体化学是相对的，并且衍生自中间体B的立体化学是绝对的。虽然示出了一种异构体，但是实例27、28和29是非对映异构体的混合物。相对立体化学在化合物名称中以S*和R*表示。

方案18

(3S*,5S*)-叔丁基3-((2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲基哌啶-1-甲酸酯18.2

向化合物18.1(200mg，0.94mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加10％Pd/C(10mg)、乙酸钠(192mg，2.34mmol)和2-氨基乙酸甲酯(235mg，1.88Mmol，HCl盐)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液倒入水中(20mL)。添加1M盐酸(10mL)，并将水性混合物用乙酸乙酯(2x20mL)洗涤。将水相用碳酸钠调节至pH8，并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，仅获得呈黄色油的外消旋反式异构体化合物18.2(150mg，56％产率)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ0.89(d,3H),1.30-1.38(m,1H),1.46(s,9H),1.71-1.76(m,1H),1.92-1.98(m,1H),2.25-2.50(m,1H),2.80(br.s,1H),3.00-3.23(m,1H),3.39-3.60(m,3H),3.73(s,3H),3.80-3.93(m,1H)。

(3S*,5S*)-叔丁基3-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-5-甲基哌啶-1-甲酸酯18.3

在0℃下向化合物18.2(170mg，0.59mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加DIEA(192mg，1.48mmol)和新戊酰氯(143mg，1.19mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，通过添加水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物18.3(218mg，粗品)。

2-(N-((3S*,5S*)-1-(叔-丁氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸18.4

向化合物18.3(210mg，0.57mmol)在甲醇(6mL)和水(2mL)中的溶液中添加氢氧化钠(45mg，1.13mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(30mL)中并用二氯甲烷(20mL)洗涤。将水相用1M盐酸(10mL)酸化并且用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物18.4(200mg，99％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.08(dd,3H),1.34(s,9H),1.45(m,10H),1.78-1.86(m,2H),2.13-2.18(m,1H),2.67-2.87(m,2H),3.81-3.85(m,1H),3.93-3.99(m,1H),4.16-4.32(m,2H)。

(3S*,5S*)-叔丁基3-甲基-5-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯18.5

向化合物18.4(180mg，0.50mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIEA(163mg，1.26mmol)、HOAt(89mg，0.66mmol)、EDCI(126mg，0.66mmol)和中间体B(127mg，0.50mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物通过添加水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1洗脱，以提供呈白色固体的化合物18.5(170mg，54％产率，95.1％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.09(d,3H),1.35(s,9H),1.46(s,9H),1.75-1.88(m,1H),1.95-2.05(m,1H),2.09-2.18(m,1H),2.86-2.96(m,2H),3.08(dd,2H),3.52(dd,2H),3.79-3.87(m,1H),4.01(br.s,2H),4.28-4.41(m,2H),6.88(dd,1H),7.13(dd,1H),7.22(d,1H),7.36-7.38(m,1H),7.56(s,1H),8.05(dd,1H)。LCMS方法1:rt 0.975min,(590.2[M+H]⁺)。

实例27

N-((3S*,5S*)-5-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物18.5(80mg，0.14mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(458mg，2.03mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应通过添加水(50mL)淬灭，并将混合物用碳酸钠粉末调节至pH10。用乙酸乙酯(2x30mL)萃取悬浮液。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例27(24mg，29％产率，TFA盐，97.1％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.05-1.26(m,3H),1.33(s,9H),1.57-1.94(m,1H),2.05-2.22(m,1H),2.26-2.64(m,1H),3.06-3.11(m,2H),3.12-3.30(m,2H),3.42-3.60(m,3H),3.89-4.84(m,4H),6.89(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(d,1H),7.35-7.43(m,1H),7.57(d,1H),8.06(dd,1H)。LCMS方法4:rt 1.964min,(490.2[M+H]⁺)。

实例28

N-((3S*,6S*)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

使用针对实例27描述的程序制备目标，从2-甲基-2-丙基2-甲基-5-氧代-1-哌啶甲酸酯起始。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Luna C18 150x25mm 5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)，给出呈白色固体的实例28(40mg，39％产率，TFA盐，98.8％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32-1.34(m,12H),1.59-1.63(m,1H),2.02-2.12(m,3H),3.10(dd,2H),3.18-3.22(m,1H),3.48-3.57(m,3H),3.96-4.21(m,2H),4.33-4.77(m,2H),6.89(dd,1H),7.15(d,1H),7.23(d,1H),7.39(dd,1H),7.59(d,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4:rt1.87min,(490.2[M+H]⁺)。

方案19

(2R*,5S*)-苄基5-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯19.2

在20℃下向化合物19.1(300mg，1.21mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加三乙胺(183mg，1.81mmol)和2-溴乙酸乙酯(222mg，1.33mmol)。将混合物在20℃下搅拌15h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1洗脱，以给出呈无色油的化合物19.2(301mg，产率74％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.15(d,3H),1.27(t,3H),1.40-1.57(m,2H),1.66-1.85(m,2H),2.44-2.67(m,2H),2.96-3.23(m,1H),3.45(s,2H),4.06-4.24(m,3H),4.38-4.54(m,1H),5.14(s,2H),7.28-7.41(m,5H)。

(2R*,5S*)-苄基5-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯19.3

在0℃下向化合物19.2(300mg，0.90mmol)和三乙胺(272mg，2.69mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加新戊酰氯(195mg，1.61mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1洗脱，以给出呈无色油的化合物19.3(240mg，产率64％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.16-1.21(m,3H),1.24-1.33(m,12H),1.64-1.88(m,4H),2.81-2.99(m,1H),3.74-4.08(m,3H),4.14-4.26(m,3H),4.39-4.60(m,1H),5.00-5.24(m,2H),7.29-7.41(m,5H)。

2-(N-((3S*,6R*)-1-((苄基氧基)羰基)-6-甲基哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸19.4

在20℃下向化合物19.3(210mg，0.50mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(110mg，2.75mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中，用盐酸将pH调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取所得混合物。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物19.4(140mg，71％产率)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.20-1.33(m,12H),1.65-2.03(m,4H),2.96-3.16(m,1H),3.90-4.22(m,4H),4.42-4.50(m,1H),5.05-5.20(m,2H),7.21-7.42(m,5H)。

(2R*,5S*)-苄基2-甲基-5-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯19.5

在20℃下向化合物19.4(70mg，0.18mmol)、EDCI(52mg，0.27mmol)和HOAt(37mg，0.27mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(93mg，0.72mmol)，随后添加中间体B(45mg，0.17mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，用0.1M盐酸(20mL)、盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:5洗脱，以给出呈白色固体的化合物19.5(74mg，66％产率，99.7％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.22-1.34(m,12H),1.67-1.89(m,3H),2.01-2.08(m,1H),3.01-3.19(m,3H),3.52(dd,2H),3.97-4.11(m,3H),4.18-4.27(m,1H),4.40-4.50(m,1H),5.00-5.23(m,2H),6.88(dd,1H),7.12(d,1H),7.22(d,1H),7.27-7.40(m,6H),7.56(s,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS方法1:rt 0.929min,(624.4[M+H]⁺)。

实例29

N-((3S*,6R*)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物19.5(74mg，0.12mmol)和三氟乙酸(14mg，0.12mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(20mg)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气球囊(15psi)下，将所得混合物在20℃下搅拌3h。通过过滤除去催化剂，并将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例29(23mg，33％产率，TFA盐，99.1％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(s,9H),1.42(d,3H),1.82-2.24(m,4H),3.09(dd,2H),3.35-3.42(m,1H),3.46-3.62(m,4H),3.90-4.58(m,3H),6.90(dd,1H),7.16(dd,1H),7.24(d,1H),7.38(d,1H),7.59(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.996min,(490.2[M+H]⁺)。

方案20

叔丁基6-氧代-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.2

在20℃下向化合物20.1(200mg，0.94mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(477mg，1.13mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入饱和水性亚硫酸钠(20mL)中，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用饱和水性碳酸氢钠(20mL)和盐水(2x20mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1洗脱，以给出呈白色固体的化合物20.2(129mg，产率65％)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ1.46(s,9H),1.72(d,1H),1.85-1.95(m,1H),2.01(dd,1H),2.18-2.27(m,1H),2.84(s,1H),3.06-3.26(m,1H),3.43-3.49(m,1H),4.04-4.34(m,1H)。

叔丁基6-((2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.3

在20℃下向化合物20.2(129mg，0.61mmol)和乙酸钠(110mg，1.34mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(20mg)和甘氨酸甲酯盐酸盐(109mg，1.22mmol)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊(15psi)下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液倒入水中(20mL)。将混合物用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将水相用饱和水性碳酸钠调节至pH10。将所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物20.3(155mg，89％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.91(dt,1H),1.11-1.53(m,10H),1.62-1.71(m,1H),2.04-2.14(m,1H),2.40-2.51(m,1H),2.99(dd,1H),3.08-3.21(m,1H),3.25-3.45(m,2H),3.53-3.78(m,4H),4.20&4.30(s,1H)。

叔丁基6-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.4

在0℃下向化合物20.3(155mg，0.55mmol)和三乙胺(165mg，1.64mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加新戊酰氯(13mg，1.09mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物20.4(179mg，产率89％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.28-1.33(m,9H),1.45(s,9H),1.52-1.61(m,3H),2.07-2.18(m,1H),2.52-2.66(m,1H),2.93-3.06(m,1H),3.30-3.65(m,2H),3.71(s,3H),4.20&4.30(s,1H),4.60(s,2H)。

2-(N-(2-(叔-丁氧基羰基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚-6-基)棕榈酰胺基)乙酸20.5

在20℃下向化合物20.4(179mg，0.49mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加水(1.5mL)中的氢氧化钠(78mg，1.94mmol)。将混合物在20℃下搅拌15h，倒入水(20mL)中并用1M盐酸调节至pH4。将所得混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将化合物20.5作为无色油分离出来(145mg，84％产率)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.26-1.34(m,9H),1.40-1.49(m,9H),1.50-1.66(m,2H),1.68-1.79(m,1H),2.05-2.19(m,1H),2.61(s,1H),2.98-3.17(m,1H),3.34-3.43(m,1H),4.01-4.20(m,1H),4.22-4.38(m,1H),4.60-4.78(m,2H)。

叔丁基6-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.6

在20℃下向化合物20.5(145mg，0.41mmol)、EDCI(117.64mg，0.61mmol)和HOAt(84mg，0.61mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIEA(211mg，1.64mmol)和中间体B(113mg，0.45mmol)。将混合物在20℃下搅拌4h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物20.6(210mg，87％产率，94.4％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.908min,(588.3[M+H]⁺)。

实例30

N-(2-氮杂二环[2.2.1]庚-6-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2，3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物20.6(100mg，0.17mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(958mg，4.25mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，并在真空下除去挥发物。将残余物溶于甲醇(10mL)中并倒入水(10mL)中。将悬浮液用饱和水性碳酸钠调节至pH10，并用乙酸乙酯(5x50mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈灰白色固体的实例30(30mg，28％产率，TFA盐，96.3％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.28-1.34(m,9H),1.66-1.80(m,2H),1.95-2.02(m,1H),2.10-2.23(m,1H),2.73(s,1H),3.07-3.20(m,3H),3.31-3.34(m,1H),3.52(dd,2H),4.03-4.11(m,1H),4.25-4.88(m,2H),4.65&4.62(s,1H),6.91(dd,1H),7.17(d,1H),7.28(d,1H),7.42(t,1H),7.62(d,1H),8.07(dd,1H)。LC-MS方法4:rt 1.988min,(488.2[M+H]⁺)。

方案21

叔丁基2-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.2

向化合物21.1(150mg，0.66mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加三乙胺(80mg，0.80mmol)和2-溴乙酸乙酯(122mg，0.73mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.2(188mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.28(t,3H),1.47(s,9H),1.65-2.05(m,8H),3.43(s,2H),3.98-4.33(m,5H)。

叔丁基2-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.3

向化合物21.2(188mg，0.60mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加DIEA(101mg，0.78mmol)和新戊酰氯(87mg，0.72mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，倒入水(10mL)中并且用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.3(207mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.25(t,3H),1.35(s,9H),1.45(s,9H),1.83-1.98(m,8H),3.87(d,1H),4.16-4.23(m,3H),4.35-4.40(m,3H)。

2-(N-(8-(叔-丁氧基羰基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-基)棕榈酰胺基)乙酸21.4

向化合物21.3(200mg，0.50mmol)在甲醇(4mL)和水(2mL)中的溶液中添加氢氧化钠(81mg，2.02mmol)。将混合物在20℃下搅拌15h，倒入水(10mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(10mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.4(99mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.36(s,9H),1.46(s,9H),1.82-2.01(m,8H),3.95-4.53(m,5H)。

叔丁基2-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.5

向化合物21.4(80mg，0.22mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(70mg，0.54mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)、HOAt(35mg，0.26mmol)和中间体B(56mg，0.22mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，倒入水(10mL)中，用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1洗脱，以得到呈黄色固体的化合物21.5(86mg，66％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.40(s,9H),1.46(s,9H),1.68-2.05(m,8H),3.00-3.07(m,2H),3.59-3.69(m,2H),4.13-4.53(m,5H),6.80-6.84(m,1H),7.05-7.10(m,1H),7.16-7.24(m,2H),7.41-7.65(m,1H),8.11(d,1H),8.46(br.s,1H)。

实例31A和31B

N-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物21.5(106mg，0.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(595mg，2.64mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h，倒入盐水(10mL)中，用饱和水性碳酸钠调节至pH10，并用5:1乙酸乙酯/甲醇(6x20mL)萃取。将有机层合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例31A(26mg，24％，TFA盐，97.2％纯度)-第一峰(非对映异构体)，较短的LCMS保留时间-和实例31B(12mg，14％产率，TFA盐，98.5％纯度)-第二峰(非对映异构体)，较长的LCMS保留时间。实例31A¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(s,9H),1.83-2.15(m,8H),3.09(dd,2H),3.52(dd,2H),4.03(d,1H),4.07-4.17(m,1H),4.39-4.42(m,1H),4.59(d,1H),4.72-4.81(m,1H),6.89(dd,1H),7.16(d,1H),7.25(d,1H),7.36(t,1H),7.56(d,1H),8.06(dd,1H)。LCMS(方法6):rt 1.588min,(502.3[M+H]⁺)。实例31B ¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.31(s,9H),1.60-1.64(m,1H),1.90-2.26(m,7H),3.14(dd,2H),3.53(dd,2H),3.64-3.67(m,1H),4.02-4.09(m,1H),4.27-4.37(m,1H),4.46(d,1H),4.62(d,1H),6.89(dd,1H),7.17(dd,1H),7.28(d,1H),7.39(d,1H),7.62(s,1H),8.06(dd,1H)。LCMS(方法6):rt 1.671min,(502.3[M+H]⁺)。

生物学测定

可以使用以下测定来测量本发明的化合物的作用。

cAMP/激动剂-拮抗剂在细胞系中的竞争测定

对化合物抑制配体诱导的cAMP升高的能力进行评估，使用珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)LANCE cAMP测定，使用表达目的特异性受体的可商购细胞，使用以下一般程序：

化合物制备

在添加到粉末原料中的二甲亚砜(DMSO-99.9％纯)中制备化合物(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)，目录号：D4540)，以产生20mM溶液(100％DMSO)，将其在37℃下超声处理10分钟以完全溶解化合物。将20mM原料进一步稀释在DMSO中，以产生2mM溶液，将其在37℃下超声处理10分钟。将2mM原料溶于测定/刺激缓冲液中，以产生400μM溶液，针对所有cAMP测定，将其在37℃下超声处理10分钟。所有原料储存在-20℃。然后进行连续稀释(稀释因子：10)以达到所需的实验浓度。

测定方案

根据制造商的说明，使用

TR-FRET cAMP测定试剂盒(珀金埃尔默公司，目录号：AD0264)进行竞争测定。将分子的连续稀释液(3μl/孔)铺板在384孔OptiPlate(珀金埃尔默公司，目录号：6007299)中。每个板中包括适当的对照(100％刺激：毛喉素和0％刺激：媒介物对照)(6μl/孔)，以进行数据归一化。在添加化合物之后，在每个孔中以2500个细胞/孔的所需密度添加6μl过表达G-蛋白偶联受体的细胞/Alexa Fluor抗体溶液(1:100稀释)。这些过表达细胞系购自英国伯明翰DiscoveRx公司。将板在1000rpm旋转1分钟并短暂涡旋后，将细胞在室温下与化合物一起预孵育30分钟(覆盖)。然后将3μl等效肽配体(EC₅₀剂量)添加到除媒介物和毛喉素对照之外的所有孔中。然后将板在1000rpm下旋转1分钟，并在结束后，将它们短暂涡旋并覆盖。在室温下在配体存在下将细胞刺激15分钟。在刺激后，向所有孔中添加12μl检测混合物(铕-螯合链霉亲和素/生物素化cAMP示踪剂溶液)，并在室温下孵育60分钟。然后在Enspire多模式读板器(珀金埃尔默公司)上读取板；记录320/340nm处激发和615/665nm处发射。

测定/刺激缓冲液(30mL)-pH 7.4

·28mL汉克氏平衡盐溶液(+MgCl₂，+CaCl₂)-(赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher)目录号：14170112)

·150μl HEPES(1M)-(赛默飞世尔科技公司目录号：15630080)

·400μl稳定剂(DTPA)纯化BSA(7.5％)-(珀金埃尔默公司，目录号：CR84-100)

·60μl IBMX(250mM)-(西格玛奥德里奇公司，目录号：I5879)

特异性cAMP/激动剂-拮抗剂竞争测定

使用上文程序运行以下特异性测定

AM₂受体抑制

使用上文方案评估化合物抑制表达AM₂受体的细胞(用CALCRL+RAMP3转染的1321N1细胞，源自DiscoverX目录号95-0169C6)中AM诱导的cAMP活化的能力进行评估。

该测定中化合物的活性在表4中阐述。

AM₁受体抑制

使用上文一般方案评估化合物抑制表达AM₁受体的细胞(用CALCRL+RAMP2转染的CHO-K1细胞，源自DiscoverX目录号93-0270C2)的AM诱导的活化的能力进行评估。

在该测定中测试的化合物通常展现出在5至5.7的范围内的pIC₅₀。

AMY₃受体抑制

使用上文一般方案评估化合物抑制表达AMY₃R受体的细胞(用CALCR+RAMP-3转染的1321N1细胞，源自DiscoverX目录号95-0166C6)的AMY诱导的活化的能力进行评估。

在该测定中测试的化合物通常展现出在3.5至6.6的范围内的pIC₅₀。

细胞活力测定

使用RealTime-GloVMT细胞活力测定试剂盒(普洛麦格公司(Promega)，目录号：G9712)，根据制造商的说明，进行细胞活力测定。这些测定证明了测试化合物(3μM)将细胞存活和生长抑制40％和70％的能力。

使用的所有细胞系购自美国弗吉尼亚州ATCC公司(表1)。将细胞以完全生长培养基中的所需密度接种到白色透明底96孔板(康宁公司(Corning)，目录号：3610)中。将各板在室温下孵育15min(以确保细胞均匀沉降)，之后在37℃下在5％CO₂中孵育过夜。第二天，将活力测定试剂盒试剂(酶和底物)在37℃水浴中与次佳生长培养基(测定缓冲液)一起平衡10-15min。然后制备含有1:1000每种试剂:每个细胞系的次佳生长培养基(在使用前良好涡旋)的试剂溶液。然后从各孔中除去完全生长培养基并用100μl试剂溶液更换。然后在读取未处理的基线之前，将各板在37℃下在5％CO₂中孵育至少1小时。试剂每3天更换一次，将各孔用PBS洗涤一次，并如上添加新鲜试剂，以进行更长持续时间的处理。在读取基线后，用适当浓度的测试分子处理各孔，将各板以110x g离心1min，以确保化合物均匀分布，然后在37℃下在5％CO₂中孵育。使用Enspire多模式读板器(珀金埃尔默公司)进行发光测量后，将各板每天进行一次处理(持续9天)。

表1：细胞系和相应的完全生长培养基、次佳培养基和接种密度

体内作用：异种移植小鼠模型

可以使用以下异种移植小鼠模型来评估化合物的体内疗效

肿瘤接种

在体内实验中使用的所有细胞系购自美国弗吉尼亚州ATCC公司(表2)。在T500TripleFlasks(赛默飞世尔科技公司，目录号：132913)中以完全生长培养基培养细胞。当达到80％-90％汇合时，使用TrypLE Express酶解离缓冲液(赛默飞世尔科技公司，目录号：12605)从烧瓶中分离细胞。使用Countess II自动细胞计数器对细胞计数，然后以110xg离心5min。将沉淀物重新悬浮在适当体积的冰冷PBS中(取决于细胞数)。为了确保肿瘤接种，将细胞(500μL)与500μL冰冷的基质胶(康宁公司，目录号：354234)使用冷的移液器吸头混合(慢慢移液以确保均匀混合并防止基质胶中形成气泡)。在注射给小鼠之前，将基质胶/细胞悬液和注射器保持在冰上。针对每个实验(10个处理组和10个媒介物对照组)，将100μL细胞悬液(50％PBS+50％基质胶中5x 10⁶个细胞)皮下注射给27周龄雌性Balb/c裸鼠。

表2：细胞系和相应的完全生长培养基

化合物制备

根据以下式，在100％DMSO(西格玛奥德里奇公司，目录号：D4540)中稀释粉末形式化合物：

然后将这些化合物在37℃下超声处理10h。然后根据下式，添加适当体积的溶剂(表4)，产生6％DMSO/94％溶剂溶液：

然后将这些化合物在37℃下超声处理10h。

表3：化合物溶剂的配方

试剂	比率
		Kolliphor HS15	1(以g计的重量)
Kollisolv PCGE400	3(以mL计的体积)
		PBS	6(以mL计的体积)

用测试化合物进行体内处理

在处理之前，将每个化合物小瓶用等分溶剂稀释，得到3％DMSO中的4mg/mL化合物，然后在37℃下超声处理10min。适合地，每天用100μL处理(20mg/kg)或媒介物对照腹膜内对小鼠进行处理。也可以使用例如5mg/kg或10mg/kg的剂量的测试化合物。每周测量一次肿瘤大小和小鼠重量。

生物学数据

表4中所示的化合物在上述AM₂ LANCE cAMP测定中展现出以下活性。

表4

体内异种移植数据

在上述小鼠异种移植模型中测试了本文所例示的化合物之一，化合物SHF-1041，其中将小鼠接种CFPAC-1细胞(来自导管腺癌的细胞(例如ATCC))。以5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量，每天一次，向处理小鼠组腹膜内施用SHF-1041测试化合物。在图1中示出了与对照组相比，在24天的SHF-1041给药后对％肿瘤体积生长的影响。与对照组相比，在5mg/kg的剂量下，SHF-1041将肿瘤体积生长抑制了42％。

塞加里细胞活力

测试了AM2受体抑制剂化合物SHF-1038对塞加里细胞活力的影响。SHF-1038是在本发明的权利要求的范围之外的小分子AM2受体抑制剂，但在本文所述的AM2D2测定中具有>8的pIC50。

将HUT-78塞加里细胞悬液接种在48孔板中含有2％胎牛血清的DMEM中(2,500个细胞/mL，1mL/孔)中。每天用终浓度为3μM的AM2受体抑制剂化合物(SHF-1038)(或媒介物对照)处理细胞，持续9天。每3天轻轻更换新鲜培养基(每孔800μL)。使用台盼蓝排除方法在第5、7和9天对细胞计数。将10μL细胞悬液添加到10μL台盼蓝中。将该混合物转移到一次性计数载玻片，并使用Countess II自动细胞计数器(赛默飞世尔科技公司)计数。将每个处理条件的细胞活力相对于媒介物处理的细胞(为100％活力)归一化。

测试化合物SHF-1038在9天处理期后将细胞活力降低68％。

Claims

1.一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

L不存在或是-C(R^A)₂-；

每个R^A独立地选自H和C_1-3烷基；

X¹是N或CR⁶；

L¹不存在或选自：-O-和-N(R⁷)-

其中所述芳基和杂芳基任选地被一个或多个R¹⁰取代；

R³选自：H和C_1-4烷基；

R⁴和R⁵独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤烷基，或

R⁴和R⁵与它们所附接的碳一起形成C_3-6环烷基；

R⁶选自：H、卤基、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基；

R⁷选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和-OR^A1；

R⁸、R⁹和R¹¹在每次出现时独立地选自：

R¹⁰在每次出现时独立地选自：

R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁸和R¹⁹在每次出现时独立地选自：

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

q是选自0、1、2、3和4的整数。

2.如权利要求1所述的化合物，其中L不存在。

3.如权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中L¹不存在。

4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R⁴选自：H和C_1-4烷基，并且R⁵是H；任选地其中R⁴和R⁵都是H。

5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中X₁、X₂和X₃是CH。

6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中HET选自：

7.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中HET是：

优选地

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

8.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R²在每次出现时独立地选自：＝O和C_1-4烷基；任选地其中q是0、1或2。

9.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中q是0。

10.如权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R³是H。

11.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中

R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤烷基和Q¹-L²-，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个R⁸取代；

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R⁹取代，

L²不存在或选自C_1-4亚烷基；

R⁸和R⁹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O、-CN、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、-L³-Q²、-OR^16A、-SO₂R¹⁶、-NR^16AR^B2、-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2、-SO₂NR^16AR^B2和-C(O)OR^16A，

R^16A选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

其中Q⁷选自氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基和吗啉基，

L³不存在或选自：-O-、-NR^A4-、-SO₂-、-C(＝O)-、-NR^A4C(＝O)-、-C(＝O)NR^A4-、-S(O)₂NR^A4-、-NR^A4S(O)₂-和-C(＝O)O-；

R¹⁴在每次出现时独立地选自：

R¹⁵在每次出现时独立地选自：

12.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹是4至7元杂环基，例如选自以下的饱和4至7元杂环基：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、＝O、-C(O)R^16A、-C(O)OR^16A、-C(O)NR^A2R^B2、-SO₂R^16A、-SO₂Q²²、-SO₂CH₂Q²²、-C(O)Q²²、-C(O)CH₂Q²²、-C(O)NR^B2Q²²、-C(O)NR^B2CH₂Q²²、-SO₂NR^A2R^B2、-SO₂NR^B2Q²²和-SO₂NR^B2CH₂Q²²

13.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹是：

R¹⁶选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、-CN、-OR^A5、-S(O)₂R^A5、-NR^A5R^B5、-C(O)R^A5、-OC(O)R^A5、-C(O)OR^A5、-NR^B5C(O)R^A5、-C(O)NR^A5R^B5、-NR^B5SO₂R^A5和-SO₂NR^A5R^B5，R^16A选自：

H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、

被1个选自以下的取代基取代的C_2-6烷基：-OR^A5和-NR^A5R^B5；

Q²选自：

其中

Q⁶是C_3-6环烷基；

L³不存在或选自：-SO₂-、-C(＝O)-、*-C(＝O)NR^A4-、*-S(O)₂NR^A4-和*-C(＝O)O-，其中*指示与R¹中的环氮的附接点；

R²¹在每次出现时独立地选自：卤基、＝O和C_1-4烷基；

q1是选自0、1和2的整数。

14.如权利要求13所述的化合物，其中R⁸¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基。

15.如权利要求13所述的化合物，其中R⁸¹是甲基或乙基。

16.如权利要求13至15中任一项所述的化合物，其中L³不存在或是-C(＝O)-。

17.如权利要求13至16中任一项所述的化合物，其中q1是0。

18.如权利要求13至17中任一项所述的化合物，其中R⁹¹不是H。

19.如权利要求13至17中任一项所述的化合物，其中R⁹¹是H。

20.如权利要求13至17中任一项所述的化合物，其中R⁹¹选自：-C(O)R¹⁶、-C(O)NR^16AR^B2；R¹⁶是C_1-4烷基；R^16A选自：H和C_1-4烷基；并且R^B2选自：H和C_1-4烷基。

21.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹是C_1-6烷基。

22.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹是叔丁基。

23.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中具有下式的基团：

是

24.如权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中X₁、X₂和X₃是CH。

25.如权利要求1所述的化合物，其选自说明书的列表1中所示的化合物中的任一种，或其药学上可接受的盐。

26.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的赋形剂。

27.如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。

28.如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM₂)介导的疾病或医学病症。

29.如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗增生性疾病，特别是癌症；任选地其中该癌症选自：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌。

30.如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗塞加里综合征。

31.一种治疗有需要的受试者中由AM₂介导的疾病或医学病症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的如权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

32.如权利要求31所述的方法，其中该疾病是增生性疾病，特别是癌症；任选地其中该癌症选自：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌。

33.如权利要求28或权利要求29所述使用的化合物，或如权利要求31或权利要求32所述的方法，其中将该化合物施用于与对照相比具有升高的AM、AM₂、CLR和/或RAMP3表达的受试者，例如其中该受试者在血清样品中具有升高的AM或AM₂表达水平。

34.如权利要求28至33中任一项所述使用的化合物或方法，其中将该化合物与一种或多种另外的抗癌剂和/或放射疗法组合施用。

35.一种化合物，其选自具有式(IX)、(XI)或(XII)的化合物：

其中HET、R¹、R²、R⁴、R⁵、L、L¹、X₁、X₂、X₃和q是如权利要求1中所定义的；

R³³是如权利要求1中所定义的R³，或R³³是氨基保护基团(例如BOC)；并且

Pg是氨基保护基团(例如BOC)。