CN112931690A - 一种仔猪饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

一种仔猪饲料添加剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

一种仔猪饲料添加剂及其制备方法，它涉及一种猪饲料添加剂及其制备方法。本发明仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株制成，其中植物乳杆菌植物亚种菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.20963。上述仔猪饲料添加剂制备方法：一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂。本发明将黄芩废渣变废为宝，有效的利用了黄芩废渣又避免了环境污染。食用了添加本发明添加剂的仔猪饲料，仔猪增重快、腹泻率低，大幅提高了仔猪的品质。

Description

一种仔猪饲料添加剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种猪饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
黄芩以根入药，味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床抗菌性比黄连好，而且不产生抗药性；因此黄芩的用量较大，但随之产生的大量黄芩废渣带来了新问题。黄芩废渣中还含有部分功能活性成分，若是直接丢弃造成资源浪费，可处理方式不当又会造成环境污染。
发明内容
本发明提供了一种用黄芩废渣制成的饲料添加剂及其制备方法，既可以不良费黄芩废渣中残留的活性成分，又避免环境污染，还可以促进养殖业发展。
本发明仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成，其中植物乳杆菌植物亚种Lac2020005菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
上述仔猪饲料添加剂的制备方法：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂；
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
本发明将黄芩废渣变废为宝，有效的利用了黄芩废渣又避免了环境污染。食用了添加本发明添加剂的仔猪饲料，仔猪增重快、腹泻率低，大幅提高了仔猪的品质。
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005为植物乳杆菌，属于乳杆菌属(Lactobacillus)；保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.20963，保藏日期为2020年10月29日。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成，其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
本实施方式中保藏号为CGMCC No.20963的植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，于2019年11月8日分离自哈药集团双黄连生产过程中产生的黄芩药渣。植物乳杆菌Lac2020005最适生长温度为30℃，兼性厌氧，单菌为直杆状，多菌时镜下多成链状，最适pH6.5左右。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：黄芩废渣为黄芩浸提后残渣。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式仔猪饲料添加剂的制备方法：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂；
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
本实施方式发酵结束后仔猪饲料添加剂pH值为4.5，其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005菌数≥108CFU/g。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80％～100％。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三或四的不同点是：步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。其它步骤及参数与实施方式三或四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式三或四或五的不同点是：步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟；黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。其它步骤及参数与实施方式三或四或五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式三、四、五或六的不同点是：步骤二中植物乳杆菌植物亚种菌株植物乳杆菌接种量5％。其它步骤及参数与实施方式三、四、五或六相同。
实施例1
植物乳杆菌Lac2020005(CGMCC No.20963)活化后接种于MRS液体培养基，控制温度37℃～43℃，时间24h～36h，制备植物乳杆菌Lac2020005发酵液，发酵液中植物乳杆菌Lac2020005的含量≥108CFU/mL。
本实施例分3组进行实验，第一组饲料添加剂中不接种菌株，第二组饲料添加剂接种市售的植物乳杆菌(CGMCC1.557)，第三组饲料添加剂接种植物乳杆菌Lac2020005(CGMCCNo.20963)。
第一组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟。
第二组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；
二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌植CGMCC1.557发酵液，厌氧发酵48h。
第三组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；
二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌Lac2020005发酵液，厌氧发酵48h。
第二组和第三组发酵后得到的饲料添加剂中菌数均≥108CFU/g。
动物实验：
选取28日龄、体重相近、健康无病的杜长大三元杂交仔猪160头，随机分为5个试验。每个实验中第一组、第二组和第三组饲料添加剂的添加量为2kg/吨，另设原始组饲料中不加入饲料添加剂。每个试验组32头，试验期28天，免疫和管理按猪场常规进行。
试验饲粮：基础日粮采用玉米、豆粕型，参照NRC(1998)猪饲养标准配制而成，具体日粮组成和营养水平见表1。
表1基础日粮组成及营养水平
Figure BDA0002965260240000031
注：预混料向每kg日粮提供Cu 180mg，Fe 220mg，Mn 55mg，Zn 210mg，I 0.3mg，Se0.3mg，Co 0.3mg，VA 15000IU，VD 33700IU，VE 50IU，VK 4.5mg，VB1 4mg，VB212mg，VB67.5mg，VB12 35μg，生物素150μg，泛酸35mg，叶酸2.5mg，烟酰胺50mg，氯化胆碱550mg。
断奶仔猪日增重情况测定：
试验仔猪分别于0、14和28天空腹12h后进行称重、记录，以计算不同时期及全期仔猪的增重情况。
对0～28d仔猪腹泻情况评定：观察并记录试验期每头仔猪每天的腹泻情况，其计算公式为：腹泻率＝试验期腹泻仔猪头次/(试验猪头次×试验天数)×100％。
仔猪日增重情况及腹泻情况如表2所示。
表2
Figure BDA0002965260240000041
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表2可知，0～14d日增重，第一组较原始组提高5.94％，但无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组比原始组分别显著提高7.63％和7.69％(P<0.05)，较第一组分别提高1.55％和1.62％，但无显著性差异(P>0.05)。
15～28d日增重，第一组较原始组提高6.45％(P>0.05)；第二、第三组较原始组显著提高45.16％和45.96％，(P<0.05)，较第一组显著提高36.37％,和37.16％(P<0.05)。
0～28d日增重，第一组比原始组提高6.16％(P>0.05)；第二、第三组较原始组显著提高27.76％和29.38％(P<0.05)，较第一组显著提高20.35％和21.89％(P<0.05)。
0～28d仔猪腹泻率，各试验组均低于原始组，其中第三组仔猪腹泻率最低。
断奶仔猪盲肠微生物菌群的测定：
试验结束后，每组随机选取仔猪5头，打开腹腔，结扎盲肠两端，切下盲肠。在无菌操作台中，准确称取盲肠内容物1g放于盛有99mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡，取稀释液进行10倍的倍比稀释，吸取0.1mL稀释液接种于选择性培养基上。
其中，大肠杆菌用伊红美蓝琼脂培养基37℃培养48h后进行菌落计数；乳酸菌用MRS培养基37℃培养48h后进行菌落计数；双歧杆菌用BL培养基37℃厌氧培养48h后进行菌落计数。
各组断奶仔猪盲肠微生物菌群的影响如表3所示。
表3
Figure BDA0002965260240000051
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表3可知，大肠杆菌数量第二组、第三组显著低于原始组(P<0.05)；第一组大肠杆菌数量低于原始组但无显著性差异(P>0.05)。
乳酸菌和双歧杆菌数量第二组、第三组显著高于原始组(P<0.05)，其中乳酸菌数量显著高于第一组(P<0.05)。第一组乳酸菌和双歧杆菌数量高于原始组，但差异不显著(P>0.05)。
断奶仔猪血清抗氧化指数的测定：
试验第21天，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。抗氧化指标的测定：采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA)，试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买(具体步骤按试剂盒说明书操作)。
各组对断奶仔猪抗氧化性能的影响如表4所示。
表4
Figure BDA0002965260240000052
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表4可知，断奶仔猪血清中T-SOD含量第一组较原始组提高14.66％，无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组较原始组显著提高了39.88％和40.51％(P<0.05)，较第一组显著提高了22.01％和22.57％(P<0.05)。
断奶仔猪血清中GSH含量试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。
断奶仔猪血清中MDA含量第一组较原始组降低51.65％，无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组较原始组分别显著降低62.75％和62.97％(P<0.05)，较第一组分别降低22.98％和23.41％(P>0.05)。
断奶仔猪血清免疫指标的测定：
试验第28d，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。
各组对断奶仔猪免疫器官指数的影响如表5所示。
表5
Figure BDA0002965260240000061
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表5可知，仔猪血清中IgA含量第二组、第三组高于原始组和第一组但无显著性差异(P>0.05)。
IgG含量第一组较原始组提高2.42％，差异不显著(P>0.05)；第二组、第三组较原始组分别显著提高30.85％和42.11％(P<0.05)，较第一组分别显著提高27.77％和38.75％(P<0.05)。
IL-4含量第一组较原始组提高3.99％，差异不显著(P>0.05)；第二组、第三组组较原始组分别显著提高31.57％和38.24％(P<0.05)，较第一组分别显著提高26.53％和32.95％(P<0.05)。
药理学毒性试验：
试验方法：选取体重为18～22g的ICR鼠100只，经3天适应性饲养后，随机均分为4组，第一组、第二组、第三组和原始组(同上)，每组各25只；原始组灌胃生理盐水，第一组、第二组、第三组将制备的饲料添加剂加水中灌服，第一组、第二组、第三组的饲料添加剂添加量为0.1g/mL，0.4mL/次，一天3次，连续7天。
测定指标及方法：
(1)临床症状观察：每日观察试验鼠的精神状态、饮食情况，每日记录发病死亡情况。
(2)病理学观察：对于死亡鼠进行剖检观察内脏变化。
(3)生长指标观察：对试验鼠进行定期称重；试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重脏器指数测定：剖检大鼠，取心脏、脾脏、肝脏、肾脏、睾丸、卵巢，称重，按照下式计算脏器指数：脏器指数＝脏器重/体重×100。
(4)肝脏功能变化观察：试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST、ALT。
临床症状观察各组鼠发病和死亡情况如下表6。
表6
分组 总数 死亡(只) 死亡率(％)
第一组 20 0 0
第二组 20 0 0
第三组 20 0 0
原始组 20 0 0
病理学观察：原始组和试验组，鼠扑杀后进行剖检眼观未见观察内脏器官明显的病理变化。
生长指标观察：试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重分析见表7。
表7
分组 肝脏指数 心脏指数 肾脏指数 肺脏指数 脾脏指数
第一组 54.02±1.26<sup>a</sup> 4.48±0.17<sup>a</sup> 13.38±0.26<sup>a</sup> 6.69±0.41<sup>a</sup> 4.66±0.53<sup>a</sup>
第二组 54.10±1.17<sup>a</sup> 4.54±0.18<sup>a</sup> 13.40±0.16<sup>a</sup> 6.73±0.42<sup>a</sup> 4.79±0.47<sup>a</sup>
第三组 54.18±1.08<sup>a</sup> 4.68±0.24<sup>a</sup> 13.47±0.21<sup>a</sup> 6.78±0.35<sup>a</sup> 4.88±0.52<sup>a</sup>
原始组 53.89±1.38<sup>a</sup> 4.25±0.29<sup>a</sup> 13.34±0.23<sup>a</sup> 6.66±0.44<sup>a</sup> 4.47±0.61<sup>a</sup>
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表7可知，各脏器指数分析，各试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。
肝脏功能变化观察，试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)见表8。
表8
分组 总数 ALT AST
第一组 20 39.12±2.11<sup>a</sup> 105.43±4.05<sup>a</sup>
第二组 20 39.21±2.22<sup>a</sup> 105.65±4.01<sup>a</sup>
第三组 20 39.27±1.98<sup>a</sup> 105.73±4.34<sup>a</sup>
原始组 20 39.08±2.38<sup>a</sup> 105.39±4.72<sup>a</sup>
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表8可知，各组数据与空白原始组相比差异不显著，都处于正常范围内。
根据第三组制备的本发明发酵制剂，20g/kg、100g/kg给1月龄ICR鼠连续灌胃给药1个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常；动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异；病理组织学检查表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。

Claims (8)

1.一种仔猪饲料添加剂，其特征在于该仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株制成，其中植物乳杆菌植物亚种菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
2.根据权利要求1所述的仔猪饲料添加剂，其特征在于黄芩废渣为黄芩浸提后残渣。
3.权利要求1所述仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；
二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂；
植物乳杆菌植物亚种菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。
4.根据权利要求3所述的仔猪饲料添加剂制备方法，其特征在于步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80％～100％。
5.根据权利要求3所述的仔猪饲料添加剂制备方法，其特征在于步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。
6.根据权利要求3所述的仔猪饲料添加剂制备方法，其特征在于步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟。
7.根据权利要求3所述的仔猪饲料添加剂制备方法，其特征在于步骤一中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。
8.根据权利要求3所述的仔猪饲料添加剂制备方法，其特征在于步骤二中植物乳杆菌植物亚种菌株接种量5％。
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