CN113073066B - 罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品。该罗伊氏乳杆菌为保藏号为CGMCC No.21577，能够改善肠道菌群紊乱，减少肠道损伤，改善肠道通透性，促进免疫系统恢复，具有治疗或预防自闭症、多动症、抽动症、抑郁症等神经系统相关疾病过敏反应的效果。

Description

罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物和药物。
背景技术
过敏反应是指已产生免疫的机体在再次接受相同抗原刺激时所发生的组织损伤或功能紊乱的反应。在全球，过敏人群在不断增加。在特定群体中，儿童食物过敏的发病率高达10％。
早期接触微生物能对人体免疫健康产生积极影响的想法至少可以追溯到1989年，当时伦敦卫生与热带医学学院的流行病学家大卫·斯特拉昌(David Strachan)提出了“卫生假说”，认为更小、更清洁的家庭中长大的儿童更容易患过敏症。在随后的几十年中，卫生假说已经演变成以微生物群为中心的模型，在这个模型中，早期接触来自家庭和环境的微生物在降低哮喘、花粉热和湿疹等炎症性疾病以及食物过敏的风险方面发挥着关键作用。目前，“卫生假说”逐步演化为“早期环境影响微菌群从而导致免疫功能失调”的理论。在生命早期，肠道菌群失调如多样性低、肠杆菌/拟杆菌比高，对过敏会产生巨大影响。肠道菌群的代谢产物是菌群与宿主间的重要介质，通过与免疫系统互作以抑制其对过敏原的炎症应答，或通过降低肠道通透性以抑制过敏原穿过肠道屏障，从而促进免疫耐受。
肠道菌群的紊乱引起过敏可能是通过增加肠道通透性发挥作用的。有研究发现，食物过敏的婴儿会出现肠漏，表现为血液中抗原和过敏原从肠道转移的增加。消化道的内部通常不受免疫监测，但如果肠道屏障的通透性增加，食物衍生的蛋白质会渗出到达体内，引发过敏反应。一些引起儿童过敏的食物，例如花生和牛奶中未能消化的蛋白质，这些蛋白质很可能完好无损地穿过受损的肠道屏障，并引发免疫反应。有研究发现，当用抗生素处理小鼠的肠道菌群后，再给它们喂食花生，这些小鼠的血液中可以发现完整花生蛋白。
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)是存在于肠道内的乳酸菌，作为益生菌使用，对肠黏膜具有很强的黏附能力，并且还具有优异的耐酸、耐胆盐和广谱抑菌特性，能广泛抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等的生长。
发明内容
本发明经研究发现，从健康女性乳汁中分离的罗伊氏乳杆菌(保藏号为CGMCCNo.21577)能够改善肠道菌群紊乱，减少肠道损伤，改善肠道通透性，促进免疫系统恢复，具有治疗或预防过敏反应的效果。
因此，本发明提供一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，所述罗伊氏乳杆菌为保藏号为CGMCC No.21577。
上述罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗过敏反应的产品中的应用。
在其中一个实施例中，所述产品是用于预防或治疗神经系统发育障碍和/或情绪障碍伴随的过敏性疾病。
在其中一个实施例中，所述神经系统发育障碍为自闭症谱系障碍或抽动症；及/或，所述情绪障碍包括多动症。
一种组合物，包括上述罗伊氏乳杆菌和/或上述罗伊氏乳杆菌的发酵产物。
在其中一个实施例中，还包括其他益生菌。
在其中一个实施例中，所述其他益生菌选自乳酸杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌、乳球菌、丙酸杆菌、明串球菌、葡萄球菌、芽孢杆菌、片球菌、大肠杆菌、普雷沃氏杆菌、粪栖杆菌、布劳特氏菌、拟杆菌、厚壁菌和酵母菌中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述罗伊氏乳杆菌为活菌和/或灭活菌体。
在其中一个实施例中，还包括益生元，所述益生元选自菊粉、洋蓟提取物、菊苣根提取物、菊芋根提取物、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽、低聚木糖、水苏糖、低聚甘露糖、低聚阿拉伯糖、抗性糊精和抗性淀粉中的至少一种。
一种药物，制备所述药物的原料包括上述罗伊氏乳杆菌或上述组合物，和药学上可接受的辅料。
附图说明
图1是实施例1中罗伊氏乳杆菌LR99显微镜观察图；
图2是实施例3中服用益生菌或安慰剂后肠漏改善情况；
图3是实施例4中服用益生菌或安慰剂后CD4+T细胞的改善情况；
图4是实施例4中服用益生菌或安慰剂后肠道菌群在门水平的组成；
图5是实施例4中服用益生菌或安慰剂后肠道菌群在属水平的热图；
图6是实施例4中服用益生菌或安慰剂后肠道菌群Shannon指数的改变；
图7～图9是实施例4中服用益生菌或安慰剂后肠道菌群在代表性有益菌种组成的对比。
本申请提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，菌株名为LR99，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.21577，该菌株于2020年12月31日由保藏中心收到并登记入册，且经保藏中心于2020年12月31日检测为存活菌株。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本发明公开内容更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本发明一实施方式提供了一种罗伊氏乳杆菌，该罗伊氏乳杆菌的编号为LR99，从健康女性乳汁中分离得到。已于2020年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，保藏号为CGMCCNo.21577。
经验证，上述罗伊氏乳杆菌可以重新编程内皮CD4+T细胞到免疫调节T细胞，发挥免疫调节作用，促进Treg细胞增加，使得Th2反应降低，从而利于干预、缓解或预防过敏反应，促进免疫系统恢复。并且，上述罗伊氏乳杆菌也具有代谢色氨酸的能力，其色氨酸的代谢产物可以改善肠道的屏障功能，抑制肠道屏障通透性的增加，减少肠道损伤，预防或缓解肠漏，也能进一步预防或缓解过敏反应。此外，上述罗伊氏乳杆菌还能够提高肠道菌群的多样性，提高肠道益生菌(例如乳酸杆菌、双歧杆菌和阿克曼氏菌等)的数量，改善肠道菌群紊乱。
基于此，本发明一实施方式提供一种上述罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗过敏性反应的产品中的应用。可选地，产品是用于预防或治疗神经系统发育障碍和/或情绪障碍伴随的过敏性疾病。具体地，神经系统发育障碍为自闭症谱系障碍(Autism SpectrumDisorder，ASD)或抽动症；情绪障碍包括多动症、抑郁症等。过敏性疾病从新生儿到老年人的各个年龄阶段都可能发生，往往具有明显的遗传倾向。在过敏性疾病中，以速发型过敏反应比较常见，其主要类型有皮肤过敏反应、呼吸道过敏反应、消化道过敏反应及过敏性休克等。
基于上述罗伊氏乳杆菌的上述功能，本发明一实施方式还提供了一种上述罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗肠漏的产品中的应用。
基于上述罗伊氏乳杆菌的上述功能，本发明一实施方式还提供了一种上述罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗改善肠道菌群紊乱的产品中的应用。
本发明一实施方式还提供了一种上述罗伊氏乳杆菌的制备方法，该制备方法采用高密度发酵制备上述罗伊氏乳杆菌。具体地，该制备方法包括步骤S1～S3。
步骤S1：活化上述罗伊氏乳杆菌。
具体地，对罗伊氏乳杆菌菌行三次活化培养用于提高菌株活力，三次活化培养的温度为37℃，时间为16h～18h。
步骤S2：将活化后的上述罗伊氏乳杆菌接种到发酵罐中发酵培养。
将改良的MRS培养基进行灭菌处理后降温到37℃，以2.5％～3.5％(v/v)的接种量接种到发酵罐进行发酵，每小时检测发酵液的pH和OD值，待发酵到pH和OD值相对平缓则说明菌株到达对数末期即将进入稳定期，发酵完成。然后对发酵液降温、低温离心、收集菌体及磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤，制备罗伊氏乳杆菌菌体。
步骤S3：将步骤S2制得的菌体冻干，制成冻干粉。
具体地，将步骤S2制得的菌体与冻干保护剂混合后乳化，然后真空冷冻干燥，制备冻干粉。可选地，冻干保护剂选自脱脂奶粉、海藻糖、低聚果糖、乳糖、葡萄糖、蔗糖、L-抗坏血酸钠、L-苹果酸及L-乳酸中的至少一种。当然，在其他实施例中，冻干保护剂不限于上述，还可以是其他能够在冻干过程中保持菌体活性的物质。可选地，菌体与冻干保护剂的体积之比为1：(2～10)。
可以理解的是，在一些实施例中，步骤S3可以省略。此时，制备的是罗伊氏乳杆菌的菌体。
上述罗伊氏乳杆菌的制备方法采用高密度发酵制备上述罗伊氏乳杆菌，产量高。
此外，基于上述罗伊氏乳杆菌的上述功能，本发明一实施方式还提供了一种组合物，该组合物包括上述罗伊氏乳杆菌和/或上述罗伊氏乳杆菌的发酵产物。
具体地，上述罗伊氏乳杆菌的发酵产物是指上述罗伊氏乳杆菌的培养产物，包括位于菌体内的代谢产物和分泌到菌体外的代谢产物中的至少一种。在使用时，取上述罗伊氏乳杆菌培养之后的培养液或将该培养液的进行冻干处理而得到的冻干粉末。或者，取上述罗伊氏乳杆菌培养之后裂解的裂解液或将该裂解液的进行纯化、冻干处理而得到的冻干粉末。
在一些实施例中，上述组合物包括上述罗伊氏乳杆菌和制成菌剂所需的辅料。上述组合物的活性成分包括上述罗伊氏乳杆菌。在一个可选地具体示例中，上述组合物包括上述罗伊氏乳杆菌和冻干保护剂。冻干保护剂如上文所述，此处不再赘述。
在一些实施例中，上述组合物还包括其他益生菌。益生菌也作为上述组合物的活性成分。也即是，上述组合物包括活性成分，该活性成分包括上述罗伊氏乳杆菌和其他益生菌。可选地，其他益生菌选自乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、乳球菌(Lactococcus)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、明串球菌(Leuconostoc)、葡萄球菌(Staphylococcus)、芽孢杆菌(Bacillus)、片球菌(Pediococcus)、大肠杆菌(Escherichia.coli)(例如Nissle1917)、普雷沃氏杆菌(Prevotella)、粪栖杆菌(Faecalibacterium)、布劳特氏菌(Blautia)、拟杆菌(Bacteroidetes)、厚壁菌(Firmicutes)和酵母菌中的至少一种。
在一个可选地具体示例中，乳酸杆菌选自植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.Lactis)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)和瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)中的至少一种。
在一个可选地具体示例中，双歧杆菌选自青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentic)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、动物双歧杆菌(Bifidobaterium animalis)和乳双歧杆菌(Bifidobateriumlactis)中的至少一种。
在一个可选的具体示例中，乳球菌选自乳酸乳球菌乳酸亚种(LactococcusLactis subsp.Lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus Lactis subsp.Cremoris)和乳酸乳球菌双乙酰亚种(Lactococcus Lactis subsp.Diacetylactis)中的至少一种。
在一个可选的具体示例中，丙酸杆菌选自费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.Shermanii)和产丙酸丙酸杆菌(Propionibacterium acidipropionici)中的至少一种。明串球菌为肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.Mesenteroides)。片球菌选自乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)和戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)中的至少一种。葡萄球菌选自小牛葡萄球菌(Staphylococcus vitulinus)、肉葡萄球菌(Staphylococcusxylosus)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)中的至少一种。芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。酵母菌选自马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、产朊假丝酵母(Cadida atilis)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)和卡氏酵母(Saccharomyces carlsbergensis)中的至少一种。可以理解的是，本实施方式中的其他益生菌不限于上述，还可以是除其他LR99外的益生菌。
在一些是实施例中，上述组合物还包括益生元。通过益生元促进上述罗伊氏乳杆菌的定植及繁殖，同时也促进肠道中的其他益生菌的生长。可选地，益生元选自菊粉、洋蓟提取物、菊苣根提取物、菊芋根提取物、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽、低聚木糖、水苏糖、低聚甘露糖、低聚阿拉伯糖、抗性糊精和抗性淀粉中的至少一种。当然，在其他实施例中，上述组合物中的益生元不限于上述，还可以是其他可以促进益生菌生长和繁殖的物质。
在一些实施例中，上述组合物还包括营养物质，所述营养物质选自GABA、色氨酸、番茄红素、β-胡萝卜素、维生素B6、维生素B12、辅酶Q10、牛磺酸、果胶、β-葡聚糖、岩藻糖、卡拉胶、瓜尔豆胶、柑橘纤维、苹果纤维、小球藻、苜蓿粉、青汁粉和膳食纤维中的至少一种。
在一些实施例中，上述组合物还包括抗氧化剂。具体地，抗氧化剂选自生育酚、类胡萝卜素、抗坏血酸/维生素C、抗坏血酸棕榈酸酯、多酚、谷胱甘肽和超氧化物歧化酶中的至少一种。
在一些实施例中，在上述组合物中，上述罗伊氏乳杆菌的质量百分含量为1％～30％。进一步地，上述罗伊氏乳杆菌的质量百分含量为1％～20％。可选地，在上述组合物中，上述罗伊氏乳杆菌的活菌含量为1.2×106CFU/g～1.6×1012CFU/g。进一步地，上述罗伊氏乳杆菌的活菌含量为3.0×1010CFU/g～2.0×1011CFU/g。
在一些实施例中，上述组合物中的罗伊氏乳杆菌为活菌。在另一些实施例中，上述组合物中的罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌的灭活菌体。在另一些实施例中，上述组合物中的罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌活菌和罗伊氏乳杆菌的灭活菌体的混合物。
上述组合物的剂型没有特别限制，例如可以是粉剂、锭剂、片剂或胶囊剂等。
在一些实施例中，以重量份数计，上述组合物包括罗伊氏乳杆菌冻干粉10份～30份、低聚果糖15份～25份、山梨糖醇或麦芽糖醇40份～65份、和硬脂酸镁5份～10份，其中，在上述组合物中，罗伊氏乳杆菌的含量为1.2×106CFU/g～1.5×1010CFU/g。
在一些实施例中，以重量份数计，上述组合物包括0.5份～30份的罗伊氏乳杆菌LR99冻干菌粉、1份～20份的其他益生菌、20份～80份的益生元、2份～10份的营养物质和0.1份～10份的抗氧化剂。其他益生菌、益生元、营养物质和抗氧化剂如上述，此处不再赘述。进一步地，上述组合物包括1份～10份的罗伊氏乳杆菌LR99冻干菌粉、1份～10份的其他益生菌、30份～80份的益生元、2份～5份的营养物质和0.5份～10份的的抗氧化剂。可选地，在上述组合物中，罗伊氏乳杆菌的含量为1.8×106CFU/g～6.5×1011CFU/g，其它益生菌的单菌的含量为1×106CFU/g～6×109CFU/g。进一步地，罗伊氏乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g～1×1011CFU/g。
上述组合物包括上述罗伊氏乳杆菌和/或上述罗伊氏乳杆菌的发酵产物，能够提高肠道菌群的多样性，提高肠道益生菌(例如乳酸杆菌、双歧杆菌及阿克曼氏菌等)的数量，改善肠道菌群紊乱，减少肠道损伤，能够预防或缓解肠漏和过敏反应，促进免疫系统恢复。
上述组合物可以作为制备用于药品或动物饲料的原料。使用时，按常规工艺，直接混合或经过发酵之后做出终产品。可以理解的是，在一些实施方式中，上述组合物也直接可以作为药品。
基于上述罗伊氏乳杆菌或上述组合物的功能，本发明一实施方式还提供了一种药品，制备该药品的原料包括上述罗伊氏乳杆菌或上述组合物、和药学上可接受的辅料。
基于上述罗伊氏乳杆菌或上述组合物的功能，本发明一实施方式还提供了一种用于预防或治疗肠漏和/或过敏反应的方法，该方法包括服用上述组合物或服用以上述组合物为原料制备的产品，其中，以组合物中的益生菌的数量计，剂量为3.0×106CFU/kg体重/天～1.2×1011CFU/kg体重/天。进一步地，以组合物中的微生物的数量计，剂量为1.0×106CFU/kg体重/天～6.0×1010CFU/kg体重/天。
具体实施例
以下结合具体实施例进行详细说明。以下实施例如未特殊说明，则不包括除不可避免的杂质外的其他组分。实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。
实施例1
从健康女性的乳汁中采用厌氧培养分离一株菌株，经16S rRNA全长测序鉴定和质谱鉴定，该菌株是新菌株，属于罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，命名为罗伊氏乳杆菌LR99(简称“LR99”或“LR-99”)。该菌株已于2020年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，保藏号为CGMCC No.21577。
1.罗伊氏乳杆菌LR99的分类学特征：
(1)显微镜下观察罗伊氏乳杆菌LR99，结果如图1所示。
(2)理化试验结果如表1和2所示。
表1
Figure GDA0003267317230000111
由表1可知，罗伊氏乳杆菌LR99为革兰氏阳性菌，不形成芽孢，无运动性，接触酶阴性，氧化酶阴性，厌氧，适宜培养温度为37℃。
表2
Figure GDA0003267317230000112
Figure GDA0003267317230000121
表2中“+”表示能够代谢；“-”表示无法代谢。
由表2可知，罗伊氏乳杆菌LR99能够代谢核糖、木糖、麦芽糖、乳糖、棉子糖、菊粉、淀粉、甘露糖、蜜二糖、半乳糖、蔗糖、L-阿拉伯糖和水杨苷，但不能代谢海藻糖、松三糖、果糖、纤维二糖、葡萄糖酸钠、甘露醇和山梨醇。
2.罗伊氏乳杆菌LR99的人工胃液和肠液耐受性：
测试罗伊氏乳杆菌LR99的人工胃液和肠液耐受性，同时以目前实验室保存的，从市售益生菌产品中分离的耐酸性能极好、可以通过胃肠道存活的罗伊氏乳杆菌DSM17938作为对比。
罗伊氏乳杆菌DSM17938和罗伊氏乳杆菌LR99在人工胃酸(pH＝3)和人工肠液(pH＝8)中的存活率检测结果如表3所示。
表3
Figure GDA0003267317230000122
由表3可知，罗伊氏乳杆菌DSM17938在人工胃液中处理1h时活菌存活率71.2％，处理1.5h活菌存活率33.1％，而罗伊氏乳杆菌LR99处理1h时活菌存活率93.1％，处理1.5h活菌存活率69.7％，这表明罗伊氏乳杆菌LR99具有相对较好的耐胃酸能力，可以大部分顺利通过胃到达肠道发挥作用。
由表3可知，罗伊氏乳杆菌DSM17938在人工肠液(pH＝8)中处理1小时活菌存活率25.8％，处理2小时后的存活率为18.5％；而罗伊氏乳杆菌LR99在人工肠液中处理1小时活菌存活率48.8％，处理2h后的存活率为37.8％。
上述结果表明，经过人工胃液和肠液消化后罗伊氏乳杆菌LR99仍能较好的存活，罗伊氏乳杆菌LR99相对商业化菌株具有较好耐消化液能力，可以在肠道内顺利存活并定殖。
3.罗伊氏乳杆菌LR99毒力实验及安全性检测：
(1)将罗伊氏乳杆菌LR99接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养48小时，计数培养液中罗伊氏乳杆菌LR99活菌数为3.2×109CFU/mL，然后将培养液原液经口以20.0mL/kg体重的比例连续给小鼠(健康雄性BALB/C小鼠，6～8周龄，体重16～18g，维持室温(25±2℃)，相对湿度(55±2)％，12h/12h光照，自由进食和饮水)灌胃3天，之后再观察7天。同时将MRS液体培养基以20.0mL/kg体重的量灌胃小鼠作为对照组。
结果显示，与对照组相比，罗伊氏乳杆菌LR99的培养物原液，未观察到两组受试小鼠有毒性反应或死亡，小鼠体重增长也无统计学差异(p＞0.05)。
(2)采用SN/T 1944-2007《动物及其制品中细菌耐药性的测定》方法，评估罗伊氏乳杆菌LR99的抗生素敏感性能。
结果显示，罗伊氏乳杆菌LR99对氨苄西林(Ampicillin)、青霉素G(PenicillinG)、红霉素(Erythromycin)、氯霉素(Chloramphenicol)、克林霉素(Clindamycin)、万古霉素(Vancomycin)和四环素(Tetracycline)等敏感。符合欧洲食品安全委员会(EuropeanFoodSafety Authority)对食用细菌耐药性评价规范中的要求；并且罗伊氏乳杆菌LR99不含外源抗生素耐药基因，食用安全。
实施例2
本实施例用于说明罗伊氏乳杆菌LR99高密度发酵及冻干菌粉的制备过程。
(1)将罗伊氏乳杆菌LR99在采用改良MRS培养基中进行厌氧培养，获得发酵用菌种。
(2)对罗伊氏乳杆菌LR99菌株进行三次活化培养用于提高菌株活力，三次活化培养的温度为37℃，时间为16h～18h之间，菌株活化完成后，对罗伊氏乳杆菌LR99株菌进行生长曲线检测，结果如表4所示。
表4
时间 pH OD
5h 4.48 4.5
6h 4.31 4.71
7h 4.17 6.05
8h 4.06 6.97
9h 3.73 7.26
10h 3.67 7.78
由罗伊氏乳杆菌LR99的生长曲线检测结果可知，罗伊氏乳杆菌LR99到达生长对数末期的时间点，即发酵收获点。对罗伊氏乳杆菌LR99种子进行培养达到对数末期时进行收获。收获的种子冷藏在4℃冰箱。
(3)发酵罐上罐：将改良的MRS培养基进行灭菌处理后迅速降温到37℃，以3％接种量接种到发酵罐进行发酵，每小时检测发酵液的pH和OD值，待发酵到pH和OD值相对平缓则说明菌株到达对数末期即将进入稳定期，此时发酵完成，立即进行降温，发酵液进行低温离心、收集菌体，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后，加冻干保护剂(脱脂奶粉)后进行乳化，完成后进行真空冷冻干燥，得到菌粉，将制备的冻干菌粉放置于-20℃以下保存。其中，经检测，发酵液中的活菌数为2.75×109CFU/mL，乳化液中的活菌数为4.7×1010CFU/mL，冻干粉中的活菌数为1.55×1011CFU/g。
实施例3
本实施例用于说明罗伊氏乳杆菌LR99对改善肠漏的影响
乳酸有D型和L型，正常人体只有L-乳酸，D-乳酸是细菌发酵的代谢产物，肠道多种细菌均可产生，即使从食物中摄取后，正常情况下很少被吸收入血，并且哺乳动物不具备将其快速降解的酶系统。当肠黏膜通透性增加时，肠道中的细菌产生的大量D-乳酸通过受损的黏膜入血，使血中D-乳酸的水平升高。监测血中D-乳酸的水平可及时反映肠黏膜损害程度和通透性变化，可用于肠道感染，内毒素血症，全身性炎症反应，反复发烧，呕吐等的辅助评价。
脂多糖(LPS)也称为细菌内毒素，是由革兰氏阴性菌细胞壁上的成分，LPS对动物来说是一种毒性物质。LPS的结构可分为3个部分：糖脂结构域-脂质A、糖残基短链-核心寡糖和高变的多糖结构域-O抗原。LPS的结构决定了其对TLR4的激动剂/拮抗剂作用。在体内，LPS与TLR4/MD-2受体复合物结合，通过Myd88依赖性或TRIF依赖性途径激活不同的信号通路；不同部位的肠道上皮细胞TLR表达量不同，能够防止LPS引起的炎症反应，并对抗致病菌。
LPS与多种疾病的发病有关，如IBD及小肠结肠炎等肠道疾病，甚至帕金森和阿尔兹海默症等。LPS不仅可以进入血液，还能够进入并可一生滞留在脑内，可能引起阿尔兹海默病。
血液中的LPS水平可反映肠道的通透性，正常的肠道屏障是不允许LPS进入的，血液中较高水平的LPS预示着肠道细菌或LPS移位到了血液，说明肠道通透性的增加，出现肠漏症状的几率增加。血液中LPS的含量多少还能指示炎症反应和应激状态，过多的LPS可引起人体免疫系统异常，出现慢性或急性炎症反应，可出现发热、疼痛等急性炎症等，可用于肠道感染，内毒素血症，全身性炎症反应，反复发烧，呕吐、精神疾病、应激反应等的辅助评价。
任何导致肠道通透性增加的应激反应，包括心理的和生理的，都可能潜在地导致细菌位移。细菌移位是指肠道活细菌从肠道穿过上皮粘膜进入机体。细菌可以经由肠系膜淋巴结进入淋巴系统在全身循环。细菌能进入血液循环导致菌血症；还可以位于组织中。细菌位移可使小肠细菌过度生长、肠道损伤，甚至休克。
通过小鼠血清中D-乳酸和LPS含量来评估罗伊氏乳杆菌LR99对肠道通透性，具体如下：
将6周龄的C57BL/6J小鼠12只，每笼3只小鼠进行饲养，自由进食和饮水，小鼠的生长环境条件为：环境温度(23±2)℃、相对湿度(50±10)％、光照模式(12h黑暗/12h光照)。待小鼠适应环境一周后，随机分为对照组和益生菌组，并对益生菌组小鼠灌胃益生菌制剂(益生菌制剂由实施例2制备的罗伊氏乳杆菌LR99冻干粉和麦芽糊精组成)，灌胃剂量为100亿CFU/只/天；同时对对照组小鼠灌胃等量的安慰剂(麦芽糊精)。
从第2周开始，饲喂安慰剂或益生菌，同时给各组进行噪声和夜间光照的复合应激刺激。
将各组小鼠灌胃并饲养六周后从尾静脉末梢收集血液。将血液3000g下离心15分钟。采用肠道屏障功能分析系统(JY-DLT，北京中生金域诊断技术股份有限公司)，按照操作说明书，检测血清中的D-乳酸和LPS含量。然后将各组小鼠血清中D-乳酸和LPS含量采用SPSS统计软件处理所得数据，以均值±标准差表示，采用独立样本检验进行组间比较，P<0.05认为差异有统计学意义，结果如图2所示。
由图2可知，与对照组相比，益生菌组的LPS和D-乳酸水平明显降低(P<0.05)。表明应激刺激导致肠道通透性的增加，益生菌可以降低肠道通透性，减少内毒素血症，全身性炎症反应等风险。
实施例4
本实施例用于说明罗伊氏乳杆菌LR99对免疫系统的促进作用
在动物模型及人体研究中，益生菌影响CD4+T细胞分化以调控过敏性疾病。益生菌可通过减少Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13等)、减少IgE、增加IL-10、促进Treg分化等方式，抑制哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、食物过敏及荨麻疹等过敏性疾病。研究发现，特定肠道菌群可以将色氨酸代谢为吲哚-3-乙醇、吲哚-3-丙酮酸或吲哚-3-乙醛，可改善肠道的屏障功能。在体内，色氨酸代谢产物可以抑制肠道屏障通透性的增加。
为了检验罗伊氏乳杆菌LR99是否能影响CD4+T细胞分化以调控过敏性疾病，将6周龄的C57BL/6J小鼠18只，每笼3只小鼠分组饲养，自由进食和饮水。适应周围环境一周之后，随机分为三组，每组小鼠6只，分别每天喂养安慰剂(对照组)、罗伊氏乳杆菌LR99冻干粉(终活菌数为1×109CFU/只)(LR-99组)、和罗伊氏乳杆菌LR99冻干粉(终活菌数为1×109CFU/只)+L-色氨酸(质量浓度0.24％)(L-色氨酸从Research Diets获得，LR-99+色氨酸组)。喂养4周后，处死小鼠后将肠道和脾脏取出。通过机械破坏法制备脾脏的单细胞悬液以分离T细胞。脾脏用胶原酶D 100ng/mL(Invitrogen)消化以进行DC分离。对于流式细胞术，使用以下荧光团标记的单克隆抗体：来自BD Biosciences的抗CD8(53-6.7)，抗CD4(GK1.5)对于幼稚T细胞分离，用“幼稚的CD4+ T细胞分离试剂盒”(Miltenyi Biotec)富集单细胞悬液，然后分选CD4+细胞。使用FACSCantoII(BD Biosciences)处理样品，使用FACSAria II(BDBiosciences)进行荧光激活的细胞分选，用FlowJo软件(TreeStar)分析数据，结果如图3所示。
由图3可知，罗伊氏乳杆菌LR99和罗伊氏乳杆菌LR99结合色氨酸后均可显著促进CD4+T细胞分化(p<0.05)。此外，单独罗伊氏乳杆菌LR99与结合色氨酸之后对增加CD4+T细胞分化没有显著差异(p>0.05)。
实施例5
本实施例用于说明LR99对肠道微生物组成的影响
(1)提取DNA：将实施例4处死的各组小鼠后收集的盲肠内容物采用TIANmap粪便DNA试剂盒(TIANGEN，目录号DP328)提取粪便菌群的DNA。使用Qubit仪对提取的DNA进行定量检测。使用1％琼脂糖凝胶电泳检测：电压100V，40min。UVI凝胶成像系统拍照记录：DNA电泳未出现杂带、拖尾，说明DNA片段纯度良好，无明显降解。取适量样品于离心管当中，使用无菌水稀释样品至1ng/μL。DNA于-20℃冰箱内储存备用。
(2)细菌16S rRNA基因扩增：以稀释后的基因组DNA为模板，根据测序区域的选择，使用带Barcode的特异引物，采用V3-V4通用引物341F(CCTACGGGNBGCASCAG，SEQ ID No.1)和805R(:GACTACNVGGGTATCTAATCC，SEQ ID No.2)扩增细菌16S rRNA基因的V3-V4区域。100ng的样本中提取的DNA在56℃进行PCR用于链复性，开始在94℃下变性4分钟，然后以94℃下降30秒、56℃下降30秒、72℃下降1分钟进行30个循环。
(3)扩增子基因测序：使用Illumina公司TruSeq DNAPCR-Free LibraryPreparation Kit的建库试剂盒进行文库的构建，构建好的文库经过Qubit定量和文库检测，合格后，使用Illumina HiSeq2500 PE250测序平台进行菌群测序。
(4)测序数据的处理和分析：将菌群测序的原始数据导入QIIME(2019.4)，用DADA2降噪以获得代表性扩增子变异体(ASVs)并将其构建系统发育树。经质控后，将过滤后的ASVs用
Figure GDA0003267317230000191
bayes classifier(NBC)方法与Greengenes(V_13.5)数据库中的基因序列进行比对和物种注释。在进行Alpha和Beta多样性分析中，重抽样深度为每样本10000条序列以保证足够序列。为了减少物种数过多对结果的影响，统计结果计算错误发现率(falsediscovery rate，FDR)进行校正。
结果表明，在门水平，对照组、益生菌组(LR99)和益生菌结合色氨酸组(LR99+TRP)的肠道菌群存在明显差异。对照组的拟杆菌门低于益生菌组(图4)。益生菌组的alpha多样性指数也高于对照组，Shannon指数差异不显著(p＝0.45064(Mann-Whitney statistic))(图5)。热图分析显示，在属水平，三组菌群组成存在差异(图6)。在属水平，具体的差异菌较多，其中使用LR99后，乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)和阿克曼氏菌(Akkermansia)明显增多，尤其是对于乳酸杆菌，色氨酸的加入似乎可以更加促进其丰度增多(图7～图9)。
实施例6
本实施例用于说明由罗伊氏乳杆菌LR99菌对被诊断患有自闭症谱系障碍(ASD)的儿童过敏症状的改善。
儿童年龄7岁，男孩。以口服罗伊氏乳杆菌LR99冻干粉(组成为罗伊氏乳杆菌LR99和冻干粉保护剂)的形式，每天3次，每次600亿CFU，服用周期30天。
在服用前后，记录孩子的肠道，皮肤症状。采集血液检测IgE和慢性食物过敏。30天后，该儿童腹泻、腹胀症状有所改变，大便呈粘液状改善，出现数次成型便，排便次数由1天2次～3次，改为1天～2天一次；皮肤炎症状改善，抓挠减少。同时，家长反馈孩子烦躁的次数减少，词汇量有少量增加。血液检测结果显示IgE由服用前的572.2IU/mL，降低到368.7IU/mL。慢性食物过敏检测显示，鸡蛋和牛奶指标稍有降低。家长选择了继续服用，仍在观察和记录持续改善情况。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 北京华元生物技术研究院
<120> 罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
cctacgggnb gcascag 17
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gactacnvgg gtatctaatc c 21

Claims (8)

1.一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为保藏号为CGMCC No.21577。
2.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗自闭症谱系障碍的过敏反应的产品中的应用。
3.一种组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，还包括其他益生菌。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述其他益生菌选自乳酸杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌、乳球菌、丙酸杆菌、明串球菌、葡萄球菌、芽孢杆菌、片球菌、大肠杆菌和酵母菌中的至少一种，所述丙酸杆菌选自费氏丙酸杆菌谢氏亚种和产丙酸丙酸杆菌中的至少一种，所述明串球菌为肠膜明串珠菌肠膜亚种，所述葡萄球菌选自小牛葡萄球菌、肉葡萄球菌和木糖葡萄球菌中的至少一种，所述芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌，所述片球菌选自乳酸片球菌和戊糖片球菌中的至少一种，所述大肠杆菌为Nissle1917。
6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为活菌和/或灭活菌体。
7.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，还包括益生元，所述益生元选自菊粉、洋蓟提取物、菊苣根提取物、菊芋根提取物、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽、低聚木糖、水苏糖、低聚甘露糖、低聚阿拉伯糖、抗性糊精和抗性淀粉中的至少一种。
8.一种药物，其特征在于，制备所述药物的原料包括权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌或权利要求3～7任一项所述的组合物，和药学上可接受的辅料。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113073066B (zh) * 2021-04-16 2022-01-04 段云峰 罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品
CN113841817A (zh) * 2021-09-07 2021-12-28 无棣珍康生物科技有限公司 一种可以防止细胞衰老、促进细胞代谢的有益食品
CN113974168B (zh) * 2021-09-10 2022-10-11 北京新华联协和药业有限责任公司 一种具有抗过敏功效的复合益生菌组合物及应用、一种制剂
CN113841737A (zh) * 2021-10-22 2021-12-28 青岛大学 一株母乳来源罗伊氏乳杆菌防治特应性皮炎的应用
CN114480208B (zh) * 2022-02-18 2023-09-29 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种缓解免疫性病症的直投式益生菌发酵剂及其应用
CN115400155A (zh) * 2022-08-17 2022-11-29 中南大学 缓解产后抑郁的益生菌组合物及其制备方法和应用
CN115300532B (zh) * 2022-09-20 2023-10-20 中加健康工程研究院(合肥)有限公司 具改善阿尔兹海默病认知能力的益生菌剂及其制备方法
CN115517367B (zh) * 2022-11-28 2023-05-05 广东益可维生物技术有限公司 副干酪乳杆菌smn-lbk在制备促进肠道健康产品中的应用
CN115943995B (zh) * 2022-12-21 2024-03-01 光明乳业股份有限公司 一种罗伊氏乳杆菌常温乳饮料及其制备方法
CN116574611B (zh) * 2023-04-26 2023-10-13 甘肃普诺贝康生物科技有限责任公司 一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法
CN116875500B (zh) * 2023-07-07 2024-02-02 镇江远森医药科技有限公司 利用罗伊氏乳杆菌YSs207制备调节人体微生态平衡的生物活性物质及其应用
CN117158588A (zh) * 2023-08-29 2023-12-05 大连医科大学 一种含有3'sl和两种乳杆菌的婴幼儿制剂及其应用
CN117866854A (zh) * 2024-03-08 2024-04-12 广州同康生物科技有限公司 修复胃肠黏膜损伤的罗伊氏粘液乳杆菌bn01及其后生元

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60232827D1 (de) * 2002-10-18 2009-08-13 Biogaia Ab Verfahren zur verbesserung der immunfunktion bei säugern unter verwendung von lactobacillus reuteri-stämmen
EP2609813A1 (en) * 2011-12-30 2013-07-03 Nestec S.A. Lactobacillus reuteri DSM 17938 for the development of the enteric nervous system
CA2960337C (en) * 2014-10-29 2022-04-05 Nestec S.A. Use of l. reuteri for recovery of microbiota dysbiosis in early life
PT3071235T (pt) * 2015-01-26 2018-02-21 Kaleido Biosciences Inc Produtos terapêuticos de glicanos e respetivos métodos relacionados
JP7030716B2 (ja) * 2016-05-09 2022-03-07 バイオガイア・エイビー アレルギー治療に有用な細菌株の選択
EP3675882A4 (en) * 2017-08-30 2021-07-28 Pendulum Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIOMA ASSOCIATED DISORDERS
CA3063669C (en) * 2017-09-29 2023-08-01 University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University Lactobacillus reuteri strain and uses thereof
CN107523526B (zh) * 2017-10-17 2020-05-12 无限极（中国）有限公司 一种罗伊氏乳杆菌及其用途
CN112204129B (zh) * 2018-02-02 2023-12-15 Ko生物技术有限公司 植物乳杆菌kbl396菌株及其用途
CN109628359B (zh) * 2019-02-22 2021-03-02 江南大学 一株可缓解过敏性哮喘的罗伊氏乳杆菌及其应用
CN110613738B (zh) * 2019-10-25 2021-06-25 江南大学 一种能够缓解类风湿性关节炎的罗伊氏乳杆菌组合物
CN110643542B (zh) * 2019-10-25 2021-01-29 江南大学 一株可缓解变应性哮喘Th2反应的罗伊氏乳杆菌及其应用
CN111265553B (zh) * 2020-01-23 2021-06-22 湖南菲勒生物技术有限公司 一株母乳来源罗伊氏乳杆菌调节母婴免疫功能的应用
CN113073066B (zh) * 2021-04-16 2022-01-04 段云峰 罗伊氏乳杆菌及其应用、组合物、药物和食品
CN113180109B (zh) * 2021-04-16 2022-02-18 段云峰 罗伊氏乳杆菌在制备预防或治疗发育障碍类疾病产品中的应用

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