CN113109270A - 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法 - Google Patents

一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113109270A
CN113109270A CN202110295061.5A CN202110295061A CN113109270A CN 113109270 A CN113109270 A CN 113109270A CN 202110295061 A CN202110295061 A CN 202110295061A CN 113109270 A CN113109270 A CN 113109270A
Authority
CN
China
Prior art keywords
integrase
nano
stirring
reaction
small molecules
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110295061.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113109270B (zh
Inventor
李颖
包敏
李淑娟
陈雨洁
刘松琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southeast University
Original Assignee
Southeast University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southeast University filed Critical Southeast University
Priority to CN202110295061.5A priority Critical patent/CN113109270B/zh
Publication of CN113109270A publication Critical patent/CN113109270A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113109270B publication Critical patent/CN113109270B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J23/00—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00
    • B01J23/38—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of noble metals
    • B01J23/48—Silver or gold
    • B01J23/52—Gold
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J27/00—Catalysts comprising the elements or compounds of halogens, sulfur, selenium, tellurium, phosphorus or nitrogen; Catalysts comprising carbon compounds
    • B01J27/24—Nitrogen compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
    • B01J31/003—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing enzymes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
    • B01J31/26—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing in addition, inorganic metal compounds not provided for in groups B01J31/02 - B01J31/24
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J35/00—Catalysts, in general, characterised by their form or physical properties
    • B01J35/20—Catalysts, in general, characterised by their form or physical properties characterised by their non-solid state
    • B01J35/23—Catalysts, in general, characterised by their form or physical properties characterised by their non-solid state in a colloidal state
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J37/00—Processes, in general, for preparing catalysts; Processes, in general, for activation of catalysts
    • B01J37/0009—Use of binding agents; Moulding; Pressing; Powdering; Granulating; Addition of materials ameliorating the mechanical properties of the product catalyst
    • B01J37/0018—Addition of a binding agent or of material, later completely removed among others as result of heat treatment, leaching or washing,(e.g. forming of pores; protective layer, desintegrating by heat)
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J37/00—Processes, in general, for preparing catalysts; Processes, in general, for activation of catalysts
    • B01J37/02—Impregnation, coating or precipitation
    • B01J37/03—Precipitation; Co-precipitation
    • B01J37/031—Precipitation
    • B01J37/033—Using Hydrolysis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J37/00—Processes, in general, for preparing catalysts; Processes, in general, for activation of catalysts
    • B01J37/08—Heat treatment
    • B01J37/082—Decomposition and pyrolysis
    • B01J37/086—Decomposition of an organometallic compound, a metal complex or a metal salt of a carboxylic acid
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J37/00—Processes, in general, for preparing catalysts; Processes, in general, for activation of catalysts
    • B01J37/16—Reducing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01007—Acetylcholinesterase (3.1.1.7)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法。首先，我们利用表面积大、孔体积大、化学稳定性好、热稳定性好的类沸石咪唑酯骨架制备具有类过氧化物酶活性的多孔碳材料，用于负载同样具备类过氧化物酶活性的亚纳米级的金簇，进而制备纳米复合模拟酶。多孔碳材料和金簇之间的协同催化作用、金簇的小尺寸效应及碳材料纳米孔的限域效应共同增强了纳米复合模拟酶的催化活性。然后，我们将乙酰胆碱酯酶和纳米复合模拟酶进行共价整合，制备成整合酶，提高了乙酰胆碱酯酶的活性和稳定性。与此同时，借助纳米复合模拟酶的高类过氧化物酶活性，利用其与乙酰胆碱脂酶之间的仿生级联催化策略，成功构建了用于检测农药小分子的高效比色传感器。

Description

一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法
技术领域
本发明属于材料制备技术领域，尤其涉及一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法。
背景技术
有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂常用来解决农业作物的病虫害问题。然而，农药残留会造成环境污染，威胁人类健康。农药残留检测的传统方法是气质联用色谱，液质联用色谱和毛细管电泳等。但是，这些方法检测周期长、检测成本高。因此，有必要开发一种快速可靠的方法来检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂，以进行公共食品安全和环境检测。酶抑制法利用杀虫剂对酶催化活性的抑制作用，可用于快速检测有机磷，氨基甲酸酯类等。目前最广泛使用的酶类为乙酰胆碱酯酶，然而其稳定性不足且价格昂贵，严重限制了其实际应用。最近，有研究报道将乙酰胆碱酯酶固定在电极材料上构建电化学传感器检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂(Electrochim.Acta,2019,318,525-533)。近年来，基于过氧化物酶和游离乙酰胆碱酯酶之间的级联催化反应构建的比色传感器引起了人们的广泛关注。与电化学方法相比，比色法成本低廉，能直观检测分析物(Anal.Chem.,2014,86,514-520)。但是，这种方法仍然存在游离乙酰胆碱酯酶和过氧化物酶不稳定的问题。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种保持游离的乙酰胆碱酯酶活性、提高其稳定性，实现有机磷等农药小分子快检的整合酶的制备方法。
技术方案：本发明的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，包括以下步骤：
(1)合成类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(2)将类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于甲醇水溶液中，调节pH，再加入十六烷基三甲基溴化铵，搅拌反应后，加入正硅酸乙酯，搅拌反应，离心，洗涤，真空干燥得到介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)将介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
(4)将介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料利用氢氟酸进行刻蚀得到氮掺杂碳纳米材料；
(5)将合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于溶剂中，超声分散后在剧烈搅拌下加入氯金酸，通过化学试剂或物理法进行还原，反应后过滤、洗涤，真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)将合成得到的纳米复合模拟酶分散到溶剂中并加入3-巯基丙酸，震荡反应后，离心，洗涤，得到的产物重新分散，并取一定量的分散液向其中加入2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，反应后离心，得到的产品分散后，再加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
进一步地，步骤(1)中，所述合成类沸石咪唑酯骨架材料-8的方法包括以下步骤：
(a)取摩尔比为1:2～1:10的六水合硝酸锌和2-甲基咪唑，分散在甲醇中搅拌反应1～24h，搅拌速度为搅拌的速度为500～1500rpm；
(b)反应后离心分离，并通过甲醇洗涤3～5次，其中离心分离的转速为5000～13000rpm；
(c)洗涤后的产物在60～120℃下真空干燥24～48h，得到类沸石咪唑酯骨架材料-8。
进一步地，步骤(2)中，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数是10％～50％；调节pH范围是10～12；加入的十六烷基三甲基溴化铵的质量是0.2～0.3g，加入十六烷基三甲基溴化铵搅拌的速度为500～1000rpm，加入十六烷基三甲基溴化铵后搅拌反应的时间是10～40min；加入的正硅酸乙酯的体积为1～2mL，搅拌反应的时间是2～6h，搅拌的速度是500～1000rpm；离心时用的溶剂是超纯水或甲醇，洗涤次数为3～6次；真空干燥的温度为50～80℃，干燥的时间是24～48h。
进一步地，步骤(3)中，所述煅烧过程中保持氮气氛围，煅烧的温度为700～1000℃，煅烧时间为1～5h，升温速率为1～10℃/min。
进一步地，步骤(4)中，所述氢氟酸溶液的浓度是2～8％、体积为30～50mL，刻蚀的时间是0.5～4h。
进一步地，步骤(5)中，所述分散氮掺杂碳纳米材料的溶剂为水或乙醇，溶剂的体积是10～80mL，超声分散的时间是10～60min，所述氯金酸的原液是四水合氯金酸，氯金酸的浓度是20mg/mL，加入的氯金酸的体积为105～840μL。
进一步地，步骤(5)中，所述化学试剂包括硼氢化钠或单宁酸，向加入氯金酸后的反应溶液中加入1～5mL的1.5mg/mL的硼氢化钠溶液或10～30mL的浓度为0.006mol/L的单宁酸溶液，所述搅拌反应的时间是1～4h，所述离心时用的溶剂是超纯水或乙醇，所述洗涤次数为3～6次；所述真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
进一步地，步骤(5)中，所述物理法包括光诱导还原法，向加入氯金酸的反应液中加入10～20mL乙醇，利用365nm波长的紫外灯照射，照射时间为10～30min。
进一步地，步骤(6)中，所述溶剂为水，溶剂的体积是1～4mL，纳米复合模拟酶取2～3mg；所述3-巯基丙酸的纯度98％，所述3-巯基丙酸的体积为4～10μL；震荡反应的速度是200rpm/min，震荡反应的时间是12～24h，震荡反应的温度是25～40℃，离心的转速是10000～13000rpm，洗涤的溶剂是超纯水，得到产物连接巯基的纳米复合模拟酶。
进一步地，步骤(6)中，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液的pH为5.0～6.0，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液的体积为100～500μL；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度是1～10mg/mL，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的体积是100～300μL，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液的pH为7.0～8.0，所述乙酰胆碱酯酶的浓度是1mg/mL，所述乙酰胆碱酯酶的体积是100～500μL。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
(1)本发明通过煅烧包覆介孔二氧化硅的类沸石咪唑酯骨架-8，再进行二氧化硅刻蚀得到形貌均一，平均粒径大小为150nm的氮掺杂碳纳米材料，通过扫描电子显微镜图可看出负载金簇后基底碳材料的形貌并没有明显改变。利用不同的还原方式可以发现得到的金颗粒的大小和结晶化程度会不同。
(2)通过氮掺杂碳载体、金纳米粒子以及纳米复合模拟酶的类过氧化物酶活性对比图可以发现纳米模拟复合酶中金纳米粒子和氮掺杂碳纳米材料之间的协同作用大大加强了材料的类过氧化物酶活性。
(3)本发明整合酶构建的传感器具有较高的检测农药性能，当我们在400微升醋酸钠-醋酸缓冲溶液中加入农药的浓度是1ng/L时，依然表现出很好的检测效果，说明该传感器的灵敏度高明显高于已经报道的其他检测农药的传感器。
附图说明
图1是类沸石咪唑酯骨架-8的扫描电子显微镜图；
图2是二氧化硅包覆类沸石咪唑酯骨架-8的扫描电子显微镜图；
图3是氮掺杂碳纳米材料的扫描电子显微镜图；
图4是纳米复合模拟酶的扫描电子显微镜图；
图5是利用不同还原方式负载金簇的X射线衍射图；
图6是氮掺杂碳载体、金纳米粒子以及纳米复合模拟酶的类过氧化物酶活性对比图；
图7是原理验证图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。
申请人研究发现，将酶固定在纳米载体上可以避免游离酶性质不稳定，极易失活的问题(Anal.Chem.,2016,88,5489-5497)。因此，将游离的乙酰胆碱酯酶固定在具有类过氧化物酶性质的无机纳米材料上，构建比色传感器来进行食品安全快检具有研究意义与实际价值。
自从基于Fe3O4纳米颗粒的过氧化物酶模拟物第一次被报道以来，各种纳米材料，例如碳纳米材料、贵金属纳米粒子、氧化物以及硫化物纳米材料(氧化铜，四氧化三钴，二硫化钼纳米片等)等已被证明具有过氧化物酶样活性(Chem.Commun.,2015,51,13752–13755)。我们利用表面积大、孔体积大、化学稳定性好、热稳定性好的类沸石咪唑酯骨架-8(ZIF-8)制备具有类过氧化物酶活性的多孔碳材料，用于负载亚纳米级的金簇(金簇本身具备类过氧化物酶活性、生物兼容性好、便于偶联其它物质等性质)，制备了纳米复合模拟酶。多孔碳材料和金簇两者之间催化作用的协同效应、金簇的小尺寸效应及多孔碳载体的限域效应共同增强了纳米复合模拟酶的催化活性。然后，我们将乙酰胆碱酯酶和纳米复合模拟酶进行共价整合，制备成整合酶，提高了乙酰胆碱酯酶的活性和稳定性。与此同时，借助纳米复合模拟酶的高类过氧化物酶活性，利用乙酰胆碱脂酶和类过氧化物酶之间的仿生级联催化策略，成功构建了用于检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的高效比色传感器。
本发明提供的一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，合成沸石咪唑酯骨架材料-8，合成类沸石咪唑酯骨架材料-8的原料为六水合硝酸锌和2-甲基咪唑，分散原料的溶剂为甲醇，金属盐和配体的摩尔比为1:2～1:10，反应时间为1～24h，搅拌的速度为500～1500rpm；离心分离的转速为5000～13000rpm，洗涤的溶剂是甲醇，洗涤次数三次及以上；得到的产物真空干燥的温度是60～120℃，干燥时间为24～48h。
步骤2，合成介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8，将步骤1合成的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于甲醇水溶液中，调节pH，再加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，搅拌一段时间后，剧烈搅拌下加入正硅酸乙酯(TEOS)，搅拌下反应一段时间，离心，洗涤，真空干燥得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
合成介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8时所用甲醇水溶液中甲醇的体积分数是10％～50％，调节pH是利用1mol/L的氢氧化钠进行调节，pH范围是10～12，加入的十六烷基三甲基溴化铵的质量是0.20～0.30g，加入十六烷基三甲基溴化铵搅拌的速度为500～1000rpm，加入十六烷基三甲基溴化铵后搅拌反应的时间是10～40min，加入的正硅酸乙酯的体积为1～2mL，搅拌反应的时间是2～6h，搅拌的速度是500～1000rpm。离心时用的溶剂是超纯水/甲醇，洗涤次数为三次及以上；得到的产物真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
步骤3，将步骤2得到的介孔二氧化硅报复的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
煅烧过程中保持氮气氛围，煅烧的温度为700～1000℃，煅烧时间为1～5h,升温速率为1～10℃/min。
步骤4，将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料利用氢氟酸进行刻蚀得到氮掺杂碳纳米材料氮掺杂碳纳米材料；
刻蚀介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的氢氟酸溶液的浓度是2～8％，所用的氢氟酸溶液的体积为30～50mL，刻蚀的时间是30min～4h。
步骤5，将合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于一定体积的溶剂中，超声分散后在剧烈搅拌下加入氯金酸，然后通过一定的还原的方法进行还原，反应一段时间后，过滤，洗涤，真空干燥得到纳米复合模拟酶；
分散氮掺杂碳纳米材料的溶剂是水/乙醇，溶剂的体积是10～80mL，超声分散的时间是10～60min，加入的氯金酸的原液是四水合氯金酸，氯金酸的浓度是20mg/mL，加入的氯金酸的体积为105～840μL。
所用的还原方法分为硼氢化钠还原时，向加入氯金酸后的反应溶液中加入1～5mL的1.5mg/mL的硼氢化钠溶液，搅拌反应的时间是1～4h，离心时用的溶剂是超纯水/乙醇，洗涤次数为三次及以上；得到的产物真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
所用的还原方法为单宁酸还原时，向加入氯金酸的反应液中加入10～30mL的浓度为0.006mol/L的单宁酸，搅拌反应的时间是1～4h，离心时用的溶剂是超纯水/乙醇，洗涤次数为三次及以上；得到的产物真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
所用的还原方法为光诱导还原时，向加入氯金酸的反应液中加入10～20mL乙醇，继而利用365nm波长的紫外灯照射，照射时间为10～30min，离心时用的溶剂是超纯水/乙醇，洗涤次数为三次及以上；得到的产物真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
步骤6，将合成得到的纳米模拟酶分散液中加入3-巯基丙酸，震荡下反应一段时间后，离心，洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散，并取一定量的分散液向其中加入2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化羧基，反应后离心，得到的产品分散后，再加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液和乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
纳米复合模拟酶分散液的制备方法是用1～5mL的水分散2mg的纳米复合模拟酶，加入的3-巯基丙酸的浓度是稀释原液到不同浓度，加入的体积为4～10μL，震荡反应的速度是200rpm/min，震荡反应的时间是12～24h，震荡反应的温度是25～40℃，离心的转速是10000～13000rpm，洗涤的溶剂是超纯水，得到产物连接巯基的纳米复合模拟酶。
分散连接巯基的纳米复合模拟酶的溶剂是水，溶剂的体积是1～4mL，缓冲液2-(N-吗啡啉)乙磺酸的pH为5.0～6.0，加入的缓冲液2-(N-吗啡啉)乙磺酸的体积是100～500μL。加入的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度是1～10mg/mL，加入的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的体积是100～300μL，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液的pH为7.0～8.0，加入的乙酰胆碱酯酶的浓度是1mg/mL，加入的乙酰胆碱酯酶的体积是100～500μL。
下面通过具体实例进一步说明本发明制备一种用于检测农药小分子的整合酶的具体方法。
实施例1
(1)类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将9.5197g六水合硝酸锌和11.0835g 2-甲基咪唑，分别分散在500和400mL的甲醇中，1000rpm转速下反应时间2h；13000rpm下离心分离，甲醇洗涤三次及以上；产物60℃下真空干燥24h。
(2)介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将步骤(1)得到的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于240mL 10vol％的甲醇水溶液中，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0，再加入0.2016g十六烷基三甲基溴化铵，搅拌30min后，剧烈搅拌下加入1.2mL正硅酸乙酯，500rpm转速下搅拌反应2和，13000rpm转速下离心，超纯水洗涤三次及以上，产物60℃下真空干燥24h得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成
将步骤(2)得到的介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中氮气氛围下，以5℃/min的升温速率，800℃下煅烧3h管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
(4)氮掺杂碳纳米材料的合成
将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料置于30mL浓度为5％的氢氟酸溶液中，反应30min得到氮掺杂碳纳米材料；
(5)纳米复合模拟酶的合成
将50mg合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于20mL的超纯水中，超声30min后，在剧烈搅拌下加入105μL20mg/mL的四水合氯金酸，搅拌10min后，搅拌下加入1mL 1.5mg/mL的硼氢化钠，搅拌1h后，抽滤，超纯水洗涤三次，60℃下真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)整合酶的合成
将2mg合成得到的纳米复合模拟酶分散于1mL的超纯水中，然后加入4.5μL稀释100倍的3-巯基丙酸，震荡下过夜后，离心，超纯水洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散于1mL水中，并取100μL的分散液向其中加入200μL pH＝5.5的50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入200μL 5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，室温下震荡过夜反应后离心，得到的产品分散于300μL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和200μL 1mg/mL乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
实施例2
(1)类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将9.5197g六水合硝酸锌和11.0835g 2-甲基咪唑，分别分散在500和400mL的甲醇中，1000rpm转速下反应时间2h；13000rpm下离心分离，甲醇洗涤三次及以上；产物60℃下真空干燥24h。
(2)介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将步骤(1)得到的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于240mL 10vol％的甲醇水溶液中，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0，再加入0.2016g十六烷基三甲基溴化铵，搅拌30min后，剧烈搅拌下加入1.2mL正硅酸乙酯，500rpm转速下搅拌反应2和，13000rpm转速下离心，超纯水洗涤三次及以上，产物60℃下真空干燥24h得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成
将步骤(2)得到的介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中氮气氛围下，以5℃/min的升温速率，900℃下煅烧3h管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
(4)氮掺杂碳纳米材料的合成
将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料置于30mL浓度为5％的氢氟酸溶液中，反应30min得到氮掺杂碳纳米材料；
(5)纳米复合模拟酶的合成
将50mg合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于20mL的超纯水中，超声30min后，在剧烈搅拌下加入105μL 20mg/mL的四水合氯金酸，搅拌10min后，搅拌下加入1mL 1.5mg/mL的硼氢化钠，搅拌1h后，抽滤，超纯水洗涤三次，60℃下真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)整合酶的合成
将2mg合成得到的纳米复合模拟酶分散于1mL的超纯水中，然后加入4.5μL稀释100倍的3-巯基丙酸，震荡下过夜后，离心，超纯水洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散于1mL水中，并取100μL的分散液向其中加入200μL pH＝5.5的50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入200μL 5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，室温下震荡过夜反应后离心，得到的产品分散于300μL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和200μL1mg/mL乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
实施例3
(1)类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将9.5197g六水合硝酸锌和11.0835g 2-甲基咪唑，分别分散在500和400mL的甲醇中，1000rpm转速下反应时间2h；13000rpm下离心分离，甲醇洗涤三次及以上；产物60℃下真空干燥24h。
(2)介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将步骤(1)得到的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于240mL 10vol％的甲醇水溶液中，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0，再加入0.2016g十六烷基三甲基溴化铵，搅拌30min后，剧烈搅拌下加入1.2mL正硅酸乙酯，500rpm转速下搅拌反应2和，13000rpm转速下离心，超纯水洗涤三次及以上，产物60℃下真空干燥24h得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成
将步骤(2)得到的介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中氮气氛围下，以5℃/min的升温速率，800℃下煅烧3h管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
(4)氮掺杂碳纳米材料的合成
将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料置于30mL浓度为5％的氢氟酸溶液中，反应30min得到氮掺杂碳纳米材料；
(5)纳米复合模拟酶的合成
将50mg合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于20mL的超纯水中，超声30min后，在剧烈搅拌下加入105μL20mg/mL的四水合氯金酸，搅拌10min后，搅拌下加入1mL 1.5mg/mL的硼氢化钠，搅拌1h后，抽滤，超纯水洗涤三次，60℃下真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)整合酶的合成
将2mg合成得到的纳米复合模拟酶分散于1mL的超纯水中，然后加入4.5μL稀释100倍的3-巯基丙酸，震荡下过夜后，离心，超纯水洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散于1mL水中，并取100μL的分散液向其中加入200μL pH＝5.5的50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入200μL5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，室温下震荡过夜反应后离心，得到的产品分散于300μL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和200μL1mg/mL乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
实施例4
(1)类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将9.5197g六水合硝酸锌和11.0835g 2-甲基咪唑，分别分散在500和400mL的甲醇中，1000rpm转速下反应时间2h；13000rpm下离心分离，甲醇洗涤三次及以上；产物60℃下真空干燥24h。
(2)介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将步骤(1)得到的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于240mL 10vol％的甲醇水溶液中，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0，再加入0.2016g十六烷基三甲基溴化铵，搅拌30min后，剧烈搅拌下加入1.2mL正硅酸乙酯，500rpm转速下搅拌反应，13000rpm转速下离心，超纯水洗涤三次及以上，产物60℃下真空干燥24h得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成的合成
将步骤(2)得到的介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中氮气氛围下，以5℃/min的升温速率，800℃下煅烧3h管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成；
(4)氮掺杂碳纳米材料的合成的合成
将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成置于30mL浓度为5％的氢氟酸溶液中，反应30min得到氮掺杂碳纳米材料的合成；
(5)纳米复合模拟酶的合成
将50mg合成得到的氮掺杂碳纳米材料的合成作为基底，将其分散于20mL的超纯水中，超声30min后，在剧烈搅拌下加入105μL20mg/mL的四水合氯金酸，搅拌10min后，搅拌下加入12.5mL 0.006mol/L的硼氢化钠，搅拌1h后，抽滤，超纯水洗涤三次，60℃下真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)整合酶的合成
将2mg合成得到的纳米复合模拟酶分散于1mL的超纯水中，然后加入4.5μL稀释100倍的3-巯基丙酸，震荡下过夜后，离心，超纯水洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散于1mL水中，并取100μL的分散液向其中加入200μL pH＝5.5的50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入200μL 5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，室温下震荡过夜反应后离心，得到的产品分散于300μL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和200μL 1mg/mL乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
实施例5
(1)类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将9.5197g六水合硝酸锌和11.0835g 2-甲基咪唑，分别分散在500和400mL的甲醇中，1000rpm转速下反应时间2h；13000rpm下离心分离，甲醇洗涤三次及以上；产物60℃下真空干燥24h。
(2)介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8的合成
将步骤(1)得到的类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于240mL 10vol％的甲醇水溶液中，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0，再加入0.2016g十六烷基三甲基溴化铵，搅拌30min后，剧烈搅拌下加入1.2mL正硅酸乙酯，500rpm转速下搅拌反应2和，13000rpm转速下离心，超纯水洗涤三次及以上，产物60℃下真空干燥24h得到介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成的合成
将步骤(2)得到的介孔二氧化硅包覆的类沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中氮气氛围下，以5℃/min的升温速率，800℃下煅烧3h管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成；
(4)氮掺杂碳纳米材料的合成的合成
将合成得到的介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料的合成置于30mL浓度为5％的氢氟酸溶液中，反应30min得到氮掺杂碳纳米材料的合成；
(5)纳米复合模拟酶的合成
将50mg合成得到的氮掺杂碳纳米材料的合成作为基底，将其分散于20mL的超纯水中，超声30min后，在剧烈搅拌下加入105μL 20mg/mL的四水合氯金酸，搅拌10min后，搅拌下加入11.3mL的乙醇，搅拌后，置于365nm波长的紫外灯下照射反应10min，抽滤，超纯水洗涤三次，60℃下真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)整合酶的合成
将2mg合成得到的纳米复合模拟酶分散于1mL的超纯水中，然后加入4.5μL稀释100倍的3-巯基丙酸，震荡下过夜后，离心，超纯水洗涤，得到的产物连接巯基的纳米复合模拟酶重新分散于1mL水中，并取100μL的分散液向其中加入200μL pH＝5.5的50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入200μL5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，室温下震荡过夜反应后离心，得到的产品分散于300μL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和200μL 1mg/mL乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
由图1～图4可以看出，发明通过煅烧包覆介孔二氧化硅的类沸石咪唑酯骨架-8，再进行二氧化硅刻蚀得到形貌均一，平均粒径大小为150nm的氮掺杂碳纳米材料，负载金簇后基底碳材料的形貌并没有明显改变；
如图5所示，图5为利用不同还原方式负载金簇的X射线衍射图；由图可以看出利用不同的还原方式可以发现得到的金颗粒的大小和结晶化程度会不同；
如图6所示，图6为氮掺杂碳载体、金纳米粒子以及纳米复合模拟酶的类过氧化物酶活性对比图，可以发现纳米模拟复合酶中金纳米粒子和氮掺杂碳纳米材料之间的协同作用大大加强了材料的类过氧化物酶活性；
如图7所示，紫外吸收曲线1代表整合酶催化过氧化氢氧化3,3',5,5'-四甲基联苯胺，紫外吸收曲线2代表硫代乙酰胆碱在整合酶催化下生成硫代乙酰胆碱，进一步还原氧化态的3,3',5,5'-四甲基联苯胺，紫外吸收3代表加入农药后抑制了整合酶的活性，使氧化态的3,3',5,5'-四甲基联苯胺浓度升高；实验条件为在400微升醋酸钠-醋酸缓冲溶液中(包括20微升的2mg/mL的整合酶、10mM的3,3',5,5'-四甲基联苯胺、1M的过氧化氢、0.2M的硫代乙酰胆碱)加入20微升1ng/L的农药并在室温下反应30min；
表1
Figure BDA0002984019680000121
表1所示为文献报道的农药小分子(如毒死蜱、氧化乐果、对氧磷等)的检测方法、所用材料以及相应检出限。

Claims (10)

1.一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)合成类沸石咪唑酯骨架材料-8；
(2)将类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于甲醇水溶液中，调节pH，再加入十六烷基三甲基溴化铵，搅拌反应后，加入正硅酸乙酯，搅拌反应，离心，洗涤，真空干燥得到介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8；
(3)将介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；
(4)将介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料利用氢氟酸进行刻蚀得到氮掺杂碳纳米材料；
(5)将合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于溶剂中，超声分散后在剧烈搅拌下加入氯金酸，通过化学试剂或物理法进行还原，反应后过滤、洗涤，真空干燥得到纳米复合模拟酶；
(6)将合成得到的纳米复合模拟酶分散到溶剂中并加入3-巯基丙酸，震荡反应后，离心，洗涤，得到的产物重新分散，并取一定量的分散液向其中加入2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，反应后离心，得到的产品分散后，再加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。
2.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述合成类沸石咪唑酯骨架材料-8的方法包括以下步骤：
(a)取摩尔比为1:2～1:10的六水合硝酸锌和2-甲基咪唑，分散在甲醇中搅拌反应1～24h，搅拌速度为搅拌的速度为500～1500rpm；
(b)反应后离心分离，并通过甲醇洗涤3～5次，其中离心分离的转速为5000～13000rpm；
(c)洗涤后的产物在60～120℃下真空干燥24～48h，得到类沸石咪唑酯骨架材料-8。
3.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数是10％～50％；调节pH范围是10～12；加入的十六烷基三甲基溴化铵的质量是0.2～0.3g，加入十六烷基三甲基溴化铵搅拌的速度为500～1000rpm，加入十六烷基三甲基溴化铵后搅拌反应的时间是10～40min；加入的正硅酸乙酯的体积为1～2mL，搅拌反应的时间是2～6h，搅拌的速度是500～1000rpm；离心时用的溶剂是超纯水或甲醇，洗涤次数为3～6次；真空干燥的温度为50～80℃，干燥的时间是24～48h。
4.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述煅烧过程中保持氮气氛围，煅烧的温度为700～1000℃，煅烧时间为1～5h，升温速率为1～10℃/min。
5.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述氢氟酸溶液的浓度是2～8％、体积为30～50mL，刻蚀的时间是0.5～4h。
6.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述分散氮掺杂碳纳米材料的溶剂为水或乙醇，溶剂的体积是10～80mL，超声分散的时间是10～60min，所述氯金酸的原液是四水合氯金酸，氯金酸的浓度是20mg/mL，加入的氯金酸的体积为105～840μL。
7.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述化学试剂包括硼氢化钠或单宁酸，向加入氯金酸后的反应溶液中加入1～5mL的1.5mg/mL的硼氢化钠溶液或10～30mL的浓度为0.006mol/L的单宁酸溶液，所述搅拌反应的时间是1～4h，所述离心时用的溶剂是超纯水或乙醇，所述洗涤次数为3～6次；所述真空干燥的温度是50～80℃，干燥的时间是24～48h。
8.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述物理法包括光诱导还原法，向加入氯金酸的反应液中加入10～20mL乙醇，利用365nm波长的紫外灯照射，照射时间为10～30min。
9.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述溶剂为水，溶剂的体积是1～4mL，纳米复合模拟酶取2～3mg；所述3-巯基丙酸的纯度98％，所述3-巯基丙酸的体积为4～10μL；震荡反应的速度是200rpm/min，震荡反应的时间是12～24h，震荡反应的温度是25～40℃，离心的转速是10000～13000rpm，洗涤的溶剂是超纯水，得到产物连接巯基的纳米复合模拟酶。
10.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液的pH为5.0～6.0，所述2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液的体积为100～500μL；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度是1～10mg/mL，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的体积是100～300μL，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液的pH为7.0～8.0，所述乙酰胆碱酯酶的浓度是1mg/mL，所述乙酰胆碱酯酶的体积是100～500μL。
CN202110295061.5A 2021-05-12 2021-05-12 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法 Active CN113109270B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110295061.5A CN113109270B (zh) 2021-05-12 2021-05-12 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110295061.5A CN113109270B (zh) 2021-05-12 2021-05-12 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113109270A true CN113109270A (zh) 2021-07-13
CN113109270B CN113109270B (zh) 2023-01-31

Family

ID=76711852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110295061.5A Active CN113109270B (zh) 2021-05-12 2021-05-12 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113109270B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115646549A (zh) * 2022-10-13 2023-01-31 南京师范大学 一种多孔纳米材料水解型纳米酶及其制备方法
CN116920781A (zh) * 2023-07-24 2023-10-24 辽宁大学 一种Ni/N共掺杂多功能材料制备方法及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107828772A (zh) * 2017-10-30 2018-03-23 陕西师范大学 一种用于比率荧光检测的固定化酶反应器及其制备方法
CN110420666A (zh) * 2019-05-29 2019-11-08 东南大学 类沸石咪唑酯骨架材料限域制备高分散钯亚纳米粒的方法
CN111092234A (zh) * 2019-12-04 2020-05-01 东南大学 一种高性能氧还原催化剂的制备方法
CN112553186A (zh) * 2020-12-25 2021-03-26 华南理工大学 一种铜基金属有机框架材料固定化漆酶及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107828772A (zh) * 2017-10-30 2018-03-23 陕西师范大学 一种用于比率荧光检测的固定化酶反应器及其制备方法
CN110420666A (zh) * 2019-05-29 2019-11-08 东南大学 类沸石咪唑酯骨架材料限域制备高分散钯亚纳米粒的方法
CN111092234A (zh) * 2019-12-04 2020-05-01 东南大学 一种高性能氧还原催化剂的制备方法
CN112553186A (zh) * 2020-12-25 2021-03-26 华南理工大学 一种铜基金属有机框架材料固定化漆酶及其制备方法和应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115646549A (zh) * 2022-10-13 2023-01-31 南京师范大学 一种多孔纳米材料水解型纳米酶及其制备方法
CN115646549B (zh) * 2022-10-13 2024-02-27 南京师范大学 一种多孔纳米材料水解型纳米酶及其制备方法
CN116920781A (zh) * 2023-07-24 2023-10-24 辽宁大学 一种Ni/N共掺杂多功能材料制备方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113109270B (zh) 2023-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Cheng et al. Hierarchical micro‐and mesoporous Zn‐based metal–organic frameworks templated by hydrogels: their use for enzyme immobilization and catalysis of Knoevenagel reaction
Hassanzadeh et al. Encapsulated cholesterol oxidase in metal-organic framework and biomimetic Ag nanocluster decorated MoS2 nanosheets for sensitive detection of cholesterol
CN113109270B (zh) 一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法
Xi et al. Iron doped graphitic carbon nitride with peroxidase like activity for colorimetric detection of sarcosine and hydrogen peroxide
Singh et al. Silver nanoparticle (AgNPs) doped gum acacia–gelatin–silica nanohybrid: An effective support for diastase immobilization
Liu et al. A Pd/SBA-15 composite: synthesis, characterization and protein biosensing
CN110484527A (zh) 一种缺陷型金属有机骨架-酶复合物及其制备方法及其应用
CN112362646B (zh) 一种基于纳米酶的谷胱甘肽传感器及其制备方法与应用
Silva-Torres et al. Enhanced laccase activity of biocatalytic hybrid copper hydroxide nanocages
Liu et al. Hollow and porous nickel sulfide nanocubes prepared from a metal-organic framework as an efficient enzyme mimic for colorimetric detection of hydrogen peroxide
Tang et al. In situ biosynthesis of ultrafine metal nanoparticles within a metal-organic framework for efficient heterogeneous catalysis
CN114471728A (zh) 铜系纳米粒子和铁卟啉纳米片复合的纳米酶及制备与应用
Hajiagha et al. Synthesis of cobalt-modified MSN as a model enzyme: Evaluation of the peroxidatic performance
CN103525805B (zh) 一种可再生的磁性固定化酶载体及其制备方法
Khdary et al. Highly dispersed platinum nanoparticles supported on silica as catalyst for hydrogen production
Li et al. High catalytic performance non-enzymatic H2O2 sensor based on Cu2O@ Cu9S5 yolk-shell nanospheres
CN109174092B (zh) 一种氧化锌/铂复合材料微球及其制备方法和应用
KR102381413B1 (ko) 금속 유기 골격체 및 이의 제조방법
CN106513052A (zh) 一种有机改性高岭土负载纳米钯催化剂的制备方法
Jung et al. Formation of cross-linked glucose oxidase aggregates in mesocellular foams
Wang et al. Nanoengineering of yolk-shell structured silicas for click chemistry
CN110327985B (zh) 超支化环糊精-纳米四氧化三铁非均相催化剂及其制备方法和应用
CN109607517B (zh) 一种部分还原氧化石墨烯及其制备方法与应用
CN113244965A (zh) 一种由牛血清白蛋白介导合成的二氧化钌纳米粒子及其过氧化物模拟酶活性
CN107243358B (zh) 一种纳米级零价铁载体及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant