CN113134039A - 一种中药组合物、制备方法及制备治疗乙肝药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物、制备方法及制备治疗乙肝药物的应用，由下述物质组成：君药：虎杖和苦参；臣药：栀子、白花蛇舌草、丹参和赤芍；佐药：穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七、柴胡和黄芪；使药：甘草；其中，按质量份数计，臣药为君药用量的至少3倍，佐药至少为君药用量的至少4倍，使药为君药用量的1/3。本发明的中药组合物是由虎杖、苦参等13味中药组成的中药复方制剂，具有清热解毒，益气活血，舒肝解郁，软坚化瘀之功效，临床上主要用于急、慢性肝炎的治疗，尤适用于有肝纤维化趋向者。

Description

一种中药组合物、制备方法及制备治疗乙肝药物的应用

技术领域

本发明属于中药药物领域，具体涉及一种中药组合物、制备方法及制备治疗乙肝药物的应用。

背景技术

乙肝，为临床常见病，多发病。中医对本病的认识，见于“黄疸”、“胁痛”“积聚”等病症。中医界对乙肝的病因认识观点较多，主要有：湿邪作祟说、肝郁致病说、阳气虚弱说，以及病毒内侵、伏于血分、阴阳双损、气血失调和而为患说，等等。其发病机理概括起来为湿热疫毒羁留肝内病变早期以湿热遏脾胃为因，湿热熏蒸肝胆则形成湿热中阻证。随着病程延长，湿热滞留肝经，肝疏泄失职，则形成肝气郁滞证，久郁化火，内外制热结合，使肝经湿热蕴结成毒。肝阴耗损累及于肾，形成肝肾阴虚证，肝病传脾，土败木郁而成肝郁脾虚证。湿热之邪内侵气分，留恋不化，正气渐伤，正不胜邪，邪入血分，血行不畅而成瘀，形成肝血瘀滞证。慢性乙肝发病特点与“杂气”致病相似，其病理机制是毒、痰、瘀。

中医对乙肝的治疗原则仍不外辨证施治，第六届全国病毒性肝炎会议将乙肝分型总结为五型：湿热中阻、肝郁脾虚、瘀血阻络、肝肾阴虚、脾肾阳虚。在临床治疗上，主要运用清热解毒利湿、益气健脾、补肾养肝、疏肝理气、化瘀通络、扶正祛邪等治法。早期宜注重清热解毒、疏肝健脾；中、晚期宜重视活血化瘀、凉血解毒。

现代医学目前也认为治疗乙肝首要是抑制病毒的复制，并认为HBV～DNA若长期大于10⁴拷贝/毫升，就说明有肝硬化发展趋向，因而治疗乙肝，不管急、慢性应首先强调抗病毒。

发明内容

本发明提供了一种中药组合物、制备方法及制备治疗乙肝药物的应用，该中药组合物具有清热解毒，益气活血，舒肝解郁，化瘀软坚。用于急慢性肝炎，尤适用于有肝纤维化趋向者。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种中药组合物，由下述物质组成：

君药：虎杖和苦参；

臣药：栀子、白花蛇舌草、丹参和赤芍；

佐药：穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七、柴胡和黄芪；

使药：甘草；

其中，按质量份数计，臣药为君药用量的至少3倍，佐药至少为君药用量的至少4倍，使药为君药用量的1/3。

一种中药组合物，按质量份数计，由下述物质按质量份组成：穿山甲4～7份，制鳖甲16～25份，黄芪13～21份，鸡内金6.7～11份，三七6～10份，丹参10～16份，赤芍10～16份，虎杖6.7～11份，栀子10～16份，柴胡6.7～11份，苦参6～10份，甘草4～7份，白花蛇舌草8～13份。

一种中药组合物，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：

虎杖10g，苦参9g，栀子15g，白花蛇舌草12g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

一种中药组合物，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：虎杖10～20g，苦参9～15g，栀子15g，白花蛇舌草12～20g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

一种抗阳胶囊，药用成分为本发明所述的中药组合物。

一种抗阳胶囊，由下述物质组成：

穿山甲4份，制鳖甲16份，黄芪13.3份，鸡内金6.7份，三七6份，丹参10份，赤芍10份，虎杖6.7份，栀子10份，柴胡6.7份，苦参6份，甘草4份，白花蛇舌草8份。

一种抗阳胶囊，由下述物质组成：

穿山甲40g，制鳖甲160g，黄芪133g，鸡内金67g，三七60g，丹参100g，赤芍100g，虎杖67g，栀子100g，柴胡67g，苦参60g，甘草40g，白花蛇舌草80g。

一种抗阳胶囊的制备方法，所述的抗阳胶囊为本发明所述的抗阳胶囊，制备方法包括：

按配方量：

穿山甲、制鳖甲、鸡内金和三七分别粉碎成细粉，备用；

丹参和虎杖分别加6倍量体积浓度为75％的乙醇提取三次，每次1.5h，合并醇提液，减压回收至无醇味，滤液继续浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏；

配方剩余中药、丹参醇提药渣和虎杖醇提药渣分别加10倍量的水煎煮三次，每次1.5h，煎液合并，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，合并稠膏，加入备用细粉，混匀、干燥及粉碎成细粉，装入胶囊。

本发明任一所述的中药组合物用于制备治疗乙肝药物的应用。

本发明任一所述的中药组合物用于制备杀灭乙肝病毒药物的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明的中药组合物是由虎杖、苦参等13味中药组成的中药复方制剂，具有清热解毒，益气活血，舒肝解郁，软坚化瘀之功效，临床上主要用于急、慢性肝炎的治疗，尤适用于有肝纤维化趋向者。

附图说明

图1为本发明的抗肿瘤胶囊的制备工艺图。

具体实施方式

以下将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，并非全部实施例，也并未对本发明做任何形式上的限制，凡是利用本实施例的技术方案，包括对本实施例做了简单的变化，均属于本发明保护的范围。

本发明的中药组合物，由下述物质组成：君药：虎杖和苦参；臣药：栀子、白花蛇舌草、丹参和赤芍；佐药：穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七、柴胡和黄芪；使药：甘草；其中，按质量份数计，臣药为君药用量的至少3倍，佐药至少为君药用量的至少4倍，使药为君药用量的1/3。本方应用虎杖、苦参为君药。虎杖，苦、寒，归肝、胆、肺经，具有清热利湿，解毒，散瘀定痛功能，临床常用于湿热黄疸和慢性乙肝等症；苦参，苦寒；归心肝、胃、大肠、膀胱经；清热燥湿利尿；近年有研究者认为从苦参中提取氧化苦参碱，对乙肝病毒有明显抑制作用。该方中栀子、白花蛇舌草、丹参、赤芍为臣药。栀子苦，寒。归心、肺、三焦经。可清热利尿，凉血解毒，散瘀消肿。实验室研究栀子有利胆作用，还能减轻四氯化氮引起的肝损害，起到保肝作用。白花蛇舌草甘，淡，性凉。归胃、大肠、小肠经。清热解毒，活血消痈，实验室研究该品有抗病毒、抗肿瘤等作用。丹参味苦，性微寒。归心、肝经。活血通络，祛瘀止痛，清心除烦。可用于癥瘕积聚，胸腹刺痛等症。赤芍苦、微寒。归肝经。清热凉血，散瘀止痛。临床常用于肝郁胁痛、癥瘕积聚等证。四味臣药除具有不同程度的清热解毒作用外，大都还具有活血散瘀的作用。乙肝病程长，久病必有血瘀。若血瘀日久，则易郁结凝聚成痞证(如肝硬化等病症)，因而臣药除加强君药清热解毒作用外，还具有活血化瘀散结作用。该方佐药为穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七、柴胡、黄芪。穿山甲咸、微寒，归肝、胃经，活血通经，消肿排脓；制鳖甲咸、微寒，归肝肾经，软坚散结，滋阴潜阳，制鳖甲多用醋制，可以加强鳖甲坚散结作用；鸡内金甘、平，归脾、胃、小肠、膀胱经，可以消积滞健脾胃；柴胡苦，微寒，归肝、胆经，疏肝解郁。乙肝在发病过程中，易引起气血瘀滞而出现肝脾肿大，五味佐药配合臣药通过疏肝、活血、软坚、健脾等作用，使肝脾血液运行通畅，淤血积聚得以解除，而恢复自然功能，起到预防纤维化的作用。本方加重黄芪，大补元气，加强活血散瘀的作用，因气行则血行，其次也可起到扶正祛邪的作用。甘草性味甘，平，归心、肺、脾、胃，甘草补脾益气，可加强黄芪的扶正补气作用。其次甘草清热解毒，缓急止痛。实验室研究甘草浸膏口服液，对四氯化碳所致大鼠肝损伤有明显保护作用，可使肝脏的变性和坏死显著减轻，肝细胞内的糖原及核算恢复，血清谷丙转氨酶活力下降。这说明该品有保肝和降低转氨酶的作用。甘草还具有调和诸药和解毒的作用，故甘草为本方使药。总之，该品是在清热解毒的基础上，辅以活血化瘀和补气药物，意在起到清理肝毒，同时解除肝瘀证，使病毒得以抑制，气旺血行，瘀去络通，诸症自可逐渐减轻。

具体的，本发明的中药组合物，以一日水煎量计，由下述质量份物质组成：穿山甲4～7份，制鳖甲16～25份，黄芪13～21份，鸡内金6.7～11份，三七6～10份，丹参10～16份，赤芍10～16份，虎杖6.7～11份，栀子10～16份，柴胡6.7～11份，苦参6～10份，甘草4～7份，白花蛇舌草8～13份。这里所说的一日水煎量，指的是取一服药，用水煎服，一般用水复煎两次，第一次加水煎熬然后把药汤倒出来，这个为头煎。然后再往药渣里加水，再煎，这次得到的汤药是二煎。把两次汤药混合再分成2–3次服用。注意的是，第二次放水比第一次减少1/3。比如根据1g中药加10ml水的原则，把总加水量的(体积百分数)65％加到第一煎中，余下的(体积百分数)35％留给二煎用。

一种中药组合物，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：虎杖10g，苦参9g，栀子15g，白花蛇舌草12g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

一种中药组合物，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：虎杖10～20g，苦参9～15g，栀子15g，白花蛇舌草12～20g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

一种抗阳胶囊，药用成分为本发明所述的中药组合物。

一种抗阳胶囊，由下述质量份物质组成：穿山甲4份，制鳖甲16份，黄芪13.3份，鸡内金6.7份，三七6份，丹参10份，赤芍10份，虎杖6.7份，栀子10份，柴胡6.7份，苦参6份，甘草4份，白花蛇舌草8份；此处的抗阳胶囊是以制药工艺中将上述中药成分制作成胶囊粉的形式进行配方量的计算，因此，具体的配方含量与传统的水煎量的配方含量稍有不同，但是药效相同。更加优选的方案，由下述物质组成：穿山甲40g，制鳖甲160g，黄芪133g，鸡内金67g，三七60g，丹参100g，赤芍100g，虎杖67g，栀子100g，柴胡67g，苦参60g，甘草40g，白花蛇舌草80g。这里抗阳胶囊的配方量是以制1000粒的胶囊量计算，根据本品的出粉率及出膏率，一个处方量药材约制成药粉500g，每粒装0.5g，可制成1000粒胶囊。

一种抗阳胶囊的制备方法，制备方法包括：按配方量：穿山甲、制鳖甲、鸡内金和三七分别粉碎成细粉，备用；丹参和虎杖分别加6倍量体积浓度为75％的乙醇提取三次，每次1.5h，合并醇提液，减压回收至无醇味，滤液继续浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏；配方剩余中药、丹参醇提药渣和虎杖醇提药渣分别加10倍量的水煎煮三次，每次1.5h，煎液合并，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，合并稠膏，加入备用细粉，混匀、干燥及粉碎成细粉，装入胶囊。

本发明任一所述的中药组合物用于制备治疗乙肝药物的应用。

本发明任一所述的中药组合物用于制备杀灭乙肝病毒药物的应用。

相关研究：(以下如无特殊说明，％的液体浓度均为体积浓度)

一、抗阳胶囊的具体制法：

处方：穿山甲40g，制鳖甲160g，黄芪133g，鸡内金67g，三七60g，丹参100g，赤芍100g，虎杖67g，栀子100g，柴胡67g，苦参60g，甘草40g，白花蛇舌草80g；

以上十三味，穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七粉碎成细粉，备用；丹参、虎杖加6倍量75％的乙醇提取三次，每次1.5小时，合并醇提液，减压回收至无醇味，滤液继续浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏；其余黄芪等七味及丹参、虎杖醇提药渣加10倍量的水煎煮三次，每次1.5小时，煎液合并，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.35(65℃)的稠膏，合并稠膏，加入上述备用细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，制成1000粒，即得；具体生产工艺流程图见图1。

二、相关的工艺研究资料

2.1醇提原理的论述：

丹参：本品为唇型科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。丹参的化学成分有丹参酮、丹参醌、丹参酚、丹参醛以及丹参素等。其有效成分主要为总酚类化合物，宜采用醇提的方法提取。

虎杖：本品为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum sieb.et Zucc.的干燥根茎和根。虎杖的根和根茎含游离蒽醌和蒽醌苷，如大黄素，大黄酚，大黄酸，蒽苷A，蒽苷B等。根中尚含白藜芦醇、虎杖苷两种芪类化合物。此外，虎杖中还含有一定的鞣质、多糖、黄酮类、氨基酸等物质。其有效成分为游离蒽醌和蒽醌苷。药理学研究表明虎杖煎剂具有抗菌、抗病毒、抗钩断螺旋体等抗病原微生物的作用；虎杖粗品及白藜芦醇苷具有镇咳、平喘、保肝、利胆作用；虎杖煎剂对小鼠艾氏腹水癌有明显抑制作用；此外，虎杖还能降血糖、降血脂，对心血管系统也有一定的作用。对于虎杖中的游离醌和蒽醌苷，宜采用醇提的方法提取。

水提原理的论述：

2.2水提原理的论述：

黄芪：本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.var.mongholicus(Beg)Hsiao.或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(的干燥根。黄芪的化学成分有皂苷类，多糖类，黄酮类，氨基酸，无机成分等。其有效成分为黄芪皂苷类。黄芪水煎液药理作用较广泛，对免疫系统、机体代谢、心血管系统、泌尿系统、中枢神经系统、应激反应均有影响，另外它还具有激素样作用，抗菌、抗病毒作用等。药理作用研究表明，黄芪水煎液口服能增加小鼠网状内皮系统的吞噬功能，从而增强非特异性免疫；能促进机体生成抗体，从而增强体液免疫；能促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转化率，从而增强细胞免疫。在机体代谢方面，黄芪可增强细胞代谢，延缓细胞衰老；影响核酸、内环核苷酸、蛋白质、糖的代谢。在心血管系统方面，黄芪皂苷通过钠，钾～ATP酶对心脏实现正性肌力作用；黄芪给兔、犬、猫、静脉注射，均显降压作用。在中枢神经系统方面，黄芪皂苷甲腹腔注射可延长硫喷妥钠所致小鼠的睡眠时间，并具有镇静、镇痛作用。另外，黄芪多糖也显示具有抗疲劳，抗缺氧，抗辐射，抗衰老等作用。故针对黄芪中的有效成分黄芪甲苷采用水煎煮方法提取。

柴胡：本品为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurumscorzonerifolium Willd.的干燥根。柴胡的化学成分有挥发油，皂苷，有机酸，醇类，及钙、钾、铝等金属元素。其有效成分为柴胡皂苷类。柴胡中的柴胡皂苷及其皂苷元对中枢神经系统有明显的镇静、镇痛、镇咳、解热、降温等作用；柴胡多糖能提高小鼠体液和细胞免疫功能；柴胡皂苷a口服能使四氯化碳肝损伤大鼠的肝功能恢复正常，具有保护肝细胞损伤和促进肝脏脂质代谢作用；柴胡粗总皂苷1/5LD50以下剂量还能使大鼠血压下降、心率减慢；此外，柴胡还具有抗肿瘤，抗病原体，影响脂类、蛋白质、血糖代谢等作用。故针对柴胡中的皂苷和多糖类成分，宜选择水煎法提取。

栀子：本品为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis.的干燥成熟果实。栀子中含有环烯醚萜类，如异栀子苷，去羟栀子苷(京尼平苷)，山栀子苷，有机酸类，色素，D～甘露醇，β～古甾醇等。药理作用研究表明，在消化系统中，栀子提取物能减轻四氯化碳引起的肝损伤，其中所含的环烯醚萜苷类成分还具有利胆、利胰、降胰酶及泻下作用；在心血管系统中，栀子提取物能降低心肌收缩力，降低血压；在中枢神经系统中，栀子水提物能抑制小鼠醋酸扭体反应，有镇痛作用。故对于栀子采用传统的水煎提取法。

苦参：本品为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。苦参中主要含有喹诺里西啶类生物碱，如苦参碱，异苦参碱，氧化苦参碱，槐果碱，异槐果碱等；黄酮类。苦参中的生物碱类成分能抑制心脏，减慢心率，减弱心肌收缩力，减少心输出量，平喘祛痰，安定，抗炎，抗肿瘤，抗病原微生物等作用。故选择水提法处理。

赤芍：本品为毛茛科植物赤芍Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeoniaveitchii Lynch的干燥根。赤芍中已鉴定的化合物大都是单萜成分，有芍药苷，氧化芍药苷，芍药内酯苷，芍药新苷，鞣质等。赤芍水提勿腹腔注射，能明显降低荷s180实体瘤小鼠的高纤维蛋白血症，还可以使荷瘤小鼠的优球蛋白溶解时间一直接近正常小鼠的水平。研究表明芍药苷具有镇静作用；芍药苷能抑制大鼠荷豚鼠肠管荷胃运动，对抗乙酰胆碱引起的平滑肌痉挛，芍药苷易溶于水，故赤芍采取水煎煮法提取有效成分。

甘草：本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。甘草中的主要化学成分为三萜类，如三萜皂苷甘草酸，甘草酸的钾、钙盐即甘草甜素，是甘草的甜味成分；黄酮类化合物，是甘草抗溃疡镇痉的有效成分；此外，甘草中还含有生物碱和多糖。药理试验研究表明甘草的药理作用较为广泛：(1)它具有肾上腺皮质激素样作用。由于甘草甜素的苷元甘草次酸在结构上同皮质激素相似，于是对后者在肝内代谢失活起竞争性抑制作用，从而间接提高的皮质激素的血药浓度所致；(2)对消化系统的作用。集中体现为甘草次酸的抗溃疡，解痉，促进胰腺分泌，保肝作用。(3)对心血管系统的作用。甘草甜素能降血脂，抑制血小板聚集，抗心率失常；(4)解毒作用。甘草甜素除本身具吸附作用，可吸附毒素以外，它的肾上腺皮质激素样作用也可解毒。另外，甘草甜素还有明显的抗炎，增强免疫，抗癌，抗病毒及抗菌等作用。因为甘草甜素是盐类，可溶于水，故采用水提的方法。

白花蛇舌草：本品为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草。白花蛇舌草的化学成分主要为甾醇类，三萜类，环烯醚萜苷类，蒽醌等。实验中证实白花蛇舌草水提液具有增强动物免疫，抗化学诱变及抗病毒，保肝利胆等作用，故采用水提的方法处理。

2.3粉碎原理的论述：

制鳖甲：本品为鳖科动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann的背甲经醋炙而成。鳖甲中主要含有动物胶，其中的骨胶原为主成分，尚含角蛋白、碘质、维生素D及磷酸钙、碳酸钙等。实验表明，鳖甲粉末对小鼠移植实质性癌具有抑制作用，它还能增强体液免疫，抑制结缔组织增生，消结块，增加血浆蛋白的作用。因打粉后还能提高其利用率，故将其粉碎入药。

三七：本品为刺五加科植物三七Pannx notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。三七的化学成分有挥发性成分、皂甙成分、三七素以及槲皮素、黄酮甙等物质。其有效成分为皂甙成分中的人参皂甙Rb1，人参皂甙Rg，三七皂甙Re。研究表明，三七中含的三七总皂苷、微量元素硒等抗癌活性物质，三七皂苷120ug/ml浓度的Rb1能使培养的肿瘤细胞92％受到抑制，三七皂苷Rd的抑制率则为79％；三七皂苷Rh1对培养的肝癌细胞有明显的抑制作用；三七皂苷Rh2具有较强的抗肿瘤活性，并能诱导癌细胞逆转成非癌细胞。此外，三七皂苷和三七多糖能增强机体免疫功能，提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，对治疗癌症有一定的辅助作用。因三七含有大量淀粉，且质地坚硬，用水或低浓度醇提取时易糊化，难以过滤，故粉碎入药。

鸡内金：本品为雉科动物家鸡Gallus gallus domesticus Brisson.的干燥沙囊内壁。鸡内金中含胃激素，角蛋白，糖蛋白，维生素，及各种氨基酸，还有少许微量元素。其药理作用主要为促进消化。因打粉后也能提高利用率，故粉碎后入药。

穿山甲：本品为鲮鲤科动物鲮鲤Manis pentadactyla Linnaeus的干燥鳞片。穿山甲中含硬脂酸，胆甾醇，脂肪族酰胺，无机元素钙、磷、锌、钠、钛、铁等，还含有挥发油和水溶性生物碱。其药理作用主要为扩张血管壁，增加血流量，降低外周阻力；抗凝血，抗炎，增强组织耐缺氧能力等。打粉后既有利于有效成分的溶出，又保证其成分稳定，故粉碎后入药。

2.4、工艺条件的优化筛选

2.4.1粉碎工艺研究

按处方比例称取制鳖甲1440g、穿山甲360g、鸡内金600g、三七540g，粉碎，过80目筛，计算出粉率，结果见表2.1。

表2.1出粉率考察结果

从表2.1结果可以看出，上述药材粉性较好，平均出粉率均在95％以上，损失少，具有生产可行性。

2.4.2醇提工艺的研究

对醇提效果影响较大的因素有乙醇浓度、加醇量、提取次数及提取时间，因此，本试验以大黄素提取量和干浸膏得率为考察指标，采用正交试验设计法对诸因素进行考察。

大黄素的含量测定方法参考有关文献和预试验，结果准确，操作简便。

2.4.2.1材料与仪器

仪器：高效液相色谱仪(岛津LC～2010型)，UV～VIS紫外～可见检测器，电子分析天平(德国赛多利斯天平有限公司，型号：BS 210S d＝0.1mg；北京赛多利斯天平有限公司，型号：BP 211D d＝0.01mg)。

试剂：含量测定用甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。

对照品：大黄素购自中国药品生物制品检定所。

2.4.2.2方法与结果分析

用L₉(3⁴)正交表安排试验，称取丹参15g、虎杖10g九份按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，摇匀，备用。具体见表2.2。

干浸膏得率测定方法：精密量取各试验项下滤液100ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥3小时，计算干浸膏得率。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温：30℃；乙腈－水(75:25)为流动相，流速1ml/min；检测波长为254nm。

对照品溶液的制备：精密称大黄素对照品4.16mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含大黄素0.0416mg)。

供试品溶液的制备：精密称取各试验项下提取液适量，水浴浓缩至干，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声提取40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

精密量取各试验项下滤液100ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥3小时，计算干浸膏得率。

表2.2醇提试验因素水平表

表2.3醇提正交试验设计表及试验结果

对表2.3数据作直观分析，结果可见：4个因素的影响大小顺序为：加醇量>提取时间>提取次数>醇浓度，最佳的制备工艺方案为A₁B₂C₃D₁。综合分析表明，以最佳工艺制备样品，有效成分提取率较高，且节省能源。

结论

综上所述，确定醇提工艺为：75％的乙醇6倍量，提取时间为1.5小时，提取次数为3次。

2.5水提工艺的研究

对水提结果影响较大的因素有煎煮次数、煎煮时间及加水量，因此，本试验以芍药苷提取量和干浸膏得率为考察指标，采用正交试验法对加水量进行研究确定。

芍药苷含量测定方法参考有关文献和预试验，结果准确，操作简便。

2.5.1材料与仪器

仪器 岛津LC—2010型高效液相色谱仪，电子分析天平(德国赛多利斯天平有限公司，型号：BS 210S d＝0.1mg，北京赛多利斯天平有限公司，型号：BP 211D d＝0.01mg)。

试剂 含量测定用甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。

对照品 芍药苷(供含量测定用，批号：110736～200220)购自中国药品生物制品检定所。

2.5.2方法与结果分析

用L₉(3⁴)正交表安排试验，称取黄芪20g、赤芍15g、栀子15g、柴胡10g、甘草6g、苦参9g、白花蛇舌草12g以及醇提工艺研究项下所剩药渣9份，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，摇匀，备用。(具体条件见表2.4)

干浸膏得率测定方法 精密量取上述滤液200ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥3小时，称重，计算干浸膏得率。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温：30℃；乙腈－0.1％磷酸(15:85)为流动相，流速1ml/min；检测波长为230nm。

对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照5.18mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含芍药苷0.0518mg)。

供试品溶液的制备 精密称取各试验项下干浸膏适量，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，称定重量，超声提取40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液20μl、供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表2.4水提试验因素水平表

表2.5水提正交试验设计表及试验结果

对表2.5数据作直观分析，结果可见：3个因素的影响大小顺序为：煎煮时间>加水量>煎煮次数，最佳的制备工艺方案为A₂B₂C₃。综合分析表明，以最佳工艺制备样品，有效成分提取率较高，且节省能源。

结论

综上所述，确定水提工艺为：加水量为10倍量，提取时间为1.5小时，提取次数为3次。

2.6浓缩工艺

减压浓缩具有温度低、回收效率高、有效成分破坏小的优点，因此，拟对本品提取液采用减压浓缩方法进行回收与浓缩，经试验，回收浓缩过程中，压力宜保持在0.08MPa，温度宜保持在65℃。

2.7干燥工艺

真空干燥具有干燥时间短，温度低，有效成分破坏小，干燥所得浸膏疏松，易于粉碎等优点。因此，拟对本品浓缩液采用真空干燥法进行干燥，经试验，干燥过程中，压力宜保持在0.06MPa，温度宜保持在60℃。兆帕斯卡

2.8成型工艺研究

2.8.1辅料的选择

由于本品原料为提取干浸膏和药物细粉的混合物，细粉在处方中比例较大，约占60％，可兼做润滑剂和抗湿剂的作用，经试验本品药粉耐湿性较好，因此，不再考虑加入赋型剂。

2.8.2润湿剂的选择

取本品药粉3份，每份200g，分别以75％、85％、95％乙醇制粒(制粒工艺按现有的方法进行)，过40目筛，对颗粒的外观、流动性进行测试比较，结果见表2.6。

表2.6润湿剂考察结果

根据上述结果，以85％乙醇的粘性适宜，颗粒成型性、流动性较好，因此，确定以85％乙醇为润湿剂。

2.8.3规格的确定

根据本品的出粉率及出膏率，一个处方量药材约制成药粉500g，每粒装0.5g，可制成1000粒。

三、药效学的实验研究：

通过动物实验研究观察抗阳胶囊的保肝降酶作用、对抗肝炎作用及其与治疗作用相关的免疫增强作用、镇痛作用等，以了解抗阳胶囊与临床功能主治有关的药理作用，为临床用药提供试验依据。

3.1.试验材料：

3.1.1受试药物：抗阳胶囊，黄褐色颗粒，1g提取物相当于2.148g生药材，由西安北大医院制剂中心制备，批号060203，临床拟用量：口服，一次6粒，一日3次，即每人每天服用药粉7.2g(成人以60kg计)。试药以电子天平精确称量，临用前以常水配制成所需浓度，用后贮存于4℃冰箱，每次仅配制满足2天的用量。采用灌胃(ig)给药，给药容积：大鼠10ml/kg，小鼠20ml/kg

3.1.2阳性对照药：

秋水仙碱片：云南植物药业有限公司生产。

联笨双酯：浙江医药股份有限公司新昌制药厂生产。

盐酸吗啡；

左旋咪唑片：山东省营南制药厂生产。

益血生：吉林敖东珠海药业有限公司生产。

3.1.3实验动物与试验条件：

3.1.3.1实验动物：SD大白鼠，♀♂兼用，由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第08—25号。ICR小白鼠，♀♂兼用，由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第08—24号。试验前饲养3—5天，选行为活动、饮食、精神状态均正常的动物进行试验。

3.1.3.2试验条件：室温22—28℃，相对湿度35～65％，空调调温，排气扇通风换气每天2次，每次1h，试验小鼠雌雄分笼喂养，水(常水)、标准颗粒饲料自由摄取。鼠舍保持整洁卫生。光/暗时间为12/12h。

3.1.4试剂与仪器：

3.1.4.1试剂：

(1)四氯化碳(CC1₄)：上海伊华医学科技有限公司生产。

(2)环磷酰胺：江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

(3)伊文思蓝：国药集团化学试剂有限公司生产，规格：10g瓶盒。

(4)印度墨汁：北京笃信精细制剂厂生产，规格100ml/瓶。

(5)透明质酸(HA)放射免疫分析试剂盒：上海海研医学生物技术有限公司生产。

(6)IV型胶原(IV—C)放射免疫分析试剂盒上海海研医学生物技术有限公司生产。

3.1.4.2仪器:

(1)电子计重秤：ACZ—6A型，分度值：1g，上海三积分电子有限公司生产。

(2)电子天平：AL104型，精确度：0.1mg，上海梅特勒—托利多仪器有限公司生产。

(3)分光光度计：721型，上海湖光科学仪器公司生产。

(4)生物显微镜：CHA—213型，日本Olympus公司生产。

(5)血球检测仪：F—820型，日本Sysmex公司生产。

(6)生化自动分析仪：7170A型，日本日立公司生产。

(7)γ放射免疫计数器：FJ2008P/2003P型，国营二六二厂生产。

3.1.5试验剂量的设计和选择依据：

抗阳胶囊的急性毒性试验结果显示：小鼠急性毒性试验采用ig给药未测出LD50，测出一天最大给药量为48g/kg·bw，据此本次抗阳胶囊主要药效学试验用药剂量按常规设计为：大鼠给药的大、中、小剂量分别为3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw及0.9g/kg·bw，分别相当于人临床拟用量的30倍、15倍及7.5倍。小鼠给药的大、中、小剂量分别为3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw及0.9g/kg·bw，分别相当于人临床拟用量的30倍、15倍及7.5倍。

3.1.6实验结果的统计方法：试验数据以均值±标准差

表示，组间进行t检验。

3.2.试验方法与结果

3.2.1对CC1₄致大鼠慢性肝损伤的影响:按文献方法，取SD大鼠60只，体重180～220g，♂♀各半，按性别体重随机分成6组：空白对照组、模型组、阳性对照(秋水仙碱)组、抗阳胶囊大、中和小剂量组。以工具药CC1₄，复制慢性肝损伤大鼠模型：除空白对照组大鼠外，其余各组大鼠均ig 50％CC1₄ 0.1ml/100g·bw，2次/周，连续10周。自造模第6周起开始给药，空白对照组和模型组ig常水10ml/kg·bw；阳性对照组ig秋水仙碱10mg/kg·bw：其余3组分别ig抗阳胶囊3.6g/kg、1.8g/kg、0.9g/kg·bw。每天给药1次，连续给药5周。末次给药后，隔夜禁食，次日在乌拉坦麻醉下取血及肝组织标本。用日立7170A型生化自动分析仪测定血清ALT、AST、ALP活力、血清总蛋白和白蛋白含量；用放射免疫法(RIA)检测血清HA、IVC含量。取血后的大鼠取全肝脏称湿重，计算肝指数；将肝左叶以10％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，作病例组织学检查、摄像。结果详见表3.1～表3.3。

表3.1抗阳胶囊对CCl₄致慢性1损伤大鼠血液生化学指标的影响

(n＝10)

注：与模型对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；

由表3.1结果可见：模型组ALT、AST及ALP明显升高(P<0.01)，而血清总蛋白、白蛋白含量和白蛋白/球蛋白(A/G)比值明显降低(P<0.01)；抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw及0.9g/kg·bw剂量组均可显著抑制这种病理性升高的ALT、AST及ALP、促损伤肝细胞的总蛋白和白蛋白生成量、纠正白蛋白球蛋白(A/G)倒置的比值(P<0.01)。

表3.2抗阳胶囊对CCl₄致慢性肝损伤大鼠体重及肝指数的影响

注：与模型对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；

由表3.2结果可见：与空白对照组相比，其余各组体重偏低而肝重增加，因此肝指数增加。模型组大鼠体重明显降低(P<0.01)，肝指数明显升高(P<0.01)，抗阳胶囊3.6g/kg·bw，1.8g/kg·bw，0.9g/kg·bw剂量组均可显著对抗这种病理性改变，使体重有所增加(P<0.05或P<0.01)、而肝指数有所降低(P<0.05)。

表3.3抗阳胶囊对CCl₄致慢性肝损伤大鼠血清HA，IV—C含量的影响

注：与模型对照组比较：*p<0.05：**p<0.01；

由表3.3结果可见：模型组大鼠血清中HA和IVC含量显著高于空白对照组(P＜0.01)，抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw和0.9g/kg·bw剂量组均可显著对抗这种病理性改变，血清HA和IVC含量显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)。

病理学检查方法：将所取SD大鼠肝经10％福尔马林固定，取材作常规石蜡切片，切片厚度约7um，行H.E染色和胶原纤维染色，用OLYMPUS BHB生物显微键进行观察。

检查结果：

正常对照组：肝小时轮廓清楚完整，肝细胞索排列整齐，肝窦清晰可见。汇管区小叶间动脉、静脉和小时间胆管未见扩张、增生，也未见管腔狭窄、炎细胞浸洞和纤维组织增生。

模型组：肝组织正常结构被破坏，肝细胞索排列紊乱，肝细胞肿胀变性，中央静脉及汇管区扩张弯曲，并伴有纤维结缔组织增生，形成纤维索向周围延伸，其中增生的纤维索形成纵隔，使小时结构紊乱，汇管区有大量炎细胞浸洞。

给药组：各组动物肝细胞变性，肝组织内炎症细胞浸洞程度与模型组相比大为减轻。纤维组织增生不明显，一般仅局限于汇管区。其中大剂量组优于中剂量组和小剂量组，中剂量组和小剂量组分别有部分动物肝细胞肿胀变性，呈气球样改变，小叶结构不清晰，均有炎细胞浸涧。

阳性药组：与大剂量组相比1例动物肝组织正常结构被破坏，伴有纤维结缔组织增生，其余动物肝组织无明显异常，肝细胞tA等病理改变。

病理学检查结果表明(光镜检查)，模型组大鼠肝内有大量纤维组织增生，相互连接呈网状，形成中央静脉到门管区，门管区到门管区的纤维桥。正常肝小叶结构被破坏，部分肝细胞变性坏死。抗阳胶囊组大鼠增生的胶原纤维显著减少，肝小叶结构有所恢复，中央静脉处仍有纤维束伸出，静脉管壁变薄，血窦增宽，肝细胞变性坏死较轻。表明抗阳胶囊有较好的促进已产生的胶原降解作用，从而保护肝细胞。以上试验表明抗阳胶囊对大鼠慢性肝损伤具有明显的抑制作用，能明显促进损伤肝细胞的修复和肝功能指标的改善。

3.2.2对CC1₄致小鼠急性肝损伤的影响：按文献方法，取ICR雄性小鼠60只，体重20～24g，随机分为6组：空白对照组及模型组(均为常水20ml/kg·bw)、阳性对照组(联苯双酯0.3g/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw组。ig给药，每天1次，连续给药6d。于d5给药后，除空白对照组注射等容量生理盐水外，其余各组小鼠均以0.5％CC1₄花生油溶液皮下注射10ml/kg·bw，共1次，当天下午加强给药1次。禁食16h后，于d₆上午给药后1h断头取血约1ml，用赖氏法测定血清中ALT、AST活力单位。结果详见表3.4。

表3.4抗阳胶囊对CCl₄致急性肝损伤小鼠血清酶活力的影响

注：与模型对照组比较：*p<0.05：**p<0.01；

由表3.4结果可见：小鼠皮下注射CC1₄后24h血清ALT、AST水平明显高于空白对照组(P＜0.01)，抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw剂量组以及联苯双酯0.3g/kg·bw组连用6d，均可对抗上述指标的变化，血清中ALT、AST活力明显降低(P＜0.01或P＜0.05)，并呈现一定的剂量依赖关系。表明抗阳胶囊对CCL₄致小鼠急性肝损伤具有明显的抑制作用。

3.2.3对免疫低下小鼠溶血素生成的影响：取ICR小鼠60只，♂♀各半，体重18g～22g，随机分为6组：空白对照组及模型对照组(均为常水20ml/kg·bw)、阳性对照组(左旋咪唑50mg/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药，每天1次，连续给药10d。在给药d4每鼠腹腔注射10％SRBC0.2ml进行免疫。除空白对照组外，其余各组小鼠在d6～d9分别腹腔注射环磷酰胺25mg/kg·bw，每天1次，连续注射4d。末次给药后1h，自小鼠眼眶内眦静脉取血1ml，分离血清，用生理盐水将血清稀释100倍。取稀释血清1ml，加10％SRBC悬液0.5ml、10％补体1ml，置37℃水浴中保温10min。2000rpm10min，取上清液1ml加3ml都氏试剂混匀，放置10min后分别测定各管OD₅₄₀nm值，计算HC₅₀并进行组间t检验。结果详见表3.5。

表3.5抗阳胶囊对免疫低下小鼠溶血素生成的影响

注：与模型对照组比较：*p<0.05；**p<0.01；

由表3.5结果可见：环磷酰胺使小鼠产生针对SRBC溶血素的能力明显抑制，模型组HC₅₀与空白对照组相比明显降低(P<0.01)，抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw3个剂量组以及左旋咪唑50mg/kg·bw组能明显对抗上述指标的变化，均可显著提高HC₅₀(P<0.01)，表明抗阳胶囊能显著拮抗环磷酰胺对小鼠血清溶血素生成的扣制作用。

3.2.4对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响：按文献方法取ICR小鼠60只，♂♀各半，体重18g～22g，随机分为6组：空白对照组及模型对照组(均为常水20ml/kg·bw).阳性对照组(左旋咪唑50mg/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药，每天1次，连续给药12d。除空白对照组外，其余各组小鼠在d7～d10分别腹腔注射环磷酰胺25mg/kg·bw，每天1次，连续注射4d。末次给药后1h，自尾静脉注入稀释的印度墨汁0.1ml/10g·bw,2min和12min时于小鼠内眦静脉丛取血20ul,溶于2ml0.1％Na₂CO₃溶液中，在721分光光度计上读取OD₆₀₀nm值，并称其肝、脾重量，计算吞噬系数a值并进行组间t检验。结果详见表3.6。

表3.6抗阳胶囊对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

注：与对照组比较：*p<0.05；**P<0.01；

由表3.6结果可见：抗阳胶囊0.9g/kg·bw剂量组的肝脾合重明显大于模型对照组(P<0.05)；抗阳胶囊3.6g/kg·bw，1.8g/kg·bw，0.9g/kg·bw剂量组的吞噬指数均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01)；抗阳胶囊1.8g/kg·bw及0.9g/kg·bw剂量组的吞噬系数均明显高于模型对照组(P<0.05或P<0.01)。表明抗阳胶囊能显著拮抗环磷酰胺对小鼠网状内皮系统吞噬功能的抑制作用。

3.2.5对二硝基氯苯(DNCB)致小鼠迟发性皮肤过敏反应的影响：按文献方法，取ICR小鼠50只，♂♀各半，体重18g～22g，随机分为5组：模型对照组(常水20ml/kg·bw).阳性对照组(左旋咪唑50mg/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw，1.8g/kg·bw，0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药，每天1次，连续给药14d。于给药首日，即于用硫化钡脱毛的腹部皮肤上滴40％DNCB丙酮溶液10μl/只致敏，13d后，在事先用硫化钡脱毛的同一只小鼠腹部皮肤上涂10％DNCB丙酮溶液20μl/只进行攻击。24h后每只小鼠尾静脉注入1％伊文思蓝10ml/kg·bw.30min后处死小鼠,取下小鼠蓝染皮肤,剪碎,置试管中用1:1丙酮生理盐水混合液4ml，浸泡24h后，离心取上清液测OD₆₁₀nm值。与对照组比较，组间进行t检验。结果详见表3.7。

表3.7抗阳胶囊对DNCB致小鼠迟发性皮肤过敏反应的影响

注：与对照组比较：*p<0.05；**P<0.01；

由表3.7结果可见：抗阳胶囊3.6g/kg·bw及1.8g/kg·bw剂量组以及左旋咪唑50mg/kg·bw组的OD₆₁₀nm值明显高于对照组(P<0.05)。表明抗阳胶囊能明显增强DNCB所致小鼠的迟发性皮肤过敏反应，即抗阳胶囊对机体的细胞免疫功能具有调节作用。2.6对物理性刺激致小鼠尾巴回缩反应的影响：按文献方法，取ICR小鼠50只，♂♀各半，体重18g—22g，随机分为5组：模型对照组(常水20ml/kg)、阳性对照组(盐酸吗啡10mg/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw.1.8g/kg·bw.0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药,每天1次，连续给药3d。末次给药后1h，把小鼠尾部(下1/3)浸入55℃温水浴中，以尾部回缩反应作为疼痛反应，记录各组小鼠尾部回缩时间(秒)，与对照组比较，组间进行1检验。结果详见表3.8；

表3.8抗阳胶囊对物理性刺激致小鼠尾巴回缩反应的影响

注：与对照组比较：*p<0.05；**P<0.01；

由表3.8结果可见：抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw剂量组以及盐酸鸣啡10mg/kg·bw组均可明显延长热刺激引起小鼠尾巴回缩反应的时间(P<0.01)，表明抗阳胶囊能明显提高小鼠因物理性刺激所致的疼痛反应阈值。

3.2.7对化学性刺激引起小鼠扭体反应的影响：按文献方法取1CR小鼠50只，♂♀各半，体重18g～22g，随机分为5组：模型对照组(常水20ml/kg·bw)、阳性对照组(盐酸吗啡10mg/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药,每天1次，连续给药3d。术次给药后1h，每只小鼠腹腔注射0.5％醋酸溶液0.2ml/只，放入观察盒内适应5min后，开始记录10min内小鼠出现扭体反应(腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高)次数，与对照组比较，组间进行t检验。结果详见表3.9。

表3.9抗阳胶囊对化学性刺激致小鼠扭体反应的影响

注：与对照组比较：*p<0.05；**P<0.01；

由表3.9结果可见：小鼠腹腔注射冰醋酸后出现典型的扭体反应，腹部收缩内陷、躯体扭曲、后肢伸展及蠕行等。抗阳胶囊3.6g/kg·bw和1.8g/kg·bw剂量组以及盐酸吗啡10mg/kgbw组能显著减少小鼠的扭体次数(P<0.05或P<0.01)。表明抗阳胶囊能明显提高小鼠因H化学性因子刺激所致的疼痛反应阈值。

3.2.8对小鼠急性脑缺血的影响：按文献方法，取ICR小鼠50只，♂♀各半，体重18g～22g.随机分为5组：对照组(常水20ml/kg·bw)、阳性对照组(益血生2g/kg·bw)和抗阳胶囊3.6g/kg·bw、1.8g/kg·bw、0.9g/kg·bw组。各组动物均ig给药，每天1次，连续给药5d.木次给药后1h，于小鼠耳后2mm处用利剪迅速断头，记录小鼠脑死亡前的张嘴呼吸次数及持续时间，与对照组比较，组间进行t检验。结果详见表3.10。

表3.10抗阳胶囊对小鼠急性脑缺血的影响

注：与对照组比较：*p<0.05；**P<0.01；

由表3.10结果可见：益血生2g/kg·bw可明显延长小鼠断头后的喘气次数和呼吸时间(P<0.01)，抗阳胶囊各剂量组虽能延长小鼠断头后的喘气次数和呼吸时间，但无统计学意义(P>0.05)。

3.3.讨论与结论

抗阳胶囊是由虎杖、苦参等13味中药组成的中药复方制剂，具有清热解毒，益气活血，舒肝解郁，软坚化瘀之功效，临床上主要用于急、慢性肝炎的治疗，尤适用于有肝纤维化趋向者。本文抗阳胶囊主要药效学试验的给药剂量经预试验和综合分析后设计为：大鼠给药的大、中、小剂量分别为3.6g/kg，1.8g/kg及0.9g/kg，分别相当于人临床拟用量的30倍、15倍及7.5倍。小鼠给药的大、中、小剂量分别为3.6g/kg，1.8g/kg及0.9g/kg，分别相当于人临床拟用量的30倍、15倍及7.5倍。

试验结果显示：抗阳胶囊对CCl₄，所致大鼠急、慢性肝损伤具有明显的抑制作用，并呈现一定的剂量依赖关系。抗阳胶囊3.6g/kg、1.8g/kg及0.9g/kg剂量组可明显降低CCl₄所致病理性升高的ALT、AST及ALP；促进慢性肝损伤细胞的总蛋白和白蛋白生成量、纠正白蛋白/球蛋白(A/G)倒置的比值(P<0.01)；使慢性肝损伤大鼠的体重有所增加(P<0.05)、肝指数有所降低(P<0.05)；使慢性肝损伤大鼠的血清HA和IVC含量显著降低(P<0.01)，表明抗阳胶囊能明显促进急、慢性肝损伤大鼠或小鼠肝细胞的修复和肝功能指标的改善。

抗阳胶囊能明显对抗环磷酰胺对小鼠血清溶血素生成的抑制作用(P<0.01)，促进免疫低下小鼠的抗体生成；能对抗环磷酰胺对小鼠网状内皮系统吞噬功能的抑制作用(P<0.05或P<0.01)，增强网状内皮系统的吞噬功能；能明显增强DNCB致小鼠的迟发性皮肤过敏反应(P<0.05)，对机体的细胞免疫功能具有正向调节作用。

此外，抗阳胶囊3.6g/kg及1.8g/kg剂量组能够明显延长物理性热刺激所引起小鼠尾巴回缩反应的时间(P<0.01)：明显减少化学性酸刺激所引起的扭体反应次数(P<0.05)，提示抗阳胶囊能抑制物理性和化学性刺激因子引起的疼痛反应，具有一定的镇痛作用。抗阳胶囊对小鼠急性脑缺血、缺氧的耐受力无明显影响(>0.05)。

综上所述，本文关于抗阳胶囊的药效学实验结果与其功能主治相吻合，为抗阳胶囊在临床上进一步应用于治疗慢性肝炎疾患提供了较为充足的药理学依据。

四、小鼠急性毒性试验；

抗阳胶囊按40％的浓度以0.4ml/10g体重的给药容量，24小时给ICR小鼠灌胃3次，小鼠无1只死亡，也无明显中毒反应，测得抗阳胶囊药粉最大给药量为48g/kg体重(折合生药103.10g/kg)，为临床人日用量0.12g/kg的400倍。

试验目的：观察给小鼠灌胃抗阳胶囊后所产生的毒性反应和死亡情况。

4.1.试验条件

4.1.1动物品系：ICR小鼠体重18～20g，♂♀各半，由陕西省中医药研究院动物中心提供，合格证，陕医动字第08～24号，实验前饲养1周，选行为活动、饮食、精神状况正常的小鼠进行实验。

4.1.2饲养管理：室温20～24℃，相对湿度45％～70％，光照12小时/日，排风扇通风2次/旧，每次0.5h，♂♀分笼饲养，水(自来水)自由摄取，符合GB14925—94，合格证号为医动字08—23号，饲料为实验动物全价营养饲料，合格证号为医动字第08～22号。

4.1.3受试动物：抗阳胶囊药粉，黄色干燥粉末，由西安北大医院提供，批号：060203，每克相当原生药2.148g。临床人拟用量：每日7.2g，每公斤体重服药量0.12g/kg(人的体重以60kg计)。试验时将药粉用蒸馏水配成40％浓度。

4.2.试验方法

4.2.1预试:取ICR小鼠9只，体重18～20g，给药前禁食12小时，分3组，剂量分别为40％浓度0.4ml/10g体重、0.3ml/10g体重、0.2ml/10g体重，24小时内灌药3次，每次间隔3小时，给药后观察小鼠一般情况。见小鼠活动自如，进食、饮水正常，大便呈湿润颗粒状，3个剂量小鼠72小时内无1只死亡，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD₅₀，故选择最大给药量试验。

4.2.2最大给药量试验：取小鼠20只，8各半，体重18—20g，给药前禁食12小时，以40％浓度的抗阳胶囊药粉混悬液24小时内分3次灌药，每次给药0.4ml/10g体重，每次间隔3小时，给药后再禁食3小时，连续观察一周，观察内容见表4.1。详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物等。

表4.1动物急性毒性试验观察表

观察项目	表现和症状
		自发活动	增多、减少、窜动、倦卧不动
肌肉运动	震颤、抽搐、麻痹、共济失调
		肌张力	增强、减弱、肌强直、肌松弛
反应	紧张不安、反应迟钝
		植物神经	坚毛、流泪、流涎、凸眼、腹泻、扭体反应
呼吸	抑制、急促、衰竭
		皮肤颜色	苍白、紫绀、充血
死亡时间	急死、缀死
		死亡症状	挣扎、角弓反张、口吐白沫

20只小鼠外观体征未见异常，活动自如、进食、饮水、粪便均正常，皮毛光洁，口、鼻、眼及肛门清洁无分泌物，无惊厥、震颤、角弓反张、活动增多跳跃、奔跑。嘴唇及为尾部无紫绀、苍白、充血表现。呼吸无急促、抑制、衰竭等改变。连续观察一周，体重有增加，给药前后体重变化见表4.2。小鼠全部存话，无明显中毒反应，解剖所见：胸腔，腹腔未见异常液体，肠管未见胀气，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、形态异常，未见出血点及其它病理改变，胃粘膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。

表4.2抗阳胶囊小鼠急性毒性实验体重统计

试验结论抗阳胶囊给ICR品系小鼠灌胃未测出LD，其最大给药量为48g/kg体重，约为临床人日用量0.12g/kg(人的体重以60kg计)的400倍。故本试验提供小鼠急性毒性最大给药量为48g/kg体。

五、抗阳胶囊近三年临床使用情况及不良反应总结

本发明的抗阳胶囊主要由穿山甲、制鳖甲、黄芪、鸡内金、三七、丹参、赤芍、虎杖、栀子、柴胡、白花蛇舌草、苦参和甘草组成，具有清热解毒，益气活血，疏肝解郁，化瘀软坚之效，临床上主要用于急、慢性肝炎，尤适用于有肝纤维化趋向患者。现对其近三年临床使用及不良反应进行总结，从而为以后的诊治提供参考依据。

对68例急慢性肝炎患者进行收集观察整理，结果证明抗阳胶囊治疗急、慢性肝炎患者效果较好，总结如下。

选择急、慢性肝炎患者，兼有肝纤维化趋势患者68例进行观察，其中男性患者有37例，女性患者有31例，年龄21～62岁，平均年龄(42.5±2.3)岁，病程2个月～13年。方法：入组患者均在常规药物治疗基础上使用山金丹胶囊进行治疗，早中晚各服药1次，每次服用5粒，治疗周期为3个月，同时嘱咐患者需要戒酒，并且严格的调控其饮食。观察指标主要于治疗前和治疗后检查肝功能，AFP(甲胎蛋白)和B超各1次,观察并记录其症状(乏力、纳呆、胁痛、恶心、腹胀、黄疸)和AFP、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)的变化。疗效判断标准，参照2001年中华中医药学会内科肝病专业委员会制定的《病毒性肝炎中医疗效判定标准》及《中药新药临床研究指导原则(试行)》中疗效判定标准。主要内容如下：临床痊愈(临床症状消失、肝功能恢复正常)；显效(临床主要症状基本消失、肝功能基本恢复正常)；有效(临床主要症状减轻甚至消失、肝功能各项指标下降达50％以上)；无效(肝功能和症状无明显改善)。总有效率＝(显效+有效)/总例数×100％。统计学方法：本次研究采取SPSS22.0的统计学软件进行整理和分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，用t检验，组内存在统计学差异性(P<0.05，P<0.01)。

疗效结果：治疗组68例中,显效29例,有效33例,无效6例，总有效率91.16％，治疗前后症状明显改善,组内比较差异有统计学意义。各项血清学指标治疗前后AFP,ALT及AST较治疗前均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)，TBIL治疗后也有显著变化，差异具有统计学意义(P<0.05)，AIb治疗前后变化没有统计学意义，见表5.1和表5.2中的结果。

表5.1主要临床症状比较(n＝68)

表5.2治疗前后各项血清学指标测定结果比较(n＝68，x±s)

注：与治疗前比较，^**P<0.01，^*P<0.05；

不良反应：68例肝炎患者未出现因不良事件而终止观察，全部完成全程观察，对治疗后的血常规、肝功能、心电图均无影响，未出现任何不良反应。

综上所述，临床观察表明山金丹胶囊治疗急、慢性肝炎慢性肝炎具有良好的疗效，而且没有明显的不良反应，服药方便，适于临床推广。

以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于，由下述物质组成：

君药：虎杖和苦参；

臣药：栀子、白花蛇舌草、丹参和赤芍；

佐药：穿山甲、制鳖甲、鸡内金、三七、柴胡和黄芪；

使药：甘草；

其中，按质量份数计，臣药为君药用量的至少3倍，佐药至少为君药用量的至少4倍，使药为君药用量的1/3。

2.一种中药组合物，其特征在于，按质量份数计，由下述物质组成：穿山甲4～7份，制鳖甲16～25份，黄芪13～21份，鸡内金6.7～11份，三七6～10份，丹参10～16份，赤芍10～16份，虎杖6.7～11份，栀子10～16份，柴胡6.7～11份，苦参6～10份，甘草4～7份，白花蛇舌草8～13份。

3.一种中药组合物，其特征在于，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：

虎杖10g，苦参9g，栀子15g，白花蛇舌草12g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

4.一种中药组合物，其特征在于，以一日水煎量计，中药组合物由下述物质组成：虎杖10～20g，苦参9～15g，栀子15g，白花蛇舌草12～20g，柴胡10g，穿山甲6g，制鳖甲24g，丹参15g，三七9g，赤芍15g，鸡内金10g，黄芪20g，甘草6g。

5.一种抗阳胶囊，其特征在于，药用成分为权利要求1～4任一所述的中药组合物。

6.一种抗阳胶囊，其特征在于，由下述物质按质量份组成：

穿山甲4份，制鳖甲16份，黄芪13.3份，鸡内金6.7份，三七6份，丹参10份，赤芍10份，虎杖6.7份，栀子10份，柴胡6.7份，苦参6份，甘草4份，白花蛇舌草8份。

7.一种抗阳胶囊，其特征在于，由下述物质组成：

穿山甲40g，制鳖甲160g，黄芪133g，鸡内金67g，三七60g，丹参100g，赤芍100g，虎杖67g，栀子100g，柴胡67g，苦参60g，甘草40g，白花蛇舌草80g。

8.一种抗阳胶囊的制备方法，其特征在于，所述的抗阳胶囊为权利要求5～7任一所述的抗阳胶囊，制备方法包括：

按配方量：

穿山甲、制鳖甲、鸡内金和三七分别粉碎成细粉，备用；

丹参和虎杖分别加6倍量体积浓度为75％的乙醇提取三次，每次1.5h，合并醇提液，减压回收至无醇味，滤液继续浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏；

配方剩余中药、丹参醇提药渣和虎杖醇提药渣分别加10倍量的水煎煮三次，每次1.5h，煎液合并，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，合并稠膏，加入备用细粉，混匀、干燥及粉碎成细粉，装入胶囊。

9.权利要求1～4任一所述的中药组合物用于制备治疗乙肝药物的应用。

10.权利要求1～4任一所述的中药组合物用于制备杀灭乙肝病毒药物的应用。

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