CN113109462B - 一种利多卡因中氯乙酸的检测方法 - Google Patents

一种利多卡因中氯乙酸的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利多卡因中氯乙酸的检测方法，针对杂质氯乙酸易溶于水，而利多卡因不易溶于水的特点，选择以0.3～0.8wt％冰乙酸溶液作为溶剂，并在梯度洗脱的过程中，优化洗脱的时间和流动相氢氧化钾溶液的浓度，使得该检测方法既能达到待测物质检测灵敏度的要求，也可以有效避免溶剂产生的干扰，对杂质分离效果好，空白溶剂不干扰杂质氯乙酸的出峰，能够准确的检测利多卡因中的氯乙酸，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点。

Description

一种利多卡因中氯乙酸的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种利多卡因中氯乙酸的检测方法。
背景技术
利多卡因是医用临床常用的局部麻药，1963年用于治疗心率失常，是目前防治急性心肌梗死及各种心脏病并发快速室性心律失常药物，是急性心肌梗死的室性早搏，室性心动过速及室性震颤的首选药。
为了保证药物的安全有效，需要对药物中的有关杂质进行研究，例如，利多卡因原料药中的潜在基因毒性杂质氯乙酸。利多卡因原料药在放置过程中，杂质在发生变化，因此，需要根据不同的贮藏条件建立合适的分析方法，达到对利多卡因中毒性杂质氯乙酸的准确、有效的检测和监控。
目前，采用离子色谱法测定氯乙酸的专利或者文献中，一般采用水作为溶剂。然而，由于杂质氯乙酸易溶于水，而利多卡因不易溶于水，在检测的过程中，配制待测样品时，如果不能保证利多卡因全部溶解，则无法将利多卡因中存在的氯乙酸提取出来，实现对待测样品中氯乙酸含量的准确测定。现有技术中并没有公开适用于离子色谱法检测利多卡因中氯乙酸时溶解待测样品的溶剂，那么如何选择合适的溶剂，既能达到待测物质检测灵敏度的要求，也可以有效避免溶剂产生的干扰，是离子色谱分析中的难题。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种利多卡因中氯乙酸的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种利多卡因中氯乙酸的检测方法，其中，检测方法采用离子色谱对利多卡因中氯乙酸进行定量检测，其采用离子色谱条件包括：溶解样品的溶剂为0.3～0.8wt％冰乙酸溶液；以氢氧化钾溶液作为流动相进行梯度洗脱，具体梯度洗脱过程如下：(1)在0-10分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持0.8～1.5mmol/L不变；(2)在10-20分钟，氢氧化钾溶液的浓度由0.8～1.5mmol/L匀速渐变至48～52mmol/L；(3)在20-20.1分钟，氢氧化钾溶液的浓度由48～52mmol/L匀速渐变至0.8～1.5mmol/L；(4)在20.1-25分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持0.8～1.5mmol/L不变。
本发明的检测方法可用于检测利多卡因原料药、利多卡因凝胶贴膏中毒性杂质氯乙酸。
在色谱法中，色谱柱的选择十分重要，本发明在探索离子色谱条件时，也尝试了大量其他色谱柱，结果发现，选择性不佳，溶剂干扰大，分离效果差。因此，本发明在选择色谱柱时，分析柱为Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC，浓缩柱为Termo Dionex InpacAG23-HC，在其他条件的配合下，能够准确测定利多卡因中氯乙酸的含量，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点。其中，分析柱的规格可以根据实际需要进行调整，例如，Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱的规格液也可以根据实际需要进行调整，例如，Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)。
本发明提供的离子色谱检测方法，以氢氧化钾溶液为流动相进行梯度洗脱，在离子色谱分析时，选择色谱柱和流动相浓度后，需要确定洗脱过程是等度洗脱或是梯度洗脱，以及洗脱过程中不同时间段中氢氧化钾溶液的浓度，都会影响分析物在色谱柱上的响应，以及主峰后溶剂峰会不会干扰主峰的分析。对于本发明而言，由于杂质氯乙酸易溶于水，而利多卡因不易溶于水，梯度洗脱过程的时间和氢氧化钾溶液的浓度并不是可以随机选择的，是需要进行大量的实验和分析确定的，否则，主峰附近会出现较大溶剂峰，在实际样品检测过程中，溶剂峰严重干扰主峰，从而产生误判本品质量的严重后果。采用本发明的梯度洗脱过程进行色谱分析，对杂质分离效果好，空白溶剂不干扰杂质氯乙酸的出峰，能够准确的检测利多卡因中的氯乙酸，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点。
在一种优选方案中，上述梯度洗脱过程中流动相氢氧化钾溶液的初始浓度为1mmol/L，详细的梯度洗脱如下：(1)在0-10分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持1mmol/L不变；(2)在10-20分钟，氢氧化钾溶液的浓度由1mmol/L匀速渐变至50mmol/L；(3)在20-20.1分钟，氢氧化钾溶液的浓度由50mmol/L匀速渐变至1mmol/L；(4)在20.1-25分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持1mmol/L不变。具体的梯度洗脱过程如下表1所示：
表1梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000021
Figure BDA0002970243670000031
上述色谱条件还包括：流动相(氢氧化钾溶液)的流速为0.9ml/min～1.1ml/min，可以但不局限于0.9ml/min、1.0ml/min或1.1ml/min。进一步地，流动相(氢氧化钾溶液)的流速为1.0ml/min。
本发明可以根据需要，选择合适的进样量进样，进样体积为10～50μl；优选为10μl。例如：在离子色谱检测时，进样量体积可以但不局限于10μl、20μl或50μl。
目前，测定氯乙酸含量的离子色谱方法中，一般以水作为溶剂。然而，对于本发明而言，由于杂质氯乙酸易溶于水，而利多卡因几乎不容于水，在检测的过程中，如何选择合适的溶剂，既能达到待测物质检测灵敏度的要求，也可以有效避免溶剂产生的干扰，是离子色谱分析中的难题。在具体实验过程中，尝试了很多溶剂进行色谱分析，例如，水、冰乙酸溶液、甲酸溶液、甲烷磺酸溶液、乙醇、乙醇水溶液、乙腈和乙腈水溶液，实验结果发现，除了以冰乙酸溶液作为溶剂之外，其他溶剂在相同的洗脱条件下存在引入其他杂质峰干扰，分离选择性不佳，空白溶剂干扰较大、样品浓度过低而达不到杂质检出的灵敏度要求，也可能会导致主成分无法完全溶解等问题。
即使本发明以冰乙酸溶液作为溶剂，也需要严格控制冰乙酸溶液中乙酸的浓度。冰乙酸溶液中乙酸的浓度过高或者过低，不利于氯乙酸含量的准确测定。当冰乙酸溶液中乙酸的浓度过高时，空白溶剂出峰较大，干扰了氯乙酸出峰；当冰乙酸溶液中乙酸的浓度过低时，无法满足待测物质检测灵敏度要求。为了获得更好的谱图，本发明确定溶剂为0.3～0.8wt％冰乙酸溶液，具体浓度可以但不局限于0.3wt％、0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％或0.8wt％，进一步地，溶剂为0.4～0.6wt％冰乙酸溶液。
本发明提供的检测方法，可以配制如下溶液，在配制如下溶液时，所选择的溶剂为0.6wt％冰乙酸溶液。
供试品溶液：取利多卡因原料药适量，精密称定，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含20mg利多卡因的溶液。
对照品溶液：取氯乙酸对照品适量，精密称定，加0.5％冰乙酸溶解并定量稀释制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液。
采用本发明的技术方案，优势如下:
本发明针对杂质氯乙酸易溶于水，而利多卡因不易溶于水的特点，选择以0.3～0.8wt％冰乙酸溶液作为溶剂，并在梯度洗脱的过程中，优化洗脱的时间和流动相氢氧化钾溶液的浓度，使得该检测方法既能达到待测物质检测灵敏度的要求，也可以有效避免溶剂产生的干扰，对杂质分离效果好，空白溶剂不干扰杂质氯乙酸的出峰，能够准确的检测利多卡因中的氯乙酸，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点。
附图说明
图1是实施例1中空白溶剂色谱图；
图2是实施例1中对照品溶液的色谱图；
图3是实施例1中供试品溶液的色谱图；
图4是实施例1中利多卡因加氯乙酸混合溶液的色谱图；
图5是对比例1中序号1对应的色谱图；
图6是对比例1中序号2对应的色谱图；
图7是对比例1中序号4对应的色谱图；
图8是对比例1中序号5对应的色谱图；
图9是对比例1中序号6对应的色谱图；
图10是对比例2中序号1对应的色谱图；
图11是对比例2中序号2对应的色谱图；
图12是对比例2中序号3对应的色谱图。
具体实施方式
通过以下实施例并结合附图对本发明的检测方法作进一步的说明，但这些实施例不对本发明构成任何限制。
在具体实验过程中发现，采用GC检测氯乙酸时检测灵敏度极低，不适用于本品氯乙酸控制；由于氯乙酸无吸收，HPLC无法检测，通过柱前衍生化，采用2-硝基苯肼与氯乙酸中的羰基在催化剂的作用下发生缩合反应，将其转化为具有较强紫外吸收的衍生化产物，结果发现利多卡因与氯乙酸共同衍生时衍生化产物消失，预验证回收率不合格，方法不适用本品氯乙酸控制。
实施例1
1、实验方法
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表1所示：
表1梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000051
溶液的配制如下：
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
空白溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液。
利多卡因加氯乙酸混合溶液：称取利多卡因原料药0.2g，置10ml量瓶中，再加入氯乙酸储备液1ml，然后加入0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取上述各溶液10μl，注入离子色谱仪，色谱图如图1-3所示。
总结：由图1-4可知道，空白溶剂和利多卡因均不干扰氯乙酸出峰，灵敏度高，理论板数大于3000，峰形良好。若利多卡因中含有氯乙酸，本发明能够准确对其进行限量控制。
2、色谱方法验证
2.1系统适用性、专属性试验
2.1.1空白干扰及分离实验
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
利多卡因加氯乙酸混合溶液：称取利多卡因原料药0.2g，置10ml量瓶中，再加入氯乙酸储备液1ml，然后加入0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取上述各溶液10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图，考察出峰情况，具体结果见表2。
表2空白干扰及分析试验结果
内容 保留时间 理论板数
空白溶剂 / /
利多卡因 / /
氯乙酸 13.454 12083
注：“/”表示无数据。
由表2可知，利多卡因不出峰，空白溶剂不干扰氯乙酸出峰，杂质氯乙酸峰形良好。
2.2检测限与定量限试验
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
取氯乙酸对照品溶液逐步稀释后进样10μl，以信噪比S/N＝3、S/N＝10分别作为检测限和定量限，结果见表3与表4。
表3检测限、定量限数据
Figure BDA0002970243670000061
表4定量限进样精密度数据
Figure BDA0002970243670000062
结论：从表3和表4可以看出，在本品检测浓度及色谱条件下，氯乙酸的定量限均在检测浓度的5ppm以下，检测限均在检测浓度的1.5ppm以下，方法的灵敏度良好，供试品溶液浓度选择合理，采用上述色谱条件可有效地检出氯乙酸含量。定量限6次进样峰面积RSD＜20.0％，精密度良好。
2.3线性与范围试验
氯乙酸储备液：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液。
线性溶液：精密量取氯乙酸储备液1ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.5ml分别置20ml、10ml、10ml、10ml、10ml，作为杂质线性50％、80％、100％、120％、150％的溶液。
设进样浓度(μg/ml)为横坐标(X轴)，峰面积为纵坐标(Y轴)，利多卡因及杂质的线性范围及线性方程见表5。
表5利多卡因的线性范围及线性方程
Figure BDA0002970243670000071
结论：由上述表5可以看出，氯乙酸浓度在0.011μg/ml～3.162μg/ml范围内呈良好线性，线性回归系数r为0.9995，y轴截距偏差为2.20％<25.0％。
2.4溶液稳定性试验
取氯乙酸对照品溶液于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时进样检测，记录色谱图。稳定性结果统计见表6。
表6对照品溶液稳定性数据
Figure BDA0002970243670000072
结论：由上述表6可以看出，氯乙酸对照品溶液在6小时内稳定。
2.5精密度试验
2.5.1重复性试验
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
按照上述方法配制6份，精密量取上述对照品溶液及供试品溶液各溶液10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图，考察出峰情况，结果见表7。
表7氯乙酸检测重复性考察
Figure BDA0002970243670000081
结论：由上述表7可以看出，重复操作6次测得的回收量均值为97.89％，6分数据RSD为0.60％，重复性良好。
2.5.2中间精密度试验
取利多卡因供试品及氯乙酸对照品溶液，照重复性试验项下方法，由不同分析人员使用不同的仪器在不同时间进行检测，结果见表8。
表8氯乙酸检测中间精密度考察
Figure BDA0002970243670000082
结论：由上述表8可以看出，不同日期、不同人员重复操作6次测得的12份回收量均值为98.45％，12分数据RSD为1.18％，中间精密度良好。
2.5.3进样精密度
取氯乙酸对照品溶液10μl连续进样6次，注入离子色谱仪，记录色谱图。进样精密度数据见表9。
表9氯乙酸进样精密度数据
内容 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD(％)
保留时间 13.104 13.117 13.057 13.081 13.067 13.187 13.102 0.360
峰面积 0.607 0.634 0.619 0.625 0.621 0.614 0.620 1.492
结论：由上述表9可以看出，连续6次进样结果RSD均小于2.0％。
2.6准确度试验
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
本底溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
回收率溶液(80％)配制：精密称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶中，精密加入氯乙酸储备液0.8ml，再加0.5wt％冰乙酸溶液溶解稀释至刻度，摇匀，即得。(平行3份)
回收率溶液(100％)配制：精密称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶中，精密加入氯乙酸储备液1ml，再加0.5wt％冰乙酸溶液溶解稀释至刻度，摇匀，即得。(平行3份)
回收率溶液(120％)配制：精密称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶中，精密加入氯乙酸储备液1.2ml，再加0.5wt％冰乙酸溶液溶解稀释至刻度，摇匀，即得。(平行3份)
取上述各溶液10μl注入离子色谱仪，结果见表10。
表10利多卡因杂质中氯乙酸检测准确度试验结果
Figure BDA0002970243670000091
结论：从上述表10可以看出，氯乙酸回收在96.2％～101.2％范围内，平均回收率为99.2％，9个回收率数据RSD为2.69％＜5.0％；限度为100ppm的回收率在85％～110％范围内，符合验证要求。
2.7耐用性试验
为考察本发明的检测方法对条件发生微小变化的耐受程度，取重复性项下氯乙酸对照品溶液与供试品溶液，进行了耐用性试验，考察因素包括流速(0.9ml/min、1.1ml/min)，考察各杂质量检出情况。结果见表11。
表11耐用性考察
Figure BDA0002970243670000101
注：拟定条件采用重复性1的数据。
结论：从上述表11可以看出，流动相的流速在0.9～1.1ml/min变化时，氯乙酸检出情况基本一致，说明流速对检测无明显影响。
实施例2
1、实验方法
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.4wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表1所示：
表1梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000102
溶液的配制如下：
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.4wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.4wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.4wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.4wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
空白溶剂：0.4wt％冰乙酸溶液。
精密量取上述各溶液10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图。
结论：色谱图与实施例1中谱图类似，本实施例中选择的空白溶剂，在离子色谱分析的过程中，空白溶剂和利多卡因均不干扰氯乙酸出峰，灵敏度高，能够准确对利多卡因中的氯乙酸进行测定。
实施例3
1、实验方法
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.7wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表1所示：
表1梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000111
溶液的配制如下：
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.7wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.7wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.7wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.7wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
空白溶剂：0.7wt％冰乙酸溶液。
精密量取上述各溶液10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图。
结论：色谱图与实施例1中谱图类似，本实施例中选择的空白溶剂，在离子色谱分析的过程中，空白溶剂和利多卡因均不干扰氯乙酸出峰，灵敏度高，能够准确对利多卡因中的氯乙酸进行测定。
实施例4
1、实验方法
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表12所示：
表12梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000121
溶液的配制如下：
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
空白溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液。
结论：色谱图与实施例1中谱图类似，本实施例中选择的梯度，在离子色谱分析的过程中，空白溶剂和利多卡因均不干扰氯乙酸出峰，灵敏度高，能够准确对利多卡因中的氯乙酸进行测定。
实施例5
1、实验方法
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表13所示：
表13梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000131
溶液的配制如下：
对照品溶液的配制：精密称取氯乙酸10mg，置50ml量瓶中，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得到中间液；精密量取5ml中间液至50ml量瓶中，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，作为氯乙酸储备液；精密量取氯乙酸储备液1ml置10ml量瓶，用0.5wt％冰乙酸溶液稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
供试品溶液：称取利多卡因原料药约0.2g置10ml量瓶，加0.5wt％冰乙酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含20mg利多卡因的溶液，即得。
空白溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液。
结论：色谱图与实施例1中谱图类似，本实施例中选择的梯度，在离子色谱分析的过程中，空白溶剂和利多卡因均不干扰氯乙酸出峰，灵敏度高，能够准确对利多卡因中的氯乙酸进行测定。
对比例1样品溶剂的选择
利多卡因几乎不溶于水，拟选择以下溶剂考察样品溶解与离子色谱检测时是否存在空白干扰。
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表1所示：
表1梯度洗脱过程
Figure BDA0002970243670000132
溶液的配制如下：
氯乙酸对照品溶液I：精密称取氯乙酸3mg，置10ml量瓶中，加空白溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取空白溶剂与氯乙酸对照品各10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图。结果汇总见表14。
表14溶剂的选择
Figure BDA0002970243670000141
结论：由表12可知，1wt％甲烷磺酸溶液和10wt％乙腈溶液作为溶剂对氯乙酸含量的检测存在干扰。即使选择冰乙酸溶液作为溶剂，也要严格控制冰乙酸溶液中乙酸的浓度，冰乙酸溶液中乙酸的浓度过高或者过低，不利于氯乙酸含量的准确测定。当冰乙酸溶液中乙酸的浓度过高时，空白溶剂出峰较大，干扰了氯乙酸出峰；当冰乙酸溶液中乙酸的浓度过低时，无法满足待测物质检测灵敏度要求。以0.5wt％冰乙酸溶液作为溶剂，在离子色谱分析的过程中，能够完全溶解供试品中利多卡因，达到检测灵敏度的要求，也可以有效避免溶剂产生的干扰。
对比例2梯度的选择
离子色谱条件：分析柱：Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC(4×250mm)；浓缩柱：Termo Dionex Inpac AG23-HC(4×50mm)；流动相：氢氧化钾溶液；溶剂：0.5wt％冰乙酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；进样体积为10μl。具体的梯度洗脱过程如下表14所示：
溶液的配制如下：
氯乙酸对照品溶液II(溶剂0.5wt％冰乙酸溶液)：取氯乙酸对照品，加0.5wt％冰乙酸溶液制成每1ml中约含2μg氯乙酸的溶液，即得。
精密量取氯乙酸对照品溶液II 10μl，注入离子色谱仪，记录色谱图，结果汇总见表15。
表15梯度的选择
Figure BDA0002970243670000151
Figure BDA0002970243670000161
结论：由表13可知，离子色谱法测定利多卡因中氯乙酸时，对梯度的要求比较高，梯度洗脱过程的时间和氢氧化钾溶液的浓度影响溶剂峰与主峰氯乙酸之间的分离度，以及溶剂峰会不会干扰主峰的分析。序号4选定的梯度进行离子色谱分析时，对杂质分离效果好，空白溶剂不干扰杂质氯乙酸的出峰，能够准确的检测利多卡因中的氯乙酸，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (7)

1.一种利多卡因中氯乙酸的检测方法，所述检测方法采用离子色谱对利多卡因中氯乙酸进行定量检测，其采用离子色谱条件包括：溶解样品的溶剂为0.3~0.8 wt%冰乙酸溶液；以氢氧化钾溶液作为流动相进行梯度洗脱，分析柱为Thermofisher Dionex Inpac AS23-HC；浓缩柱为Termo Dionex Inpac AG23-HC；具体梯度洗脱过程如下：（1）在0-10分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持1 mmol/L不变；（2）在10-20分钟，氢氧化钾溶液的浓度由1 mmol/L匀速渐变至50 mmol/L；（3）在20-20.1分钟，氢氧化钾溶液的浓度由50mmol/L匀速渐变至1mmol/L；（4）在20.1-25分钟，氢氧化钾溶液的浓度保持1 mmol/L不变。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂为0.4~0.6 wt%冰乙酸溶液。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂为0.5 wt%冰乙酸溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述离子色谱条件包括：所述流动相的流速为0.9ml/min~1.1ml/min。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0ml/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述离子色谱条件包括：进样体积为10~50μl。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述离子色谱条件包括：进样体积为10μl。
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