CN110251558A - 一种黄芩药渣半固体发酵技术方法及其应用 - Google Patents

一种黄芩药渣半固体发酵技术方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，属于半固体发酵技术领域。其技术方案为：取黄芩药渣，黄芩药渣粉碎至20mm以下，得到黄芩药渣粉，将黄芩药渣粉中加入多种复合酶混合物，并充分混合均匀，将充分混合的混合物进行烘干，烘干混合物，将烘干混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。本发明的有益效果为：利用半固体发酵的方法处理黄芩药渣，所用的液态植物乳杆菌和复合酶会分解黄芩药渣中的纤维、果胶等成分，结合黄芩中的黄酮类有效成分及乳酸菌等多种益生菌的相互作用，不仅能够在比传统的物理化学方法更为温和的条件下实现药渣的利用，更能对其药性进行适度的调整，扩大用药范围。

Description

一种黄芩药渣半固体发酵技术方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种半固体发酵技术领域，尤其涉及一种黄芩药渣半固体发酵技术方法及其应用。
背景技术
中药黄芩是唇形科多年生草本植物黄芩的干燥根，主产于黑龙江、吉林、辽宁、河北、山东、陕西、甘肃、内蒙古等地。黄芩具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功效，主要用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。黄芩中主要含有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素，此外还有黄芩素-7-O-糖苷，5,7-二羟基 -6-甲氧基双氢黄酮，白杨黄素及其苷，木蝴蝶素A及其葡萄糖醛酸苷等成分。黄芩属于大宗常用药材，据相关资料统计，目前市场上70％的中成药都含有黄芩，如常用的中成药清开灵口服液、双黄连颗粒/口服液/冻干粉针、银黄片/ 银黄颗粒/银黄口服液、小柴胡胶囊/小柴胡片/小柴胡颗粒、龙胆泻肝丸、固经丸等。对于年用量在1.6万吨到2万吨的黄芩来说，黄芩药渣的产量也十分惊人，随着医药产业的蓬勃发展，黄芩药渣的排放量也在日益增加，但对于处理中药药渣大多采取的传统方法如焚烧、固定区域堆放、填埋等方式，不仅使环境遭到巨大破坏，也造成了资源浪费。据有关研究测定，经提取黄芩苷后得到的黄芩药渣中仍含有黄酮类成分，药渣仍然具有抗菌抑菌、抗病毒、抗氧化等作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用半固体发酵的方法处理黄芩药渣，所用的微生物和复合酶会分解黄芩药渣中的纤维、果胶等成分，结合黄芩中的黄酮类有效成分及乳酸菌等多种益生菌的相互作用，不仅能够在比传统的物理化学方法更为温和的条件下实现药渣的利用，更能对其药性进行适度的调整，扩大用药范围的黄芩药渣半固体发酵技术方法。
本发明是通过如下措施实现的：
一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，其特征在于，所述半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为30％～70％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为30％～70％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为30％～60％的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为30％～60％的黄芩药渣粉中加入0.3％～0.5％重量比的液态植物乳杆菌和0.3％～0.5％重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7 天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
本发明的具体特点还有：
所述半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣1kg，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为35％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为35％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为30％的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为30％的黄芩药渣粉中加入0.3％重量比的液态植物乳杆菌和0.3％重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7 天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
所述S2步骤中的所述多种复合酶混合物由纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶混合组成，所述纤维素酶、所述果胶酶和所述木聚糖酶比例为：2:1:1。
所述黄芩药渣发酵物用于抗菌抑菌的应用。
本发明的有益效果为：利用半固体发酵的方法处理黄芩药渣，所用的微生物和复合酶会分解黄芩药渣中的纤维、果胶等成分，结合黄芩中的黄酮类有效成分及乳酸菌等多种益生菌的相互作用，不仅能够在比传统的物理化学方法更为温和的条件下实现药渣的利用，更能对其药性进行适度的调整，扩大用药范围。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1：
一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣1kg，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为35％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为35％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为30％的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为30％的黄芩药渣粉中加入0.3％重量比的液态植物乳杆菌和0.3％重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7 天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
本半固体发酵技术方法制备的黄芩药渣发酵物在存放12个月期间，在外观性状、鉴别、检查、含量各项检查指标均无明显变化，符合临床前药品质量标准的各项规定，质量基本稳定。
实施例2：
一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣1kg，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为70％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为70％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为60％的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为60％的黄芩药渣粉中加入0.5％重量比的液态植物乳杆菌和0.5％重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7 天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
实施例3：
一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣1kg，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为50％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为50％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为45％的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为45％的黄芩药渣粉中加入0.4％重量比的液态植物乳杆菌和0.4％重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7 天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
本黄芩药渣半固体发酵技术方法的发明人在发酵技术方法、及其应用方面，进行了一系列实验研究，确定了本黄芩药渣半固体发酵技术方法，使其与现有技术相比具有明显的突出疗效优势。
实验一、黄芩药渣半固体发酵物黄酮类成分含量测定 1、材料
1.1、样品：上述实施例1、实施例2和实施例3制备的黄芩药渣发酵物。
1.2、对照物：
(1)、黄芩药渣；
(2)、将实施例1中S3步骤中最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装，得到对照发酵物。
2、试验方法
2.1、测定方法：高效液相色谱法(通则0512)测定
2.1.1、色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸为流动相，按下表表1的规定进行梯度洗脱；检测波长为275nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
表1
2.2、溶液制备
对照品溶液的制备：取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素适量，加入甲醇配成100μg/ml的溶液。
供试品溶液的制备：
取黄芩药渣粉末2g精密称定，精密加入60％甲醇25ml，超声处理10min，取滤液，即得；
取施例1、实施例2和实施例3制备的黄芩药渣发酵物各2g，精密称定，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3、检测方法
分别精密量取等量的上述对照品、供试品溶液溶液，注入高效液相色谱仪，进行检测，参照对照品溶液，利用外标法得出检测结果，结果如表2所示。
表2黄酮类成分含量
3、结论
从上表2可以看出，实施例1，2和3的效果较好，黄酮类成分含量提高了2倍，尤其是黄芩素的含量有了大幅提升，黄芩素具有降低脑血管阻力，改善脑血循环、增加脑血流量及抗血小板凝集的作用。临床用于脑血管病后瘫痪的治疗。黄芩素进入动物体内后，在血液中迅速转化为黄芩苷及其他代谢物。发酵10天的对照发酵物样品与实施例1相比，黄酮类成分总含量较实施例1 发酵7天的样品有所下降，因此从节约成本的角度出发，认为发酵7天即可。
实验二、本发明中黄芩药渣半固体发酵物抑菌实验
1样品
1.1菌株
大肠杆菌O78标准菌株(E.coli O78，编号CVCC1418)；金黄色葡萄球菌菌株ATCC29213。
1.2样品与试剂
样品：实施例1、实施例2和实施例3制备的黄芩药渣发酵物、黄芩药渣样品。
试剂：营养肉汤培养基，麦康凯培养基，普通营养琼脂培养基、乙醇等试剂均为分析纯。
1.3仪器
循环真空水泵(SHZ-3型)、真空干燥箱(ZK-82B型)、电子控温电热器、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平(FA1004型)、回流冷凝装置、蒸馏装置等。 2、方法
2.1菌液的制备
将标准大肠杆菌和金黄色葡萄球菌划线于固体培养基上，于37℃培养18～ 24h。分别挑取单个菌落接种于营养肉汤培养基中，于37℃培养18h。用平皿稀释法测定菌液的浓度，调整细菌浓度为1.5×108CFU/ml备用。
2.2试验样品的制备
取实施例1,2,3制备的黄芩药渣发酵物和黄芩药渣样品进行水煎提取，加 10倍量的水提取1h后，浓缩至含药量为1g/ml的溶液，置于小瓶，120℃高压灭菌20min，置4℃冰箱备用。
2.3最低抑菌浓度MIC值的测定
设置四组实验组(包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)，每组实验组均取小试管12支并编号；用无菌移液枪于每支试管中加普通营养肉汤培养基1ml；无菌条件下于第一管加入试验药物1ml，震荡混匀；吸取试验药物1ml加入第二管中震荡混匀，依次类推至第11管，吸取1ml弃去(保证12支试管中的溶液体积相同)，第12管不加作为阳性对照。每管加入上述制备的菌液1ml，置37℃孵育箱，培养18h后观察试验结果，生长管的前一管为该样品的MIC。试验重复3次取其平均值作为每个样品的MIC值；
其中，Ⅰ组中使用由实施例1黄芩药渣发酵物制备的试验药物，Ⅱ组中使用由实施例2黄芩药渣发酵物制备的试验药物，Ⅲ组中使用由实施例3黄芩药渣发酵物制备的试验药物，Ⅳ组中使用由黄芩药渣样品制备的试验药物。
3、结果
实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果见表3：
表3体外抑菌效果
从表3中可以看出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组对大肠杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌均有一定的抑菌效果。其中Ⅰ的抑菌效果最好，最低抑菌浓度可达156mg/ml；其次为Ⅲ组的抑菌效果也较好，抑菌浓度为225mg/ml；Ⅱ、Ⅳ组的抑菌效果最差，其抑菌浓度均超过1000mg/ml。
实验三、本发明中黄芩药渣半固体发酵物急毒评价实验
取实施例1,2,3和黄芩药渣粉末，进行水煎提取，加10倍量的水提取1h 后，浓缩至含药量为200mg/ml的溶液。每只小鼠按5g/kg b.wt.灌胃给予各样品1次，灌胃体积为0.2ml/10g，给药后连续观察4h，之后连续观察7d，在观察期内各动物精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食、二便、口鼻分泌物等一般状态未见异常，无动物死亡，且体重自然增长。试验结束后将小鼠脱臼处死，主要脏器均无肉眼可见病变，无明显中毒表现或不良反应。表明本发酵产物对昆明种小鼠的LD50大于5g/kg，根据WTO有关外源性化学物急性毒性分级标准进行评价，试验结果表明本发酵产物属实际无毒。
本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述，当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种黄芩药渣半固体发酵技术方法，其特征在于，所述半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为30%～70％的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为30%～70％的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为30%～60%的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为30%～60%的黄芩药渣粉中加入0.3%～0.5%重量比的液态植物乳杆菌和0.3%～0.5%重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
2.根据权利要求1所述黄芩药渣半固体发酵技术方法，所述半固体发酵技术方法包括以下步骤：
S1、取黄芩药渣1kg，将黄芩药渣进行挤压，得到含水率为35%的黄芩药渣；
S2、将S1步骤得到的含水率为35%的黄芩药渣粉碎至20mm以下，将粉碎后的黄芩药渣压滤，得到含水率为30%的黄芩药渣粉；
S3、将S2步骤得到含水率为30%的黄芩药渣粉中加入0.3%重量比的液态植物乳杆菌和0.3%重量比的多种复合酶混合物，并充分混合均匀；
S4、将S3步骤最终得到的混合物在真空条件下、保持温度在37℃发酵7天，发酵完成后得到黄芩药渣发酵物并进行真空包装。
3.根据权利要求2所述黄芩药渣半固体发酵技术方法，其特征在于，所述S2步骤中的所述多种复合酶混合物由纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶混合组成，所述纤维素酶、所述果胶酶和所述木聚糖酶比例为：2:1:1。
4.根据权利要求1所述的黄芩药渣半固体发酵技术方法，其特征在于，所述黄芩药渣发酵物用于抗菌抑菌的应用。
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