CN113214211A - 一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途，属于制药领域。该化合物的结构如式I所示。实验结果表明，该化合物不仅能够明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中NO的产生，还能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中炎症因子IL‑6的表达，具有良好的抗炎活性。此外，该化合物对包括肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞均具有良好的抑制作用。本发明提供的化合物在制备抗炎药物，以及预防和/或治疗癌症的药物中具有广阔的应用前景。

Description

一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途。

背景技术

中药牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia surulicosa Andr.的干燥根皮，始载于《神农本草经》，列为中品，历代本草皆有记载。其性味苦、辛，微寒。归心、肝、肾经，有清热凉血、活血化瘀的功效，用于热入营血、吐血、无汗骨蒸、跌扑伤痛、痈肿疮毒。牡丹皮炭是牡丹皮以武火炒至表面黑褐色，内部黄褐色的炮制品，牡丹皮炒炭后寒凉之性缓和，止血作用增强，具有止血不留淤的特点，常用于血热出血，如治吐血、衄血等的十灰散(《十药神书》)等。现代药理学研究表明(牡丹皮的现代药学研究进展，中国医药信息，2020年1月第37卷第1期)牡丹皮具有抑菌抗炎、抗肿瘤、抗心律失常、降糖、激活机体免疫系统及保护心血管等多种作用。在凝血系统方面，牡丹皮和牡丹皮炭药效相反，牡丹皮能延长急性血瘀大鼠的PT、TT，减少TXB2及增加6-keto-PGF1α的含量，抑制血小板黏附，具有活血化瘀作用[牡丹皮、赤芍与白芍对急性血瘀模型大鼠活血功效的比较研究，中草药，2016，47(15)：2676-2683]，而牡丹皮炭能缩短小鼠的出血和凝血时间，缩短大鼠的PT、TT、PRT、APTT，增加TXB2及降低6-keto-PGF1α的含量，增强血小板聚集功能而发挥止血、凝血作用[丹皮炭止血作用有效部位及作用机制研究，中草药，2009，40(8)：1278-1280；牡丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血小板聚集性及血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响，中国实验方剂学杂志，2009，15(11)：41-43]。

牡丹皮炒炭后药效相反，主要是因为炮制后药效物质基础发生变化，故对牡丹皮炮制后新生成的成分进行提取纯化分离，对解释其炮制后药效相反的炮制机理，同时充分开发利用牡丹皮及其炮制品具有重要意义。目前还未见将提取自牡丹皮炭的化合物用来抗炎或治疗癌症的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途。

本发明提供了一种式I所示化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅各自独立的选自氢、羟基、C_1～4烷基、C_1～4烷氧基。

进一步地，所述化合物为：

本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)取牡丹皮炭，加乙醇水溶液提取，收集提取液，浓缩得总浸膏；

(2)取总浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，取正丁醇萃取部位，加甲醇和水的混合溶液溶解，过滤，将滤液加入D101型大孔树脂中进行洗脱，得到Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4四个组分；

(3)取Fr.4组分经硅胶柱柱层析，得Fr.4a、Fr.4b、Fr.4c、Fr.4d四个组分，取Fr.4a组分分离提纯，即得。

牡丹皮炭是牡丹皮以武火炒至表面焦褐色，内部焦褐色为度的炮制品。

进一步地，步骤(1)中，所述乙醇水溶液为体积分数50％～100％的乙醇水溶液，优选为体积分数95％的乙醇水溶液；所述牡丹皮炭与乙醇水溶液的体积质量比为1：(6～10)kg/L，优选为1：8kg/L；所述提取方式为回流提取，提取时间为5～15小时，优选为10小时；

和/或，步骤(2)中，在所述D101型大孔树脂中进行梯度洗脱，采用的洗脱剂为水、体积分数20％的乙醇水溶液、体积分数40％的乙醇水溶液、体积分数60％的乙醇水溶液和体积分数80％的乙醇水溶液；所述Fr.4组分为体积分数80％的乙醇水溶液的洗脱液；

和/或，步骤(3)中，所述硅胶柱中采用的洗脱剂依次为体积比为15:1、12:1、10:1、9:1、7:3的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液；所述Fr.4a组分为体积比为12:1的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液的洗脱液；所述分离提纯方法为制备色谱分离提纯，所述制备色谱采用的洗脱剂为体积分数40％-80％的甲醇水溶液。

本发明还提供了一种抗炎和/或抗肿瘤的药物，它是以上述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制得的制剂。

本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备一氧化氮生成抑制剂中的用途。

本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备抗炎药物中的用途。

进一步地，所述抗炎药物能够抑制一氧化氮生成，和/或，所述抗炎药物能够抑制炎症因子IL-6的表达。

本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途。

进一步地，所述癌症为肺癌、肝癌、宫颈癌或乳腺癌。

实验结果表明，化合物M2不仅能够明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中NO的产生，还能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中炎症因子IL-6的表达，具有良好的抗炎活性。此外，化合物M2对包括肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞均具有良好的抑制作用。本发明提供的提取自牡丹皮炭的化合物在制备抗炎药物，以及预防和/或治疗癌症的药物中具有广阔的应用前景。

本发明化合物的制备方法简单，适合工业化生产。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为化合物M2的¹H-¹H COSY以及HMBC相关示意图。

图2为化合物M2的¹HNMR(500MHz，CD₃OD)谱图。

图3为化合物M2的¹³C NMR(500MHz，CD₃OD)谱图。

图4为化合物M2的¹H-¹H COSY谱图。

图5为化合物M2的HMQC谱图。

图6为化合物M2的HMBC谱图。

图7为各组对LPS体外诱导的巨噬细胞炎症模型的NO产生量和炎症因子IL-6表达量的影响，其中：*表示与LPS组相比有显著性差异，P<0.05；**表示与LPS组相比有极显著性差异，P<0.01。

图8为各组处理后RAW264.7细胞的细胞存活率，其中：*表示与空白组相比有显著性差异，P<0.05；**表示与空白组相比有极显著性差异，P<0.01。

图9为化合物M2对Hela细胞的抑制活性，其中：*表示与空白组(0组)相比有显著性差异，P<0.05；**表示与空白组(0组)相比有极显著性差异，P<0.01。

图10为化合物M2对A549细胞的抑制活性，其中：*表示与空白组(0组)相比有显著性差异，P<0.05；**表示与空白组(0组)相比有极显著性差异，P<0.01。

图11为化合物M2对MCF-7细胞的抑制活性，其中：*表示与空白组(0组)相比有显著性差异，P<0.05；**表示与空白组(0组)相比有极显著性差异，P<0.01。

图12为化合物M2对HepG2细胞的抑制活性，其中：*表示与空白组(0组)相比有显著性差异，P<0.05；**表示与空白组(0组)相比有极显著性差异，P<0.01。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

牡丹皮炭购于广州市至信中药饮片有限公司，生产批号为120302。

实施例1：本发明化合物M2的制备

取牡丹皮炭干燥根茎35kg，经8倍量的95％乙醇水溶液(体积分数)回流提取三次(第一次提取3h，第二次提取3h，第三次提取2h)。将三次所得的提取液合并回收至无醇味后得总浸膏。加1500mL水混悬，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对总浸膏进行萃取3次，合并相同萃取溶剂减压浓缩后得到石油醚萃取物154g，乙酸乙酯萃取物270g，正丁醇萃取物178g，以及水溶性部位浸膏85g。

将正丁醇萃取物178g用300mL甲醇和水的混合溶液(体积比＝1:4)进行溶解，过滤。将滤液加入D101型大孔树脂中，分别用3～4倍柱体积的水，20％乙醇水溶液(体积分数)，40％乙醇水溶液(体积分数)，60％乙醇水溶液(体积分数)以及80％乙醇水溶液(体积分数)进行梯度洗脱，洗脱液用不同比例的甲醇-氯仿进行展开，用碘蒸汽结合硫酸乙醇作为显色剂进行显色。经合并相同斑点的流份，最终得到Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4四个流份。其中，Fr.4为80％乙醇水溶液(体积分数)的洗脱液。

取Fr.4与200目硅胶按照重量比1:1.5的量进行拌样，待溶剂挥干后，经硅胶柱柱层析，依次用体积比为15:1，12:1，10:1，9:1以及7:3的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液进行洗脱，采用紫外灯结合碘蒸汽的方法对所得流份进行合并，得：Fr.4a～Fr.4d四个组分。其中，Fr.4a为体积比为12:1的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液的洗脱液；

取Fr.4a采用40％-80％甲醇水溶液(体积分数)进行制备色谱反复纯化，得到化合物M2(12.8mg)。化合物M2为淡黄色固体粉末，易溶于甲醇及乙醇等有机试剂。

本实施例中，8倍量的95％乙醇水溶液指牡丹皮炭干燥根茎与95％乙醇水溶液的质量体积比为1kg：8L。

化合物M2的结构确认：

化合物M2的¹H-¹H COSY以及HMBC相关示意图如图1所示，¹HNMR(500MHz，CD₃OD)谱如图2所示，¹HNMR谱图解析如表1所示，¹³C NMR(500MHz，CD₃OD)谱如图3所示，¹H-¹H COSY谱如图4所示，HMQC谱如图5所示，HMBC谱如图6所示。

表1.化合物M2的¹HNMR(500MHz，CD₃OD)谱图信息

HR-ESI-MS给出m/z：341.0996[M+H]⁺(计算值为341.1020)确定分子式为C₁₉H₁₆O₆，计算其不饱和度为12。

化合物M2的¹HNMR(500MHz，CD₃OD)谱中共显示8组氢信号(羟基较为活泼易被氘代试剂掩盖)，分别是δ2.49(3H，s)、δ2.54(3H，s)、δ3.91(3H，s)、δ6.60(1H，d，J＝9.0Hz)、δ7.13(1H，t，J＝8.0Hz)、δ7.20(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz)、δ7.43(1H，d，J＝9.0Hz)及δ7.56(1H，d，J＝1.5，8.0Hz)。其中δ2.49(3H，s)及δ2.54(3H，s)可能为与羰基相连的甲基氢信号，δ3.91(3H，s)为与氧相连的甲基氢；δ6.60(1H，d，J＝9.0Hz)与δ7.43(1H，d，J＝9.0Hz)可能为苯环1上的一组相邻氢信号，δ7.13(1H，t，J＝8.0Hz)、δ7.20(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz)及δ7.56(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz)为苯环2上相邻的氢信号。在¹³C NMR(500MHz，CD₃OD)谱中显示有19组碳信号，分别是δ15.0、δ26.4、δ56.6、δ104.1、δ115.7、δ116.0、δ118.8、δ124.0、δ124.5、δ125.6、δ134.8、δ139.8、δ146.6、δ147.8、δ152.0、δ152.2、δ154.5、δ174.2及δ205.4。其中δ15.0、δ26.4及δ56.6可能为甲基、羰甲基及甲氧基的碳信号，此外δ174.2、δ205.4提示该化合物可能含有两个酮羰基，结合氢谱推测δ205.2与δ174.2仅有一个酮羰基碳旁连接甲基结构，剩余一个可能为环内的一个羰基信号碳。

利用¹H-¹H COSY，HMQC以及HMBC对化合物2的碳氢进行关联分析，确定具体归属。在¹H-¹H COSY谱中，δ6.60(1H，H-5’)与δ7.43(1H，H-4’)相互关联且耦合；δ7.56(1H，H-4)与δ7.20(1H，H-6)、δ7.56(1H，H-4)与δ7.13(1H，H-5)以及δ7.13(1H，H-5)与δ7.20(1H，H-6)之间相互关联并耦合。在HMQC中，δ_H2.49归属于δ_C15.0、δ_H 2.54归属于δ_C26.4、δ_H 3.91归属于δ_C56.6、δ_H 6.60归属于δ_C104.1、δ_H 7.13归属于δ_C118.8、δ_H 7.20归属于δ_C125.6、δ_H 7.43归属于δ_C124.0以及δ_H 7.56归属于δ_C115.7。其中δ_H 2.54归属于δ_C26.4、δ_H 3.91归属于δ_C56.6符合之前对化合物存在一个与羰基相连接的甲基结构以及一个与氧相连接的甲基结构的推测且初步推测δ_H2.49归属于δ_C15.0为双键上的取代甲基信号。在HMBC谱中，δ_H2.49与δ139.8及δ152.2相关；δ_H2.54与δ116.0、δ124.0以及δ205.4相关；δ_H3.91与δ154.5相关；δ_H 6.60与δ116.0、δ134.8以及δ154.5相关；δ_H7.13与δ115.7、δ124.5及δ146.6相关；δ_H7.20与δ124.5、δ147.8以及δ118.8相关；δ_H7.43与δ134.8、δ152.0、δ154.5以及δ205.4相关；δ_H 7.56与δ118.8、δ146.6以及δ174.2相关；可以得出δ104.1、δ116.0、δ124.0、δ134.8、δ152.2以及δ154.5形成苯环1上的6个C；δ115.7、δ118.8、δ124.5、δ125.6、δ146.6及δ147.8形成苯环2上的6个C；其中，δ_H3.91与δ154.5相关耦合、δ_H2.54与δ116.0、δ124.0以及δ205.4说明甲氧基与羰基碳均为苯环1上的取代基；除此之外，又因为δ_H2.49与δ139.8及δ152.2相关耦合，且均为季碳无氢信号，故推测甲基连接的双键可能成环。

综上，确定化合物M2为3-(3-acetyl-6-hydroxy-2-methoxyphenyl)-8-hydroxy-2-methyl-4H-chromen-4-one，结构如下：

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1：本发明化合物的抗炎活性研究

1、材料

小鼠白细胞介素-6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒，抚生实业，货号A105894；一氧化氮(NO)含量测定试剂盒，抚生实业，货号A085517；

DMEM培养基，Hyclone，货号SH30022.01；胎牛血清Gibco公司，货号42F7180K；胰酶，Genview公司，货号89040101100；抗生素，Genview公司，货号87020101100，小鼠单核细胞巨噬细胞(RAW 264.7，ATCC)。

2、实验方法

(1)实验分组

分组：空白组：DMSO溶剂对照组；

LPS组(即对照组)：0.6μg/mL，12h；

LPS+M2组(即实验组)：LPS加药浓度为0.6μg/mL，化合物M2加药浓度分别为200、100、50、25、12.5μg/ml。

(2)细胞培养

小鼠巨噬细胞系RAW 264.7在含有10％FBS胎牛血清、1％双抗(链霉素100mg/mL、青霉素100U/mL)和90％DMEM完全培养基中培养。待细胞长满培养瓶后，按体积比1:3的稀释比对细胞进行传代培养。

(3)细胞活力测试

在96孔板中加入8×103个/孔对数期生长的RAW 264.7细胞，37℃，5％CO₂条件下孵育过夜。实验组加入不同浓度的化合物M2(200、100、50、25、12.5μg/ml)处理12h，加入终浓度为0.6μg/mL的脂多糖(LPS)溶液，每孔中加入20μL(5mg/mL)MTT溶液，培养箱内避光孵育4h后丢弃上层培养基，加入100μL DMSO溶解甲醛染料，避光震荡10min，用酶标仪测定490nm处吸光度。细胞存活率(％)＝(实验组OD－空白组OD)/(对照组OD－空白组OD)×100％，细胞抑制率(％)＝100％－细胞存活率(％)。

(3)化合物M2对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO分泌量的影响

在96孔板中加入8×103个/孔对数期生长的RAW 264.7细胞，37℃，5％CO2条件下孵育过夜。实验组加入不同浓度的M2(200、100、50、25、12.5μg/ml)处理2h，加入终浓度为0.6μg/mL的脂多糖(LPS)溶液，37℃、5％CO₂培养箱培养12h。培养结束后，4℃、1 000r/min离心5min，收集上清液，参照一氧化氮(NO)试剂盒说明书，在96孔板中加入50μL上清液后，加入50μL Griess A，震荡1min，加入Griess B继续反应10min，测定540nm吸光度值，用亚硝酸钠(NaNO₂)建立标准曲线，计算样品中亚硝酸钠浓度，从而推算各组细胞培养液中NO含量。

(4)化合物M2对炎症细胞因子IL-6分泌量的影响

按以上步骤(3)的实验方法对细胞进行处理，参照酶联免疫吸附剂(ELISA)试剂盒说明书对白细胞介素-6(IL-6)分泌量进行测定，根据标准曲线，计算各种炎症因子的含量。

3、实验结果

运用脂多糖(LPS)体外诱导的巨噬细胞炎症模型研究化合物M2的抗炎活性，结果如图7所示。可以看出，化合物M2不仅能够明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中NO的产生，还能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中炎症因子IL-6的表达，说明化合物M2具有良好的抗炎活性。

表2.各组处理后RAW264.7细胞的细胞存活率结果

各组处理后RAW264.7细胞的细胞存活率结果如图8和表2所示。可以看出，除了高剂量组化合物M2(200μmol/ml)外，其他各组的细胞存活率都大于90％，表明化合物M2对巨噬细胞的毒性较小。

上述实验结果表明，本发明化合物M2具有良好的抗炎活性。

实验例2：本发明化合物的抗肿瘤活性研究

1、材料

DMEM培养基，Hyclone，货号SH30022.01；胎牛血清，Gibco货号42F7180K胰蛋白酶，Genview，货号89040101100；抗生素，Genview，货号87020101100MTT，上海生工，货号A600799-0005；DMSO，Sigma货号RNBG8041；A549-人肺癌细胞株；HepG2-人肝癌细胞株；Hela-人宫颈癌细胞株；MCF-7-人乳腺癌细胞株。

2、实验方法

(1)药物制备与分组

以适量0.5％DMSO助溶化合物M2，用不含胎牛血清的DMEM培养液溶解，配制为浓度为200、100、50、25、12.5μg/ml的药液，然后分装药液，放-20℃冰箱保存。

细胞实验分为6组，分别为空白组，给药组(设置5个浓度，分别为200、100、50、25、12.5μg/ml)。

(2)细胞培养

Hela、A549、MCF-7、HepG2细胞分别用含10％胎牛血清、1％双抗的DMEM培养基，在37℃饱和湿度、含5％CO₂的培养箱中培养。

(3)实验步骤

(3.1)取生长状态良好的Hela、A549、MCF-7、HepG2细胞用0.25％胰酶消化后，细胞计数。

(3.2)将细胞种到96孔板中，Hela、A549密度为5000个细胞/孔，MCF-7、HepG2为7000个细胞/孔。

(3.3)待细胞稳定后分别进行不同的药物处理；于24h后进行CCK-8检测。CCK-8检测步骤如下：

(a)各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积CCK-8溶液，在37℃、5％CO₂培养箱中培养2小时；

(b)选择450nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，相对存活率为纵坐标绘制细胞生长柱形图。

(c)通过Graphpad软件计算并绘制存活率柱形图。

3、实验结果

采用CCK-8法研究化合物M2对4种肿瘤细胞(A549、HepG2、Hela、MCF-7)的抑制作用，结果如图9～12所示。可以看出，本发明提供的化合物M2能有效抑制肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞的生长，且其浓度越高，抑制作用越大。

上述实验表明本发明化合物M2对包括肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞均具有良好的抑制作用。

综上，本发明提供了一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途。实验结果表明，化合物M2不仅能够明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中NO的产生，还能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中炎症因子IL-6的表达，具有良好的抗炎活性。此外，化合物M2对包括肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞均具有良好的抑制作用。本发明提供的化合物在制备抗炎药物，以及预防和/或治疗癌症的药物中具有广阔的应用前景。

Claims (10)

1.式I所示化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅各自独立的选自氢、羟基、C_1～4烷基、C_1～4烷氧基。

2.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物，其特征在于：所述化合物为：

3.权利要求2所述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)取牡丹皮炭，加乙醇水溶液提取，收集提取液，浓缩得总浸膏；

(2)取总浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，取正丁醇萃取部位，加甲醇和水的混合溶液溶解，过滤，将滤液加入D101型大孔树脂中进行洗脱，得到Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4四个组分；

(3)取Fr.4组分经硅胶柱柱层析，得Fr.4a、Fr.4b、Fr.4c、Fr.4d四个组分，取Fr.4a组分分离提纯，即得权利要求2所述化合物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述乙醇水溶液为体积分数50％～100％的乙醇水溶液，优选为体积分数95％的乙醇水溶液；所述牡丹皮炭与乙醇水溶液的体积质量比为1：(6～10)kg/L，优选为1：8kg/L；所述提取方式为回流提取，提取时间为5～15小时，优选为10小时；

和/或，步骤(2)中，在所述D101型大孔树脂中进行梯度洗脱，采用的洗脱剂为水、体积分数20％的乙醇水溶液、体积分数40％的乙醇水溶液、体积分数60％的乙醇水溶液和体积分数80％的乙醇水溶液；所述Fr.4组分为体积分数80％的乙醇水溶液的洗脱液；

和/或，步骤(3)中，所述硅胶柱中采用的洗脱剂依次为体积比为15:1、12:1、10:1、9:1、7:3的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液；所述Fr.4a组分为体积比为12:1的二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液的洗脱液；所述分离提纯方法为制备色谱分离提纯，所述制备色谱采用的洗脱剂为体积分数40％-80％的甲醇水溶液。

5.一种抗炎和/或抗肿瘤的药物，其特征在于：它是以权利要求1～2任一项所述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制得的制剂。

6.权利要求1～2任一项所述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备一氧化氮生成抑制剂中的用途。

7.权利要求1～2任一项所述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备抗炎药物中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述抗炎药物能够抑制一氧化氮生成，和/或，所述抗炎药物能够抑制炎症因子IL-6的表达。

9.权利要求1～2任一项所述化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或其氘代化合物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述癌症为肺癌、肝癌、宫颈癌或乳腺癌。

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