CN113173843B - 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113173843B
CN113173843B CN202110547616.0A CN202110547616A CN113173843B CN 113173843 B CN113173843 B CN 113173843B CN 202110547616 A CN202110547616 A CN 202110547616A CN 113173843 B CN113173843 B CN 113173843B
Authority
CN
China
Prior art keywords
black shank
compound
tobacco black
solvent
silica gel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110547616.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113173843A (zh
Inventor
李银科
胡秋芬
杨光宇
周敏
汪伟光
董淼
黄海涛
刘欣
孔维松
李晶
王晋
许�永
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Minzu University
Original Assignee
Yunnan Minzu University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Minzu University filed Critical Yunnan Minzu University
Priority to CN202110547616.0A priority Critical patent/CN113173843B/zh
Publication of CN113173843A publication Critical patent/CN113173843A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113173843B publication Critical patent/CN113173843B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C50/00—Quinones
    • C07C50/26—Quinones containing groups having oxygen atoms singly bound to carbon atoms
    • C07C50/34—Quinones containing groups having oxygen atoms singly bound to carbon atoms the quinoid structure being part of a condensed ring system having three rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N35/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical
    • A01N35/06—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical containing keto or thioketo groups as part of a ring, e.g. cyclohexanone, quinone; Derivatives thereof, e.g. ketals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C46/00—Preparation of quinones
    • C07C46/02—Preparation of quinones by oxidation giving rise to quinoid structures
    • C07C46/06—Preparation of quinones by oxidation giving rise to quinoid structures of at least one hydroxy group on a six-membered aromatic ring
    • C07C46/08—Preparation of quinones by oxidation giving rise to quinoid structures of at least one hydroxy group on a six-membered aromatic ring with molecular oxygen
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用，所述化合物的结构式为：
Figure 372050DEST_PATH_IMAGE001
。所述的方法是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的。应用为所述的抗烟草黑胫病活性化合物在制备抗烟草黑胫病产品中的应用。本发明化合物结构新颖，且具有较好的抗黑胫病活性，可作为抗烟草黑胫病的先导化合物用于抗烟草黑胫病防治生物农药的研发。

Description

一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用。
背景技术
烟草黑胫病是烟草生产上最具毁灭性的病害之一，又称烟草疫病，烟农称为“黑杆疯”、“黑根”、“乌头病”。中国各主要产烟区均有不同程度发生，其中安徽、山东、河南省为历史上的重病区；云南、贵州、四川、湖南、广东、广西、福建等南方烟区发生亦相当普遍。目前黑胫病的防治主要通过轮作栽培、品种基因改良、生物农药等方法实现防治。其中用生物农药防治是最常用且最容易实现的方法。因此，寻找更多高效的生物农药先导化合物对烟草黑胫病的防治具有重要意义。
耳叶决明（学名：Cassia auriculata Linn.）是豆科，决明属多年生亚灌木状披散草本植物，高可达75厘米，枝条、叶柄、叶轴疏柔毛。小叶对生，线状镰形，顶端有小凸尖，基部近圆形；托叶线状锥形，花腋生，总状花序；总花梗顶端有小苞片；萼片卵状长圆形，顶端渐尖，花瓣黄色，卵形，花药长圆形；子房无柄，荚果扁平而直，8-9月开花；10-12月结果。该植物原产于印度、新加坡，在我国台湾省有栽培、华南、西南热带、亚热带地区有广泛种植。该植物具有广泛的药用价值，具有润肠解毒的高效，主治目赤肿痛、头晕头胀、口腔糜烂、习惯性便秘、痢疾、腹泻等疾病。而蒽醌类化合物是其主要活性成分。
在天然产物中，蒽醌类具有止血、抗菌、泻下、利尿等的作用。其中抗菌活性尤为突出，蒽醌类化合物对多种细菌均有不同程度的抑制作用，抑菌机理主要是抑制菌体糖及代谢中间产物的氧化和脱氢，并能抑制蛋白和核酸的合成，因此可某些抗菌素的毒副反应及耐药性。由于蒽醌类化合物具有广谱的药理活性，国内外研究者对该类化合物进行了深入的研究，除从天然产物中寻找该类化合物外，还经过结构修饰而得到具有更优药理活性的化合物。通过研究这类化合物的构效关系，可进一步研究和开发更多的蒽醌类化合物，从中寻找有效的先导化合物和活性基团。本发明旨在提供一种从耳叶决明中提取的具有显著抗烟草黑胫病活性的新型蒽醌类化合物，以期为抗烟草黑胫病的生物农药提供更多高效的候选化合物。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种抗烟草黑胫病活性化合物；第二目的在于提供所述抗烟草黑胫病活性化合物的制备方法；第三目的在于所述抗烟草黑胫病活性化合物的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述抗烟草黑胫病活性化合物是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，命名为：2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌，英文名为：2-(3- hydroxyethyl)-3,6-dimethoxy-5-methylanthraquinone，分子式为：C19H18O5，该化合物为深红色胶状物其结构式为：
Figure 982091DEST_PATH_IMAGE001
。
本发明的第二目的是这样实现的，是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，具体步骤为：
A、浸膏提取：将原料耳叶决明全株干燥粉碎至20~40目，取第一溶剂提取，浓缩；然后去第二溶剂萃取，水相用碳酸钠饱和后再用第二溶剂萃取，合并溶剂相浓缩得浸膏a；
B、硅胶柱层析：将浸膏a用浸膏a重量1.5~3倍的第三溶剂溶解，上硅胶柱层析，装柱硅胶为150~200目，用量为浸膏a重量的6~10倍，用体积比为1:0~0:1的三氯甲烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集三氯甲烷-丙酮体积配比为8:2的洗脱组分得到洗脱液b；
C、高效液相色谱分离：将洗脱液b经高效液相色谱分离纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物初品b；目标物初品b在经葡聚糖凝胶柱纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物纯品；
所述的第一溶剂为体积百分浓度为90~100%的乙醇水溶液；第二溶剂为乙酸乙酯；第三溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的抗烟草黑胫病活性化合物在制备抗烟草黑胫病产品中的应用。
本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定了为抗烟草黑胫病活性化合物，并表征了其具体结构为：
Figure 73544DEST_PATH_IMAGE002
所述的抗烟草黑胫病活性化合物为深红色胶状物，经红外、紫外和质谱及1H-NMR，13C-NMR，HMBC进行波谱解析， 1H-NMR，13C-NMR波谱数据图分别如图2，3所示，1H NMR 和 13CNMR 数据如表1所示；化合物的红外、紫外和质谱数据：UV (CH3OH) λ max (log ε) 215(4.15)、252 (3.78)、276 (3.69)、402 (3.22) nm；IR (KBr) ν max 3927、3042、2965、1668、1615、1558、1452、1364、1162、1068、840 cm-1; 1H NMR和 13C NMR 数据 (CDCl3, 500 和125 MHz) 见表-1；正离子模式 ESIMS m/z 349 [M+Na]+，HRESIMS m/z 349.1052 [M+Na]+(计算值C19H18O5Na，349.1044)。
结构解析过程如下：化合物1为深红色胶状物，HRESI-MS显示其准分子离子峰为349.1052 [M + Na]+，结合1H和13C NMR将分子式定为C19H18O5。其红外光谱显示化合物中有羟基 (3927 cm-1)、羰基 (1668 cm-1) 和芳环 (1615、1558、1452 cm-1) 信号，紫外光谱在215、252、276、402 nm有最大吸收也证实化合物中存在芳环结构。化合物的1H和13C NMR谱(表-1) 显示其含有19个碳和18个氢，包括一个1,2,4,5-四取代的苯环 (C-1～C-4，C-4a和C-10a；H-1，H-4)，一个1,2,3,4-四取代苯环(C-5～C-8，C-9a和C-10a；H-7和H-8)，一个甲基(C-13，H3-13)，两个甲氧基(δ C 56.2 q，56.4 q；δ H 3.80，3.84 s)，1个羟乙基(C-11和C-12，H2-11和H2-12)。根据两个苯环的核磁共振数据和典型的羰基信号(C-5和C-10)可初步推测该化合物为蒽醌类化合物。该推测可根据H-1和C-1a、C-4a、C-9， H-4和C-1a、C-4a、C-10，H-8和C-9, C-9a, C-10a的HMBC相关(图3)得到证实。
化合物的母体结构得到证实后，根据两个甲氧基氢(δ H 3.80、3.84)和C-3、C-6的HMBC相关可证实两个甲氧基取代在C-3和C-6位；根据甲基氢信号(H3-13)和C-5、C-6、C-10a有HMBC相关，可证实该甲基取代在C-5位；此外，根据H2-11和C-1、C-2、C-3，H2-12和C-2的HMBC相关，可证实羟乙基取代在C-2位。至此，本发明化合物的结构得到确认，其结构鉴定为：2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌，结构式如图1所示。
表1 化合物的 1H NMR 和 13C NMR 数据 (CDCl3)
Figure 579612DEST_PATH_IMAGE003
本发明的有益效果为：
1）本发明首次从耳叶决明中提取得到一个结构新颖的蒽醌类化合物，该化合物且具有较好的抗黑胫病活性，可作为抗烟草黑胫病的先导化合物用于抗烟草黑胫病防治生物农药研发。
2）本发明首次以中药材耳叶决明为原料，为具有植物病害防治功效的植物来源的天然产物开发提供了新的研究方向。
3）制备本化合物的原料来源广泛、成本低，可为本化合物的制备提供充足持续的原料支持，易实现产业化生产。
附图说明
图1为本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的结构式；
图2为本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的核磁共振碳谱；
图3为本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的核磁共振氢谱；
图4为本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的主要HMBC相关图示。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，命名为：2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌，英文名为：2-(3- hydroxyethyl)-3,6-dimethoxy-5- methylanthraquinone，分子式为：C19H18O5，该化合物为深红色胶状物其结构式为：
Figure 625190DEST_PATH_IMAGE002
。
本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的方法，是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，具体步骤为：
A、浸膏提取：将原料耳叶决明全株干燥粉碎至20~40目，取第一溶剂提取，浓缩；然后去第二溶剂萃取，水相用碳酸钠饱和后再用第二溶剂萃取，合并溶剂相浓缩得浸膏a；
B、硅胶柱层析：将浸膏a用浸膏a重量1.5~3倍的第三溶剂溶解，上硅胶柱层析，装柱硅胶为150~200目，用量为浸膏a重量的6~10倍，用体积比为1:0~0:1的三氯甲烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集三氯甲烷-丙酮体积配比为8:2的洗脱组分得到洗脱液b；
C、高效液相色谱分离：将洗脱液b经高效液相色谱分离纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物初品b；目标物初品b在经葡聚糖凝胶柱纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物纯品；
所述的第一溶剂为体积百分浓度为90~100%的乙醇水溶液；第二溶剂为乙酸乙酯；第三溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
所述的第一溶剂为体积百分浓度95%的乙醇水溶液。
B步骤中在浸膏上硅胶柱分离前，用浸膏a重量1.5~3倍的第三溶剂溶解，再用浸膏a重量0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样。
B步骤中所述的氯仿-丙酮混合有机溶剂的梯级配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1。
C步骤中所述的高效液相色谱分离是采用21.2 mm × 25 cm，5 μm的C18色谱柱，以58% 甲醇水溶液为流动相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为402 nm，收集32.4min 的色谱峰。
C步骤中葡聚糖凝胶柱纯化的流动相为甲醇。
本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用为所述的抗烟草黑胫病活性化合物在制备抗烟草黑胫病产品中的应用。
以本发明所述的抗烟草黑胫病活性化合物为模板合成的化合物同样能够实现本发明的目的。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1
本实施例耳叶决明样品来源于云南西双版纳。取耳叶决明全株晒干，粉碎到约 35目。称取3.2 kg粉碎后的样品，置于20 L的玻璃反应釜中，加入95%的乙醇水溶液6 L，回流提取50 min，滤出提取液；再次往残渣中加入95%的乙醇水溶液6 L，回流提取50 min，滤除提取液。合并两次提取液浓缩到小体积，然后用3%的酒石酸溶液 6 L 稀释，再次用6 L的乙酸乙酯萃取2次，合并萃取的乙酸乙酯相，减压浓缩得蒽醌部位浸膏268.4 g。浸膏用320 g(80-100 目) 粗硅胶拌样，烘干，用 470 g硅胶 (150-200目) 柱色谱，三氯甲烷：丙酮（20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5）梯度洗脱，分成6个部分。选取8:2洗脱部分进行HPLC进一步分离：用Agilent公司的Zorbax PrepHT GF (21.2 mm × 25 cm) 反相柱，以 58% 甲醇水溶液为流动相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为402 nm，收集32.4 min的色谱峰，多次累加后蒸干，得化合物粗品。粗品再用甲醇溶解，以甲醇为流动相，用葡聚糖凝胶柱净化，得深红色胶状物，即目标化合物纯品。
取制备得到深红色胶状物，经红外、紫外和质谱及1H-NMR，13C-NMR，HMBC进行波谱解析， 1H-NMR，13C-NMR波谱数据图分别如图2，3所示，1H NMR 和 13C NMR 数据如表1所示；化合物的红外、紫外和质谱数据：UV (CH3OH) λ max (log ε) 215 (4.15)、252 (3.78)、276(3.69)、402 (3.22) nm；IR (KBr) ν max 3927、3042、2965、1668、1615、1558、1452、1364、1162、1068、840 cm-1; 1H NMR和 13C NMR 数据 (CDCl3, 500 和 125 MHz) 见表-1；正离子模式 ESIMS m/z 349 [M+Na]+，HRESIMS m/z 349.1052 [M+Na]+ (计算值C19H18O5Na，349.1044)。
结构解析过程如下：化合物1为深红色胶状物，HRESI-MS显示其准分子离子峰为349.1052 [M + Na]+，结合1H和13C NMR将分子式定为C19H18O5。其红外光谱显示化合物中有羟基 (3927 cm-1)、羰基 (1668 cm-1) 和芳环 (1615、1558、1452 cm-1) 信号，紫外光谱在215、252、276、402 nm有最大吸收也证实化合物中存在芳环结构。化合物的1H和13C NMR谱(表-1) 显示其含有19个碳和18个氢，包括一个1,2,4,5-四取代的苯环 (C-1～C-4，C-4a和C-10a；H-1，H-4)，一个1,2,3,4-四取代苯环(C-5～C-8，C-9a和C-10a；H-7和H-8)，一个甲基(C-13，H3-13)，两个甲氧基(δ C 56.2 q，56.4 q；δ H 3.80，3.84 s)，1个羟乙基(C-11和C-12，H2-11和H2-12)。根据两个苯环的核磁共振数据和典型的羰基信号(C-5和C-10)可初步推测该化合物为蒽醌类化合物。该推测可根据H-1和C-1a、C-4a、C-9， H-4和C-1a、C-4a、C-10，H-8和C-9, C-9a, C-10a的HMBC相关(图-3)得到证实。
化合物的母体结构得到证实后，根据两个甲氧基氢(δ H 3.80、3.84)和C-3、C-6的HMBC相关可证实两个甲氧基取代在C-3和C-6位；根据甲基氢信号(H3-13)和C-5、C-6、C-10a有HMBC相关，可证实该甲基取代在C-5位；此外，根据H2-11和C-1、C-2、C-3，H2-12和C-2的HMBC相关，可证实羟乙基取代在C-2位。至此，本发明化合物的结构得到确认，其结构鉴定为：2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌，结构式如图1所示。
表1 化合物的 1H NMR 和 13C NMR 数据 (CDCl3)
Figure 976537DEST_PATH_IMAGE003
实施例2
耳叶决明样品来源于云南德宏。取取耳叶决明全株晒干，粉碎到约 40 目。称取3.5 kg粉碎后的样品，置于20 L的玻璃反应釜中，加入95%的乙醇水溶液8 L，回流提取40min，滤出提取液；再次往残渣中加入95%的乙醇水溶液8 L，回流提取40 min，滤除提取液。合并两次提取液浓缩到小体积，然后用3%的酒石酸溶液 8 L 稀释，用8 L的乙酸乙酯萃取2次。减压浓缩得蒽醌部位浸膏381.6 g。浸膏用420 g (80-100 目) 粗硅胶拌样，烘干，用850 g硅胶 (150-200目) 柱色谱，三氯甲烷：丙酮（20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5）梯度洗脱，分成6个部分。选取8:2洗脱部分进行HPLC进一步分离：用Agilent公司的Zorbax PrepHT GF(21.2 mm × 25 cm) 反相柱，以 58% 甲醇水溶液为流动相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为402 nm，收集32.4 min 的色谱峰，多次累加后蒸干，得化合物粗品。粗品再用甲醇溶解，以甲醇为流动相，用葡聚糖凝胶柱净化，得化合物纯品。
本实施例得到的化合物结构鉴定同实施例1，确认本实施例制备的化合物为所述的蒽醌类化合物——2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌。
实施例3
耳叶决明样品来源于云南元江县。取取耳叶决明全株晒干，粉碎到约 50 目。称取4.2 kg粉碎后的样品，置于20 L的玻璃反应釜中，加入95%的乙醇水溶液10 L，回流提取30min，滤出提取液；再次往残渣中加入95%的乙醇水溶液10 L，回流提取50 min，滤除提取液。合并两次提取液浓缩到小体积，然后用3%的酒石酸溶液 10 L 稀释，用10 L的乙酸乙酯萃取2次。合并萃取的乙酸乙酯相，减压浓缩得蒽醌部位浸膏220 g。浸膏用280 g (80-100目) 粗硅胶拌样，烘干，用580 g硅胶 (150-200目) 柱色谱，三氯甲烷：丙酮（20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5）梯度洗脱，分成6个部分。选取8:2洗脱部分进行HPLC进一步分离：用Agilent公司的Zorbax PrepHT GF (21.2 mm × 25 cm) 反相柱，以 58% 甲醇水溶液为流动相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为402 nm，收集 32.4 min 的色谱峰，多次累加后蒸干，得化合物粗品。粗品再用甲醇溶解，以甲醇为流动相，用葡聚糖凝胶柱净化，得化合物纯品。
本实施例得到的化合物结构鉴定同实施例1，确认本实施例制备的化合物为所述的蒽醌类化合物——2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌。
实施例4
抗烟草黑胫病活性试验
一、抑制烟草疫霉菌活性试验
取燕麦片加水1000 mL, 在沸水浴上加热1 小时，纱布过滤后加水补足1000 mL，然后加糖和琼脂，加热使琼脂完全熔化后，趁热用纱布(中间加脱脂棉) 过滤于三角瓶中，121 ℃、15 磅灭菌20min (分钟), 取出冷却至45℃左右，于无菌操作台上加入氨苄青霉素(5 mg/100 mL) , 混匀后倾倒于平皿中, 28℃培养48 小时，经检查无菌后待用。
取直径5 mm 的圆形滤纸, 放入培养皿中, 置于15 磅高压灭菌30 min, 烘干后分别浸入20 µM的实施例1制备的化合物、75%乙醇水溶液及灭菌蒸馏水中。于无菌操作台上用无菌吸管分别吸取0.2 mL烟草疫霉菌的新鲜菌液于燕麦片琼脂培养基平板上。用三角玻璃涂棒涂布均匀, 将滤纸片用镊子分别轻贴于相应的平板上, 置28℃培养观察实验结果,测定抑菌圈大小。同时，以农用氯霉素作为阳性对照。
测试结果表明：本发明的蒽醌类化合物抑菌圈直径为14.2±1.4 mm，阳性对照农用氯霉素的抑菌圈直径为12.2±1.6 mm。说明本发明化合物抑制烟草疫霉菌效果显著优于阳性对照农用氯霉素，具有突出的抑制黑胫病活性。
二、防治烟草黑胫病的效果检测
烟苗移栽到直径10 cm，高10 cm的花盆中，栽培基质为：灭菌土壤、草炭、珍珠岩培养(2:2:1) ，每盆1 株。移栽缓苗后于根部加入菌谷10 g/株，将烟苗置于人工气候室内培养，白天30℃，黑夜28℃，光照：黑暗 ( 12 h :12 h)，相对湿度95%，使烟苗发病。在黑胫病发病前使用20 µM的本发明化合物对烟苗进行灌根处理，每株浇10 mL，共浇2次。每个处理10 株，重复3 次，14 d 后调查发病情况，计算病情指数。
结果：本发明化合物对烟草黑胫病防治效果为(62.2±3.8)%，具有显著的烟草黑胫病防治效果。

Claims (7)

1.一种抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，所述的抗烟草黑胫病活性化合物在制备抗烟草黑胫病产品中的应用，所述抗烟草黑胫病活性化合物是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，命名为：2-(2-羟乙基)-3,6-二甲氧基-5-甲基蒽醌，英文名为：2-(3- hydroxyethyl)-3,6-dimethoxy-5-methylanthraquinone，分子式为：C19H18O5，该化合物为深红色胶状物其结构式为：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
2.根据权利要求1所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，所述的抗烟草黑胫病活性化合物是以耳叶决明全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，具体步骤为：
A、浸膏提取：将原料耳叶决明全株干燥粉碎至20~40目，取第一溶剂提取，浓缩；然后去第二溶剂萃取，水相用碳酸钠饱和后再用第二溶剂萃取，合并溶剂相浓缩得浸膏a；
B、硅胶柱层析：将浸膏a用浸膏a重量1.5~3倍的第三溶剂溶解，上硅胶柱层析，装柱硅胶为150~200目，用量为浸膏a重量的6~10倍，用体积比为1:0~0:1的三氯甲烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集三氯甲烷-丙酮体积配比为8:2的洗脱组分得到洗脱液b；
C、高效液相色谱分离：将洗脱液b经高效液相色谱分离纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物初品b；目标物初品b在经葡聚糖凝胶柱纯化得到目标物抗烟草黑胫病活性化合物纯品；
所述的第一溶剂为体积百分浓度为90~100%的乙醇水溶液；第二溶剂为乙酸乙酯；第三溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
3.根据权利要求2所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，所述的第一溶剂为体积百分浓度95%的乙醇水溶液。
4.根据权利要求2所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，B步骤中在浸膏上硅胶柱分离前，用浸膏b重量1.5~3倍的第三溶剂溶解，再用浸膏b重量0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样。
5.根据权利要求2所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，B步骤中所述的氯仿-丙酮混合有机溶剂的梯级配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1。
6.根据权利要求2所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，C步骤中所述的高效液相色谱分离是采用21.2 mm × 25 cm，5 μm的C18色谱柱，以 58% 甲醇水溶液为流动相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为402 nm，收集32.4 min 的色谱峰。
7.根据权利要求2所述的抗烟草黑胫病活性化合物的应用，其特征在于，C步骤中葡聚糖凝胶柱纯化的流动相为甲醇。
CN202110547616.0A 2021-05-19 2021-05-19 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用 Active CN113173843B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110547616.0A CN113173843B (zh) 2021-05-19 2021-05-19 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110547616.0A CN113173843B (zh) 2021-05-19 2021-05-19 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113173843A CN113173843A (zh) 2021-07-27
CN113173843B true CN113173843B (zh) 2022-08-09

Family

ID=76929547

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110547616.0A Active CN113173843B (zh) 2021-05-19 2021-05-19 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113173843B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005029958A1 (fr) * 2003-08-29 2005-04-07 Institute For Plant Protection And Soil Science, Hubei Academy Of Agricultural Sciences Utilisation de derives d'antrhaquinone en tant que pesticides pour la lutte contre les maladies des plantes
CN106942240A (zh) * 2017-02-28 2017-07-14 江苏辉丰农化股份有限公司 一种包含大黄素衍生物与苯并异噻唑啉酮的杀菌剂组合物
CN106966888A (zh) * 2017-04-28 2017-07-21 云南民族大学 一种具有抗烟草花叶病毒活性的新颖蒽醌类化合物的制备方法和应用
CN107011143A (zh) * 2017-05-05 2017-08-04 云南民族大学 两种蒽醌类化合物的制备方法和应用
CN107098879A (zh) * 2017-06-02 2017-08-29 云南中烟工业有限责任公司 一种具有抗菌活性的异黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN113200840A (zh) * 2021-05-19 2021-08-03 云南民族大学 一种具有抗菌活性的蒽醌类化合物及其制备方法和应用
CN113826620A (zh) * 2021-10-12 2021-12-24 安徽农业大学 两种蒽醌类化合物在防治根结线虫病方面的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005029958A1 (fr) * 2003-08-29 2005-04-07 Institute For Plant Protection And Soil Science, Hubei Academy Of Agricultural Sciences Utilisation de derives d'antrhaquinone en tant que pesticides pour la lutte contre les maladies des plantes
CN106942240A (zh) * 2017-02-28 2017-07-14 江苏辉丰农化股份有限公司 一种包含大黄素衍生物与苯并异噻唑啉酮的杀菌剂组合物
CN106966888A (zh) * 2017-04-28 2017-07-21 云南民族大学 一种具有抗烟草花叶病毒活性的新颖蒽醌类化合物的制备方法和应用
CN107011143A (zh) * 2017-05-05 2017-08-04 云南民族大学 两种蒽醌类化合物的制备方法和应用
CN107098879A (zh) * 2017-06-02 2017-08-29 云南中烟工业有限责任公司 一种具有抗菌活性的异黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN113200840A (zh) * 2021-05-19 2021-08-03 云南民族大学 一种具有抗菌活性的蒽醌类化合物及其制备方法和应用
CN113826620A (zh) * 2021-10-12 2021-12-24 安徽农业大学 两种蒽醌类化合物在防治根结线虫病方面的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Three new anthraquinones from the twigs of Cassia auriculata Linn. and;Feng-Xian Yang，等;《Phytochemistry Letters 》;20210617;第44卷;第125-1287页 *
Three new anthraquinones from the twigs of Cassia fistula and their bioactivities;Min Zhou，等;《Journal of Asian Natural Products Research》;20170202;第19卷(第11期);第1073-1078页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113173843A (zh) 2021-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110452170B (zh) 一种异喹啉生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN110483396B (zh) 一种异戊烯基异喹啉生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN110483535B (zh) 一种异喹啉三环生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN113200989B (zh) 一种色酮生物碱类化合物的制备方法及其应用
WO2014183630A1 (zh) 一种木脂素苷类化合物及其制备方法
Budzianowska et al. Phenylethanoid glucosides from in vitro propagated plants and callus cultures of Plantago lanceolata
CN113214152B (zh) 川滇唐松草中抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法与应用
CN113087664A (zh) 一种喹啉生物碱类化合物及其制备方法与应用
CN105777845B (zh) 一种毛叶山桐子中抗菌成分的提取方法及用途
CN111072616B (zh) 一种抗烟草黑胫病的化合物及其制备方法和用途
CN110590723B (zh) 烟草中一种甾醇类化合物及其制备方法与应用
CN110357894B (zh) 一种三环生物碱类化合物及其制备方法与应用
CN113173843B (zh) 一种抗烟草黑胫病活性化合物及其制备方法和应用
CN109535169B (zh) 一种色酮衍生物及其制备方法和应用
CN113200911B (zh) 一种喹啉生物碱类化合物及其制备方法与应用
CN114409661B (zh) 一种吲哚生物碱类化合物及其制备方法与应用
CN113717184B (zh) 雪茄烟中一种具有抗烟草花叶病毒活性的喹啉生物碱及其制备方法和应用
CN110467623B (zh) 一种苯并异呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN112898357B (zh) 金莲花中一种二萜苷类新化合物及其分离纯化方法和应用
CN112608362B (zh) 原人参二醇型毛蕊铁线莲新苷类化合物、制备方法及应用
CN109438464B (zh) 一种提取自短叶决明中的色酮衍生物及其制备方法和应用
CN109438406B (zh) 一种提取自柄腺山扁豆中的色酮衍生物及其制备方法和应用
CN117209428A (zh) 一种具有抗烟草黑胫病活性的蒽醌类化合物及其制备方法和应用
CN107501225B (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN115557960B (zh) 一种异戊烯基化吲哚生物碱类化合物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant