CN113069439B - Bace2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

针对眼部黑色素肿瘤缺乏有效的药物治疗的情况，本发明首次发现，BACE2Inhibitor3l可显著抑制眼部黑色素瘤细胞生长，且药物作用效果随着浓度升高而增加。本发明为眼部黑色素瘤的临床治疗提供了新的治疗药物，提高治疗有效性，延长患者寿命，提高生存质量。本发明开拓了BACE2Inhibitor3l用于眼部黑色素瘤治疗的一个新领域。

Description

BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用

技术领域

本发明涉及眼部黑色素瘤治疗的技术领域，尤其涉及BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用。

背景技术

眼部黑色素瘤包括葡萄膜黑色素瘤(Uveal melanoma,UM)和结膜黑色素瘤(Conjunctivalmelanoma,CM)。其中，UM是成人最常见的眼内恶性肿瘤，恶性程度高，约有50％的UM患者发生肝转移，肝转移患者的中位生存时间仅10.2个月。CM起病较为隐匿，早期常不影响视力，发现时常有扩散转移，预后差，严重影响患者生命健康。目前，眼部黑色素瘤的主要治疗手段是手术和放化疗，而其对常规放化疗均不敏感，治疗棘手。因此，探求眼部黑色素瘤新治疗药物，提高治疗有效性，降低患者死亡率和眼球摘除率，是亟待解决的临床难题。

BACE2是一种1型膜结合的天冬氨酸蛋白酶，属于胃蛋白酶家族。已有研究发现BACE2在肿瘤中具有重要促癌作用，如黑色素瘤通过BACE2促进淀粉样聚集物分泌来激活YAP级联信号，从而促进其转移。迄今为止尚没有BACE2抑制剂BACE2 Inhibitor 3l在眼部黑色素瘤中应用的报道，其对眼部黑色素瘤的疗效和作用机制尚不清楚。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的，本发明第一方面提供BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用。

优选的，所述BACE2抑制剂为式I所示化合物

其中各个R可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R1选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，各个R2可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R3选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基。

进一步优选的，所述BACE2抑制剂为BACE2 Inhibitor 3l，结构式为

本发明还提供一种用于治疗眼部黑色素瘤的组合物，其特征在于，所述组合物包含作为活性成分的BACE2抑制剂。

优选的，所述组合物为片剂、粉剂、注射剂、胶囊、混悬剂、糊剂、凝胶、涂布剂、药膜剂、缓释剂或微球。

进一步优选的，所述BACE2抑制剂为式I所示化合物

其中各个R可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R1选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，各个R2可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R3选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基。

进一步优选的，所述BACE2抑制剂为BACE2 Inhibitor 3l，结构式为

本发明中，BACE2 Inhibitor 3l结构式为

分子式为C36H38F3N3O3。

本发明中，“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。

本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成片剂、粉剂、注射剂、胶囊、混悬剂、糊剂、凝胶、药膜剂、缓释剂或微球等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。

本发明的有益效果，针对眼部黑色素肿瘤缺乏有效的药物治疗的情况，本发明首次发现，BACE2 Inhibitor 3l可显著抑制眼部黑色素瘤细胞生长，且药物作用效果随着浓度升高而增加。该发明旨在为眼部黑色素瘤的临床治疗提供新的治疗药物，提高治疗有效性，延长患者寿命，提高生存质量。本发明前所未有的开拓了BACE2 Inhibitor 3l用于眼部黑色素瘤治疗的一个新领域。

附图说明：

图1为本发明实施例1中不同浓度BACE2 Inhibitor 3l对眼部黑色素瘤细胞增殖的抑制效果。

图2为本发明实施例2中BACE2 Inhibitor 3l显著抑制眼部黑色素瘤细胞增殖能力的平板克隆结果图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步地说明，以更好地理解本发明。

实施例1细胞增殖实验(CCK8)

细胞增殖实验(CCK8)

实验材料：眼部黑色素瘤细胞系OCM1由John F.Marshall教授(英国伦敦JohnVane科学中心英国癌症研究临床中心肿瘤生物学实验室)提供，CRMM1由MartineJ.Jager教授(荷兰莱顿莱顿大学医学中心)提供，胰蛋白酶购自Gibco，CCK8购自日本同仁化学，BACE2Inhibitor 3l购自Axon Medchem。

实验步骤：胰蛋白酶消化眼部黑色素瘤细胞系OCM1和CRMM1，800rpm离心后，去上清,加入新鲜培养液，用电子细胞计数板计数细胞数量，以3500个/每孔的细胞密度将种植于96孔细胞培养板内，每孔100uL培液，按0,1,2.5,5umol/LBACE2 Inhibitor 3l设置药物浓度梯度，并设有3个复孔，种植前充分混匀细胞悬液，保证每孔细胞总数和药物浓度相同，设置5个时间点：0h、24h、48h、72h、96h。将所用孔的细胞接种完成的时间点定为0h，加入CCK8试剂10uL后，置入37℃，5％CO₂培养箱避光孵育4h。取出培养板，使用酶标仪测定450nm波长处的吸光度值。每隔24小时检测一次，将培养板放回培养箱内。注意实验过程中不要产生气泡，以免干扰酶标仪读数。使用GraphPad软件绘制生长曲线。具体结果如图1所示，结果显示BACE2 Inhibitor 3l能显著抑制OCM1细胞和CRMM1细胞的增殖，且作用效果随着药物浓度提高而提升，因此BACE2 Inhibitor3l能够用于治疗眼部黑色素瘤。

实施例2平板克隆实验

实验材料：眼部黑色素瘤细胞系OCM1和CRMM1，胰蛋白酶、PBS购自Gibco，BACE2Inhibitor 3l购自Axon Medchem，结晶紫购自碧云天

实验步骤：选择对数生长期、状态良好的细胞眼部黑色素瘤细胞系OCM1和CRMM1，大概长到70-80％时候用胰蛋白酶消化细胞，消化下来用细胞计数板计数，种植于6孔板内，使每个孔含有2mL培液，1000个细胞，以及分别含0,1,2.5,5umoL BACE2 Inhibitor 3l药物浓度。由于此部分实验细胞要求量比较少，会导致加入细胞悬液体积会特别少，可以先将细胞稀释至10000/mL，再从中取10uL细胞悬液加入。后置于37℃，5％CO₂细胞培养箱内培养至一星期(观察克隆大小，若多数克隆细胞团达到50个细胞以上，则可终止培养)。吸净培养液，PBS清洗，加入结晶紫和染色30min，用PBS洗去多余结晶紫染料。拍照观察统计.每孔一组，每组重复三个孔。具体结果如图2所示，结果显示，BACE2 Inhibitor 3l能显著抑制眼部黑色素瘤细胞增殖能力。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (3)

1.BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用，其中所述眼部黑色素瘤为眼脉络膜黑色素瘤或结膜黑色素瘤，所述BACE2抑制剂为式I

所示化合物其中各个R可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R1选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，各个R2可相同或不同，选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基，R3选自H、C1-C3烷基、羟基、卤素、C1-C3烷氧基、硝基、氰基、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷氧基。

2.根据权利要求1所述BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用，其中所述眼部黑色素瘤为结膜黑色素瘤。

3.根据权利要求1或2所述的BACE2抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用，其特征在于，所述BACE2抑制剂为BACE2 Inhibitor 3l，结构式为

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