CN108477143A - 一种细胞运输用保持液及运输方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞运输用保持液及运输方法，主要涉及细胞运输技术领域。包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠以及溶液介质。在常温条件下将细胞分散在保持液中进行运输。本发明的有益效果在于：它可使细胞在常温条件下的较长时间内保持较高的生物活性，因此能够使细胞在常温环境下进行长距离长时间的运输，且运输成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及细胞运输技术技术领域，具体是一种细胞运输用保持液及运输方法。
背景技术
细胞做为人体和动物的基本构成单位，是科研机构以及药物研究机构的重要的基础原材料。几乎所有的生物学基础研究以及药物研发都要用到细胞，细胞的产品质量直接关系到整个科研实验和药物研究的质量，而细胞运输是细胞质量高低的一个重要因素。目前细胞的运输主要有3种方式：1)用细胞培养瓶灌满培养液后进行常温运输；2)细胞冷冻后，用干冰进行运输；3)细胞冷冻后，用液氮进行运输。
上述3种主要的细胞运输方式均有优缺点：细胞液灌装运输方式可避免细胞复苏的技术操作同时运输费用低廉，但在该方式下，细胞的存活时间较短，因此该方式不适合于长距离与长时间运输；细胞采用冷冻后干冰运输的方式可以使细胞在超低温状态下保持较高的生物活性，但干冰易挥发，为了使细胞持续地处于超低温环境下，就必须使用大量的干冰，并且在长距离与长时间运输时还得中途添加干冰，造成了高昂的运输费用，另外干冰被包括我国在内的一些国家归于九类危险品，许多快递公司无资质运输。细胞采用液氮运输面临着与干冰运输类似的难题。
综上所述，现有技术在细胞运输技术方面存在收距离和时间对细胞活性影响大，成本居高不下，以及对运输资质要求苛刻的问题，使得细胞运输技术成为各项科研及药物研究中长久以来存在的普遍难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种细胞运输用保持液及运输方法，它可使细胞在常温条件下的较长时间内保持较高的生物活性，因此能够使细胞在常温环境下进行长距离长时间的运输，且运输成本低廉。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种细胞运输用保持液，包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠以及溶液介质。
优选的，包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.1％～0.3％，蔗糖0.2％～0.4％，海藻糖0.4％～0.6％，谷氨酸0.05％～0.15％，羧甲基纤维素钠0.05％～0.15％，海藻酸钠0.1％～0.3％以及溶液介质。
最优的，包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.2％、蔗糖0.3％、海藻糖0.5％、谷氨酸0.1％、羧甲基纤维素钠1％、海藻酸钠2％以及溶液介质。
其制备方法包括：
1)称取羧甲基纤维素钠和海藻酸钠，加入去离子水，在121℃条件下高压灭菌0.12Mpa压力条件下灭菌20min，冷却至室温备用，得胶体A；
2)称取葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸，用相应细胞培养基溶解，0.22um滤器过滤除菌，得溶液B；
3)按1：1比例混合胶体A和溶液B，混匀即得。
其使用方法为：将运输细胞1500rpm/min下离心5min后，倾倒上清液至剩余100uL的液体，吸打混匀；加入所述保持液1mL并吸打分散均匀后，即可进行常温运输。
预运输的细胞需生长状态良好，若是贴壁细胞则先用胰酶等消化。
本发明的有益效果在于：
本发明所述的保持液与现有技术相比，能够在长时间、长距离的运输中使细胞保持较好的生物活性，克服了现有常温运输中细胞活性随着距离和时间的增加而收到显著影响的问题。同时，相比需要冷冻细胞进行运输的干冰保存运输与液氮运输，本方法无需冷冻，细胞在常温下就能够运输，且在常温条件下较长时间保持较高的生物活性，从而无需干冰、液氮等保护物质，降低了对运输环境、条件、资质等的限制，且显著降低了运输成本。使细胞的长距离，长时间，低成本，高质量的运输成为可能。
附图说明
附图1是实施例3中3种类型细胞在常温下使用本保持剂存储4，8，12天后的细胞活率。
附图2是实施例3中3种类型细胞在常温下使用本保持剂存储4，8，12天后的细胞回收率。
附图3是实施例3中D12回收细胞显微镜下形态(从上到下依次为293T细胞、shcwann细胞、PBMC细胞)。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1：一种细胞运输用保持液，包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.2％、蔗糖0.3％、海藻糖0.5％、谷氨酸0.1％、羧甲基纤维素钠1％、海藻酸钠2％以及溶液介质。
通过下述方法配置：
1)称取1％的羧甲基纤维素钠和2％海藻酸钠，加入相应体积的去离子水，121°、0.12Mpa高压灭菌20min，冷却至室温备用；
2)称取0.2％葡萄糖，0.3％蔗糖，0.5％海藻糖，0.1％谷氨酸，用1640培养基(Hyclone)细胞培养基溶解，0.22um滤器过滤除菌；
3)超净工作台内按1:1的比例吸取步骤一所配置的胶体和步骤二所配置的溶液，混匀均匀，即得保持液。
实施例2：一种细胞运输用保持液，包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.25％、蔗糖0.25％、海藻糖0.40％、谷氨酸0.15％、羧甲基纤维素钠0.05％、海藻酸钠0.25％以及溶液介质。
通过下述方法配置：
1)称取0.05％的羧甲基纤维素钠和0.25％海藻酸钠，加入相应体积的去离子水，125°、0.10Mpa高压灭菌20min，冷却至室温备用；
2)称取0.25％葡萄糖，0.25％蔗糖，0.40％海藻糖，0.15％谷氨酸，用1640培养基(Hyclone)细胞培养基溶解，0.22um滤器过滤除菌；
3)超净工作台内按1:1的比例吸取步骤一所配置的胶体和步骤二所配置的溶液，混匀均匀，即得保持液。
实施例3：使用实施例1制得的保持液，对293T细胞，雪旺细胞(Shcwann细胞)以及外周血单个核细胞(PBMC细胞)进行保存运输
1)取对数生长期的细胞，293T细胞以及雪旺细胞使用0.25％胰酶及EDTA消化后计数，PBMC细胞直接计数；
2)分别取5x106PBMC细胞，2x106雪旺细胞以及293T细胞与1ml本产品充分混合，置于室温中运输；，分别设置两个对照组，对照组1使用1ml1640培养基加入10％小牛血清加入同等数量的细胞亦放置于常温下运输，对照组2使用1ml冻存液含10％DMSO，20％胎牛血清以及70％1640培养基加入同等数量细胞置于-80℃干冰条件下运输；
3)分别在第4天，8天，12天观察计算实验组及对照组细胞活率(台盼蓝染色法)，得率(细胞当天计数/细胞初始数量)以及实验组细胞形态(镜下观察)：实验组细胞使用5X培养液稀释细胞后使用40um孔径细胞滤膜过滤去除保存液后用1mlPBS洗涤3次后进行上述实验操作，对照组1细胞用1mlPBS洗涤三次后进行上述实验操作，对照组2细胞37°C快速复苏后用1mlPBS洗涤3次后进行上述实验操作；
分别观察计算第4天，8天，12天细胞活率(见附图1)，细胞得率(见附图2)以及细胞形态(见附图3)。
Claims (7)
1.一种细胞运输用保持液，其特征在于：包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠以及溶液介质。
2.如权利要求1所述一种细胞运输用保持液，其特征在于：包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.1％～0.3％，蔗糖0.2％～0.4％，海藻糖0.4％～0.6％，谷氨酸0.05％～0.15％，羧甲基纤维素钠0.05％～0.15％，海藻酸钠0.1％～0.3％以及溶液介质。
3.如权利要求1所述一种细胞运输用保持液，其特征在于：包括按质量百分比浓度计的葡萄糖0.2％、蔗糖0.3％、海藻糖0.5％、谷氨酸0.1％、羧甲基纤维素钠1％、海藻酸钠2％以及溶液介质。
4.如权利要求1～3任一项所述一种细胞运输用保持液，其特征在于：其制备方法包括：
1)称取羧甲基纤维素钠和海藻酸钠，加入去离子水，在121℃条件下高压灭菌20min，冷却至室温备用，得胶体A；
2)称取葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸，用细胞培养基溶解，0.22um滤器过滤除菌，得溶液B；
3)按1：1比例混合胶体A和溶液B，混匀即得。
5.如权利要求1～3任一项所述一种细胞运输用保持液，其特征在于：其使用方法为：将运输细胞1500rpm/min下离心5min后，倾倒上清液至剩余100uL的液体，吸打混匀；加入所述保持液1mL并吸打分散均匀后，即可进行常温运输。
6.一种细胞运输方法，其特征在于：在常温条件下将细胞分散在如权利要求1～5任一项所述的细胞运输用保持液中进行运输。
7.如权利要求6所述一种细胞运输方法，其特征在于：包括以下步骤：将运输细胞1500rpm/min下离心5min后，倾倒上清液至剩余100uL的液体，吸打混匀；加入所述保持液1mL并吸打分散均匀后，即可进行常温运输。
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