CN113156030B

CN113156030B - 一种磁性糊精微球、制备方法和在平菇内毒死蜱残留量测定中的应用

Info

Publication number: CN113156030B
Application number: CN202011486267.8A
Authority: CN
Inventors: 张素敏; 冯翠萍; 荆旭; 陈振家
Original assignee: Shanxi Agricultural University
Current assignee: Shanxi Agricultural University
Priority date: 2021-03-26
Filing date: 2021-03-26
Publication date: 2023-03-14
Anticipated expiration: 2041-03-26
Also published as: CN113156030A

Abstract

本发明涉及植物农药残留检测技术领域，具体来说是一种磁性糊精微球、制备方法和在平菇内毒死蜱残留量测定中的应用，本发明建立一种可转换亲水性溶剂、磁固相萃取、纳米磁性糊精微球、分散液液微萃取技术和高效色谱联用测定平菇中的有机磷类农药毒死蜱残留量的方法，使用己酸与待测样品充分接触进行萃取，然后用磁性纳米糊精微球吸附己酸，再将待测样品洗脱用以检测。本发明利用制得的磁性微球作为磁固相载体，通过外加磁场使吸附毒死婢的磁性微球能够快速分离，不仅明显缩短了前处理时间而且极大的减轻了溶剂消耗，使得检测效率大大提高，同时采用毒性低的己酸做为溶剂，这对测定平菇中毒死蜱残留检测有很大的应用价值。

Description

一种磁性糊精微球、制备方法和在平菇内毒死蜱残留量测定中的应用

技术领域

本发明涉及植物农药残留检测技术领域，具体来说是一种磁性糊精微球、制备方法和在平菇内毒死蜱残留量测定中的应用。

背景技术

食用菌是一种可食用或药用的大型真菌，通称蘑菇，是一种重要的蔬菜。它具有蛋白质含量高、脂肪含量低，以及含有大量多糖等营养特性，对人体有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖血脂等作用。

有机磷农药是广泛应用的一类农药，因其具有高活性、低残留、种类多、易分解、不易在动物和人体中积累等特点，被广泛应用于农业、园艺、医学治疗等方面；虽然有机磷化合物优点众多，但是它的缺点也非常明显，例如容易污染环境且危害人体健康，因此机磷化合物滥用产生的问题越来越受到人们的关注。我国是农业大国，随着大量的杀虫剂接触人群，除了农业人员面临着杀虫剂的危害以外，越来越多的妇女儿童也受到低剂量杀虫剂的危害，有机磷是脂溶性物质，它可以污染皮肤且无损伤的进入机体，它也可以进入胎盘，导致流产，堕胎。

磁固相萃取技术(MSPE)是一种新型的固相萃取技术，利用具有磁性的粒子作为固相萃取吸附剂，将其分散在介质中进行萃取，然后利用外加磁场实现对吸附剂的分离和回收。与传统方法相比它操作简单，并且通过外加磁场从而达到样品快速分离的作用，避免了填充柱背压过高的问题。MSPE具有材料制备简单、磁性材料表面易于改性、在溶液中分散性好、传质速度快、分离迅速、操作简单、材料可重复利用、检出限低等优势。

毒死蜱是世界上应用很广泛的一种有机磷杀虫剂，在食用菌生产中，虽不被提倡使用，但是仍有一定的应用群体。这样就会造成食用菌和产地环境农药污染，影响人体健康。目前，对其他林产品中的毒死蜱农残的检测有一些研究，但平菇中毒死蜱农药残留测定的研究还很少。

现有技术中常采用液相色谱法(LC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)，LC-MS和GC-MS测定毒死蜱农药残留量，这些测定方法均需要进行前处理，常规采用的是液相萃取和固相萃取，但是这两种方法不仅操作步骤繁琐而且耗时较长，还会消耗大量的有机溶剂，因此在发展的过程中逐渐被分散液液微萃取方法替代，但是一般的分散液液微萃取方法使用的是卤代烃等毒性大的溶剂，对测试人员的身体易于造成伤害，综上所述，现有技术的前处理方法均存在一定的缺陷。

发明内容

针对上述存在的技术不足，本发明的目的是提供了一种磁性糊精微球、制备方法和在平菇内毒死蜱残留量测定中的应用，本发明利用制得的磁性微球作为磁固相载体，通过外加磁场使吸附毒死婢的磁性微球能够快速分离，不仅明显缩短了前处理时间而且极大的减轻了溶剂消耗，使得检测效率大大提高，同时采用毒性低的己酸做为溶剂，这对测定平菇中毒死蜱残留检测有很大的应用价值。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种磁性糊精微球的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备水相：将糊精糊化，得到水相；

S2、制备油相：

将表面活性剂溶解于正己烷中，于45-55℃条件下溶解，再加入交联剂、四氧化三铁粉末和助表面活性剂，混合均匀后得到油相；

其中，所述交联剂为三偏磷酸钠，所述三偏磷酸钠与所述糊精的质量比为0.0025-0.0075:1；所述四氧化三铁粉末与所述糊精的质量比为0.0025-0.005:1；所述四氧化三铁粉末的粒径为20-40nm；所述助表面活性剂为正戊醇，所述正戊醇的体积与所述糊精的质量之比为3-5mL:1g；所述表面活性剂包括司班60和吐温80的混合物，且司班60与吐温80的质量比为1:1-2；

S3、磁性纳米糊精微球的制备：

将水相加入至油相中并搅拌均匀后，于55-65℃条件下搅拌反应3-3.5h，再于80-90℃下破乳30-35min，除去上层油相，经洗涤、干燥后得到磁性纳米糊精微球；

其中，糊精与油相的体积比为1.4-1.5:1。

优选的，所述步骤S1中糊精糊化的条件为：将糊精和NaOH共同加入至蒸馏水中，80-90℃下糊化25-35min，糊精和NaOH的质量比为1:0.1-0.2。

优选的，所述步骤S3中洗涤、干燥的条件为：用无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮交替洗涤3-5次后，恒温干燥。

本发明还保护了制备方法制备得到的磁性糊精微球。

本发明还保护了磁性糊精微球在测定平菇内毒死蜱残留量中的应用。

优选的，所述平菇内毒死蜱残留量按照如下步骤测定：

S1、平菇样品预处理：

按平菇粉质量与乙腈体积比为1g:2mL将粉碎的平菇加入至乙腈中，涡旋，取上清液做为待测样品；

S2、待测样品的提取：

将待测样品溶解于去离子水中，加入无机盐和萃取剂后涡旋，再加入磁性纳米糊精微球后再次涡旋，涡旋结束后再于3000-3500r/min下离心10min，得到的固体为待测微球；

其中，待测样品和去离子水的体积之比为1-1.5:5；磁性纳米糊精微球的质量与待测样品的体积之比为10-50mg：1mL；所述萃取剂为戊酸或己酸；所述无机盐为氯化钠，所述氯化钠的质量与待测样品的体积比为200-1000mg：1mL；

S3、待测微球的分离：

利用外加磁铁将S2的待测微球吸附至离心管壁上，弃掉溶液后，对待测微球洗脱，得到上清液和洗脱后的磁性糊精微球，上清液为待检测液；

S4、待检测液的测定：将过滤后的待检测液采用高效液相系统检测。

优选的，所述S2中的萃取剂为己酸，所述己酸与待测样品的体积比为40-80μL：1mL。

优选的，所述S2中氯化钠的质量与待测样品的体积比为200-600mg：1mL。

优选的，所述S3中洗脱的方法为：向含有待测微球的离心管内加入乙腈，涡旋后，采用外部磁铁吸附洗脱后的磁性糊精微球。

优选的，所述S4中过滤操作采用0.22μm有机滤膜。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

1、本发明建立一种可转换亲水性溶剂、磁固相萃取、纳米磁性糊精微球、分散液液微萃取技术和高效色谱联用测定平菇中的有机磷类农药毒死蜱残留量的方法；利用磁固相萃取技术，使得本申请萃取时间短、操作简单、无需净化、溶剂毒性低、富集倍数高、重现性好且准确度高。

2、本发明使用的溶剂为己酸，己酸是低毒性的萃取剂，相比于现有技术的毒性大的卤代烃来说，存在更加广阔的应用空间。

3、本发明以糊精、四氧化三铁磁粉为原料，三偏磷酸钠为交联剂，利用反相微乳液法制备成磁性糊精纳米微球，再将其与磁固相萃取和高效液相色谱联用，测定平菇中的有机磷类农药毒死蜱残留量，旨在建立一种更加快速高效的针对有机磷农药残留的检测方法；

本发明将可转换亲水性溶剂、磁固相萃取、分散液液微萃取技术相结合，之后与高效液相色谱联用，成功地建立了测定平菇中有机磷农药毒死蜱的一种方法；巧妙的将分散液液微萃取与磁固相萃取两种技术结合在一起；实验中优化了一系列影响实验萃取效率的因素，并对该方法的性能进行了评价，获得了满意的回收率，较低的检出限，并且给出了应用于平菇中有机磷毒死蜱残留量的测定可行性技术方案；综上所述，该方法的优点是：整个实验简便快捷、分析成本低、绿色环保。

4、本发明将糊精在碱性条件下糊化，得到水相，糊精分子比淀粉小，而且无毒，无免疫原性，能够在食品工业中应用；将司班60和吐温80做为表面活性剂，正戊醇做为助表面活性剂，表面活性剂和助表面活性剂都是反相微乳液法必不可少的物质，他们的存在可以保证反相微乳液体系透明、稳定，三偏磷酸钠做为交联剂，四氧化三铁粉末做为磁性微球，四氧化三铁是粒径比较小的磁性材料，本发明中四氧化三铁粒径越小越好；将油相与水相共混并采用反相微乳液法反应后得到磁性糊精微球，采用反相微乳液法目的是使制得的微球粒径更小；制得的微球有很强的吸附功能，而且容易改性，能够做为高分子载体被应用于食品、医药及化妆品产业，还能够用于酶的固定化、免疫测定、细胞分离、基团重组、DNA分离和层析等领域。

本发明在平菇内毒死蜱残留量测定时，先将平菇和农药制成用于检测的待测样品，再将待测样品与氯化钠和己酸混合，加入氯化钠改变离子浓度，增加溶解度，促进目标物毒死婢在萃取过程中分配到有机相中，使用己酸与待测样品充分接触进行萃取，然后用磁性纳米糊精微球吸附己酸；此时乙腈作为分散剂，己酸作为萃取剂进行分散液液微萃取的过程，实现转换亲水性溶剂的目的；

平菇内毒死蜱残留量的测定方法为：先把平菇粉和农药溶于乙腈中，漩涡提取后，加入氯化钠和己酸继续提取，提取完成后，就完成了分散液液微萃取，这步完成后加入磁性纳米糊精微球，让微球充分吸附溶解在己酸里的毒死蜱，完成磁固相微萃取，然后利用外加磁场把吸附了毒死蜱的磁性微球快速富集起来，然后再把毒死蜱洗脱出来，利用高效液相色谱仪对洗脱出来的毒死蜱进行测定；

本申请制得的磁性纳米糊精微球具有很强的吸附能力，能够将分散在己酸中的毒死蜱吸附到磁性纳米糊精微球上，然后利用外加磁场快速把磁性微球富集起来，再把吸附在微球上的毒死蜱洗脱下来，上机检测，这样大大缩短了检测前处理时间，提高检测效率。

5、本发明在检测过程中，优化后的萃取条件为：在待测样品为1mL时，磁性纳米糊精微球为20mg，己酸40μL，使用300μL乙腈将萃取物进行洗脱，有机磷毒死蜱的检出限为0.0004mg/mL，平菇中有机磷毒死蜱的回收率为81.37-88.64％，结果表明本发明的方法能够用于平菇中有机磷毒死蜱残留量的测定。

附图说明

图1为本发明的实施例1制得的磁性纳米糊精微球电镜表征；

图2为在最佳波长条件下毒死蜱标品色谱图；

图3为本发明实施例1的己酸及实施例4的戊酸对回收率影响图；

图4为本发明实施例1及实施例8-实施例11的己酸用量对回收率影响图；

图5为本发明实施例1及实施例12-实施例15的纳米磁性微球用量对回收率影响图；

图6为本发明实施例1及实施例16-实施例19的氯化钠用量对回收率影响图；

图7为本发明实施例1的检测液在最佳波长条件下毒死蜱标品色谱图；

图8为本发明的毒死蜱标准曲线图。

具体实施方式

下面结合本发明实施例中的附图，用以较佳的实施例及附图配合详细的说明。

材料与试剂

平菇，市售；甲醇，乙腈，色谱纯；纳米四氧化三铁(纯度为99％)；氯化钠，正己烷，丙酮，无水乙醇，正戊醇，司班60，吐温80，均为分析纯；毒死蜱，购于中国农业大学。

仪器与设备

Agilent1260高效液相色谱仪，安捷伦公司；ZORBAX SB-C18色谱柱(150×4.6mm，5μm)，安捷伦公司；有机相针式滤膜器(尼龙)，上海安谱实验科技股份有限公司；低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；电子恒温水浴锅，北京中兴伟业仪器有限公司；多管漩涡混合器，常州恩培仪器制造有限公司。

实施例1

一种磁性糊精微球的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备水相：

精确的称取4g糊精、0.6gNaOH于250mL锥形瓶中，加入200mL蒸馏水，85℃糊化30min；

S2、制备油相：

精确的称取6.6g司班60、13.2g吐温80、100mL正己烷于250mL锥形瓶中，置于50℃水浴锅中溶解，再加入0.01g三偏磷酸钠、0.01g四氧化三铁粉末、18mL正戊醇，混合均匀后得到油相；

S3、磁性纳米糊精微球的制备：

将水相逐滴加至油相中并不停的搅拌，水油相混合后高速匀浆机搅拌10min，然后置于60℃水浴锅中反应3小时，然后85℃破乳30分钟，除去上层油相，用无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮交替洗涤4次后，置于60℃干燥箱中恒温干燥，得到制备好的磁性纳米糊精微球。

平菇内毒死蜱残留量按照如下步骤测定方法，包括以下步骤：

S1、平菇样品预处理：

将1g平菇粉和50μL配好的浓度为500ppm的有机磷农药加入至2mL乙腈中，涡旋，取上清液做为待测样品；

S2、待测样品的提取：

将1mL待测样品溶解于5mL去离子水中，加入200mg氯化钠和40μL己酸后涡旋5min，再加入20mg磁性纳米糊精微球后再次涡旋5min，涡旋结束后再于3000r/min下离心10min，得到的固体为待测微球；

S3、待测微球的分离：

利用外加磁铁将S2的待测微球吸附至离心管壁上，弃掉溶液后，向含有待测微球的离心管内加入300μL乙腈，涡旋5min后，得到上清液和洗脱后的磁性糊精微球，采用外部磁铁吸附洗脱后的磁性糊精微球对待测微球洗脱，上清液为待检测液；

实施例2

一种磁性糊精微球的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备水相：

精确的称取4g糊精、0.4gNaOH于250mL锥形瓶中，加入180mL蒸馏水，80℃糊化33min；

S2、制备油相：

精确的称取6.6g司班60、0.6g吐温80、80mL正己烷于250mL锥形瓶中，置于45℃水浴锅中溶解，再加入0.03g三偏磷酸钠、0.02g四氧化三铁粉末、20mL正戊醇，混合均匀后得到油相；

S3、磁性纳米糊精微球的制备：

将水相逐滴加至油相中并不停的搅拌，水油相混合后高速匀浆机搅拌10min，然后置于55℃水浴锅中反应3.5小时，然后80℃破乳30分钟，除去上层油相，用无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮交替洗涤3次后，置于60℃干燥箱中恒温干燥，得到制备好的磁性纳米糊精微球。

S1、平菇样品预处理：

将1g平菇粉和150μL配好的浓度为500ppm的有机磷农药加入至2mL乙腈中，涡旋，取上清液做为待测样品；

S2、待测样品的提取：

将1mL待测样品溶解于5mL去离子水中，加入800mg氯化钠和20μL己酸后涡旋5min，再加入18mg磁性纳米糊精微球后再次涡旋5min，涡旋结束后再于3300r/min下离心10min，得到的固体为待测微球；

S3、待测微球的分离：

实施例3

一种磁性糊精微球的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备水相：

精确的称取4g糊精、0.8gNaOH于250mL锥形瓶中，加入200mL蒸馏水，90℃糊化30min；

S2、制备油相：

精确的称取6.6g司班60、9.9g吐温80、100mL正己烷于250mL锥形瓶中，置于55℃水浴锅中溶解，再加入0.02g三偏磷酸钠、0.015g四氧化三铁粉末、15mL正戊醇，混合均匀后得到油相；

S3、磁性纳米糊精微球的制备：

将水相逐滴加至油相中并不停的搅拌，水油相混合后高速匀浆机搅拌10min，然后置于65℃水浴锅中反应3小时，然后90℃破乳30分钟，除去上层油相，用无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮交替洗涤5次后，置于60℃干燥箱中恒温干燥，得到制备好的磁性纳米糊精微球。

S1、平菇样品预处理：

S2、待测样品的提取：

将1mL待测样品溶解于5mL去离子水中，加入1000mg氯化钠和30μL己酸后涡旋5min，再加入22mg磁性纳米糊精微球后再次涡旋5min，涡旋结束后再于3500r/min下离心10min，得到的固体为待测微球；

S3、待测微球的分离：

实施例4

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸替换为戊酸。

实施例5

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸替换为壬酸。

实施例6

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸替换为辛酸。

实施例7

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸替换为庚酸。

实施例8

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸的量由40μL替换为20μL。

实施例9

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸的量由40μL替换为60μL。

实施例10

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸的量由40μL替换为80μL。

实施例11

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将己酸的量由40μL替换为100μL。

实施例12

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将纳米磁性微球的量由20mg替换为10mg。

实施例13

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将纳米磁性微球的量由20mg替换为30mg。

实施例14

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将纳米磁性微球的量由20mg替换为40mg。

实施例15

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将纳米磁性微球的量由20mg替换为50mg。

实施例16

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将氯化钠的量由200mg替换为400mg。

实施例17

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将氯化钠的量由200mg替换为600mg。

实施例18

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将氯化钠的量由200mg替换为800mg。

实施例19

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，将氯化钠的量由200mg替换为1000mg。

实施例20

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，在平菇内毒死蜱残留量测定中，不添加入50μL配好的浓度为500ppm的有机磷农药。

HPLC仪器条件：

高效液相色谱仪上的流动相为乙腈+水(90+10，v/v)，在这个条件下检测时间短，能节约实验时间，进样量5μL，流速为0.5mL/min，柱温为20℃，二极管阵列检测器，检测波长为230nm，分析时间为14min。

提取率的计算：

提取率＝样品峰面积×2.05÷标品峰面积

结果分析：

一、磁性纳米糊精微球的扫描电镜结果：

图1为本发明实施例1制得的磁性纳米糊精微球电镜表征图，结果表明磁性材料被包覆于糊精微球中，所制备的材料呈球形，形态规则，微球粒径在200-500nm之间，说明制备得到了本申请预合成的纳米磁性微球。

二、实验条件的优化

(1)检测波长的优化：

图2为本发明最佳波长条件下毒死蜱的峰面积和峰形，峰面积是其中最大的且峰形较为完整的出峰，实验中使用了3个检测波长，从220nm到230nm对药物进行检测，结果表明230nm的波长为最佳的检测波长；

(2)酸种类的选择

如图3所示，实验比较了戊酸、己酸、壬酸、辛酸、庚酸几种提取剂的提取效果，其中壬酸、辛酸、庚酸的杂峰干扰或者提取效果不强而淘汰，戊酸和己酸的提取率如表格所示，结果表明己酸的提取率最大，所以己酸为最佳提取剂。

(3)己酸的量的优化

如图4所示，本实验设计了5个用量梯度(20、40、60、80、100μL)来比较己酸用量对回收率的影响，发现随着己酸用量的增加，毒死蜱的回收率是先增加再减小的，而当己酸的量为40、60、80μL时回收率基本上是相同的且达到70％以上，因此为了节省材料，本实验选用40μL己酸的为最佳实验用量。

(4)纳米磁性微球的优化

如图5所示，在磁固相微萃取过程中，纳米磁性微球的用量也是影响回收率的重要因素之一，因此本实验在范围内探究了纳米磁性微球用量对目标物回收率的影响，因此设计一系列纳米磁性微球用量梯度(10，20，30，40，50mg)进行研究；在10-50mg范围内，随着纳米磁性微球用量的增加，对毒死蜱的回收率不断增大，在纳米四氧化铁用量达到20mg时回收率已经趋于平稳，这说明萃取物大部分都已经吸附在了纳米磁性微球的纳米四氧化铁上，继续增加纳米磁性微球的用量，回收率的变化同20mg纳米四氧化铁用量一样趋于稳定，并且没有明显提高；这是因为20mg纳米磁性微球能够将萃取物大部分吸附，而多加入的纳米磁性微球并没有吸附萃取物，这是使回收率不再增加的原因；为了保证有较高的回收率，同时要尽可能节约实验药品的情况下，本申请选择20mg纳米磁性微球作为磁固相萃取的最佳实验条件。

(5)氯化钠的优化

如图6所示，为氯化钠的用量对回收率的影响，在萃取毒死蜱过程中，向样品溶液中加入无机盐可以改变溶液的离子强度，从而对毒死蜱的回收率产生影响。在实验中设计了5个加盐量梯度(200，400，600，800，1000mg)用来试验加盐量对回收率的影响，结果表明200mg氯化钠对毒死蜱的回收率影响最大。

三、平菇内毒死蜱残留量测定方法的回收率

由图2和图7以及通过公式计算目标分析物的回收率在81.37％-88.64％之间；实验结果表明，本申请提出的方法适合于食用菌农药残留分析测定；

所述回收率的计算方法为：回收率＝提取后的峰面积/没有提取时的峰面积×100％。

四、平菇内毒死蜱残留量测定方法的线性范围

在平菇中添加了五种不同浓度的农药混标进行了加标实验，扣除空白后制作标准曲线如图8所示；线性方程为y＝21.124x+158.03，R²＝0.9945；目标分析物在0.1-10mg/mL范围内均呈现良好的线性，线性方程的相关系数0.9972。检出限(LOD)按S/N＝3计算，目标分析物都具有较低的检出限LOD是0.0004mg/mL；按S/N＝10计算，LOQ是0.0012mg/mL；实施例20的有机磷毒死蜱检出量为0.0012mg/mL。

综上所述，优化后的萃取条件为磁性纳米糊精微球为20mg，己酸40μL，使用300μL乙腈将萃取物进行洗脱，有机磷毒死蜱的检出限为0.0004mg/mL，平菇中有机磷毒死蜱的回收率为81.37-88.64％，本发明提供的方法能够用于平菇中有机磷毒死蜱残留测定，且本发明将可转换亲水性溶剂、磁固相萃取、分散液液微萃取技术相结合，之后与高效液相色谱联用，成功地建立了测定平菇中有机磷农药毒死蜱的一种方法；巧妙的将分散液液微萃取与磁固相萃取两种技术结合在一起，实验中优化了一系列影响实验萃取效率的因素，并对该方法的性能进行了评价，获得了满意的回收率，较低的检出限，并且成功应用于平菇中有机磷毒死蜱残留量的测定。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims

1.一种磁性糊精微球在测定平菇内毒死蜱残留量中的应用，其特征在于，所述磁性糊精微球按照以下步骤制备：

S1、制备水相：将糊精糊化，得到水相；

S2、制备油相：

S3、磁性纳米糊精微球的制备：

其中，糊精与油相的体积比为1.4-1.5:1。

2.根据权利要求1所述的一种磁性糊精微球在测定平菇内毒死蜱残留量中的应用，其特征在于，所述步骤S1中糊精糊化的条件为：将糊精和NaOH共同加入至蒸馏水中，80-90℃下糊化25-35min，糊精和NaOH的质量比为1:0.1-0.2。

3.根据权利要求1所述的一种磁性糊精微球在测定平菇内毒死蜱残留量中的应用，其特征在于，所述步骤S3中洗涤、干燥的条件为：用无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮交替洗涤3-5次后，恒温干燥。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述平菇内毒死蜱残留量按照如下步骤测定：

S1、平菇样品预处理：

S2、待测样品的提取：

S3、待测微球的分离：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S2中的萃取剂为己酸，所述己酸与待测样品的体积比为40-80μL：1mL。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S2中氯化钠的质量与待测样品的体积比为200-600mg：1mL。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S3中洗脱的方法为：向含有待测微球的离心管内加入乙腈，涡旋后，采用外部磁铁吸附洗脱后的磁性糊精微球。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S4中过滤操作采用0.22μm有机滤膜。