CN113040093A - 氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用 - Google Patents
氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医学领域，特别涉及氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用。本发明利用氧嗪酸钾作为尿酸酶抑制剂，阻断尿酸分解代谢，并同时补充尿酸前体物质腺嘌呤，以达到升高尿酸水平的目的；通过不同剂量氧嗪酸钾和腺嘌呤的联合诱导，探索和优化大鼠高尿酸血症的造模剂量和造模时间，建立一种肾脏病理损伤接近人类发病特点的、较为稳定的高尿酸肾损伤动物模型。本发明研究结果显示：氧嗪酸钾(1500mg/kg)联合腺嘌呤(50mg/kg)连续灌胃5周能够建立稳定的大鼠高尿酸肾损伤模型。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域，特别涉及氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用。
背景技术
尿酸是嘌呤代谢的终产物，高尿酸血症是由于嘌呤代谢障碍使得尿酸生成增加和/或尿酸排泄减少所导致的一种代谢性疾病。随着生活水平的提高，人们摄入的食物结构发生了重大变化，蛋白质及脂肪的摄入显著提高，高脂血症和高尿酸血症的发病率也明显提高。
大量研究结果表明，血尿酸水平升高与肾脏相关疾病、动脉粥样硬化及冠心病、原发性高血压、脑卒中等疾病的发生率、死亡率等呈独立正相关。啮齿类动物是高尿酸血症研究中最常用的动物模型，但因啮齿类动物具有尿酸酶，可将尿酸分解并排出体外，所以很难发生高尿酸血症。啮齿类动物高尿酸血症模型建立主要从促进尿酸合成和抑制其排泄这两方面考虑，方法众多，但其诱导周期、肾损伤程度以及观察指标差异较大。有数据显示大鼠采用腺嘌呤联合氧嗪酸钾灌胃21d可建立大鼠的高尿酸肾损伤模型，病理观察可见炎性细胞浸润、肾小管局灶性萎缩、高剂量下肾小管扩张、细胞间质纤维化严重；酵母膏、氧嗪酸钾、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤、乙胺丁醇等造模剂单剂或组合制剂通过灌胃及腹腔注射等方式给药，可诱导啮齿类动物高尿酸肾损伤模型。而给药方式、使用的药物及其剂量各异，不同种属的啮齿类动物对药物的敏感性各不相同，导致造模周期不一致、动物肾脏损伤程度差异较大。
因此，建立一种肾脏病理损伤接近人类发病特点的、较为稳定的高尿酸肾损伤动物模型，具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明通过不同剂量氧嗪酸钾联合腺嘌呤诱导大鼠高尿酸血症，探索大鼠高尿酸血症模型的最佳条件，为高尿酸血症的治疗研究提供可靠的动物模型。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了构建大鼠高尿酸肾损伤模型的诱导剂，包括氧嗪酸钾和腺嘌呤。
在本发明的一些具体实施方案中，氧嗪酸钾的浓度为1500mg/kg大鼠体重。
在本发明的一些具体实施方案中，腺嘌呤的浓度为50mg/kg大鼠体重。
基于上述研究，本发明还提供了所述的诱导剂在构建大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导剂对大鼠连续灌胃5周，每周1次。
本发明还提供了大鼠高尿酸肾损伤模型的构建方法，取所述的诱导剂对大鼠灌胃。在本发明的一些具体实施方案中，氧嗪酸钾的浓度为1500mg/kg大鼠体重。在本发明的一些具体实施方案中，腺嘌呤的浓度为50mg/kg大鼠体重。在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导剂对大鼠连续灌胃5周，每周1次。
本发明将体重220～240g成年雄性Sprague-Dawley大鼠56只，按照每组8只分为正常对照组及不同剂量氧嗪酸钾(1000、1500mg/kg)联合腺嘌呤(0、50、100mg/kg)模型组6个，连续灌胃5周，每周对大鼠进行尾静脉采血，检测血清中血尿酸、血肌酐和血尿素氮水平。6周后取材，观察大鼠肾脏的病理改变，肾组织炎症、纤维化相关因子的mRNA及蛋白表达水平变化。
实验结果表明：1500mg/kg氧嗪酸钾联合100mg/kg腺嘌呤组大鼠造模2周后开始死亡，第6周生存率为62.5％；其余各组大鼠生存率与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比，造模1周后，各模型组大鼠血尿酸水平均有显著升高(P＜0.05)，第6周停止造模后血尿酸基本恢复到造模前水平；各模型组动物血肌酐、血尿素氮水平在第5周均较正常组有所升高；与正常组相比，模型组大鼠肾组织的炎症和纤维化相关因子mRNA和蛋白表达水平均随腺嘌呤剂量的增加而增加，其中联合100mg/kg腺嘌呤组与正常组的差异有统计学意义(P＜0.05)。大鼠肾脏解剖及组织学检测结果显示，模型组随着氧嗪酸钾及腺嘌呤剂量的增加，各组均有不同程度的肾髓质白色沉积，肾小管间质纤维化，小管上皮细胞坏死增加，肾小球萎缩。50mg/kg腺嘌呤联合1500mg/kg氧嗪酸钾组大鼠肾组织炎症与纤维化相关基因和蛋白的表达水平相比正常组有所升高，且可见组织炎性细胞浸润和纤维化的发生，符合高尿酸血症所致肾损伤的临床表现。
综上，本发明利用氧嗪酸钾作为尿酸酶抑制剂，阻断尿酸分解代谢，并同时补充尿酸前体物质腺嘌呤，以达到升高尿酸水平的目的；通过不同剂量氧嗪酸钾和腺嘌呤的联合诱导，探索和优化大鼠高尿酸血症的造模剂量和造模时间，建立一种肾脏病理损伤接近人类发病特点的、较为稳定的高尿酸肾损伤动物模型。本发明研究结果显示：氧嗪酸钾(1500mg/kg)联合腺嘌呤(50mg/kg)连续灌胃5周能够建立稳定的大鼠高尿酸肾损伤模型。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示造模大鼠生存曲线；
图2示不同剂量氧嗪酸钾联合腺嘌呤造模大鼠肾外观及剖面的改变；
图3示不同剂量氧嗪酸钾联合腺嘌呤造模后大鼠肾组织HE染色；
图4示不同剂量氧嗪酸钾联合腺嘌呤造模后大鼠肾组织Masson染色；
图5示大鼠肾组织炎症及纤维化相关因子表达的变化。
具体实施方式
本发明公开了氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
高尿酸血症对肾脏的损伤机制主要是由尿酸结晶引起的梗阻及局部炎症反应，目前临床治疗方案是采用化学合成降尿酸药物来降低尿酸水平，但患者易发生不良反应。诸多研究者为寻求新的治疗药物以减少不良反应的发生，便希望首先在动物模型上观察其药物疗效及作用，而啮齿类动物是药物研究中最常用的动物模型。因此，建立一种类似人类高尿酸所致肾损伤的发病特点，且较为稳定的高尿酸肾损伤动物模型至为重要。
然而，由于啮齿类动物体内具有尿酸酶，能将尿酸氧化成尿囊素排出体外，导致其血尿酸水平非常低，这一直是诱导啮齿类动物建立高尿酸血症模型的难点所在。目前常用的手段是从促进尿酸合成及抑制尿酸排泄这两方面来建立高尿酸啮齿类动物模型：①促进尿酸的合成：尿酸前体物质增多可刺激黄嘌呤氧化酶活性增强，如黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤等；②尿酸酶抑制剂抑制尿酸酶活性，如氧嗪酸钾等；③减少尿酸排泄保持尿酸浓度在较高水平，如烟酸、乙胺丁醇等；④基因筛选，构建同源重组胚胎干细胞，基因选择性敲除尿酸酶基因建立动物模型。
大鼠高尿酸血症模型按照是否有合并症及继发性损伤，分为单纯性和半继发性性损伤或合并症的高尿酸血症模型，其中单纯性高尿酸血症多以腺嘌呤、黄嘌呤等促进尿酸合成的方式进行造模，而半继发性损伤或合并症的高尿酸血症模型多为以氧嗪酸钾、氧嗪酸钾联合腺嘌呤的方法造模，且采用联合造模的方法使大鼠尿酸能够稳定升高，这种方法更接近于人类尿酸性肾脏病变。因此，本研究采用了尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾为基础联合尿酸前体物质腺嘌呤，以灌胃的方式来诱导大鼠高尿酸血症动物模型，探索了氧嗪酸钾的给药剂量(1000、1500mg/kg)和腺嘌呤的给药剂量(0、50、100mg/kg)。血清学指标结果显示，造模1周后与正常组相比模型组动物的血尿酸水平均有显著升高(P<0.05)，并在持续灌胃的5周内血尿酸水平一直维持较高且较稳定的水平；除最高剂量组(氧嗪酸钾:1500mg/kg+腺嘌呤:100mg/kg)外，各组大鼠的存活率均为100％。尤其是氧嗪酸钾剂量为1000mg/kg联合腺嘌呤50mg/kg及氧嗪酸钾剂量为1500mg/kg的3组。
根据大鼠肾功能检测、组织病理及炎症、纤维化相关基因表达的结果发现，在氧嗪酸钾联合腺嘌呤诱导大鼠高尿酸血症的模型中，各项指标与腺嘌呤的剂量及氧嗪酸钾的剂量呈正相关。当氧嗪酸钾剂量不变的情况下，随着腺嘌呤的剂量增加，大鼠血肌酐、血尿素氮升高(P＜0.05)、肾组织病理显示病变程度加重，炎症、纤维化相关基因表达升高(P＜0.01)。而在腺嘌呤相同的剂量下(50mg/kg)，高剂量氧嗪酸钾(1500mg/kg)与低剂量(1000mg/kg)的肾功能指标、病理结果及炎症、纤维化基因表达相比病变程度虽有加重，但相比于同一氧嗪酸钾剂量下，不同剂量嘌呤组差异无统计学意义，且在造模后第6周，氧嗪酸钾单独诱导的UA1、UA4组病理组织学改变无显著性变化，这一现象我们推测可能是由于第5周停止氧嗪酸钾灌胃后小鼠自身尿酸分解代谢的能力有所恢复，而联合了腺嘌呤的造模组在阻断尿酸分解代谢的同时补充尿酸前体导致小鼠肾组织受损相比于氧嗪酸钾组更为严重，这导致UA2、UA3、UA5、UA6组在第6周没有联合给药的情况下，大鼠的尿酸代谢恢复能力受限。以上结果均提示在该模型中腺嘌呤对大鼠肾脏的损伤程度可能大于氧嗪酸钾，但存在此差异的具体原因尚不清楚有待进一步研究。
本研究结果显示，氧嗪酸钾(1500mg/kg)联合腺嘌呤(50mg/kg)连续灌胃大鼠5周能够诱导稳定的高尿酸血症，造模6周后病理结果显示肾脏有炎性细胞的浸润和胶原纤维的增加，肾组织mRNA水平和蛋白水平均证明了促炎因子和纤维化相关蛋白的存在，病理改变接近临床高尿酸患者的特点。在这个造模剂量下，不仅可以较充分的抑制尿酸酶活性，而且可以同时促进尿酸的合成，保证尿酸水平的升高。由于氧嗪酸钾和腺嘌呤都不易溶于水，我们选择羧甲基纤维素钠做悬浮剂，将充分研磨的氧嗪酸钾和腺嘌呤混悬于0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中，以确保给药剂量的准确。
使用该方法建立啮齿类动物模型的操作较简单，可在短期内升高尿酸水平，但由于动物体内尿酸酶存在活性的差异，在一定程度上造成了模型尿酸水平的差异，模型的肾损伤程度可能有差异。另外腺嘌呤对肾脏有一定损伤，利用本方法建立的高尿酸肾损伤模型除高尿酸的影响外也无法排除造模试剂对肾脏的影响。
本发明提供的氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用中，所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实验动物：
56只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重220～240g，购自四川大学实验动物中心[实验动物生产许可证号：SCXK(川)2018-026]，在实验开始以前，至少给予动物1周时间适应环境，实验SD大鼠于室温20～25℃、70％湿度条件下分笼饲养，12h明暗交替，自由采食和饮水[实验动物使用许可证号：SYXK(川)2018-119，动物实验伦理备案号：2015070A]。
实验试剂
氧嗪酸钾(山东中科泰斗化学有限公司)，纯度≥97％；腺嘌呤(美国Amerco公司)；羧甲基纤维素钠(成都科龙化工试剂厂)；兔抗鼠微管蛋白(Tubulin)抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)；兔抗鼠BAX抗体(美国CST公司)；山羊抗鼠E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)抗体(美国BD公司)；兔抗人α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smoothmuscle actin,α-SMA)抗体(美国Abcam公司)；山羊抗小鼠纤维连接蛋白(fibronectin,FN)抗体(美国Proteintech公司)；山羊抗鼠肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)抗体(美国CST公司)；兔抗人血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1，VCAM-1)抗体(美国CST公司)；辣根过氧化物(Horseradishperoxidase,HRP)标记山羊抗兔二抗(美国lifetechnology-Thermo Fisher Scientific公司)；HRP标记兔抗小鼠二抗(美国lifetechnology-Thermo Fisher Scientific公司)。
仪器
生化自动分析仪(美国Roche公司，COBAS 400Plus)；倒置相差显微镜(日本Olympus公司，IX50)；分光光度计(美国Thermo Scientific公司，NanoDrop 2000)；实时荧光定量PCR扩增仪(美国BIO-RAD公司，CFX 96)；电泳仪(美国BIO-RAD公司，WideMini-subcell GTSystem)；成像仪(法国FUSION公司，FX7)。
统计学方法
采用SPSS 22.0软件进行数据统计分析，分析前采用Z值转换剔除极端异常值。分类变量以例数表示。连续变量采用Kolmogorov-Smirnov和Shapiro-Wilk检验其正态性，正态分布资料以均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，并采用Tukey法进行两两比较，重复测量数据中采用平衡设计的重复测量方差分析及多元方差分析，并进行不同时间点和不同组间的两两比较。p<0.05认为差异有统计学意义。
实施例1 SD大鼠空腹血生化水平检测
实验开始前对所有大鼠进行空腹血清尿酸值测定，选取空腹血清尿酸值在69.96±9.49μmol/L的大鼠作为实验对象。此后每周用静脉留置针穿刺尾静脉取大鼠血样0.5mL于EP管中，常温静置0.5h后，1000×g离心10min，取上清液，用罗氏生化自动分析仪检测血尿酸、血肌酐、血尿素氮。
实施例2诱导SD大鼠高尿酸血症模型
用0.5％羧甲基纤维素钠溶液悬浮不同浓度的氧嗪酸钾与腺嘌呤联合造模分为7组，其中正常对照组标记为NC，不同的模型组分别标记为UA1-6(表1)，每组8只大鼠，灌胃1次/d，连续5周，5周后停止造模，正常饲养1周。对大鼠每日称重，并按照1mL/100g体重的剂量进行灌胃。
表1氧嗪酸钾与腺嘌呤联合造模计量及分组情况
实施例3 SD大鼠组织样本的收集与检测
第6周各组大鼠用7％水合氯醛(0.5mL/100g体重)腹腔注射麻醉，保定后被皮消毒，打开腹腔及胸腔，暴露心脏，穿刺右心室采血1mL用于血生化检测，快速剪取双肾至手术盘，去除肾被膜、称重，计算肾脏指数(肾重/体重)，观察肾脏的病理改变。取一个肾的1/4放入组织包埋盒用10％中性甲醛浸泡48h后，用于肾组织病理苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)HE及Masson染色。按照2010年国际肾脏病理学会(renal pathology society,RPS)提出的慢性肾病分型国际标准，综合HE及Masson染色结果进行评分。另取肾组织的各1/4冻存于液氮中，且本研究根据各组动物的肾脏组织学病变程度，选择动物存活率较高、肾组织相对病变较轻(慢性进行性肾病一级)的UA2与UA5组动物的肾脏组织分别用于肾组织炎症、纤维化相关因子的基因表达差异分析及其蛋白表达水平分析，以确定后续研究动物造模采用的方案。
实施例4组织炎症、纤维化相关基因表达—逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription-PCR,RT-PCR)
Trizol法提取总RNA后，用核酸蛋白定量仪检测浓度及纯度，取1μg RNA溶液按照Vazyme HiScript II Q RT SuperMix forqPCR试剂盒说明书逆转录成互补脱氧核糖核酸(cDNA)溶液。以GAPDH为内参，通过上海生工设计并合成相应上下游引物(表2)，按照VazymeAceQTM qPCR SYBR Green Master Mix试剂盒说明书，用20μL体系在实时荧光定量PCR扩增仪上进行反应，反应条件为95℃3min，40个循环(95℃10s，60℃30s)，溶解曲线95℃15s，65～95℃每上升0.5℃为一个梯度使用Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪进行荧光检测，通过2-△△CT法计算各组肾组织炎症、纤维化相关因子的基因表达差异。
表2.PCR引物序列
实施例5组织炎症和纤维化相关蛋白表达检测-蛋白免疫印迹
用RIPA裂解液(中国北京康为世纪生物科技有限公司)裂解SD大鼠肾组织得到总蛋白后，蛋白质定量聚氰基丙烯酸正丁酯法检测蛋白含量并煮沸变性，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，将蛋白转移至聚偏氟乙烯膜上，封闭后4℃一抗Tubulin、BAX、E-cad、α-SMA、FN、TNF-α、VCAM-1孵育过夜，清洗后37℃孵育二抗2h，通过增强化学发光法用成像仪采集图像，并使用Image J软件进行灰度分析。
效果例1大鼠生存状况及血尿酸水平检测
在饲养过程中发现，模型组相比NC组状态较差，表现为体型消瘦，毛色无光泽。高剂量腺嘌呤组动物在造模2周后开始出现少量死亡，各组大鼠的生存状况图1。造模2周时各组8只大鼠均存活，到造模第5周时，NC组、UA1组、UA4组无大鼠死亡，其生存率为1.0。UA2组在第23天死亡1只，UA5组在第25天死亡1只，故其生存率为0.875。UA3组在第14、17天分别死亡1只，其生存率为0.75。UA6组，在第23、25、28天分别死亡1只，其生存率为0.625。
1000mg/kg氧嗪酸钾与不同剂量腺嘌呤联合诱导的大鼠血尿酸水平变化及1500mg/kg氧嗪酸钾与不同剂量腺嘌呤联合诱导的大鼠血尿酸水平变化(表3)。造模1周后，大鼠血尿酸水平升高，5周停止造模后，第6周尿酸基本恢复到造模前的水平。
表3.各组大鼠血尿酸水平变化(
n＝5)
同一时间点，与NC组比较，*p＜0.05；不同时间点，各组与给药前血尿酸水平比较，△p＜0.05
效果例2大鼠肾功能变化
造模第5周，模型组大鼠的血肌酐、血尿素氮水平均较正常组有所升高，其中联合腺嘌呤100mg/kg组(UA3、UA6)升高较为明显；同剂量氧嗪酸钾+腺嘌呤联合造模后，随腺嘌呤剂量增加，大鼠肾脏指数升高。与NC组相比，UA3、UA5和UA6组肾脏指数升高，且差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。
表4.造模第5周大鼠肾功能及肾脏指数的变化(
n＝8)
与NC组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
效果例3造模大鼠肾脏解剖和组织学检测
第6周解剖观察发现，与正常对照组相比，1000mg/kg氧嗪酸钾组肾脏外观和剖面无明显异常；联合50mg/kg腺嘌呤处理之后，肾脏髓质变白；联合100mg/kg腺嘌呤处理之后，肾脏外观可见白色颗粒，髓质与皮质间有明显的白色沉积物；1500mg/kg氧嗪酸钾和联合腺嘌呤诱导的各组肾脏外观和剖面的改变更加明显(图2)。
大鼠肾HE染色观察发现：UA1组处理之后，肾小管出现管型；UA2组肾小球萎缩，肾小管内刷状缘减少，管腔扩大；UA3组，肾小管间质中炎性细胞大量聚集并且小管间质纤维化；UA5组处理大鼠之后，肾小管细胞增生、纤维细胞增多、炎性细胞大量聚集，部分肾小管上皮细胞坏死(图3)。
Masson染色观察发现：添加腺嘌呤的4个组(UA2、UA3、UA5、UA6)较NC组肾脏胶原纤维的表达明显升高，且UA3及UA6的细胞间质纤维化程度最高，UA2、UA5次之(图4)。根据慢性肾病分型国际标准，评分，从各组小管间质及血管病理评分中(表5)可以看出，氧嗪酸钾联合腺嘌呤处理后相比于正常组有极显著的病理改变(P<0.01),其中评分UA2(4±1.60)、UA5(5±1.85)为慢性进行性肾病1级，大鼠存活率较高、肾组织相对病变较轻。
表5.不同剂量氧嗪酸钾联合腺嘌呤造模后第6周肾病病理评分[只(％),n＝8]
△肾小管萎缩与间质纤维化(interstitial fibrosis andtubular atrophy,IFTA)；与NC组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
效果例4大鼠肾组织炎症因子表达的检测
1000mg/kg氧嗪酸钾添加不同剂量腺嘌呤造模，随腺嘌呤剂量，增加大鼠肾组织炎症和纤维化相关基因的mRNA水平升高(表6)。选定50mg/kg腺嘌呤添加不同剂量氧嗪酸钾造模，随氧嗪酸钾剂量的增加大鼠肾组织纤维化相关基因FN、转化生长因子-β(transforminggrowth factor-β,TGF-β)的mRNA水平升高，FN、TGF-β基因表达水平UA5组均显著高于NC组(P＝0.026、0.004)，UA2、UA5组炎症相关基因IL-1β相比于NC组无统计学意义(P＝0.205、0.585)，而两组的TNF-α表达均极显著高于NC组(P＝0.002、0.007)(表6)。表6.大鼠肾组织炎症及纤维化相关基因的mRNA表达水平检测结果(
n＝8)
与NC组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
50mg/kg腺嘌呤添加不同剂量氧嗪酸钾(1000、1500mg/kg)造模大鼠肾组织蛋白免疫印迹法检测结果显示，氧嗪酸钾联合腺嘌呤组相比于NC组，VCAM-1、α-SMA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.01)，TNF-α和FN的蛋白表达均有升高(图5，表7)。
表7.蛋白免疫印迹法检测大鼠肾组织蛋白表达半定量分析(
n＝8)
与NC组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 四川大学华西医院
<120> 氧嗪酸钾联合腺嘌呤在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gacactatgc gggtcacttg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cccaggcagg agatttgtta 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gtggtgcagg atgcattgct ctga 24
Claims (9)
1.构建大鼠高尿酸肾损伤模型的诱导剂，其特征在于，包括氧嗪酸钾和腺嘌呤。
2.如权利要求1所述的诱导剂，其特征在于，氧嗪酸钾的浓度为1500mg/kg大鼠体重。
3.如权利要求1或2所述的诱导剂，其特征在于，腺嘌呤的浓度为50mg/kg大鼠体重。
4.如权利要求1至3任一项所述的诱导剂在构建大鼠高尿酸肾损伤模型中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述诱导剂对大鼠连续灌胃5周，每周1次。
6.大鼠高尿酸肾损伤模型的构建方法，其特征在于，取如权利要求1至3任一项所述的诱导剂对大鼠灌胃。
7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，氧嗪酸钾的浓度为1500mg/kg大鼠体重。
8.如权利要求7所述的构建方法，其特征在于，腺嘌呤的浓度为50mg/kg大鼠体重。
9.如权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述诱导剂对大鼠连续灌胃5周，每周1次。
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|---|---|---|---|---|
| CN115039737A (zh) * | 2021-08-09 | 2022-09-13 | 北京中医药大学 | 一种建立尿酸盐肾沉积动物模型的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103125439A (zh) * | 2013-02-21 | 2013-06-05 | 李长贵 | 一种构建高尿酸血症合并糖尿病的动物模型的方法 |
| WO2016087490A1 (en) * | 2014-12-03 | 2016-06-09 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Combination of pi3k-inhibitors |
| CN110772516A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-11 | 四川大学华西医院 | 异紫堇定碱或其盐在制备降低血尿酸水平、防治尿酸性肾病的药品中的用途 |
-
2021
- 2021-03-11 CN CN202110263194.4A patent/CN113040093A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103125439A (zh) * | 2013-02-21 | 2013-06-05 | 李长贵 | 一种构建高尿酸血症合并糖尿病的动物模型的方法 |
| WO2016087490A1 (en) * | 2014-12-03 | 2016-06-09 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Combination of pi3k-inhibitors |
| CN110772516A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-11 | 四川大学华西医院 | 异紫堇定碱或其盐在制备降低血尿酸水平、防治尿酸性肾病的药品中的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 于雪峰等: "高嘌呤饮食联合尿酸酶抑制制备大鼠高尿酸血症肾损害模型", 《中华中医药学刊》 * |
| 郭磊: "《医学机能学实验指导手册》", 30 September 2017, 中国协和医科大学出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115039737A (zh) * | 2021-08-09 | 2022-09-13 | 北京中医药大学 | 一种建立尿酸盐肾沉积动物模型的方法 |
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