CN113156020A - 针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,采用UPLC‑ELSD法进行测定,包括以下步骤:S1:对安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖和纽甜进行标准溶液的制备;S2:对样品进行溶解过滤,精密称取样品于容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,经过离心过滤后,滤液供液相色谱检测;S3:进行UPLC‑ELSD的测定;采用超高效液相色谱仪对S1得到的系列标准溶液和S2中得到的过滤液进行分析,然后采用ELSD检测仪进行检测。本申请通过对流动相和洗脱条件的改变,从而减轻食用香精中其他成分的干扰,能有效将7种甜味剂进行快速的鉴定。
Description
技术领域
本发明涉及食用香精检测领域,尤其涉及一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法。
背景技术
甜味剂是一类重要的食品添加剂,用以改善食品口感和风味,其中非糖类甜味剂由于高甜度、低热量、多不参与代谢过程等优点而成为蔗糖的代用品在现代食品工业中普遍应用。近年来,随着消费和认识水平的提高,人们对食品安全问题日益关注,食品中各种添加剂特别是甜味剂的使用情况越来越受到人们的重视。食品添加剂在规定的剂量范围内使用对人无害,若超量使用,则可能引起各种形式的毒性表现。因此,必须对其使用量进行严格管理,发挥其有利作用,防止其不利影响。目前,各国对糖精钠、甜蜜素等甜味剂采取了严格限制使用的政策,均制定了大量的标准,已成为国际贸易和国内标准中考察的重点。我国国家标准GB 2760《食品添加剂使用标准》中对可用于食品加工的甜味剂,包括甜蜜素、安塞蜜、糖精钠、阿斯巴甜等的适用范围和添加限量都有明确规定。食用香精是由各种天然或合成香料及许可使用的附加物调配的,以改善、强化和模仿食品香气和香味的食品添加剂。为改善香精的口感和风味,所使用的香精中会不同程度的添加甜味剂。为实现对该类产品的监管和测定,因此亟需发展一种快速、准确、高灵敏度的测定方法。
发明内容
针对上述技术中存在的不足之处,本发明提供一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,通过对流动相和洗脱条件的改变,从而减少食用香精中其他成分的干扰,能有效将7种甜味剂进行快速的鉴定。
为实现上述目的,本发明提供一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,采用UPLC-ELSD法进行测定,包括以下步骤:
S1:对七种甜味剂的进行标准溶液的制备;称取七种甜味剂的标准品,用溶解液溶解并定容,作为标准母液使用;再分别精密量取0.5mL,1mL,3mL,6ml至10mL容量瓶中,用溶解液分别稀释并定容,即得各系列标准溶液;
S2:对样品进行溶解过滤;精密称取样品于容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,经过离心过滤后,滤液供液相色谱检测;
S3:进行UPLC-ELSD的测定;采用超高效液相色谱仪对S1得到的系列标准溶液和S2中得到的过滤液进行分析,然后采用ELSD检测仪进行检测。
作为优选,所述七种甜味剂分别为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖和纽甜。
作为优选,七种甜味剂的标准母液的初始浓度分别为安赛蜜146ug/mL;糖精钠133ug/mL;甜蜜素297ug/mL,三氯蔗糖258ug/mL;阿斯巴甜248ug/mL,甜菊糖42ug/mL以及纽甜1491ug/mL。
作为优选,在步骤S2中,精密称取样品约1.000g于10mL容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,并在8000r/min下离心10min后,取5mL经0.20μm微孔滤膜过滤,滤液供液相色谱检测。
作为优选,在步骤S3中,采用液相色谱仪的条件为:
色谱柱:Phenomenex C18柱,规格为4.6×250mm,5μm;
流动相:流动相A,为甲醇:甲酸-乙酸铵溶液=5:95;流动相B,为0.1%甲酸甲醇溶液;流动相C,为纯乙腈;其中甲酸-乙酸铵溶溶液由2m mol/L甲酸、10m mol/L乙酸铵、0.01‰DMF混合所制;
梯度洗脱条件:0min-2min流动相A为100%,4min时流动相A为62%、流动相B为25%、流动相C为13%,保留7min,12min时流动相A为55%、流动相C为45%,保留7min,20min时流动相A为100%,且平衡10min后进下一针。
作为优选,在进行梯度洗脱时,不同的时间段采用不同的流速,其中0-2min流速为0.6ml/min;4min时流速为0.8ml/min,12min时流速为0.8ml/min;20min时流速为0.6mL/min。
作为优选,液相色谱仪的其他使用条件为柱温:25℃;进样量:10μL;
EDSL的参数信息为:漂移管温度:55℃;增益:500;气体流量:32psi;喷雾器:冷却状态。
作为优选,设置空白对照组,以溶解液作为空白对照试验,过0.2um滤膜后上机检测。
本发明的有益效果是:与现有技术相比,本申请通过改变流动相以及洗脱条件,从而能有效对食用香精中的七种甜味剂进行快速检测,有效避免了其他的因素对液相色谱仪的检测产生不利的影响。本申请的流动相虽然具有三种,但是这三种流动相都采用很温和的成分,不会对色谱柱或者液相仪器有任何的损害,即使刺激性较强的甲酸-乙酸铵溶液中甲酸和乙酸铵的浓度分别为2mmol/L和20mmol/L乙酸铵+0.01‰DMF,这些微小的量不会在测量过程中对仪器造成干扰及损害,配合不同的洗脱梯度,从而实现对食用香精中的七种甜味剂进行快速检测。
附图说明
图1为本发明的步骤流程图;
图2为七种甜味剂对照品的ELSD液相色谱图;
图3至图8为1-6号食用香精样品的ELSD液相色谱图。
具体实施方式
为了更清楚地表述本发明,下面结合附图和实施例对本发明作进一步地描述。
蒸发光散射检测器(ELSD)是一种通用型的检测器,可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高,对温度变化不敏感,基线稳定,适合与梯度洗脱液相色谱联用。蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、内脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。ELSD的响应值与样品质量成正比,因此可以用来确定样品的纯度或探测未知物体。蒸发光散射(ELS)检测的原理是,雾化来自超高效液相色谱系统的溶剂,并将产生的液滴夹杂在气流中。然后流动相从液滴中蒸发出来。分析物的挥发性低于流动相时,它作为“干”溶质颗粒留在气流中并流到ELS检测器中。到达检测器后,颗粒使光束发生散射。散射光的量可以测量出来,并且与洗脱物质的浓度有关。
现有技术(申请号为201811087237.2)公开了一种超高效液相色谱-串联质谱检测烟用香精中五种甜味剂的方法,虽然能对五种甜味剂进行定性、定量检测,但是由于采用的是液相色谱与质谱串联的方式,对操作人员有着较高的需求,在测量过程中对样品前处理的要求也较高,否则就有可能对质谱仪造成不同程度的污染,从而对后期的维护耗时又耗力,因此液质方法对大批量检测使用存在着一定的弊端,且对经济能力不够的中小型检测实验室的推广难度较大。
请参阅图1,基于此,本申请公开了一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,采用UPLC-ELSD法进行测定,包括以下步骤:
S1:对七种甜味剂的进行标准溶液的制备;称取七种甜味剂的标准品,用溶解液溶解并定容,作为标准母液使用;再分别精密量取0.5mL,1mL,3mL,6ml至10mL容量瓶中,用溶解液分别稀释并定容,即得各系列标准溶液;
S2:对样品进行溶解过滤;精密称取样品于容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,经过离心过滤后,滤液供液相色谱检测;
S3:进行UPLC-ELSD的测定;采用超高效液相色谱仪对S1得到的系列标准溶液和S2中得到的过滤液进行分析,然后采用ELSD检测仪进行检测。在具体实施例中,溶解液为流动相A,这样在进行液相检测时,能有效避免溶解液对检测结果造成影响。
为了实现上述目的,七种甜味剂分别为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖和纽甜。七种甜味剂的标准母液的初始浓度分别为安赛蜜146ug/mL;糖精钠133ug/mL;甜蜜素297ug/mL,三氯蔗糖258ug/mL;阿斯巴甜248ug/mL,甜菊糖42ug/mL以及纽甜1491ug/mL。在本实施例中,选择以上7种常用的甜味剂,从而满足市面上常见的甜味剂检测;众所周知,试样在提取过程中,分析靶标物被提取的同时会有很多共提物存在于提取液中,从而影响靶标物在分析仪器上的定性定量分析,因此采取通用的浓度稀释的方式消除基质的影响;为了确保在消除基质影响的同时对标准品的测定不受影响,特别将标准品的浓度进行特殊配制,从而满足测量需求。
在步骤S2中,精密称取样品约1.000g于10mL容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,并在8000r/min下离心10min后,取5mL经0.20μm微孔滤膜过滤,滤液供液相色谱检测。
在步骤S3中,采用液相色谱仪的条件为:
色谱柱:Phenomenex C18柱,规格为4.6×250mm,5μm;
流动相:流动相A,为甲醇:甲酸-乙酸铵溶液=5:95;流动相B,为0.1%甲酸甲醇溶液;流动相C,为纯乙腈;其中甲酸-乙酸铵溶溶液由2m mol/L甲酸、10m mol/L乙酸铵、0.01‰DMF混合所制;
梯度洗脱条件:0min-2min流动相A为100%,4min时流动相A为62%、流动相B为25%、流动相C为13%,保留7min,12min时流动相A为55%、流动相C为45%,保留7min,20min时流动相A为100%,且平衡10min后进下一针。
在进行梯度洗脱时,不同的时间段采用不同的流速,其中0-2min流速为0.6ml/min;4min时流速为0.8ml/min,12min时流速为0.8ml/min;20min时流速为0.6mL/min。
液相色谱仪的其他使用条件为柱温:25℃;进样量:10μL;
EDSL的参数信息为:漂移管温度:55℃;增益:500;气体流量:32psi;喷雾器:冷却状态。
设置空白对照组,以溶解液作为空白对照试验,过0.2um滤膜后上机检测。从而排出溶解液的干扰。
请参阅2至图8,取6批食用香精,按照上述方法进行采用UPLC-ELSD法进行测定,测定结果如下:
其中“-”表示未检出。
从以上实验的图谱中可以看到7中甜味剂的标准品的对应峰并未重叠在一起,分离度尚可,从而确保能有效地进行七种甜味剂的定性及对样品中杂质的干扰;在进行样品测量过程中,根据样品的出峰时间以及峰面积来对该物质进行定性和定量分析,从而达到测量需求。
以上公开的仅为本发明的几个具体实施例,但是本发明并非局限于此,任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,采用UPLC-ELSD法进行测定,包括以下步骤:
S1:对七种甜味剂进行标准溶液的制备;称取七种甜味剂的标准品,用溶解液溶解并定容,作为标准母液使用;再分别精密量取0.5mL,1mL,3mL,6ml至10mL容量瓶中,用溶解液分别稀释并定容,即得各系列标准溶液;
S2:对样品进行溶解过滤;精密称取样品于容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,经过离心过滤后,滤液供液相色谱检测;
S3:进行UPLC-ELSD的测定;采用超高效液相色谱仪对S1得到的系列标准溶液和S2中得到的过滤液进行分析,然后采用ELSD检测仪进行检测。
2.根据权利要求1所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,所述七种甜味剂分别为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊糖和纽甜。
3.根据权利要求2所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,七种甜味剂的标准母液的初始浓度分别为安赛蜜146ug/mL;糖精钠133ug/mL;甜蜜素297ug/mL,三氯蔗糖258ug/mL;阿斯巴甜248ug/mL,甜菊糖42ug/mL以及纽甜1491ug/mL。
4.根据权利要求1所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,在步骤S2中,精密称取样品约1.000g于10mL容量瓶中,用溶解液超声萃取稀释并定容;将其中10mL的样品溶液置于离心管中,并在8000r/min下离心10min后,取5mL经0.20μm微孔滤膜过滤,滤液供液相色谱检测。
5.根据权利要求1所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,在步骤S3中,采用液相色谱仪的条件为:
色谱柱;Phenomenex C18柱,规格为4.6×250mm,5μm;
流动相:流动相A,为甲醇:甲酸-乙酸铵溶液=5:95;流动相B,为0.1%甲酸甲醇溶液;流动相C,为纯乙腈;其中甲酸-乙酸铵溶溶液由2m mol/L甲酸、10m mol/L乙酸铵、0.01‰DMF混合所制;
梯度洗脱条件:0min-2min流动相A为100%,4min时流动相A为62%、流动相B为25%、流动相C为13%,保留7min,12min时流动相A为55%、流动相C为45%,保留7min,20min时流动相A为100%,且平衡10min后进下一针。
6.根据权利要求5所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,在进行梯度洗脱时,不同的时间段采用不同的流速,其中0-2min流速为0.6ml/min;4min时流速为0.8ml/min;12min时流速为0.8ml/min;20min时流速为0.6mL/min。
7.根据权利要求5所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,液相色谱仪的使用条件为柱温:25℃;进样量:10μL。
8.根据权利要求1所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,EDSL的参数信息为:漂移管温度:55℃;增益:500;气体流量:32psi;喷雾器:冷却状态。
9.根据权利要求1所述的针对食用香精中七种甜味剂含量的测定方法,其特征在于,设置空白对照组,以溶解液作为空白对照试验,过0.2um滤膜后上机检测。
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