CN113133366A - 一种防治烟草黑胫病的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治烟草黑胫病的方法，烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时，用硫胺素浓度为20mM/L的溶液均匀喷洒在其叶面上，每株烟草幼苗喷洒硫胺素溶液50mL左右，以叶片均布药液且不流淌为宜。这一时期使土壤水分保持在80％左右，控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:(1.5‑2.0):(3‑3.5)，增强烟株抗病性。本发明利用植物自身特有的系统防御机制，通过对烟草植株进行硫胺素溶液预处理，从而能较好的防治烟草黑胫病。从根本上改变了传统的对付植物病害的方法，实现了由治病到防病的技术转型。

Description

一种防治烟草黑胫病的方法

技术领域

本发明涉及烟草种植技术领域，特别涉及一种防治烟草黑胫病的方法。

背景技术

烟草[Nicotiana tabacum L.]为茄科烟草属植物，原产于南美洲，中国南北各省区广为栽培；是一种重要的经济作物。随着国家烟草专卖局提出“卷烟上水平”的要求，卷烟工业对优质原料的需求越来越大，红花大金元(简称“红大”)作为清香型烤烟良种的代表，深受烟草工业企业的肯定和喜爱。然而，红花大金元的抗病性不强，对植烟环境及种植管理要求较高，导致该品种的种植规模与产量常年偏低，难以满足市场需求。近年来，由于化肥施用过度以及耕地利用不当等原因，植烟地耕作层土壤出现酸化、板结现象，导致我国多个植烟区域相继爆发较为严重的土传病害。其中，又以红大种植区的受灾情况最为严重，烟农损失惨重，严重打击了农户的种烟积极性，也加剧了优质烟叶的供需矛盾。在红大烟草众多病害中，烟草黑胫病尤为严重。

烟草黑胫病是一种烟草土传卵菌病害，又名“黑秆疯、乌头病、黑根”，其病原菌为烟草疫霉。该种病害近年来在云南烟区常有发生，平均发病率为5.0％～12％，严重时发病率高达75％，给烟草生产造成了巨大的经济损失。当环境条件有利时，任何生长阶段都可被感染，生长季节普遍存在的潮湿环境条件有利于病原菌的生长繁殖，使其成为烟草最难控制的疾病之一。

病原菌的相互识别依赖于二者细胞表面分子之间的相互作用。病原菌入侵寄主植物时，通过细胞表面分子之间的作用，使植物体内发生一系列反应，诱导植物体内产生新的物质。按此分子识别机理，当无病原菌存在时，植物细胞壁受到某些物质如：无机盐、有机小分子、生物大分子以及真菌细胞壁碎片的刺激时，植物体内能发生一系列反应，通过这一系列的反应诱导植物产生植保素，使植物获得抗病性。植物免疫诱导抗病的发现从根本上改变了传统的对付植物病害的方法，实现了由治病到防病的技术转型。传统的对付植物病害的方法是发现植物得病后，用农药杀死病原菌。这些农药在杀死病原菌的同时，在植物上也有大量的残留，长期的使用对环境已造成了巨大的危害。而通过植物免疫诱导技术来诱导植物自身产生抗性则不然，因为大部分植物免疫诱导技术所用物质是无毒、无残留的物质且用量又极低，通过这类物质来对付植物病害，几乎不会对环境产生不良影响。植物免疫诱导技术可称得上是植物的“疫苗”，在植物发病前施用，以防为主，使植物更加健康的生长，从而杜绝或减少化学农药的使用。因此，对其研究、开发应用具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种防治烟草黑胫病的方法，该方法简单、易操作，能有效预防烟草黑胫病，可对烟草黑胫病进行定向防治。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种防治烟草黑胫病的方法，烟草幼苗移栽后用硫胺素溶液均匀喷洒在其叶面上。

进一步优选的：所述硫胺素溶液的浓度为5～20mM/L。

进一步优选的：所述硫胺素溶液的浓度为20mM/L。

进一步优选的：每株烟草幼苗喷洒硫胺素溶液50mL左右，以叶片均布药液且不流淌为宜。

进一步优选的：烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时开始喷洒所述硫胺素溶液。

进一步优选的：使土壤水分保持在80％左右。

进一步优选的：控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:(1.5-2.0):(3-3.5)，增强烟株抗病性。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明首先找到可能防治烟草黑胫病的硫胺素，通过综合考量硫胺素对黑胫病病原菌的抑菌能力和对烟草植株的毒害作用，筛选出抑菌效果良好、可定向应用于烟草黑胫病防治的20mM/L硫胺素，通过喷施硫胺素以防治烟草黑胫病，该防治方法操作简单，防治效果较好，天然无污染。

附图说明

图1是本发明设置实验的流程图；

图2是本发明硫胺素对烟草疫霉菌丝抑制结果图；

图3是硫胺素对烟草疫霉菌丝的抑制效果图；

图4是硫胺素对烟草疫霉孢子囊的抑制效果图；

图5是各处理烟草形态图；

图6是硫胺素防治烟草黑胫病效果图；

图7是设置实验中步骤5各种处理方式后烟草形态测定结果；

图8是不同浓度硫胺素对烟草生长的影响。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1，一种防治烟草黑胫病的方法，烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时，用硫胺素浓度为0mM/L的溶液均匀喷洒在其叶面上，每株烟草幼苗喷洒硫胺素溶液50mL左右，以叶片均布药液且不流淌为宜。这一时期使土壤水分保持在80％左右，控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:1.8:3.2，增强烟株抗病性。

实施例2，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为1mM/L。

实施例3，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为2mM/L。

实施例4，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为5mM/L。

实施例5，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为10mM/L。

实施例6，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为20mM/L。

实施例7，一种防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术特征不再赘述，其不同的技术特征在于：硫胺素的浓度为50mM/L。

设置实验

步骤1，培养烟草疫霉菌株

从黑胫病烟草病株茎秆中分离出烟草疫霉菌株。并在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA:200克、马铃薯、20克葡萄糖和15克琼脂在1000毫升水中的提取物)上进行常规培养备用。

步骤2，检测不同浓度的硫胺素溶液对黑胫病病原菌的抑制效果；

步骤21，制备硫胺素原液

用无菌蒸馏水制备硫胺素原液，溶液通过微滤膜(0.2μm)过滤除菌；

步骤22，制备带药平板

PDA培养基进行高温灭菌45min，待PDA冷却至40-50℃，将硫胺素原液加入PDA培养基中，获得6组含硫胺素的PDA培养基，使得每组培养基中硫胺素的浓度为1mM、2mM、5mM、10mM、20mM和50mM，其中不加硫胺素的PDA培养基为CK，倒出带有不同浓度硫胺素的培养基即为带药平板；

步骤23，接种烟草疫霉菌株

将烟草疫霉菌株分别接种于含不同浓度硫胺素的带药平板和CK组的带药平板上，待CK组菌落面积生长至2/3时，采用十字交叉法测量菌落直径；

步骤24，统计数据

抑制率＝(CK组的菌落直径-处理组的菌落直径)/CK组的菌落直径，重复三次，获得烟草疫霉在不同硫胺素浓度中的生长情况，进而判断硫胺素对烟草疫霉的抑制效果，评估结果如图2、图3所示；

由图2、图3可知，烟草疫霉的菌丝生长受到硫胺素的抑制，且呈剂量依赖性。从1mM/L开始对菌丝生长有抑制作用，在20mM/L的硫胺素作用下达到79％的抑制作用。

步骤3，检测不同浓度的硫胺素溶液对黑胫病病原菌孢子囊的抑制效果：配制含不同浓度的硫胺素(0、1、2、5、10、20、50mM)诱导液，打取7mm烟草疫霉菌饼转移至培养皿中，并向皿中加入含各浓度硫胺素诱导液10mL，之后将培养皿密封好放入恒温培养箱26℃，光照培养48h。在无菌操作环境下，平行削去菌饼下部培养基，使其厚度在1mm左右，置于载破片上在10x20配光学显微镜下观察孢子囊的个数，进行拍照记录。

由图4可知，不同浓度的硫胺素对烟草黑胫病病原菌孢子囊均有较好的抑制作用，其中在20mM/L的硫胺素作用下达到87％的抑制作用。

步骤4，根据步骤2和步骤3的抑菌结果筛选出适合的硫胺素浓度；综合考虑硫胺素对烟草疫霉菌丝生长抑制以及对孢子囊的抑制效果，筛选出20mM的硫胺素对黑胫病病原菌抑制效果较好、且不影响烟草生长。

步骤5，验证硫胺素对烟草黑胫病的防治效果

步骤51，烟草育苗与移栽

烟草(红花大金元)种子采用漂浮育苗后移栽到花盆中(直径＝20cm)，每盆保留一个幼苗，并在温室中培育(25±3℃)；

步骤52，硫胺素预处理

幼苗移栽两周后用20mM的硫胺素均匀喷洒五叶一心的烟草幼苗，以喷洒蒸馏水作为对照。之后,各处理幼苗分别覆盖着塑料袋保持高湿度。七天后再进行第二次喷施处理。每个处理进行三次重复，每个重复包含10个植株。

步骤53，接种病原菌

采用菌丝块基部创伤接种法进行烟草疫霉的接种(用手术刀划伤烟苗茎基部2mm伤口，分别接种烟草疫霉5g/株，然后用无菌棉保湿)。接种过的幼苗生长在温室中。实验设计和接种:(a)对照:蒸馏水/蒸馏水(DW)；(b)蒸馏水/烟草疫霉接种(DW+P.nic)；(c)硫胺素/蒸馏水(VB1+DW)；(d)硫胺素/接种烟草疫霉(VB1+P.nic)。每个处理六株植物。试验重复三次。

步骤54，植株形态指标测定及病害观察

植株于25℃下光暗交替培养10d测定株高、茎围和最大叶宽并统计发病情况，统计结果如图5、图7所示；

由图5和图7可知，20mM的硫胺素没有对烟草生长造成负面影响。

由图6可知，20mM的硫胺素有保护烟草植株的效果，在接种烟草疫霉前预先用硫胺素处理烟草，植株发病病斑面积较小。

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (7)

1.一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：烟草幼苗移栽后用硫胺素溶液均匀喷洒在其叶面上。

2.根据权利要求1所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：所述硫胺素溶液的浓度为5～20mM/L。

3.根据权利要求2所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：所述硫胺素溶液的浓度为20mM/L。

4.根据权利要求1所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：每株烟草幼苗喷洒硫胺素溶液50mL左右，以叶片均布药液且不流淌为宜。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时开始喷洒所述硫胺素溶液。

6.根据权利要求1所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：使土壤水分保持在80％左右。

7.根据权利要求1所述的一种防治烟草黑胫病的方法，其特征在于：控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:(1.5-2.0):(3-3.5)，增强烟株抗病性。

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