CN113100227B - 一种可直接输入人体的nk细胞运输液及其制备方法和应用 - Google Patents

一种可直接输入人体的nk细胞运输液及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：乳酸钠林格注射液80％‑98.94％；20wt％的人血白蛋白1％‑20％；5wt％的葡萄糖注射液0.05％‑5％；50wt％的海藻糖溶液0.01％‑1％。本发明还提供了上述NK细胞运输液的制备方法和应用。本发明所提供的NK细胞运输液，输注前无需再进行处理，因其主要成分为医用注射级别，成分明确，可直接输入人体，方便快捷。

Description

一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及免疫细胞技术领域，具体是涉及一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用。
背景技术
自然杀伤细胞（natural killer cells, NK）是天然免疫系统的一个重要组成部分，在机体抵抗病毒感染和抗肿瘤的过程中发挥关键作用，不需要预先的致敏便能杀伤发生恶性转化和感染的细胞，而不损伤正常细胞。主要分布于脾脏、骨髓、淋巴结和外周血等处，可在各种趋化因子的诱导下，向炎症等部位迁移。NK细胞表面存在多种抑制型和激活型的受体，各种信号通过这些受体的传递，实现NK细胞的抑制或激活。
NK细胞作为人体的重要免疫细胞，仅占外周血淋巴细胞的 5% ~ 10% ,其杀伤活性不受主要组织相容性复合体(MHC)限制，不依赖于抗体，能快速溶解某些肿瘤细胞进而发挥抗肿瘤作用，因此NK细胞抗癌功能的开发与应用是近年来癌症研究的重点内容。
NK细胞治疗中一个很重要的问题是如何解决NK细胞的运输问题，因为NK细胞从制备到使用需要一段时间，细胞处理完以后需马上输注(4小时内)，否则时间过长会影响细胞品质。
目前NK细胞运输方式通常有两种，一种是在液氮冻存状态下进行运输，另一种是常温培养基下运输。两种方法都存在一些弊端。液氮冻存状态下进行运输危险性高（液氮温度为-196℃），运输受限，而且细胞经过冻存后其活性会下降，对后续治疗造成影响。常温培养基下运输，耗费培养基过多，体积较大，到达目的地处理NK细胞时对处理人员、处理环境及仪器的要求较高，使其应用受到限制。加速NK细胞在临床的应用是大势所趋，所以研发一种有效的NK细胞运输液是非常有必要的。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种可直接输入人体的NK细胞运输液及其制备方法和应用，以解决现有技术中存在的技术问题。
本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本发明提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 80％-98.94％；
20wt％的人血白蛋白 1％-20％；
5wt％的葡萄糖注射液 0.05％-5％；
50wt%的海藻糖溶液 0.01％-1％。
NK细胞在采用上述的细胞运输保存液保存时，低温有助于降低细胞代谢而延长细胞保存时间。然而，NK细胞虽然处于低代谢状态，但仍需要一定的营养物质进行代谢。为了维持细胞的代谢，选用乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液及50wt%的海藻糖溶液，其中乳酸钠林格注射液，是一种平衡盐液，其电解质浓度、pH、渗透压等与细胞外液接近，可作为良好的细胞溶液。20wt％的人血白蛋白主要防止细胞在悬液中接团，细胞结团后输注会引起小血管的栓塞，也影响细胞的活率。5wt％葡萄糖注射液主要为细胞提供基础的能量供给。海藻糖是由两个葡萄糖分子以a,a,1,1-糖苷键构成非还原性糖，自身性质非常稳定，海藻糖可在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性、不失活，对细胞具有保护作用。四种成分配合使用可以更好地保证NK细胞的正常活动代谢，提高对恶劣环境的适应能力，而且成分简单、明确，主要成分为医用级别，可直接输入人体，无任何风险。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 84.2％；
20wt％的人血白蛋白 12％；
5 wt％的葡萄糖注射液 3％；
50wt％的海藻糖溶液 0.8％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 87.1％；
20 wt％的人血白蛋白 10％；
5 wt％的葡萄糖注射液 2.3％；
50wt%的海藻糖溶液 0.6％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 90％；
20 wt％的人血白蛋白 8％；
5 wt％的葡萄糖注射液 1.5％；
50wt%的海藻糖溶液 0.5％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 93.8％；
20 wt％的人血白蛋白 5％；
5 wt％的葡萄糖注射液 1％；
50wt%的海藻糖溶液 0.2％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 97.15％；
20 wt％的人血白蛋白 2.5％；
5 wt％的葡萄糖注射液 0.25％；
50wt%的海藻糖溶液 0.1％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 98.94％；
20 wt％的人血白蛋白 1％；
5 wt％的葡萄糖注射液 0.05％；
50wt%的海藻糖溶液 0.01％。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液中，其中所述乳酸钠林格注射液、20wt％人血白蛋白、5wt％葡萄糖注射液50wt%海藻糖溶液为医用注射级别；所述50wt%的海藻糖溶液是通过0.22μm滤膜过滤除菌的。
本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本发明提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液的制备方法，包括如下步骤：将上述的乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述50wt%海藻糖溶液的具体制备步骤为：将100g海藻糖加入100ml灭菌注射用水中，充分溶解，使用前用0.22μm滤膜进行过滤除菌。
本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本发明提出的一种可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
a将NK细胞离心收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
b调整细胞密度为1×105个/ml -1×108个/ml，制成细胞悬液；
c将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，之后进行冷藏运输。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤a中，所述NK细胞离心的转速为2000-3000转/分钟，时间为5-6分钟。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤b中，所述细胞密度为1×107个/ml，浓度太低浪费运输液，浓度太高细胞代谢会增加且细胞容易结团，影响细胞活率。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤c中，所述细胞悬液与空气的体积比例为1:1-1:5，优选为1:3，这样优选的目的是为了保证细胞在运输过程中对氧气的需求，模拟细胞培养环境。
进一步地，前述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法中，其中步骤c中，所述冷藏运输的温度范围为4-17℃，优选为12℃，这样优选后的温度不仅容易获得，而且可以降低细胞的基础代谢率，减少对营养物质的需求。
在常温环境中，NK细胞内各种酶和其他生物大分子反应、代谢旺盛，耗氧高，分泌物也可能较大。这些生理过程会产生的大量氧自由基和脂质过氧化物。它们必须及时被清除，否则引起环境pH和渗透压变化，造成细胞溶胀和死亡。而在低温下，NK细胞代谢较低，这些问题可以得到很大的缓解。具体地，低温环境可降低细胞的基础代谢，产生的有害物质减少，且低温对细胞无损害作用，保持细胞的最优状态；在本发明中选用4-17℃作为NK细胞保存的温度，试验条件下的最佳温度为12℃，该温度可以通过常规的生物疫苗运输箱得到。通过实验对0h、8h、24h、48h、72h的NK细胞活率计数，发现0h、8h、24h细胞活率变化不大，且均大于48h、72h的细胞活率，故选用24h作为NK细胞运输液使用的最长时间。因此，运输的NK细胞在运送过程中需要储存在4℃～17℃的生物疫苗运输箱中，且在24小时（时间从细胞加入转移袋开始计算）内运送到指定地点
本发明所述的NK细胞运输液，还可用于其它类型的免疫细胞，尤其是用于治疗恶性肿瘤的免疫细胞，包括但不限于：NK细胞、单核细胞、B细胞和T细胞。
本发明相比于现有技术的有益效果在于：
由于NK细胞为悬浮培养，收集时需要专业技术人员在标准GMP实验室内进行，对环境及仪器的要求较高，限制了NK细胞的广泛应用。而本发明只需将NK细胞在培养所在的实验室收集后，加入到发明所述的NK细胞运输液中，按照NK细胞运输液的使用方法即可运送到各地，输注前无需再进行处理；且因所述NK细胞运输液的主要成分为医用注射级别，成分明确，可直接输入人体，方便快捷。
本发明所述的NK细胞运输液，无需冷冻，NK细胞在4-17℃下就能够运输，且其在该温度条件下24h内可以保持较高的生物活性，从而无需干冰、液氮等保护物质，降低了对运输环境、条件、资质等的限制，且显著降低了运输成本，使NK细胞的长距离、长时间、低成本、高质量的运输成为可能。
附图说明
图1为本发明的NK细胞表面标志性抗原流式图。
具体实施方式
以下本文将通过具体的实施例来描述发明。如未特别指明之处，可根据本领域技术人员所熟悉的《细胞实验指南》(科学出版社，北京，中国，2001年)、《免疫检测技术》(科学出版社，北京，中国，1991)等实验手册以及本文所引用的参考文献中所列方法来实施。其中，所用的试剂原料均为市售品，可以通过公开渠道购买获得。
NK细胞的培养过程如下：抽取外周血50ml（武警总院赠予），并使用无菌PBS稀释（体积稀释比例为1:1），每支50 ml离心管中加入20 ml人淋巴细胞分离液（市购），沿管壁、缓慢加入30ml稀释的外周血，避免破坏分离液的水相，在3000转/分钟下离心30分钟。离心完毕将上层血浆小心吸出至另一个50ml离心管中，灭活（在56℃的水浴锅中水浴20分钟，灭火的目的是为了去除血清中的补体等对热敏感的物质以及对血清中可能存在的支原体具有灭活作用）待用，然后将离心后得到的淡黄色的单个核细胞层吸出至15 ml离心管中，2000转/分钟离心5分钟，结束后，用无菌PBS（市购）洗涤，共离心3次，沉淀即为外周血单个核细胞。用40ml NK培养液（市购）重悬单个核细胞，加入已灭活的自体血浆和重组人IL-2（市购），混匀后加入75cm2培养瓶中，置于37℃、5％（v/v）CO2细胞培养箱中静置培养。第3天，补充NK培养液（为补充NK细胞培养的所需营养）和重组人IL-2（主要是活化NK细胞，增强NK细胞的治疗效果），并把培养瓶中的培养液平均分配到两个大培养袋中继续培养，每3-4天向每个大培养袋中补充100 ml NK培养液和重组人IL-2。总共培养约14天，全部操作均在标准GMP实验室进行，并进行质量监测，括细菌及真菌污染检测、细胞内毒素检测、细胞活率、细胞流式检测、细胞杀伤性检测等。
培养14天时对NK细胞进行检测：1、NK细胞细菌、真菌检测：阴性。2、NK细胞内毒素检测：＜0.05EU。3、NK细胞活率检测：95.1％。4、NK细胞流式检测，主要检测项为CD3-/CD16+CD56+NK（见图1），从图1中可以看出NK细胞的阳性率为92.88%。5、NK细胞杀伤性检测：取NK细胞（细胞密度为1×107个/ml）与靶细胞K562细胞（细胞密度为1×105个/ml）按照效靶比25:1的比例混合，培养于96孔板内，每孔总体积2ml，同时设置效应细胞孔、靶细胞孔、空白对照孔，实验孔为NK 细胞孔，置于37℃、5％（v/v）CO2细胞培养箱中培养24h后，加CCK-8试剂20μl，置于细胞培养箱孵育4h后于450nm测定吸光度（A）值。按公式计算NK细胞的杀伤性：杀伤率=[1-9(实验孔A值-效应细胞孔A值)/靶细胞孔A值]*50wt%。经计算杀伤率为68.5％。
实施例1
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 84.2％；
20wt％的人血白蛋白 12％；
5 wt％的葡萄糖注射液 3％；
50wt%的海藻糖溶液 0.8％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
实施例2
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 87.1％；
20 wt％的人血白蛋白 10％；
5 wt％的葡萄糖注射液 2.3％；
50wt%的海藻糖溶液 0.6％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt%的人血白蛋白、5 wt%的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
实施例3
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 90％；
20 wt％的人血白蛋白 8％；
5 wt％的葡萄糖注射液 1.6％；
50wt%的海藻糖溶液 0.4％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt%的人血白蛋白、5 wt%的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
实施例4
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 93.8％；
20 wt％的人血白蛋白 5％；
5 wt％的葡萄糖注射液 1％；
50wt%的海藻糖溶液 0.2％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt%的人血白蛋白、5 wt%的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度范围为12℃。
实施例5
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 97.15％；
20 wt％的人血白蛋白 2.5％；
5 wt％的葡萄糖注射液 0.25％；
50wt%的海藻糖溶液 0.1％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20wt%的人血白蛋白、5wt%的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
实施例6
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 98.94％；
20 wt％的人血白蛋白 1％；
5 wt％的葡萄糖注射液 0.05％；
50wt%的海藻糖溶液 0.01％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt%人血白蛋白、5 wt%葡萄糖注射液、50wt%海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
实施例7
本实施例提供了一种可直接输入人体的NK细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 80％；
20 wt％的人血白蛋白 14％；
5 wt％的葡萄糖注射液 5％；
50wt%的海藻糖溶液 1％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt%人血白蛋白、5 wt%葡萄糖注射液、50wt%海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。所述NK细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，包括以下步骤：
将NK细胞离心（2000转/分钟离心5分钟）收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
调整细胞密度为1×107个/ml，制成细胞悬液；
将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，其中所述细胞悬液与空气的体积比例保持在1:3；
本实施例所述的可直接输入人体的NK细胞运输液使用生物疫苗冷藏箱进行运输，温度为12℃。
对比例1
本对比例提供了一种细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 90％；
5 wt％的葡萄糖注射液 6％；
50wt%的海藻糖溶液 4％。
将上述的乳酸钠林格注射液、5wt％的葡萄糖注射液、50wt%海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述细胞运输液。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
对比例2
本对比例提供了一种细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
20 wt％的人血白蛋白 85％；
5 wt％的葡萄糖注射液 10％；
50wt%的海藻糖溶液 5％。
将上述的20 wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液及50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述细胞运输液。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
对比例3
本对比例提供了一种细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 85％；
20 wt％的人血白蛋白 10％；
5 wt％的葡萄糖注射液 5％；
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt％的人血白蛋白及5 wt％的葡萄糖注射液按上述体积占比混合均匀，即得所述细胞运输液。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
对比例4
本对比例提供了一种细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 80％；
20 wt％的人血白蛋白 15％；
50wt%的海藻糖溶液 5％。
将上述的乳酸钠林格注射液、20 wt％的人血白蛋白及50wt%的海藻糖溶液按上述体积占比混合均匀，即得所述细胞运输液。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
对比例5
本对比例提供了一种细胞运输液，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 90％；
5 wt％的葡萄糖注射液 10％。
将上述的乳酸钠林格注射液、5wt％的葡萄糖注射液按上述体积占比混合均匀，即得所述细胞运输液。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
对比例6
本对比例提供了一种细胞运输液，其包括：
葡萄糖0.2mg/ml；氯化钠3mg/ml；氯化钾1mg/ml；氯化钙0.8mg/ml；乳酸钠8mg/ml。
将0.2mg葡萄糖、3mg氯化钠、1mg氯化钾、0.8mg氯化钙及8mg乳酸钠依次溶解于适量灭菌注射用水中，并用该灭菌注射用水定容至1ml，即得所述细胞运输液（含有0.2mg/ml葡萄糖，3mg/ml氯化钠，1mg/ml氯化钾，0.8mg/ml氯化钙，8mg/ml乳酸钠）。所述细胞运输液一般现配现用或者4℃冷藏保存。
上述细胞运输液的使用方法同实施例1所述的NK细胞运输液的使用方法。
测试例1
按上述的NK细胞运输液的使用方法将之前离心收集的NK细胞添加至实施例1-7所述的NK细胞运输液及对比例1-6所述的细胞运输液中，接种浓度（细胞密度）为1×107个/ml，分别于0h、7h、24h计数细胞活力，具体结果见表1。
测试例2
按上述的NK细胞运输液的使用方法将之前离心收集的NK细胞添加至实施例1-7所述的NK细胞运输液及对比例1-6所述的细胞运输液中，接种浓度（细胞密度）为1×107个/ml，分别于0h、7h、24h计数细胞数量，具体结果见表2。
测试例3
按上述的NK细胞运输液的使用方法将之前离心收集的NK细胞添加至实施例1-7所述的NK细胞运输液及对比例1-6所述的细胞运输液中，接种浓度（细胞密度）为1×107个/ml，分别取7h、24h细胞进行流式检测，主要检测项结果见表3。
测试例4
按上述的NK细胞运输液的使用方法将之前离心收集的NK细胞添加至实施例1-7所述的NK细胞运输液及对比例1-6所述的细胞运输液中，接种浓度（细胞密度）为1×107个/ml，分别取7h、24h细胞进行杀伤性检测，具体结果见表4。
表1 NK细胞活率检测表
Figure 240215DEST_PATH_IMAGE002
表2 NK细胞数量检测表
Figure 750831DEST_PATH_IMAGE004
表3 NK细胞流式检测表
Figure 999410DEST_PATH_IMAGE006
表4 NK细胞杀伤率检测表
Figure 971783DEST_PATH_IMAGE008
从表1-4的数据可以看出，本发明实施例1-7中的NK细胞运输液24h内细胞活率、细胞数量、流式检测、细胞杀伤率等变化不大。对比例1-6缺少20wt的％人血白蛋白、乳酸钠林格注射液、50wt%的海藻糖溶液或5 wt％的葡萄糖注射液后，细胞活率、细胞数量、细胞杀伤率均明显下降，尤其是随着时间的增加，这种影响更加明显。这说明20wt的％人血白蛋白、乳酸钠林格注射液、50wt%海藻糖溶液及5 wt％葡萄糖注射液四种成分配合，协同作用可以更好地保证NK细胞的正常活动代谢，提高对恶劣环境的适应能力，以上数据说明本发明的NK细胞运输液对NK细胞具有保护作用，且所述NK细胞运输液的主要成分为临床注射级别，可作为直接回输人体的NK细胞运输液进行推广应用。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 84.2％；
20wt％的人血白蛋白 12％；
5wt％的葡萄糖注射液 3％；
50wt％的海藻糖溶液 0.8％；
或以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 87.1％；
20wt％的人血白蛋白 10％；
5wt％的葡萄糖注射液 2.3％；
50wt％的海藻糖溶液 0.6％。
2.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 90％；
20wt％的人血白蛋白 8％；
5wt％的葡萄糖注射液 1.5％；
50wt％的海藻糖溶液 0.5％。
3.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 93.8％；
20wt％的人血白蛋白 5％；
5wt％的葡萄糖注射液 1％；
50wt%的海藻糖溶液 0.2％。
4.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 97.15％；
20wt％的人血白蛋白 2.5％；
5wt％的葡萄糖注射液 0.25％；
50wt%的海藻糖溶液 0.1％。
5.一种可直接输入人体的NK细胞运输液，其特征在于，以体积百分比计，其组成为：
乳酸钠林格注射液 98.94％；
20wt％的人血白蛋白 1％；
5wt％的葡萄糖注射液 0.05％；
50wt%的海藻糖溶液 0.01％。
6.如权利要求1-5任一项所述的NK细胞运输液，其特征在于，所述乳酸钠林格注射液、20wt％人血白蛋白及5wt％葡萄糖注射液均为医用注射级别；所述50wt%的海藻糖溶液是通过0.22μm滤膜过滤除菌的。
7.一种权利要求6所述的可直接输入人体的NK细胞运输液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将上述的乳酸钠林格注射液、20wt％的人血白蛋白、5wt％的葡萄糖注射液、50wt%的海藻糖溶液按体积占比混合均匀，即得所述NK细胞运输液。
8.一种权利要求6所述的可直接输入人体的NK细胞运输液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
a将NK细胞离心收集后，使用NK细胞运输液将细胞吹散，之后将其加入NK细胞运输液中；
b调整细胞密度为1×105个/ml-1×108个/ml，制成细胞悬液；
c将细胞悬液盛放于含有空气的转移袋中，之后进行冷藏运输；
所述细胞悬液与空气的体积比例为1:1-1:5；所述冷藏运输的温度范围为4-17℃。
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