CN113215024A - 一株植物乳杆菌及一种发酵黄芩药渣的方法 - Google Patents

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Abstract

一株植物乳杆菌及一种发酵黄芩药渣的方法，本发明植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005。发酵黄芩药渣的方法：一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；二、灭菌后降温接种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005，厌氧发酵48±3h；三、提取发酵后黄芩废渣中的黄芩苷。本发明将黄芩废渣变废为宝，提高黄芩饮片的利用率，减少资源浪费。本发明植物乳杆菌Lac2020005与具有发酵后活菌，对营养底物适应性好且生长速度快，产酸量多，且对大肠杆菌抑制效果好的特点。本发明菌株可以提高黄芩废渣中黄芩苷的转化富集率较对照组提高22.41％，较市售的植物乳杆菌植CGMCC1.557提高4.09％。

Description

一株植物乳杆菌及一种发酵黄芩药渣的方法
技术领域
本发明涉及一株微生物菌株和一种处理药渣的方法。
背景技术
黄芩以根入药，味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床抗菌性比黄连好，而且不产生抗药性；因此黄芩的用量较大，但随之产生的大量黄芩废渣带来了新问题。黄芩废渣中还含有部分功能活性成分，若是直接丢弃造成资源浪费。
发明内容
本发明提供了一株植物乳杆菌及一种发酵黄芩药渣的方法。本发明是为了进一步的提取黄芩废渣中的有效活性成分，提高黄芩饮片的利用率，减少资源浪费。
一株植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
一种发酵黄芩药渣的方法：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005，厌氧发酵48±3h；
三、提取发酵后黄芩废渣中的黄芩苷；
其中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
本发明植物乳杆菌Lac2020005与具有发酵后活菌，对营养底物适应性好且生长速度快，产酸量多，且对大肠杆菌抑制效果好的特点。本发明菌株可以提高黄芩废渣中黄芩苷的转化富集率较第一组提高22.41％，较第二组提高4.09％。
本发明将黄芩废渣变废为宝，提高黄芩饮片的利用率，减少资源浪费。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)为植物乳杆菌Lac2020005，属于乳杆菌属 (Lactobacillus)；保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为 CGMCCNo.20963，保藏日期为2020年10月29日。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Lac2020005，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
本实施方式中保藏号为CGMCC No.20963的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Lac2020005于2019年11月8日分离自哈药集团双黄连生产过程中产生的黄芩药渣。
与市售的植物乳杆菌植CGMCC1.557相比较，本实施方式植物乳杆菌Lac2020005相同发酵条件下发酵后活菌高37.6％，对营养底物适应性好且生长速度快(比植物乳杆菌植CGMCC1.557提前2.6h进入对数生长期)，产酸量多12.33％，且对大肠杆菌抑制效果好。
具体实施方式二：本实施方式发酵黄芩药渣的方法：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005，厌氧发酵48±3h；
三、提取发酵后黄芩废渣中的黄芩苷；
其中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
植物乳杆菌Lac2020005最适生长温度为30℃，兼性厌氧，单菌为直杆状，多菌时镜下多成链状，最适pH 6.5左右。
本实施方式发酵结束后黄芩废渣的pH值为4.5，其中植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Lac2020005菌数≥108CFU/g。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同点是：步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80％～100％。其它步骤及参数与实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三的不同点是：步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。其它步骤及参数与实施方式二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式二或三或四的不同点是：步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟；黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。其它步骤及参数与实施方式二或三或四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式二、三、四或五的不同点是：步骤二中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005接种量5％。其它步骤及参数与实施方式二、三、四或五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式二至六之一的不同点是：步骤三中提取方法采用回流浸提法、溶剂提取法、微博提取法、酶法提取法、超临界流体萃取法或超声法。其它步骤及参数与实施方式二至六之一相同。
实施例1
植物乳杆菌Lac2020005(CGMCC No.20963)活化后接种于MRS液体培养基，控制温度37℃～43℃，时间24h～36h，制备植物乳杆菌Lac2020005发酵液，发酵液中植物乳杆菌Lac2020005的含量≥108CFU/mL。
本实施例分3组进行实验，第一组黄芩废渣中不接种菌株，第二组黄芩废渣接种市售的植物乳杆菌植CGMCC1.557，第三组黄芩废渣接种植物乳杆菌Lac2020005。
第一组黄芩渣的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量 80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟。
第二组黄芩渣的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量 80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；
二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌植CGMCC1.557，厌氧发酵48h。
第三组黄芩渣的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量 80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；
二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) (CGMCC No.20963)，厌氧发酵48h。
第二组和第三组发酵后得到的黄芩废渣中菌数均≥108CFU/g。
1、本实施例采用液相色谱测定黄芩苷的含量：
1.1色谱条件与系统适用性
用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，用乙腈和0.6％的磷酸(45∶55)为流动相，流量为 1.0ml/min，检测波长为277nm，进样量为10μL。
1.2标准品溶液的制备
精密称定对照品黄芩苷一定量，加甲醇制成1ml含20.8μg和6μg的混合溶液，即得。
1.3检测样品的制备
取第一、二、三组的黄芩渣10g，研细，取细粉约0.5g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加50％的甲醇80ml，超声处理10min，加50％的甲醇稀释至刻度，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加50％的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
1.4线性关系实验
标准品溶液分别进样5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，进行测定。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,求得黄芩苷回归方程。
1.6样品测定
分别精密吸取检测样品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，测定样品中黄芩苷的含量。
2本实施例实验结果
本实施例各组实验数据如表1所示。
表1
实验前 实验后 提高率
第一组 0.205g 0.214g 4.39％
第二组 0.211g 0.261g 23.7
第三组 0.213g 0.281g 26.8％
第三组本发明方法黄芩废渣发酵前后黄芩苷含量变化比较，黄芩苷含量提高率为26.8％，第一组和第二组提高率分别为4.39％和23.74％。本发明菌株和方法对黄芩废渣中的黄芩苷具有积极的转化富集和浸出提取效果。

Claims (8)

1.一株植物乳杆菌，其特征在于该植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Lac2020005，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
2.一种发酵黄芩药渣的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005，厌氧发酵48±3h；
三、提取发酵后黄芩废渣中的黄芩苷；
其中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
3.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80％～100％。
4.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。
5.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟。
6.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤一中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。
7.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤二中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)接种量5％。
8.根据权利要求2所述的发酵黄芩药渣的方法，其特征在于步骤三中提取方法采用回流浸提法、溶剂提取法、微博提取法、酶法提取法、超临界流体萃取法或超声法。
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