CN113101991B - 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用 - Google Patents

一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113101991B
CN113101991B CN202110426563.7A CN202110426563A CN113101991B CN 113101991 B CN113101991 B CN 113101991B CN 202110426563 A CN202110426563 A CN 202110426563A CN 113101991 B CN113101991 B CN 113101991B
Authority
CN
China
Prior art keywords
hybridization
solution
liquid
area
washing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110426563.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113101991A (zh
Inventor
蒋兴宇
王斗
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southwest University of Science and Technology
Original Assignee
Southwest University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southwest University of Science and Technology filed Critical Southwest University of Science and Technology
Priority to CN202110426563.7A priority Critical patent/CN113101991B/zh
Publication of CN113101991A publication Critical patent/CN113101991A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113101991B publication Critical patent/CN113101991B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
    • C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0689—Sealing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0819—Microarrays; Biochips

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明提供了一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用，所述微流控芯片自上而下依液体流动方向分布有加样区、杂交区和废液区；所述加样区包括位于所述微流控芯片内部的反应液管道和与外界相通的加样孔，所述杂交区和废液区位于所述微流控芯片内部；所述反应液管道和加样孔与杂交区分别通过液体管路相连，所述杂交区与废液区通过废液管路相连；所述液体管路和废液管路之间设置有共用的转阀。本发明还提供了一种所述的病毒联合检测的微流控芯片以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法。本发明所述病毒联合检测的微流控芯片结构简单，操作方便，便于携带；检测结果准确，特异性好，灵敏度高，对环境无污染，具有广阔的应用前景。

Description

一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用
技术领域
本发明属于病毒分型检测技术领域，尤其涉及一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用。
背景技术
病毒感染会引发各类病毒性疾病，其种类繁多，症状各异，并且具有传染性，危害人们的身体健康。不同类型的病毒感染可能会产生相似的临床症状，如轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒和星状病毒感染均会引起腹泻，冠状病毒和流行性感冒的病毒均具有感冒、流涕、咳嗽和发热的症状。应对不同的病毒有相应的治疗方法，相似的症状给疾病的鉴定与诊断带来了困难，还会影响治疗的时机与效果，同时也增加了疾病预防与控制的难度与工作量。
因此，对临床症状相近的病毒进行联合检测具有重要意义。CN112126713A公开了一种冠状病毒和流感病毒联合检测产品及其用途，通过设计冠状病毒、和流感病毒的荧光PCR引物和探针，进行联合检测，可以对多种类型的临床样本进行检测，且减少了检测时间，降低了检测成本，具有灵敏度高、特异性好的优点。但是该产品需要配合相应的荧光PCR仪使用，对检测人员的水平要求较高，且检测的病毒种类较少，限制了产品的推广。
目前，市面上的病毒联合检测的产品往往存在检测类型较少、检测操作较为复杂、对操作人员和检测环境要求较高以及检测成本较高的问题。如何提供一种病毒联合检测的产品，能够实现样本的低成本、多种类检测，且操作简单，无需借助专用的检测仪器，已成为亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用，通过将微流控技术与基因芯片结合，制备得到的微流控芯片可以实现多种病毒的联合检测；检测在封闭环境中完成，降低了污染环境的风险；检测结果肉眼可见，简单方便。
为达此目的，本发明采用如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种病毒联合检测的微流控芯片，所述微流控芯片自上而下依液体流动方向分布有加样区、杂交区和废液区；
所述加样区包括位于所述微流控芯片内部的反应液管道和与外界相通的加样孔，所述杂交区和废液区位于所述微流控芯片内部；
所述反应液管道和加样孔与杂交区分别通过液体管路相连，所述杂交区与废液区通过废液管路相连；
所述液体管路和废液管路之间设置有共用的转阀。
本发明中，将加样区、杂交区和废液区按液体流动的方向排列，液体流动可以借助重力作用，无需复杂的液体管路控制装置，结构更为简单；将反应液管路、杂交区和废液区设计在芯片内部，可以使检测反应在加样、杂交过程中式中处于密封状态，避免待测样本对环境造成污染；液体管路和废液管路共用转阀，减小了芯片的体积，方便携带，使用时仅需旋转转阀即可实现相应液体的加入或排出，操作简便。
优选地，所述反应液管道包括洗液管道、杂交液管道、孵育液管道和显色液管道。
优选地，所述洗液管道包括洗液A管道和洗液B管道。
优选地，所述洗液管道、孵育液管道和显色液管道设置有与外界相连的液体加入孔，所述液体加入孔的外部设置有滤膜。
本发明中，通过在液体加入孔的外部设置滤膜，可以防止外界环境对芯片内的试剂造成污染，影响检测结果的准确性；同时也可以避免芯片中的待测样品污染环境，降低感染风险。
优选地，所述杂交液管道与所述加样孔相通，所述杂交液管道设置有刀片。
本申请中，所述刀片可以将插入杂交液管道的装有PCR产物的EP管切开，使扩增产物与杂交液混合并进行后续的检测反应，避免了转移PCR产物过程中因转移用具、环境的污染从而造成检测结果不准确，同时操作也更为简单，使用更加便捷。
优选地，所述杂交区内设置有杂交膜，所述杂交膜上固定有探针。
优选地，所述探针的3’端修饰有氨基。
本发明中，所述探针通过3’端的氨基与杂交膜上的醛基发生席夫碱反应从而固定在杂交膜上。
优选地，所述杂交区还设置有与液体管路和废液管路相通的气阀。
本发明中，所述气阀帮助芯片内液体的流入或排除，实现了待测样本在封闭环境中的检测，避免污染，应用价值更高。
优选地，杂交液与PCR反应液从所述加样孔加入所述杂交液管道中，所述杂交液包括含有十二烷基磺酸钠(SDS)的柠檬酸钠缓冲液(SSC)。
优选地，所述洗液管道内装有洗液，所述洗液包括含有十二烷基磺酸钠的柠檬酸钠缓冲液。
本发明中，所述洗液包括洗液A和洗液B。
本发明中，所述杂交液、洗液A和洗液B中的十二烷基磺酸钠的浓度不同。
优选地，所述孵育液管道内装有孵育液，所述孵育液包括辣根过氧化物酶(Streptavidin-POD)溶液。
优选地，所述显色液管道内装有显色液，所述显色液包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液(TMB)。
优选地，所述辣根过氧化物酶溶液包括链霉亲和素修饰的辣根过氧化物酶溶液。
本发明中，所述病毒联合检测的微流控芯片的工作原理如图1所示：将装有PCR反应液的EP管经样品孔插入杂交液管道11，杂交液管道11内的刀片9将EP管切开，PCR反应液与杂交液混合，混合液通过液体管路经由转阀进入杂交区16，PCR产物经解链后与杂交膜上的探针结合；转动转阀，洗液A管路10中的液体通过液体管路进入杂交区16，对杂交膜进行洗涤，再次转动转阀，将废液排入废液区17；采用相同的方法，依次加入孵育液、洗液B和显色液，并排出废液，根据杂交膜上的斑点确定检测结果。
第二方面，本发明提供了一种第一方面所述的病毒联合检测的微流控芯片以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，所述使用方法包括：
将杂交液、PCR反应液、洗液A、孵育液、洗液B和显色液通过转阀依次加入杂交区，经过杂交、洗涤、孵育、再次洗涤和避光显色后，分析，得到检测结果。
本发明中，所述病毒联合检测的微流控芯片的使用方法操作简便，耗时较短；并且检测结果肉眼可见，无需借助专用的仪器，可以满足基层或应急场所的检测需求；所述检测在封闭环境下进行，结果准确，同时也不会污染环境，风险较低。
优选地，所述杂交前还包括加热解链的步骤。
优选地，所述杂交、洗涤、孵育和再次洗涤后还包括通过转阀将液体排入废液区的步骤。
优选地，所述洗涤、孵育和再次洗涤在轻摇条件下进行。
优选地，所述分析包括将显色液通过转阀排入废液区，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干表面的水分，观察。
作为优选技术方案，本发明所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，包括以下步骤：
将杂交液与PCR反应液加入杂交液管道中，通过转阀加入杂交区，加热解链后，杂交，通过转阀将液体排入废液区；
洗液A通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下洗涤，通过转阀将液体排入废液区；
孵育液通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下孵育，通过转阀将液体排入废液区；
洗液B通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下再次洗涤，通过转阀将液体排入废液区；
显色液通过转阀加入杂交区，避光显色；
将显色液通过转阀排入废液区，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干表面的水分，观察，得到检测结果。
第三方面，本发明提供了第一方面所述的病毒联合检测的微流控芯片和/或第二方面所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法在制备病毒联合检测试剂盒和/或病毒联合检测装置中的应用。
本发明中，所述病毒联合检测的微流控芯片方便携带，检测结果准确，且污染风险极低，操作简便；所述检测方法简单高效，耗时较短，检测结果容易观察，具有极高的应用价值。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明所述病毒联合检测的微流控芯片在封闭环境中对待测样本进行检测，一方面不会对扩增产物造成污染，保证了结果的准确性，另一方面不会污染环境，安全性更高；
(2)所述微流控芯片操作简单，耗时较短，检测效率高，实现了大量样本的集成化检测，节省了人力物力；且装置体积较小，便于携带，可以满足应急场景的基层应用的相关检测中；
(3)所述微流控芯片的检测结果准确，特异性好，灵敏度高，且检测结果肉眼可见，无需配合复杂的装置，使用更为方便。
附图说明
图1为本发明所述病毒联合检测的微流控芯片的工作原理图；
图2为本发明实施例1中所述病毒联合检测的微流控芯片的整体外观图片；
图3为本发明实施例1中所述病毒联合检测的微流控芯片的截面图；
图4为本发明实施例3中使用实施例2制备的呼吸道病毒联合检测的微流控芯片对样本进行检测的结果图片。
图中，1～6-不同病毒的检测探针(图3中，1’-呼吸道合胞病毒检测探针，2’-新型冠状病毒检测探针，3’-甲型H3N2流感病毒检测探针，4’-甲型流感病毒检测探针，5’-乙型流感病毒检测探针，6’-新型甲型H1N1流感病毒检测探针)；7-气阀；8-液体加入孔；9-刀片；10-洗液A管道；11-杂交液管道；12-孵育液管道；13-洗液B管道；14-显色液管道；15-加样区；16-杂交区；17-废液区。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
材料：
待测样本来自临床样本。
SDS购自sigma。
SSC购自sigma。
辣根过氧化物酶购自sigma。
TMB购自sigma。
实施例1
本实施例提供一种病毒联合检测的微流控芯片，其整体外观图片如图2所示，截面图如图3所示。
所述微流控芯片自上而下依液体流动方向分布有加样区、杂交区和废液区；
所述加样区包括位于所述微流控芯片内部的反应液管道和与外界相通的加样孔，所述杂交区和废液区位于所述微流控芯片内部；
所述反应液管道和加样孔与杂交区分别通过液体管路相连，所述杂交区与废液区通过废液管路相连；
所述液体管路和废液管路之间设置有共用的转阀；
所述反应液管道包括洗液A管道、杂交液管道、孵育液管道、洗液B管道和显色液管道；所述洗液A管道、孵育液管道、洗液B管道和显色液管道设置有与外界相连的液体加入孔，所述液体加入孔的外部设置有滤膜；
所述杂交液管道与所述加样孔相通，所述杂交液管道设置有刀片；
杂交区内设置有杂交膜，所述杂交膜上固定有探针，所述探针的3’端修饰有氨基；
所述杂交区还设置有与液体管路和废液管路相通的气阀。
所述病毒联合检测的微流控芯片的工作原理如下，将装有PCR反应液的EP管插入杂交液管道中，被刀片切开，PCR反应液与杂交液混合后，通过液体管路经由转阀进入杂交区，与杂交膜上的探针结合；再依次加入洗液A、孵育液、洗液B和显色液，并通过转阀排出废液，观察，即可得到检测结果。
本发明所述病毒联合检测的微流控芯片结构简单，方便携带，可以在封闭环境中进行检测，避免对扩增产物或操作环境造成污染；所述微流控芯片将杂交、洗涤、孵育和显色集中于一个芯片中，操作简单，效率很高，且无需借助专用仪器对检测结果进行观察，应用价值极高。
实施例2
本实施例向实施例1构建的病毒联合检测的微流控芯片中加入杂交液、洗液A、孵育液、孵育液、洗液B和显色液，并且在杂交膜上固定新型甲型H1N1流感病毒检测探针、乙型流感病毒检测探针、甲型流感病毒检测探针、甲型H3N2流感病毒检测探针、新型冠状病毒检测探针和呼吸道合胞病毒检测探针，制成呼吸道病毒联合检测的微流控芯片，具体如下：
所述杂交液为含有0.2％SDS的2×SSC溶液；
所述洗液A为含有0.2％SDS的1×SSC溶液；
所述孵育液为含有0.5U的辣根过氧化物酶溶液；
所述洗液B为1％SDS的0.5×SSC溶液；
所述显色液为2.5mg/ml的TMB溶液。
杂交膜上依次固定新型甲型H1N1流感病毒检测探针6’、乙型流感病毒检测探针5’、甲型流感病毒检测探针4’、甲型H3N2流感病毒检测探针3’、新型冠状病毒检测探针2’和呼吸道合胞病毒检测探针1’，其中新型甲型H1N1流感病毒检测探针的序列如SEQ ID No.1所示，乙型流感病毒检测探针的序列如SEQ ID No.2所示，甲型流感病毒检测探针的序列如SEQ ID No.3所示，甲型H3N2流感病毒检测探针的序列如SEQ ID No.4所示，新型冠状病毒检测探针的序列如SEQ ID No.5所示，呼吸道合胞病毒检测探针的序列如SEQ ID No.6所示。
SEQ ID No.1：GGCTCGAATCGACCGTGGG；
SEQ ID No.2：TTCGCAACAATGGCTTGGGC；
SEQ ID No.3：CTCATGGAATGGCTAAAGACAAGA；
SEQ ID No.4：TAACATTACAGGATTTGCACCTTTTTC；
SEQ ID No.5：ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC；
SEQ ID No.6：TCATCCAGCAAATACACCATCCAACG。
所述呼吸道病毒联合检测的微流控芯片可对待测样本同时进行6种常见的呼吸道病毒的联合检测，操作简单，耗时较短，检测成本较低，可快速确定样本中可能含有的病毒类型，并针对检测结果采用相应手段，对相关疾病的治疗和防控具有重要意义。
实施例3
本实施例使用实施例2制备的呼吸道病毒联合检测的微流控芯片对样本进行检测，具体步骤如下：
(1)样本扩增
使用6种病毒的扩增引物对待测样本进行扩增，其中，新型甲型H1N1流感病毒检测引物的序列如SEQ ID No.7～8所示，乙型流感病毒检测引物的序列如SEQ ID No.9～10所示，甲型流感病毒检测引物的序列如SEQ ID No.11～12所示，甲型H3N2流感病毒检测引物的序列如SEQ ID No.13～14所示，新型冠状病毒检测引物的序列如SEQ ID No.15～16所示，呼吸道合胞病毒检测引物的序列如SEQ ID No.17～18所示。
SEQ ID No.7：GCCTCATACAAGATCTTCAG；
SEQ ID No.8：CACACACATGTGATTTCACTAGA；
SEQ ID No.9：TTCGCAACAATGGCTTGGGC；
SEQ ID No.10：TGTGGTAGTCCTCCGTCTTCTGTT；
SEQ ID No.11：GGCCCCCTCAAAGCCGAGAT；
SEQ ID No.12：CAAAGCGTCTACGCTGCAGT；
SEQ ID No.13：CTGACCAACACCACCATA；
SEQ ID No.14：CATCAATAGGGTCCGATA；
SEQ ID No.15：GACCCCAAAATCAGCGAAAT；
SEQ ID No.16：TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG；
SEQ ID No.17：TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT；
SEQ ID No.18：ACATACCTATTAACCCAGTGAAT。
(2)联合检测
将装有PCR反应液的EP管插入加样口，使PCR反应液与200μL杂交液加入杂交液管道中，通过转阀加入杂交区，在95℃下加热解链10min，在45℃下杂交0.5h，通过转阀将液体排入废液区；
500μL洗液A通过转阀加入杂交区，在45℃下轻摇洗涤15min，通过转阀将液体排入废液区；
500μL孵育液通过转阀加入杂交区，在室温下轻摇孵育10min，通过转阀将液体排入废液区；
500μL洗液B通过转阀加入杂交区，在室温下再次轻摇洗涤10min，通过转阀将液体排入废液区；
500μL显色液通过转阀加入杂交区，避光显色5min；
将显色液通过转阀排入废液区，用蒸馏水洗涤2次，每次3min，吸干表面的水分，观察，得到检测结果。
杂交膜上若相应探针位置显示蓝色，则表明待测样本中相应的病毒为阳性，若相应探针位置无颜色，则表明待测样本中相应的病毒为阴性。
检测结果如图4所示。由图可知，使用所述呼吸道病毒联合检测的微流控芯片对临床确诊呼吸道合胞病毒样本进行检测，可以看出1’呼吸道合胞病毒探针区域具有肉眼可见的蓝色圆点，指示呼吸道合胞病毒阳性，其余病毒均为阴性结果，与预期相符，证明了检测结果的准确性。
综上所述，本发明提供了一种病毒联合检测的微流控芯片，所述微流控芯片结构简单，方便携带；可以在封闭环境中进行检测，不污染环境，风险较低；检测结果准确，特异性好，灵敏度高；操作简便，耗时较短，检测效率高；结果肉眼可见，无需借助专用仪器，具有极高的应用价值。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
序列表
<110> 南方科技大学
<120> 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用
<130> 2021
<160> 18
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggctcgaatc gaccgtggg 19
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ttcgcaacaa tggcttgggc 20
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ctcatggaat ggctaaagac aaga 24
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
taacattaca ggatttgcac ctttttc 27
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
accccgcatt acgtttggtg gacc 24
<210> 6
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
tcatccagca aatacaccat ccaacg 26
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gcctcataca agatcttcag 20
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
cacacacatg tgatttcact aga 23
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ttcgcaacaa tggcttgggc 20
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
tgtggtagtc ctccgtcttc tgtt 24
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ggccccctca aagccgagat 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
caaagcgtct acgctgcagt 20
<210> 13
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ctgaccaaca ccaccata 18
<210> 14
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
catcaatagg gtccgata 18
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
gaccccaaaa tcagcgaaat 20
<210> 16
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
tctggttact gccagttgaa tctg 24
<210> 17
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
ttagcaaagt caagttgaat gat 23
<210> 18
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
acatacctat taacccagtg aat 23

Claims (16)

1.一种病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片自上而下依液体流动方向分布有加样区、杂交区和废液区；
所述加样区包括位于所述微流控芯片内部的反应液管道和与外界相通的加样孔，所述杂交区和废液区位于所述微流控芯片内部，所述杂交区内设置有杂交膜，所述杂交膜上固定有探针；
所述反应液管道和加样孔与杂交区分别通过液体管路相连，所述杂交区与废液区通过废液管路相连；
所述反应液管道包括洗液管道、杂交液管道、孵育液管道和显色液管道，所述洗液管道、孵育液管道和显色液管道设置有与外界相连的液体加入孔，所述液体加入孔的外部设置有滤膜；
所述杂交液管道与所述加样孔相通，所述杂交液管道设置有刀片；
所述液体管路和废液管路之间设置有共用的转阀。
2.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述洗液管道包括洗液A管道和洗液B管道。
3.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述探针的3’端修饰有氨基。
4.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述杂交区还设置有与液体管路和废液管路相通的气阀。
5.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，杂交液与PCR反应液从所述加样孔加入所述杂交液管道中，所述杂交液包括含有十二烷基磺酸钠的柠檬酸钠缓冲液。
6.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述洗液管道内装有洗液，所述洗液包括含有十二烷基磺酸钠的柠檬酸钠缓冲液。
7.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述孵育液管道内装有孵育液，所述孵育液包括辣根过氧化物酶溶液。
8.根据权利要求1所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述显色液管道内装有显色液，所述显色液包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液。
9.根据权利要求7所述的病毒联合检测的微流控芯片，其特征在于，所述辣根过氧化物酶溶液包括链霉亲和素修饰的辣根过氧化物酶溶液。
10.一种权利要求1～9任一项所述的病毒联合检测的微流控芯片以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：
将杂交液、PCR反应液、洗液A、孵育液、洗液B和显色液通过转阀依次加入杂交区，经过杂交、洗涤、孵育、再次洗涤和避光显色后，分析，得到检测结果。
11.根据权利要求10所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述杂交前还包括加热解链的步骤。
12.根据权利要求10所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述杂交、洗涤、孵育和再次洗涤后还包括通过转阀将液体排入废液区的步骤。
13.根据权利要求10所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述洗涤、孵育和再次洗涤在轻摇条件下进行。
14.根据权利要求10所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述分析包括将显色液通过转阀排入废液区，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干表面的水分，观察。
15.根据权利要求10所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：
将杂交液与PCR反应液加入杂交液管道中，通过转阀加入杂交区，加热解链后，杂交，通过转阀将液体排入废液区；
洗液A通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下洗涤，通过转阀将液体排入废液区；
孵育液通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下孵育，通过转阀将液体排入废液区；
洗液B通过转阀加入杂交区，在轻摇条件下再次洗涤，通过转阀将液体排入废液区；
显色液通过转阀加入杂交区，避光显色；
将显色液通过转阀排入废液区，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干表面的水分，观察，得到检测结果。
16.权利要求1～9任一项所述的病毒联合检测的微流控芯片和/或权利要求10～15任一项所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法在制备病毒联合检测试剂盒和/或病毒联合检测装置中的应用。
CN202110426563.7A 2021-04-20 2021-04-20 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用 Active CN113101991B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110426563.7A CN113101991B (zh) 2021-04-20 2021-04-20 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110426563.7A CN113101991B (zh) 2021-04-20 2021-04-20 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113101991A CN113101991A (zh) 2021-07-13
CN113101991B true CN113101991B (zh) 2022-10-04

Family

ID=76718893

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110426563.7A Active CN113101991B (zh) 2021-04-20 2021-04-20 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113101991B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113684246B (zh) * 2021-08-06 2024-05-17 南方科技大学 高灵敏度、无需扩增的核酸检测方法及其应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8916348B2 (en) * 2004-05-06 2014-12-23 Clondiag Gmbh Method and device for the detection of molecular interactions
EP2674217B1 (en) * 2006-11-06 2019-07-10 Alere Technologies GmbH Device for assays using binding members
CA3006347A1 (en) * 2007-07-23 2009-01-29 Clondiag Gmbh Methods and devices for determining values indicative of the presence and/or amount of nucleic acids
CN102680677B (zh) * 2012-05-08 2015-04-01 嘉兴博泰生物科技发展有限公司 一种检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法
CN108169495A (zh) * 2018-02-13 2018-06-15 苏州仁端生物医药科技有限公司 一种微流控芯片及其应用
CN111073999B (zh) * 2018-10-22 2022-08-09 四川农业大学 同步共检六种禽病毒的可视化芯片
CN109810875A (zh) * 2019-03-28 2019-05-28 苏州点晶生物科技有限公司 一种扇形核酸多联检装置
CN110935497A (zh) * 2019-12-27 2020-03-31 首都医科大学附属北京儿童医院 集成化微流控免疫检测芯片及其应用
CN111135892B (zh) * 2020-02-21 2021-01-05 厦门大学 微流控芯片操控设备、微流控系统和微流控芯片

Also Published As

Publication number Publication date
CN113101991A (zh) 2021-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Cui et al. Diagnostic methods and potential portable biosensors for coronavirus disease 2019
Liu et al. A microfluidic-integrated lateral flow recombinase polymerase amplification (MI-IF-RPA) assay for rapid COVID-19 detection
CN110283940A (zh) 核酸组合物、流感病毒的检测试剂盒和微流控芯片
Huguenin et al. Broad respiratory virus detection in infants hospitalized for bronchiolitis by use of a multiplex RT‐PCR DNA microarray system
CN107099619A (zh) 一种检测呼吸道病原体的lamp引物组合物及其试剂盒
Rasmussen et al. Critical parameters in the MCF-7 cell proliferation bioassay (E-Screen)
Teo et al. VereFlu™: an integrated multiplex RT-PCR and microarray assay for rapid detection and identification of human influenza A and B viruses using lab-on-chip technology
CN113101991B (zh) 一种病毒联合检测的微流控芯片及其应用
CN103233082B (zh) 一种利用实时荧光定量pcr检测h7n9禽流感病毒的试剂盒
CN109517927A (zh) 一种甲型、乙型流感病毒快速分型检测试剂盒及其应用
CN109402239A (zh) 一种用于实时荧光定量pcr的免提取直接扩增试剂及其应用
CN106290269B (zh) 一种复合型微生物快速检测方法及微芯片系统
CN102251061A (zh) 甲型/乙型流感病毒核酸双重荧光pcr检测试剂盒
CN104830996B (zh) 一种基于抗体磁珠捕获的流感病毒检测前处理方法
CN110218769A (zh) 用于lamp或rt-lamp的整合一体式多联试纸条
Yu et al. A novel diagnostic method to detect Duck Tembusu virus: a colloidal gold-based immunochromatographic assay
CN102146485B (zh) 流感病毒一步rt-pcr检测试剂盒
CN103320530B (zh) 一种h1n1/h5n1型禽流感病毒检测试剂盒及其应用
CN102140547A (zh) 麻疹病毒一步实时荧光定量rt-pcr试剂盒
CN107365684A (zh) 一种纸微流控芯片及其核酸提取方法和等温扩增方法
CN107488742A (zh) B型流感病毒全基因组测序方法
CN102154514A (zh) 甲型h1n1流感病毒一步实时荧光定量rt-pcr试剂盒
CN106319028A (zh) 用于检测解脲支原体和人型支原体的试剂盒
CN107354154A (zh) H9n2亚型禽流感病毒全基因组测序方法
CN208104419U (zh) 检测人类病毒核酸的微流控芯片及检测系统

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant