CN113092598A - 一种米格列醇中间体的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体公开了一种米格列醇中间体的检测方法。该方法包括如下步骤：配制对照品和供试品溶液，并分别注入高效液相色谱仪，采用氨基键合相色谱柱，以甲醇‑乙腈‑甲酸铵缓冲液体系为流动相进行洗脱，以示差折光检测器进行检测。本发明的检测方法能够同时准确检测底物葡萄糖、乙醇胺及N‑羟乙基葡萄糖胺，能够将底物葡萄糖、乙醇胺、N‑羟乙基葡萄糖胺和杂质完全分开，分离度高，准确检测目的产物N‑羟乙基葡萄糖胺的纯度，消除葡萄糖、乙醇胺及杂质对N‑羟乙基葡萄糖胺的影响。本发明的检测方法稳定可靠，重复性、耐用性好，为米格列醇中间体制备生产提供一种便利的检测方法。

Description

一种米格列醇中间体的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种米格列醇中间体的检测方法。
背景技术
糖尿病是最为常见的一种内分泌代谢失调引起的疾病，主要分为I型糖尿病和II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病，NIDD)，其中，又以II型糖尿病为主。目前糖尿病的治疗手段主要包括：饮食治疗、运动治疗、口服降糖药物及皮下注射胰岛素等。常用的治疗II型糖尿病药物主要有磺酰脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂类等。黄酰脲类主要是刺激B细胞释放胰岛素，但该类药物副作用较大，可引起低血糖、胃肠反应、腹痛、肝损伤及严重的体重增加。双胍类主要是促进肌肉对葡萄糖的摄取和利用，抑制糖异生作用，其对肝肾疾病患者易引起乳酸性酸中毒。α-葡萄糖苷酶抑制剂类有多种药理活性，降糖效果显著，副作用小，是治疗II型糖尿病的高效、安全药物。
作为一种新型α-葡萄糖苷酶抑制剂，米格列醇(Miglitol)能竞争性抑制α-葡萄糖苷酶，减少糖类化合物的代谢，降低糖类在小肠的吸收，从而稳定饭后血浆葡萄糖浓度。该药物安全有效，且一般耐受性良好，已成为治疗II型糖尿病的首选药物。
米格列醇(Miglitol)是拜耳公司在1997年度上市的新型抗糖尿病药物。它是从杆菌肉汤培养基中发现的一种新型肠道α-葡萄糖苷酶抑制剂，是1-脱氧野尻霉素的母体修饰产物，属于N-取代-1-脱氧野尻霉素类型，结构与葡萄糖相似。化学名为10(2-羟乙基)-2-(羟甲基)-3,4,5-哌啶三醇；结构式如下：
Figure BDA0002360420330000011
米格列醇的合成工艺主要有两类：(1)化学合成法：通常是先得到1-脱氧野尻霉素，再将其修饰后引入不同的取代基，以获得各种衍生物，再与环氧乙烷反应制取米格列醇；(2)化学合成和生物催化相结合的方法：以葡萄糖为起始原料，与乙醇胺制得N-羟乙基葡萄糖胺，利用微生物转化为呋喃型葡萄糖胺，最后还原得到米格列醇。
N-羟乙基葡萄糖胺是合成米格列醇的重要中间体，其制备过程中，需要对其进行质量控制。在日常生产中，不单独控制N-羟乙基葡萄糖胺的质量情况，仅仅通过分光光度法控制反应后的含糖量及薄层色谱法控制米格列醇底物的转化情况，通过含糖量推测反应的程度。这种方法不能准确控制中间体N-羟乙基葡萄糖胺的纯度，不能有效检测反应起始物料葡萄糖和乙二胺的残留量及其他未知杂质的含量。
鉴于以上现有技术的不足，急需提供一种高效液相检测方法，来有效检控米格列醇生产工艺中的中间体N-羟乙基葡萄糖胺。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明提供一种米格列醇中间体N-羟乙基葡萄糖胺的液相检测方法，该方法能够有效检控米格列醇生产过程N-羟乙基葡萄糖胺、底物葡萄糖、乙醇胺及未知杂质的含量，该方法稳定可靠，重复性、耐用性好，为米格列醇中间体制备生产提供一种便利的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种米格列醇中间体的检测方法，配制对照品和供试品溶液，并分别注入高效液相色谱仪，采用氨基键合相色谱柱，以甲醇-乙腈-甲酸铵缓冲液混合体系为流动相进行洗脱，以示差折光检测器进行检测。
优选地，所述氨基键合相色谱柱为氨丙基或酰胺基键合相色谱柱，进一步优选色谱柱为Waters Xbridge Amide色谱柱(规格4.6×250mm，3.5μm)，纳微HILIC柱，或Luna NH2柱；其色谱柱规格为4.6×250mm，5μm。
优选地，所述流动相中甲酸铵缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L。
进一步优选地，所述甲酸铵缓冲液的pH为3.0～4.0，甲酸调节pH。
优选地，所述流动相中甲醇-乙腈-甲酸铵缓冲液的体积比为80～120:700～800:200～300；进一步优选地，所述流动相中甲醇-乙腈-甲酸铵缓冲液的体积比为100:700:300。
优选地，所述流动相流速为0.3～0.5ml/min，优选为0.4ml/min。
在另一个实施方案中，流动相中的甲醇用异丙醇代替。
优选地，所述检测方法中色谱柱温度为35～45℃，优选为40℃。
优选地，所述的检测方法示差折光检测器检测池温度为35～45℃，优选为40℃。
优选地，所述的检测方法进样量为20μL。
本发明所述的检测方法，可通过以下步骤实现。
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品，置于量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品，置于量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品，置于量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品，置于量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，检测条件如下：
色谱柱：Waters Xbridge Amide色谱柱，纳微HILIC柱，或Luna NH2柱；其色谱柱规格为4.6×250mm，3.5μm；
色谱柱柱温：35～45℃；
流动相：甲醇-乙腈-(0.01～0.1mol/L,pH3.0～4.0)甲酸铵缓冲液(80～120:700～800:200～300)，或异丙醇-乙腈-(0.01～0.1mol/L,pH3.0～4.0)甲酸铵缓冲液(80～120:700～800:200～300)；
流动相流速：0.3～0.5ml/min；
示差折光检测池温度：35～45℃；
进样量：20μL。
本发明的检测方法，能够同时准确检测底物葡萄糖、乙醇胺及N-羟乙基葡萄糖胺，能够将底物葡萄糖、乙醇胺、N-羟乙基葡萄糖胺与杂质完全分开，分离度高，准确检测目的产物N-羟乙基葡萄糖胺的纯度，消除葡萄糖、乙醇胺及杂质对N-羟乙基葡萄糖胺的影响。本发明的检测方法稳定可靠，重复性、耐用性好，为米格列醇中间体制备生产提供一种便利的检测方法。
附图说明
图1是实施例1乙醇胺对照品色谱图；
图2是实施例1葡萄糖对照品色谱图；
图3是实施例1米格列醇中间体1对照品色谱图；
图4是实施例1供试品色谱图；
图5是实施例2乙醇胺对照品色谱图；
图6是实施例2葡萄糖对照品色谱图；
图7是实施例2米格列醇中间体1对照品色谱图；
图8是实施例2供试品色谱图；
图9是实施例3乙醇胺对照品色谱图；
图10是实施例3葡萄糖对照品色谱图；
图11是实施例3米格列醇中间体1对照品色谱图；
图12是实施例3供试品色谱图；
图13是实施例4乙醇胺对照品色谱图；
图14是实施例4葡萄糖对照品色谱图；
图15是实施例4米格列醇中间体1对照品色谱图；
图16是实施例4供试品色谱图；
图17是实施例5乙醇胺对照品色谱图；
图18是实施例5葡萄糖对照品色谱图；
图19是实施例5米格列醇中间体1对照品色谱图；
图20是实施例5供试品色谱图；
图21是对比实施例1乙醇胺对照品色谱图；
图22是对比实施例1葡萄糖对照品色谱图；
图23是对比实施例1米格列醇中间体1对照品色谱图；
图24是对比实施例1供试品色谱图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或这等同替换均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.02mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.01mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.04mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.02mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：Waters Xbridge Amide色谱柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，3.5μm；
色谱柱柱温：40℃；
流动相：甲醇-乙腈-(0.05mol/L，pH3.0)甲酸铵缓冲液(80:700:300)
流动相流速：0.4ml/min；
示差折光检测池温度：40℃；
进样量：20μL。
色谱图见图1-图4，从图1可以看出乙醇胺的出峰时间为11.731min，从图2可以看出，葡萄糖的出峰时间为13.594min，从图3可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为16.794min，三种物质出峰时间不同，供试品检测中互不干扰。从图4可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1完全分开，米格列醇中间体1的分离度为2.28，葡萄糖的分离度为2.52，乙醇胺的分离度为2.82。
实施例2
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.01mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.03mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.01mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.02mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：Waters Xbridge Amide色谱柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，3.5μm；
色谱柱柱温：35℃；
流动相：甲醇-乙腈-(0.1mol/L,pH4.0)甲酸铵缓冲液(120:800:200)；
流动相流速：0.5ml/min；
示差折光检测池温度：35℃；
进样量：20μL。
色谱图见图5-图8，从图5可以看出乙醇胺的出峰时间为11.891min，从图6可以看出，葡萄糖的出峰时间为13.870min，从图7可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为16.967min，三种物质出峰时间不同，供试品检测中互不干扰。从图8可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1完全分开，米格列醇中间体1的分离度为2.65，葡萄糖的分离度为0.98，乙醇胺的分离度为1.99。
实施例3
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.03mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.02mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.01mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.05mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：纳微HILIC柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，5μm；
色谱柱柱温：45℃；
流动相：异丙醇-乙腈-(0.01mol/L,pH3.5)甲酸铵缓冲液(100:700:300)；
流动相流速：0.3ml/min；
示差折光检测池温度：45℃；
进样量：20μL。
色谱图见图9-图12，从图9可以看出乙醇胺的出峰时间为12.483min，从图10可以看出，葡萄糖的出峰时间为14.103min，从图11可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为18.518min，三种物质出峰时间不同，供试品检测中互不干扰。从图12可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1完全分开，米格列醇中间体1的分离度为3.21，葡萄糖的分离度为2.14，乙醇胺的分离度为1.65。
实施例4
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.04mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.02mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.04mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.03mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：Luna NH2柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，5μm；
色谱柱柱温：40℃；
流动相：甲醇-乙腈-(0.05mol/L，pH3.0)甲酸铵缓冲液(100:800:200)
流动相流速：0.4ml/min；
示差折光检测池温度：40℃；
进样量：20μL。
色谱图见图13-图16，从图13可以看出乙醇胺的出峰时间为5.605min，从图14可以看出，葡萄糖的出峰时间为6.019min，从图15可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为7.967min，三种物质出峰时间不同，供试品检测中互不干扰。从图16可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1完全分开，米格列醇中间体1的分离度为2.01，葡萄糖的分离度为1.72，乙醇胺的分离度为1.10。
实施例5
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.03mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.03mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.02mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.01mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：Waters Xbridge Amide色谱柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，3.5μm；
色谱柱柱温：40℃；
流动相：甲醇-乙腈-(0.02mol/L，pH3.0)甲酸铵缓冲液(50:800:200)
流动相流速：0.4ml/min；
示差折光检测池温度：40℃；
进样量：20μL。
色谱图见图17-图20，从图17可以看出乙醇胺的出峰时间为15.297min，从图18可以看出，葡萄糖的出峰时间为18.518min，从图19可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为26.413min，三种物质出峰时间不同，供试品检测中互不干扰。从图20可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1完全分开，米格列醇中间体1的分离度为3.64，葡萄糖的分离度为1.02，乙醇胺的分离度为2.02。
对比实施例1
(1)样品制备
对照品溶液配制：精密称取乙醇胺对照品100.03mg，置于10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为乙醇胺对照溶液；精密称取葡萄糖对照品25.04mg，置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为葡萄糖对照溶液；精密称取米格列醇中间体I对照品125.01mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为米格列醇中间体I对照溶液。
供试品溶液配制：精密称取米格列醇中间体I粗品125.04mg，置于25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
(2)色谱系统检测
将上述乙醇胺、葡萄糖及米格列醇中间体I的对照品溶液，供试品溶液分别注入色谱仪检测，记录色谱图，计算各物质的分离度。检测条件如下：
色谱柱：Waters Xbridge Amide色谱柱，其色谱柱规格为4.6×250mm，3.5μm；
色谱柱柱温：40℃；
流动相：乙腈-(0.05mol/L，pH3.0)甲酸铵缓冲液(700:300)
流动相流速：0.4ml/min；
示差折光检测池温度：40℃；
进样量：20μL。
色谱图见图21-图24，从图21可以看出乙醇胺的出峰时间为13.954min，从图22可以看出，葡萄糖的出峰时间为14.103min，从图23可以看出米格列醇中间体1的出峰时间为20.898min，葡萄糖与乙醇胺出峰时间接近，供试品检测中会产生干扰。从图24可以看出，乙醇胺、葡萄糖和杂质及米格列醇中间体1不能完全分开，米格列醇中间体1的分离度为0.58，葡萄糖的分离度为N/A，乙醇胺的分离度为N/A。
实施例6系统适用性试验
系统适用性溶液的准备：精密称取米格列醇中间体I对照品、乙醇胺对照品和葡萄糖对照品，用流动相溶解并稀释至刻度，分别配制成5mg/ml的溶液摇匀，作为系统适用性溶液。将上述系统适用性溶液精密量取20μL注入HPLC高效液相色谱仪，按照实施例1的色谱条件连续进样6次，记录色谱图，并计算米格列醇中间体I峰的理论塔板数，分离度，主峰保留时间和峰面积的相对标准偏差RSD；计算乙醇胺峰与葡萄糖的理论塔板数，分离度，主峰保留时间和峰面积的相对标准偏差RSD。结果见表1。
表1米格列醇中间体I测定方法系统适用性试验结果
Figure BDA0002360420330000091
从表1结果可知，米格列醇中间体I的保留时间RSD为0.28％，峰面积RSD为0.81％，乙醇胺的保留时间RSD为0.53％，峰面积RSD为0.49％，葡萄糖的保留时间RSD为0.34％，峰面积RSD为0.37％。均符合药典要求。
实施例7线性与范围试验
(1)称取米格列醇中间体I对照品配制成10mg/ml的储备液，分别取1.0ml，2.0ml，3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml于10ml量瓶中，用流动相稀释至浓度为1.0mg/ml、2.0mg/ml、3.0mg/ml、4.0mg/ml、5.0mg/ml、6.0mg/ml、7.0mg/ml，取上述浓度溶液和10ml储备液按照实施例1的色谱条件进行检测，以浓度为横坐标，米格列醇中间体I峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程和相关系数。米格列醇中间体I线性和范围试验结果见表2。
表2米格列醇中间体I线性和范围试验结果
Figure BDA0002360420330000101
(2)称取乙醇胺对照品配制成0.04mg/ml的储备液，分别取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml于10ml量瓶中，用溶剂稀释至浓度约0.004mg/ml、0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml、0.020mg/ml、0.024mg/ml、0.028mg/ml，取上述浓度溶液和0.04mg/ml储备液按照实施例1的色谱条件进行检测，以浓度为横坐标，乙醇胺峰峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程和相关系数。乙醇胺线性与范围试验结果见表3。
表3乙醇胺线性范围与试验结果
Figure BDA0002360420330000102
(3)称取葡萄糖对照品配制成0.1mg/ml的储备液，分别取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml于10ml量瓶中，用溶剂稀释至浓度约0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml，取上述浓度溶液和0.1mg/ml储备液按照实施例1的色谱条件进样检测，以浓度为横坐标，葡萄糖峰峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程和相关系数。葡萄糖线性与范围试验结果见表4。
表4葡萄糖线性范围与试验结果
Figure BDA0002360420330000103
从表2-4结果可以看出，米格列醇中间体I、乙醇胺和葡萄糖的浓度-峰面积线性关系良好，r>0.999。
实施例8准确性试验
(1)配制5.0mg/ml米格列醇中间体I对照品溶液共两份，再分别配制浓度为4.0mg/ml、5.0mg/ml、6.0mg/ml的米格列醇中间体I供试品溶液各3份，作为80％、100％和120％的供试品溶液，按照实施例1的色谱条件依法进行测定，计算平均回收率。结果见表5。
表5米格列醇中间体I准确性试验结果
Figure BDA0002360420330000111
(2)配制0.02mg/ml乙醇胺对照品溶液共2份，再分别配制浓度0.016mg/ml、0.02mg/ml、0.024mg/ml的乙醇胺溶液各3份，作为80％、100％和120％的供试品溶液，按照实施例1的色谱条件依法进行测定，计算平均回收率。结果见表6。
表6乙醇胺准确性试验结果
Figure BDA0002360420330000112
(3)配制0.05mg/ml的葡萄糖对照品溶液共2份，浓度为10.0mg/ml的米格列醇中间体I母液100ml,取5ml置于10ml量瓶中，分别加入0.15mg/ml的葡萄糖溶液2.33ml、3.0ml、3.67ml，用流动相稀释至刻度，配制成80％、100％和120％的供试品溶液，各配制3份，按照实施例1的色谱条件依法进行测定，计算平均回收率。结果见表7。
表7葡萄糖准确性试验结果
Figure BDA0002360420330000121
从表5-7可以看出，米格列醇中间体I、乙醇胺和葡萄糖测定平均回收率在95％以上，说明，本方法的准确度高。
实施例9精密度试验
(1)重复性试验
第一天，操作者A配制供试品溶液6份和米格列醇中间体I、乙醇胺及葡萄糖对照品溶液各2份，依实施例1的色谱条件进行检测，按照外标法计算米格列醇中间体I、乙醇胺及葡萄糖的含量，以相对标准偏差RSD验证重复性结果。
(2)中间精密度试验
第二天，操作者B配制供试品溶液6份和米格列醇中间体I、乙醇胺及葡萄糖对照品溶液2份，在不同色谱仪按照实施例1的色谱条件进行检测。按外标法计算米格列醇中间体I、乙醇胺及葡萄糖的含量。计算12个含量的相对标准偏差RSD，作为中间精密度结果。结果见表8。
表8精密度验证结果
Figure BDA0002360420330000122
Figure BDA0002360420330000131
重复性试验中，米格列醇中间体I含量的RSD为0.37，乙醇胺含量的RSD为0.79，葡萄糖含量的RSD为1.82％，精密度试验中，米格列醇中间体I含量的RSD为0.35％，乙醇胺含量的RSD为0.91％，葡萄糖含量的RSD为1.71％。表明该方法精密度良好。
实施例10稳定性试验
配制米格列醇中间体I、乙醇胺和葡萄糖对照溶液，配制米格列醇中间体I供试品溶液，在常温下分别放置8h、于0h、1h、2h、4h、6h、8h进样按照实施例1色谱条件进行测定分析，进样量20μl。分别记录米格列醇中间体供试品溶液中米格列醇中间体I、乙醇胺和葡萄糖的含量变化情况。结果见表9。
表9米格列醇中间体供试品溶液稳定性试验结果
Figure BDA0002360420330000141
从表9结果可知，米格列醇中间体I含量的RSD为0.11％，乙醇胺含量的RSD为0.81％，葡萄糖含量的RSD为1.73％，本发明的方法稳定性良好。
经过验证，本发明的其他技术方案也能达到与实施例1类似的技术效果，其稳定性好、精密度高、专属性耐用性好。

Claims (10)

1.一种米格列醇中间体的检测方法，其特征在于包括如下步骤：配制对照品和供试品溶液，并分别注入高效液相色谱仪，采用氨基键合相色谱柱，以甲醇-乙腈-甲酸铵缓冲液混合体系为流动相进行洗脱，以示差折光检测器进行检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的氨基键合相色谱柱为氨丙基或酰胺基键合相色谱柱，优选为Waters Xbridge Amide色谱柱，纳微HILIC柱，或Luna NH2柱。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中甲酸铵缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述甲酸铵缓冲液pH为3.0～4.0，甲酸调节pH。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中甲醇-乙腈-甲酸铵缓冲液的体积比为80～120:700～800:200～300。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相流速为0.3～0.5ml/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱温度为35～45℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，示差折光检测器检测池温度为35～45℃。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，进样量为20μL。
10.根据权利要求1-9任一项所述的检测方法，其特征在于，用异丙醇代替流动相中的甲醇相。
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