CN113046406A - 一种鱼骨多肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物制品领域，具体涉及一种鱼骨多肽的制备方法。本发明公开的鱼骨多肽的制备方法包括将粉碎后的鱼骨在稀酸溶液中浸泡处理，并经过两次酶解后灭酶，然后在培养基中培养，最后喷雾干燥制得。本发明提供的鱼骨多肽的制备方法所得的多肽，品质和产率较高，具备显著的抗氧化和清除表面自由基的功效，尤其适合在化妆品中的应用。

Description

一种鱼骨多肽的制备方法
技术领域
本发明属于生物制品领域，具体涉及一种鱼骨多肽的制备方法。
背景技术
鱼类在加工过程中会产生大量的鱼头、鱼骨、鱼尾、鱼皮、内脏等下脚料，近年来，我国鱼类加工比例逐年上升，但目前仍不足50％，除了一部分用于加工饲料鱼粉外，大部分被直接丢弃，如何有效地利用鱼类加工中产生的鱼骨等下脚料，产生经济效益是水产加工业面临的一个重要课题。
鱼骨具有包括蛋白质、灰分、氨基酸、不饱和脂肪酸等多种有益成分，对鱼骨加以分类利用，不但能减少资源浪费，大大增加鱼类加工的附加值，同时还能减少环境污染，实现鱼类生产加工的绿色、可持续发展。
中国专利申请CN102551111A公开了一种鱼骨有机酸钙多肽粉的制备方法，但该方法仅经过一次酶解，最终得到的多肽品质较差，且灭酶时间过短。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种鱼骨多肽的制备方法，通过本发明的方法制得的鱼骨多肽品质好，产率高，具有显著的抗氧化和清除表面自由基的功效。
本发明的技术方案是：
一种鱼骨多肽的制备方法，包括如下步骤：
S1向粉碎后的鱼骨中加入稀酸溶液，稀酸溶液的加入量为粉碎后的鱼骨质量的2-4倍，在常温下浸泡20-25min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2向步骤S1得到的处理后的鱼骨中加入去离子水，去离子水的加入量为处理后的鱼骨质量的2-3倍，制成混悬液，先加入质量比0.25-0.3％的胰蛋白酶和质量比0.15-0.25％的木瓜蛋白酶，在pH为6的条件下常温酶解120-180min，再加入质量比0.15-0.25％的胶原蛋白酶和0.2-0.35％糜蛋白酶在60-65℃下酶解30-60min，得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物灭酶；
S3在无菌条件下向步骤S2灭酶后的产物加入培养基，接入质量比为2-5％的乳酸菌，震荡发酵；
S4将步骤S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，制得粉末状鱼骨多肽。
所述步骤S1所述稀酸溶液为醋酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液中的一种或多种。
所述步骤S2中灭酶操作具体为：将超滤后的产物加热至90-95℃，维持12-18min，灭酶的同时进行超声处理，超声频率为30KHZ。
所述步骤S3所述培养基包括纯水、黑茶粗叶提取物和葡萄糖。
所述步骤S3所述培养基还包括菊粉。
所述步骤S3所述培养基还包括牡丹籽蛋白酶解物。
所述步骤S3的震荡发酵操作具体为：在34-35℃的条件下，发酵60-70h。
所述步骤S4的喷雾干燥条件为：进风温度控制在120-140℃，出风温度控制在60-80℃。
所述制备方法中用到的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胶原蛋白酶、糜蛋白酶、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物、葡萄糖等原材料均为公知的商品化普通原材料，均可从市场上购买获得。
进一步地，本发明的另一目的在于提供上述的鱼骨多肽的制备方法制得的鱼骨多肽在化妆品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优势：
(1)本发明提供了一种鱼骨多肽的制备方法，相较于传统方法，本发明将粉碎后的鱼骨在稀酸溶液中进行预处理，并经过两次酶解后再次灭酶，然后在培养基中培养，最后喷雾干燥制得，整体方法过程简单，可用于鱼骨多肽的大规模培养，在降低培养成本的同时，能够获得纯度较高的鱼骨多肽。
(2)本发明创造性地通过两次酶解，制得的鱼骨多肽具有较高的纯度，品质明显提高，经实验证实具备显著的抗氧化和清除表面自由基的功效。
(3)本发明提供的培养基包括纯水、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物和葡萄糖，以该培养基培养得到的鱼骨多肽具有较高的营养价值，产率较高，应用前景广泛。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，将本发明的所述内容做进一步解释。但本发明上述主题的范围不仅限于以下实施例。
实施例1、一种鱼骨多肽的制备方法
所述鱼骨多肽的制备方法，包括如下步骤：
S1将粉碎后的鱼骨放入2倍体积的醋酸溶液中在常温下浸泡20min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2将S1得到的鱼骨加入2倍体积的去离子水制成混悬液，先加入0.25％的胰蛋白酶和0.15％的木瓜蛋白酶在pH为6，常温下酶解120min，再加入质量比0.15％的胶原蛋白酶和0.2％糜蛋白酶在60℃下酶解30min,得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物在温度90℃，维持12min进行灭酶，灭酶的同时进行超声处理，频率在30KHZ；
S3将S2灭酶后的产物在无菌条件下制成培养基，培养基包括纯水、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物和葡萄糖，接入质量比为2％的乳酸菌，在34℃的条件下震荡发酵60h；
S4将S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，进风温度控制在120℃，出风温度控制在60℃，制得粉末状鱼骨多肽。
实施例2、一种鱼骨多肽的制备方法
一种鱼骨多肽的制备方法，包括如下步骤：
S1将粉碎后的鱼骨放入4倍体积的醋酸溶液中在常温下浸泡25min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2将S1得到的鱼骨加入3倍体积的去离子水制成混悬液，先加入0.3％的胰蛋白酶和0.25％的木瓜蛋白酶在pH为6，常温下酶解180min，再加入0.25％的胶原蛋白酶和0.35％糜蛋白酶在65℃下酶解60min,得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物在温度95℃，维持18min进行灭酶，灭酶的同时进行超声处理，频率在30KHZ；
S3将S2灭酶后的产物在无菌条件下制成培养基，培养基包括纯水、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物和葡萄糖，接入质量比为5％的乳酸菌，在35℃的条件下震荡发酵70h；
S4将S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，进风温度控制在140℃，出风温度控制在80℃，制得粉末状鱼骨多肽。
实施例3、一种鱼骨多肽的制备方法
一种鱼骨多肽的制备方法，包括如下步骤：
S1将粉碎后的鱼骨放入4倍体积的醋酸溶液中在常温下浸泡25min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2将S1得到的鱼骨加入3倍体积的去离子水制成混悬液，先加入0.25％的胰蛋白酶和0.2％的木瓜蛋白酶在pH为6，常温下酶解150min，再加入质量比0.2％的胶原蛋白酶和0.35％糜蛋白酶在60-65℃下酶解50min,得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物在温度90℃，维持15min进行灭酶，灭酶的同时进行超声处理，频率在30KHZ；
S3将S2灭酶后的产物在无菌条件下制成培养基，培养基包括纯水、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物和葡萄糖，接入质量比为3％的乳酸菌，在34℃的条件下震荡发酵65h；
S4将S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，进风温度控制在125℃，出风温度控制在70℃，制得粉末状鱼骨多肽。
对比例1、一种鱼骨多肽的制备方法
一种鱼骨多肽的制备方法，包括如下步骤：
S1将粉碎后的鱼骨放入4倍体积的醋酸溶液中在常温下浸泡25min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2将S1得到的鱼骨加入3倍体积的去离子水制成混悬液，先加入0.25％的胰蛋白酶和0.2％的木瓜蛋白酶在pH为6，常温下酶解150min,得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物在温度90℃，维持15min进行灭酶，灭酶的同时进行超声处理，频率在30KHZ；
S3将S2灭酶后的产物在无菌条件下制成培养基，培养基包括纯水、菊粉、牡丹籽蛋白酶解物、黑茶粗叶提取物和葡萄糖，接入质量比为3％的乳酸菌，在34℃的条件下震荡发酵65h；
S4将S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，进风温度控制在125℃，出风温度控制在70℃，制得粉末状鱼骨多肽。
与实施例3不同的是，步骤S2没有进行胶原蛋白酶和糜蛋白酶的二次酶解。
试验例一、鱼骨多肽纯度的测定
1.试验材料：实施例1-3和对比例1制得的鱼骨多肽。
2.试验方法：将上述鱼骨多肽放在45℃的通风干燥箱中干燥，直至测得含水量为4％-8％，通过高效液相色谱梯度洗脱法检测纯度。
3.试验结果：
试验结果如表1所示。
表1：鱼骨多肽纯度的测定
组别 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1
纯度％ 89％ 92％ 95％ 78％
由表1可以看出，采用本发明提供的鱼骨多肽的制备方法制得的鱼骨多肽具有较高的纯度。
试验例二、自由基清除效果的测定
1.试验材料：实施例1-3和对比例1制得的鱼骨多肽。
2.试验方法：用二甲基亚砜将制得的鱼骨多肽制成质量浓度为1％的鱼骨多肽溶液，取2mL样品加入2mL浓度为100μmol/L的二苯基苦基苯肼，摇匀，静置30min，在510nm的波长下测定吸光度，结合公式测得样品的抑制率，从而判断自由基的清除效果。
抑制率计算公式：[1-(A1-A2)/A3]×100％
A1是2mL二苯基苦基苯肼加2mL样品溶液的吸光度；
A2是2mL二甲基亚砜加2mL样品溶液的吸光度；
A3是2mL二甲基亚砜加2mL二苯基苦基苯肼的吸光度。
3.试验结果：
试验结果如表2所示。
表2：自由基清除效果的测定结果
组别 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1
抑制率 91.4％ 92.6％ 94.3％ 81.6％
由表2可以看出，本发明制得的鱼骨多肽的自由基清除效果显著，具备显著的抗氧化和清除表面自由基的功效，尤其适合在化妆品中应用。

Claims (9)

1.一种鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1向粉碎后的鱼骨中加入稀酸溶液，稀酸溶液的加入量为粉碎后的鱼骨质量的2-4倍，在常温下浸泡20-25min，过滤，用去离子水清洗，烘干，得处理后的鱼骨；
S2向步骤S1得到的处理后的鱼骨中加入去离子水，去离子水的加入量为处理后的鱼骨质量的2-3倍，制成混悬液，先加入质量比0.25-0.3％的胰蛋白酶和质量比0.15-0.25％的木瓜蛋白酶，在pH为6的条件下常温酶解120-180min，再加入质量比0.15-0.25％的胶原蛋白酶和0.2-0.35％糜蛋白酶在60-65℃下酶解30-60min，得到酶解液，进行超滤，对超滤后的产物灭酶；
S3在无菌条件下向步骤S2灭酶后的产物加入培养基，接入质量比为2-5％的乳酸菌，震荡发酵；
S4将步骤S3所得的产物取液相部分，喷雾干燥，制得粉末状鱼骨多肽。
2.根据权利要求1所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S1所述稀酸溶液为醋酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中灭酶操作具体为：将超滤后的产物加热至90-95℃，维持12-18min，灭酶的同时进行超声处理，超声频率为30KHZ。
4.根据权利要求1所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3所述培养基包括纯水、黑茶粗叶提取物和葡萄糖。
5.根据权利要求4所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3所述培养基还包括菊粉。
6.根据权利要求4所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3所述培养基还包括牡丹籽蛋白酶解物。
7.根据权利要求1所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3的震荡发酵操作具体为：在34-35℃的条件下，发酵60-70h。
8.根据权利要求1所述的鱼骨多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S4的喷雾干燥条件为：进风温度控制在120-140℃，出风温度控制在60-80℃。
9.根据权利要求1-8任一项所述的鱼骨多肽的制备方法制得的鱼骨多肽在化妆品中的应用。
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