CN113151299B - 一种提高番茄植物耐低温能力的基因及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高番茄植物耐低温能力的基因及应用，涉及基因工程及分子生物学领域，所述基因为番茄SlFHY3基因，所述番茄SlFHY3基因具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。该应用为通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3基因的表达水平上升，所述番茄SlFHY3基因的核苷酸序列：SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。本发明提供的SlFHY3基因的这一应用，为培育耐低温番茄新品种提供了新的种质资源，具有较好的潜在应用价值，同时为研究番茄植物低温应答响应分子机制和提高植物抗逆性研究奠定了一定的理论基础。

Description

一种提高番茄植物耐低温能力的基因及应用

技术领域

本发明涉及基因工程、分子生物学及生理学等领域，具体涉及一种提高番茄植物耐低温能力的基因及应用。

背景技术

番茄起源于南美洲热带地区，是一种喜温不耐寒的蔬菜作物。由于植物的不可移动性，番茄的生长发育对低温胁迫极其敏感，低温逆境影响了番茄植物的生长和产量。近年来，随着全球极端气候现象的频繁发生，低温已成为限制蔬菜生产发展的瓶颈问题之一。因此，探究番茄响应低温逆境的生理生化变化与分子机理，挖掘番茄低温应答的关键基因，不仅为获得耐低温番茄提供重要的理论支撑，而且对反季节蔬菜生产及保障蔬菜的周年供应和促进蔬菜产业的可持续发展具有重要的科学意义及应用价值。

低温弱光是设施园艺产业发展的瓶颈问题之一，以往的相关研究多是针对低温或弱光单一障碍因子的独立解析，而实际生产中蔬菜的温、光逆境障碍常相伴而生。然而设施蔬菜的温光互作机制却鲜见报道。因此，解析蔬菜作物生长过程中的温光互作机制及调控网络，是提高番茄等蔬菜作物抗逆性、产量和品质的关键环节。大量研究表明，耐低温属于多基因控制的复杂性状，由于转录因子可能对一类相关性状的很多基因实施调控，所以转录因子往往是耐受各种逆境包括耐低温等的主效基因，因此，从一些关键调节因子入手，可促使多个应答基因发挥作用。光信号转录因子可以传递光信号调控植物生长发育的许多过程，但光信号转录因子是否参与调控设施蔬菜的耐低温能力鲜见报道。

发明内容

本发明实施例的目的是提供一种提高番茄耐低温能力的基因及应用，以解决相关技术中存在的设施蔬菜低温弱光逆境障碍和温光互作机制不清的问题。

根据本发明实施例的第一方面，提供一种提高番茄耐低温能力的基因，所述基因为番茄SlFHY3基因，所述番茄SlFHY3基因具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

根据本发明实施例的第二方面，提供番茄SlFHY3基因在提高番茄耐低温能力中的应用，通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3基因的表达水平上升，所述番茄SlFHY3基因的核苷酸序列：SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

进一步地，所述基因过表达技术包括：

提取番茄叶片总RNA，反转录获得cDNA，以cDNA为模板，SlFHY3-OE-F和SlFHY3-OE-R为引物，扩增SlFHY3基因，将扩增产物构建到植物过表达载体上，其中，所述引物SlFHY3-OE-F和SlFHY3-OE-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

将所述表达载体导入宿主细胞中，再利用其侵染目的番茄植株，筛选阳性转基因番茄植株，获得耐低温的转基因番茄植株。

进一步地，所述植物过表达载体为具有35S启动子的表达载体。

进一步地，所述的宿主细胞为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。

进一步地，所述的农杆菌细胞为GV3101。

根据本发明实施例的第三方面，提供一种提高番茄耐低温能力的蛋白，其特征在于，所述蛋白为番茄SlFHY3蛋白，所述番茄SlFHY3蛋白具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

根据本发明实施例的第四方面，提供番茄SlFHY3蛋白在提高番茄耐低温能力中的应用，通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3蛋白的表达水平上升，所述番茄SlFHY3蛋白为的氨基酸序列：SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

本发明的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：

由上述实施例可知，本发明通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3基因的表达水平上升，从而提高番茄耐低温能力中的应用。本发明试验证明过量表达SlFHY3基因可以显著提高番茄植株耐冷性，若敲除SlFHY3基因则显著降低番茄植株耐冷性。该基因正向调控番茄植株耐冷性，该基因的生物学功能验证对于番茄耐冷性分子机制的研究有重要的参考意义。

本发明的转基因植物的培育方法利用来源于花椰菜花叶病毒组成型启动子CaMV35S启动子过表达SlFHY3基因的表达量，提高番茄植株的耐冷性，从而有利于番茄在低温灾害频发的气候条件下安全生产。

本发明提供的SlFHY3蛋白及其编码基因为培育耐低温番茄新品种提供了基因资源，具有较好的潜在应用价值，同时为研究植物应答逆境信号的机制和耐受不利环境的分子机制奠定理论基础。

附图说明

此处的附图被并入说明书中构成说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。

图1为本发明实施例3中SlFHY3基因敲除番茄植株靶位点测序结果图。

图2为本发明实施例3中SlFHY3基因过表达番茄株系中SlFHY3基因相对表达量结果图。

图3为本发明实施例4中低温处理前后番茄株系中SlFHY3基因的相对表达量结果图。

图4为本发明实施例4中低温处理前后的番茄植株表型对比图。

图5为本发明实施例4中低温处理前后的番茄植株存活率结果示意图。

图6为本发明实施例4中低温处理前后的番茄植株电导率变化结果示意图。

图7为本发明实施例4中低温处理前后的番茄植株光系统PSII最大光化学量子产量(Fv/Fm)变化对比图。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

除非有特殊说明，下述实施例中所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到，本发明的实施将使用本领域技术人员显而易见的植物学常规技术、组织培养、分子生物学、生物生理生化、DNA重组及生物信息学技术。这些技术在文献中进行了充分解释。

实施例1：SlFHY3基因过表达载体的构建

为了解植物响应低温的分子机制，从番茄基因组中克隆了SlFHY3基因。根据编码区序列分析，设计特异性引物SlFHY3-OE-F和SlFHY3-OE-R，并在引物上分别加上限制性酶切位点(Asc I和Kpn I)，序列如SEQ ID NO.3和4所示。用PrimerSTAR高保真酶PCR扩增SlFHY3片段，然后对PCR扩增片段及载体进行酶切，将SlFHY3片段连接到pFGC1008-HA上，得到植物过表达载体。将上述重组质粒送到擎科公司测序确认，所得的基因SlFHY3的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。结果表明所克隆的序列与Solgenomics中公布的序列(Solyc07g043270)一致。

需要说明的是，所述植物过表达载体适用于双子叶植物，如番茄、茄子、辣椒、黄瓜、西甜瓜等植物。

实施例2：SlFHY3基因敲除载体的构建

根据SlFHY3的基因序列，利用CRISPR-P网站设计CRISPR的靶点和引物，SlFHY3基因的第一靶点片段序列如SEQ ID NO.5所示，第二靶点片段序列如SEQ ID NO.6所示。第一靶点的引物序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，第二靶点的引物序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。合成的两个靶点的引物序列退火后连接到SlU61上，然后将其连接到线性化克隆载体pCBSG012-slu61-DSG-bsai上。将上述重组质粒送到擎科公司测序确认。

实施例3：番茄SlFHY3转基因植株的构建与检测

将上述构建好的植物达载体和CRISPR基因编辑载体利用农杆菌介导的遗传转化方法转入农杆菌GV3101，并进行番茄子叶侵染，通过诱导愈伤，抗性诱导分化以及生根培养，获得组培苗，将T2代突变体种子和过表达种子分别进行卡那霉素抗性和氯霉素抗性的测试，选择3/4具有抗性而其余1/4没有抗性的株系，说明在该株系中连有目的基因的过表达载体以单拷贝形式插入。将这些植株移出，再进行单株收种。

利用qRT-PCR技术验证过表达阳性转基因植株，结果显示，SlFHY3表达量相比野生型上调6～15倍(图1)，利用PCR和测序技术验证阳性SlFHY3突变转基因植株，发现fhy3#1在第一个靶点缺失2个碱基，同时一个碱基发生了替换；而在第二个靶点处缺失了3个碱基，分别在原始相邻基序(PAM)附近发生突变，导致SlFHY3停止翻译(图1)。

实施例4：SlFHY3基因转基因材料的耐低温能力检测

首先将五叶一心的野生型番茄幼苗Ailsa Craig(为美国番茄遗传资源中心的产品)进行25℃和4℃处理，取6h的叶片样品，提取总RNA，反转录得到cDNA，进行荧光实时定量PCR。用于检测SlFHY3基因表达量的引物为：

RT-F:5’-TTTCTTGGGTAATGCG-3’；

RT-R:5’-ATGGAGGGATAGTGGC-3’。

低温后SlFHY3基因的相对表达量见图3。图3中，低温处理6h后，SlFHY3基因的表达显著高于常温处理，这说明番茄SlFHY3基因响应低温胁迫。

将五叶一心的野生型番茄幼苗和实施例3中所得的SlFHY3基因过表达株系和突变体株系在人工培养箱内进行25℃和4℃处理，低温处理7天后，将低温胁迫处理组与相同条件下未进行低温处理的对照组进行比较，观察野生型、过表达株系和突变体株系番茄植株的表型(图4)、电导率(图6)、光系统II(PSII)最大光化学量子产量(Fv/Fm，图7)的变化，然后将低温处理番茄幼苗放回所述光照培养箱常温恢复培养1周，统计存活率(图5)。

处理后表型照片见图4。图4中，低温胁迫后，过表达番茄植株(FHY3-OE)的生长状况显著优于野生型(WT)和突变体(fhy3)植株，突变体(fhy3)植株的生长状况最差。

存活率结果见图5。图5中，低温胁迫后，过表达番茄植株(FHY3-OE)的存活率显著高于野生型(WT)和突变体(fhy3)植株，突变体(fhy3)植株的存活率最差。存活率平均值分别为：FHY3-OE：80.10％，WT：54.06％，fhy3：28.13％。

相对电导率结果见图6。图6中，低温胁迫后，突变体(fhy3)植株的相对电导率显著高于野生型(WT)和过表达番茄植株(FHY3-OE)植株，过表达番茄植株(FHY3-OE)植株的相对电导率最低。说明过表达番茄植株体内电解质渗透最低，植株生长状况较好。

光系统II(PSII)最大光化学量子产量(Fv/Fm)结果见图7。图7中，低温胁迫后，过表达番茄植株(FHY3-OE)的Fv/Fm显著高于野生型(WT)和突变体(fhy3)植株，突变体(fhy3)植株的Fv/Fm最低。说明SlFHY3基因敲除后，破坏了低温下番茄植株的光系统II的功能。

以上结果显示，SlFHY3正调控番茄植物的耐低温能力。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方案及试验，对本发明作了详尽的描述，但本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 沈阳农业大学

<120> 一种提高番茄植物耐低温能力的基因及应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 849

<212> PRT

<213> 番茄(Solanum lycopersicum)

<400> 1

Met Asp Ile Asp Leu Arg Leu Pro Ser Gln Asp His Asp Lys Glu Glu

1 5 10 15

Glu Glu Glu Glu Gln Asn Gly Ile Ile Asn Met Leu Asp Asn Glu Glu

20 25 30

Lys Ile His Gly Asp Asp Gly Met His Gly Met Leu Val Ile Glu Glu

35 40 45

Lys Met His Ala Glu Asp Arg Gly Asp Met Asn Thr Pro Val Gly Thr

50 55 60

Met Ile Asp Phe Lys Glu Asp Val Asn Leu Glu Pro Leu Ala Gly Met

65 70 75 80

Glu Phe Glu Ser His Gly Glu Ala Tyr Ala Phe Tyr Gln Glu Tyr Ala

85 90 95

Arg Ser Met Gly Phe Asn Thr Ala Ile Gln Asn Ser Arg Arg Ser Lys

100 105 110

Thr Ser Arg Glu Phe Ile Asp Ala Lys Phe Ala Cys Ser Arg Tyr Gly

115 120 125

Thr Lys Arg Glu Tyr Glu Lys Ser Ala Asn Arg Pro Arg Ser Arg Gln

130 135 140

Gly Asn Lys Gln Asp Pro Glu Asn Ala Thr Gly Arg Arg Ala Cys Ala

145 150 155 160

Lys Thr Asp Cys Lys Ala Ser Met His Val Lys Arg Arg Pro Asp Gly

165 170 175

Lys Trp Ile Ile His Arg Phe Glu Lys Glu His Asn His Glu Leu Leu

180 185 190

Pro Ala Gln Ala Val Ser Glu Gln Thr Arg Arg Met Tyr Ala Ala Met

195 200 205

Ala Arg Gln Phe Ala Glu Tyr Lys Asn Val Val Gly Leu Lys Ser Asp

210 215 220

Thr Lys Val Leu Phe Asp Lys Gly Arg Asn Ser Ala Ile Glu Gly Gly

225 230 235 240

Asp Ile Ser Val Leu Leu Glu Phe Phe Ile Gln Met Gln Asn Leu Asn

245 250 255

Ser Asn Phe Phe Tyr Ala Val Asp Val Gly Glu Asp Gln Arg Val Lys

260 265 270

Asn Leu Phe Trp Val Asp Ala Lys Ala Arg His Asp Tyr Val Asn Phe

275 280 285

Ser Asp Val Val Ser Phe Asp Thr Thr Tyr Val Arg Asn Lys Tyr Lys

290 295 300

Met Pro Leu Ala Leu Phe Val Gly Val Asn Gln His Phe Gln Phe Met

305 310 315 320

Leu Leu Gly Cys Ala Leu Val Ser Glu Glu Ser Ala Ser Thr Phe Ser

325 330 335

Trp Val Met Arg Thr Trp Leu Lys Ala Met Gly Gly Gln Ala Pro Lys

340 345 350

Thr Val Ile Thr Asp His Asp Leu Val Leu Lys Ser Val Ile Ser Glu

355 360 365

Ala Leu Pro Leu Ser Leu His Tyr Phe Cys Leu Trp His Ile Leu Gly

370 375 380

Lys Val Ser Asp Thr Leu Asn His Val Ile Lys Gln Asn Glu Lys Phe

385 390 395 400

Met Pro Lys Phe Glu Lys Cys Leu Asn Arg Ser Trp Thr Asp Glu Glu

405 410 415

Phe Glu Lys Arg Trp Arg Lys Leu Val Asp Lys Phe Asp Leu Arg Glu

420 425 430

Val Glu Leu Val His Ser Leu Tyr Glu Asp Arg Val Lys Trp Ala Pro

435 440 445

Thr Phe Ile Arg Asp Val Val Leu Ala Gly Met Ser Thr Val Gln Arg

450 455 460

Ser Glu Ser Val Asn Ser Phe Phe Asp Lys Tyr Val His Lys Lys Thr

465 470 475 480

Thr Ile Gln Glu Phe Val Lys Gln Tyr Glu Ser Ile Leu Gln Asp Arg

485 490 495

Tyr Glu Glu Glu Ala Lys Ala Asp Ser Asp Thr Trp Asn Lys Gln Pro

500 505 510

Ala Leu Arg Ser Pro Ser Pro Phe Glu Lys His Leu Ala Gly Leu Tyr

515 520 525

Thr His Ala Val Phe Lys Lys Phe Gln Ser Glu Val Val Gly Ala Thr

530 535 540

Ala Cys Gly Pro Lys Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ile Val Leu Thr Tyr

545 550 555 560

Arg Val Gln Asp Phe Glu Lys Thr Gln Glu Phe Ile Val Thr Leu Asp

565 570 575

Glu Met Lys Ser Glu Ile Ser Cys Ile Cys His Leu Phe Glu Tyr Lys

580 585 590

Gly Tyr Leu Cys Arg His Ala Leu Ile Val Leu Gln Ile Cys Ala Val

595 600 605

Ser Ser Ile Pro Pro Gln Tyr Ile Leu Lys Arg Trp Thr Lys Asp Ala

610 615 620

Lys Ser Lys Tyr Ser Met Thr Asp Gly Ser Glu Asp Val Gln Ser Arg

625 630 635 640

Phe Gln Arg Tyr Asn Glu Leu Cys His Arg Ala Met Lys Leu Ser Glu

645 650 655

Glu Gly Ser Leu Ser Gln Glu Ser Tyr Ser Phe Ala Leu Arg Ala Leu

660 665 670

Asp Asp Ala Phe Gly Ser Cys Val Thr Phe Asn Asn Ser Asn Lys Asn

675 680 685

Met Leu Glu Ala Gly Thr Ser Ser Ala Ser Gly Leu Leu Cys Ile Glu

690 695 700

Asp Asp Asn Gln Ser Arg Ser Met Ser Lys Thr Asn Lys Lys Lys Asn

705 710 715 720

Asn Phe Thr Lys Lys Arg Lys Val Asn Ser Glu Pro Asp Val Met Ala

725 730 735

Val Gly Ala Ala Asp Ser Leu Gln Gln Met Asp Lys Leu Asn Ser Arg

740 745 750

Pro Val Thr Leu Asp Gly Tyr Phe Gly Pro Gln Gln Ser Val Gln Gly

755 760 765

Met Val Gln Leu Asn Leu Met Ala Pro Thr Arg Asp Asn Tyr Tyr Ala

770 775 780

Asn Gln Gln Thr Ile Gln Gly Leu Gly Gln Leu Asn Ser Ile Ala Pro

785 790 795 800

Thr His Asp Gly Tyr Tyr Gly Ala Gln Pro Thr Met His Gly Leu Gly

805 810 815

Gln Met Asp Phe Phe Arg Ser Pro Ser Phe Ser Tyr Gly Ile Arg Asp

820 825 830

Glu Pro Thr Val Arg Ser Ser Gln Leu His Asp Asp Ala Ser Arg His

835 840 845

Pro

<210> 2

<211> 2550

<212> DNA

<213> 番茄(Solanum lycopersicum)

<400> 2

atggatatag atcttcgtct gccttctcaa gaccatgata aggaagaaga agaagaggaa 60

caaaatggaa ttataaatat gcttgacaat gaagaaaaaa tacatggtga tgacggaatg 120

catgggatgt tggttattga agagaagatg catgcagaag atagagggga tatgaacact 180

cccgtaggaa ctatgataga ctttaaggag gatgtgaacc ttgaaccgct ggctggcatg 240

gaatttgagt cacatggtga ggcttatgcc ttttatcaag agtatgctcg gtcgatggga 300

ttcaatacag ccatacaaaa cagccgtcgc tcaaagacgt caagggaatt cattgatgca 360

aaattcgcat gttctagata tggaactaaa cgggaatatg agaagtctgc aaatcggcca 420

cgtagtaggc aaggaaacaa acaggatcca gaaaatgcta ctggtcggcg agcatgtgca 480

aagacagatt gcaaagcaag tatgcatgtg aaaagaaggc ccgatgggaa atggataatt 540

catagattcg agaaagaaca taatcatgaa cttctacctg cccaagctgt cagtgaacaa 600

acaagaagaa tgtatgctgc aatggcaaga caatttgctg aatacaaaaa tgttgttggt 660

ctgaaaagtg acacaaaagt tctatttgac aaaggtcgaa attcagcaat tgaaggggga 720

gacataagtg ttctattaga gttctttatt cagatgcaaa atcttaattc caacttcttt 780

tatgctgttg atgtgggtga agatcaacgt gtaaagaact tgttctgggt tgatgccaaa 840

gctaggcatg attatgtgaa tttcagcgat gttgtctctt ttgatactac ctatgtcaga 900

aacaaatata agatgcccct ggctcttttt gttggggtca atcagcattt tcagttcatg 960

ctacttggat gtgctttggt ctctgaagag agtgcgtcaa cattttcttg ggtaatgcgg 1020

acatggttga aggcaatggg cggtcaagct ccgaagacag tgatcaccga tcatgacctg 1080

gtattgaagt cagtcatttc agaggctttg ccactatccc tccattattt ctgtttatgg 1140

catatcctgg gaaaggtgtc tgatacactg aatcatgtca tcaaacagaa tgaaaagttt 1200

atgcctaagt tcgagaaatg tcttaacagg tcatggacag atgaggagtt tgaaaagagg 1260

tggagaaaac tagttgataa atttgatctc agagaagttg aattggttca ttcactgtat 1320

gaagatcggg tgaaatgggc ccctacattt ataagggatg tggttttagc gggaatgtca 1380

acggttcaac gatcagagag tgtaaactct ttctttgaca aatatgtaca taagaaaact 1440

accatccagg agtttgtaaa gcaatatgaa tcaatattac aagataggta tgaggaggag 1500

gcaaaggcag attctgatac atggaacaaa caacctgctt tgagatcccc atccccattt 1560

gagaagcact tggcggggct ttatacacat gctgtattta agaaattcca gtctgaggtt 1620

gtgggtgcaa ctgcttgtgg tcctaaaaga gagaagcaag atgagatagt cttaacatat 1680

agagttcaag attttgagaa gactcaagag ttcattgtta cattggatga aatgaagtca 1740

gaaatatctt gtatttgtca tttgtttgaa tataaaggct acctttgtag acatgcattg 1800

atagttctcc aaatatgtgc tgtttcctct atcccaccac aatatatttt gaagcgatgg 1860

acaaaagatg cgaagagcaa gtactctatg acggatggat ctgaagatgt gcagtcaagg 1920

ttccagagat ataatgagct atgtcatcgg gctatgaaat tgagtgaaga agggtcgtta 1980

tctcaagaga gctatagttt tgctcttcgt gcacttgatg acgcgtttgg gagttgtgta 2040

acttttaata actcaaacaa gaacatgtta gaagctggca catcatcagc atctggtctt 2100

ctctgtattg aagatgataa ccaaagtagg agtatgagca agacaaacaa gaagaaaaat 2160

aacttcacta agaaacgcaa ggtgaactcg gagccagatg ttatggctgt tggggcagca 2220

gacagcttgc aacaaatgga caaattgaac tccaggcctg tgactcttga tggttatttt 2280

ggcccgcaac aaagtgttca aggaatggta cagttaaact tgatggcacc aactcgtgat 2340

aactactatg caaaccaaca gactattcag ggccttggac agttgaactc tatagctcct 2400

acacatgatg gctattatgg tgctcagcca acaatgcatg ggctgggcca aatggacttt 2460

ttccgctctc caagtttctc atatggcatt cgggatgaac ccactgtaag atcttctcaa 2520

ttgcacgacg atgcatctag acatccttga 2550

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ttggcgcgcc atggatatag atcttcgtct gcc 33

<210> 4

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

acgcgtcgac aggatgtcta gatgcatcgt cgt 33

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggggatatga acactcccgt 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gtgtttcctt gcctactacg 20

<210> 7

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tgattgggga tatgaacact cccgtgttt 29

<210> 8

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tctaaaacac gggagtgttc atatcccca 29

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tgtagtttgt gtttccttgc ctactacg 28

<210> 10

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

aaaccgtagt aggcaaggaa acacaaac 28

Claims (6)

1.番茄SlFHY3基因在提高番茄耐低温能力中的应用，通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3基因的表达水平上升，所述番茄SlFHY3基因的核苷酸序列：SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的应用，所述基因过表达技术包括：

提取番茄叶片总RNA，反转录获得cDNA，以cDNA为模板，SlFHY3-OE-F和SlFHY3-OE-R为引物，扩增SlFHY3基因，将扩增产物构建到植物过表达载体上，其中，引物SlFHY3-OE-F和SlFHY3-OE-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

将所述植物过表达载体导入宿主细胞中，再利用其侵染目的番茄植株，筛选阳性转基因番茄植株，获得耐低温的转基因番茄植株。

3.根据权利要求2所述的应用，所述植物过表达载体为具有35S启动子的表达载体。

4.根据权利要求2所述的应用，所述的宿主细胞为农杆菌细胞。

5.根据权利要求4所述的应用，所述的农杆菌细胞为GV3101。

6.番茄SlFHY3蛋白在提高番茄耐低温能力中的应用，通过基因过表达技术使得所述番茄SlFHY3蛋白的表达水平上升，所述番茄SlFHY3蛋白的氨基酸序列：SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

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