CN113025503A - 一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 - Google Patents
一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113025503A CN113025503A CN202110459093.4A CN202110459093A CN113025503A CN 113025503 A CN113025503 A CN 113025503A CN 202110459093 A CN202110459093 A CN 202110459093A CN 113025503 A CN113025503 A CN 113025503A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- agar
- edible fungus
- activated carbon
- weighing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000001963 growth media Substances 0.000 title claims abstract description 93
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 30
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 77
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 50
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 48
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 26
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 24
- 239000002609 media Substances 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 16
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 15
- 240000001016 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 15
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 15
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 13
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 12
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 9
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 3
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004215 spores Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
Abstract
本发明公开了一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用，所述培养基为PDA培养基或含琼脂的培养基，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中添加有质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。本发明所提供的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基简单易配置，且可以降低对菌丝生长有害物质的浓度，能有效促进菌丝生长，保持及提升菌种的活性，降低或解除有害物质对食用菌菌丝体造成的逆境胁迫。
Description
技术领域
本发明涉及培养基技术领域，具体涉及一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用。
背景技术
食用菌属于丝状真菌，主要包括了担子菌门及子囊菌门内肉眼可见的大型真菌，目前实现人工培育的物种可通过组织分离或孢子分离的方法获得菌种，但菌种经过多次的常规继代培养后极易出现退化或老化，影响其品质，对生产和加工造成严重的影响。研究表明用于制作培养基的琼脂及磷酸盐在高压高温状态下会产生不利于菌丝生长的物质，例如过氧化氢，此类物质对微生物有强烈的毒害作用，因此能够降低有害物质浓度的培养基对于菌种特性的维持具有重要意义。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明旨在提供一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用，所述培养基简单易配置，且可以降低对菌丝生长有害物质的浓度。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，所述培养基为PDA 培养基或含琼脂的培养基，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中添加有质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。
作为一种优选的技术方案，所述PDA培养基包括琼脂20g、土豆 200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，加水定容至1000mL。
作为一种优选的技术方案，所述含琼脂的培养基包括酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g、琼脂粉20g，加水定容至1000mL。
作为一种优选的技术方案，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中还添加有吐温-20，所述吐温-20的添加量为1～1.5ml/250ml培养基。
本发明第二方面在于提供如上所述食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，当所述培养基为PDA培养基时，制备步骤包括：称取琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、 Vb 0.01g，土豆去皮切块后加入1000mL去离子水煮沸15～20min，用纱布过滤保留土豆浸出液，然后加入剩余物质，加热并搅拌均匀后定容至1000mL，分装至2个1000mL三角瓶，每瓶500mL；称取5g 200～ 300目的活性炭，分装到2个50ml三角瓶中，每瓶2.5g，使用密封膜密封后置于高压灭菌锅中，121℃灭菌18min，灭菌结束后，取出三角瓶置于超净工作台，待温度降至约50℃时按照质量体积比为 0.5％的浓度，将活性炭倒至装有培养基的三角瓶中，摇匀，然后分装至无菌培养皿，冷却凝固后即得。
作为一种优选的技术方案，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、 Vb 0.01g，加入1000mL去离子水煮沸15～20min，然后称取20g琼脂粉继续加入并搅拌溶解，定容至1000mL，转移至1000mL的三角瓶中，然后称取5g 200～300目的活性炭，加到三角瓶中，将三角瓶转移至磁力搅拌器上，加入转子到三角瓶中，以500～600rpm的搅拌速度搅拌培养基，同时分装培养基至18*180mm的玻璃试管中，盖上胶塞后置于118～121℃中灭菌18～25min，灭菌结束后，取出试管轻摇混匀后，将试管平置于倾斜斜面上，待凝固后即得。
作为一种优选的技术方案，以500rpm的搅拌速度搅拌培养基的同时，使用智能液体分装泵分装培养基至18*180mm的玻璃试管中。
作为一种优选的技术方案，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、 Vb 0.01g，加入500mL去离子水煮沸15～20min，转移至规格为1L的三角瓶中，然后称取5g 200～300目的活性炭，加到该三角瓶中，使用玻璃棒搅拌并摇匀，称取20g琼脂粉至另一规格为1L的三角瓶中，加入500mL去离子水后转移至水浴锅中加热溶解，培养基和琼脂封口后至于118～121℃中灭菌18～25min，转移至超净台后混合摇匀，倒平板，待凝固后即得。
本发明第三方面在于提供如上所述的培养基在食用菌培养、保藏及复壮中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明所提供的培养基能够显著提高食用菌菌丝体的生长速度以及提升菌丝体的活力，达到复壮的目的。
此外，相比于分别对琼脂糖、磷酸盐及培养基的其他组份单独高温高压灭菌后再混合使用的方式，本发明所提供的制备方法更简便且降低污染的风险。
附图说明
图1是本发明实施例1添加了活性炭培养基的R version 3.5.3 分析结果图；
图2是本发明实施例3添加了活性炭培养基与未添加活性炭培养基的菌丝萌发状态示意图；
图3是本发明实施例4中各组的差异显著性分析结果图；
图4是本发明实施例4中各培养基的菌丝状态示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。在未作说明的情况下，本发明所采用的试剂、设备和方法均为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，所述培养基在常规的PDA培养基、改良的PDA培养基或其它含琼脂的培养基的基础上添加质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。本发明培养基能有效促进菌丝生长，保持及提升菌种的活性，降低或解除有害物质对食用菌菌丝体造成的逆境胁迫。
食用菌菌丝体一般需要在无菌的培养基上生长和保藏，如PDA等含琼脂的混合培养基(含有碳氮源)，而琼脂或琼脂和糖类在有缓冲剂磷酸盐的条件下以及高压灭菌状态下能产生过氧化氢、酚类、醛类等对菌丝体生长有害的物质，加入活性炭能够将有害物质吸附和固定，减少菌丝体对有害物质的吸收积累。活性炭的有效添加量(0.5％)是经过实验测试所得，发明人在实验中发现,当活性炭加入太多时，同样会吸附培养基的部分营养成分而不利于菌丝体的生长，实验测试发现添加量高于0.5％后，菌丝体的生长速度变化不显著(P<0.05)。
在一种实施方式中，所述常规的PDA培养基可以包括：琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，加水定容至1000mL。
在一种实施方式中，所述改良的PDA培养基可以包括：在上述 PDA培养基的基础上添加15～20g的牛肉浸粉、15～20g的酵母浸粉、 15～20g的蛋白胨，以上三种组分可以自由添加，或者将PDA培养基中的葡萄糖换成可溶性淀粉、蔗糖、乳糖等。
在一种实施方式中，所述含琼脂的培养基可以包括：酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO41.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g、琼脂粉20g，加水定容至1000mL。
实施例1:
称取琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、 Vb微量(约0.01g)，土豆去皮切块(切至长度和宽度接近1cm)后加入1000mL去离子水煮沸15～20min，用纱布过滤保留土豆浸出液，然后加入剩余物质，加热并搅拌均匀后定容至1000mL，分装至2个 1000mL三角瓶，每瓶500mL；称取5g 200～300目的活性炭，分装到 2个50ml三角瓶中，每瓶2.5g，使用密封膜密封后置于高压灭菌锅中，121℃灭菌18min，灭菌结束后，取出三角瓶置于超净工作台，待温度降至约50℃时按照质量体积比为0.5％的浓度，将活性炭倒至装有培养基的三角瓶中，摇匀，然后分装至无菌培养皿，冷却凝固后即得到培养基。
所述培养基可用于食用菌菌种的培养、保藏及复壮等过程。
使用灵芝菌丝体在相同的打孔接种方式及培养条件(25℃、避光) 下，对添加了活性炭的培养基进行测试，结果如下：
数据经R version 3.5.3分析并作图，结果如图1。
图1显示，除了组3和组4无统计学差异外，其它各组之间均具有统计学差异(P＜0.05)，表明添加了活性炭的培养基，菌丝体生长更快。
实施例2：
称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb微量 (约0.01g)，加入1000mL去离子水煮沸15～20min，然后称取20g 琼脂粉继续加入并搅拌溶解，定容至1000mL，转移至1000mL的三角瓶中，然后称取5g 200～300目的活性炭，加到三角瓶中，将三角瓶转移至磁力搅拌器上，加入转子到三角瓶中，以500rpm的搅拌速度搅拌培养基，同时使用智能液体分装泵分装培养基至18*180mm的玻璃试管中，盖上胶塞后置于121℃中灭菌18min，灭菌结束后，取出试管轻摇混匀后，将试管平置于具有适当倾斜度的斜面上，待凝固后即得培养基。所述培养基除可用于食用菌菌种的保藏之外，还可用于食用菌菌种的培养和复壮过程。
实施例3：
称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb微量 (约0.01g)，加入500mL去离子水煮沸15～20min，转移至规格为 1L的三角瓶中，然后称取5g 200～300目的活性炭，加到该三角瓶中，使用玻璃棒搅拌并摇匀，称取20g琼脂粉至另一规格为1L的三角瓶中，加入500mL去离子水后转移至水浴锅中加热溶解，培养基和琼脂封口后至于121℃中灭菌20min，转移至超净台后混合摇匀，倒平板，待凝固后即得。
将退化的灵芝菌种转接到平板上，数天后即可萌发长出菌丝，而对照平板培养基(未添加活性炭)菌丝未萌发，如图2所示，表明本实施例培养基可以在一定程度上恢复菌种的活力，实现复壮的效果。
所述培养基可用于食用菌菌种的培养、保藏及复壮等过程。
实施例4：
添加了活性炭的PDA培养基(或含有琼脂及磷酸盐的培养基)相对于对照而言，可以提升菌丝体(上述实验使用已经退化的灵芝菌丝体)的生长速度，但是考虑到活性炭不溶于水，因此制成的培养基存在一定的活性炭分布不均匀的情况，因此，本实施例额外补充添加了吐温-20(即吐温-20作为培养基的一个组份，同培养基的其他组份一起灭菌)，所述吐温-20的添加量为1～1.5ml/250ml培养基，验证对食用菌菌丝体的影响。
结果如下表，表中数据表明，相对于仅添加了活性炭的培养基，添加了吐温-20及活性炭的培养基在相同培养条件下，菌丝体的生长速度略有下降，但差异不显著(P<0.05)，且相对于对照组(编号CK 组：无活性炭和吐温-20，或编号3组：只加吐温-20)，其生长速度仍显著提高(P<0.05)。
差异显著性分析结果如图3所示。
3种培养基下菌丝体的生长量(cm/9d)
添加活性炭(培养基编号1)与添加活性炭和吐温-20(培养基编号2)这两个处理组之间无显著性差异(P＝0.0651>0.05)，这两个处理组与仅添加吐温-20的培养基(培养基编号3)相比具有显著性差异(P<0.05)。但添加吐温-20及活性炭的处理组(培养基编号2)，菌丝生长速度要略低于添加活性炭的处理组(培养基编号1)，但菌丝浓密度要稍高于添加活性炭的处理组，且菌丝体更均匀，详见图4。
以上结果说明，在实施例1-3培养基的基础上添加适宜量的吐温 -20后，可加速活性炭的分散，提高食用菌菌丝体的生长质量。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，其特征在于，所述培养基为PDA培养基或含琼脂的培养基，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中添加有质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。
2.根据权利要求1所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，其特征在于，所述PDA培养基包括琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，加水定容至1000mL。
3.根据权利要求1所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，其特征在于，所述含琼脂的培养基包括酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g、琼脂粉20g，加水定容至1000mL。
4.根据权利要求1所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，其特征在于，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中还添加有吐温-20，所述吐温-20的添加量为1～1.5ml/250ml培养基。
5.根据权利要求1～4任一项所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，其特征在于，当所述培养基为PDA培养基时，制备步骤包括：称取琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，土豆去皮切块后加入1000mL去离子水煮沸15～20min，用纱布过滤保留土豆浸出液，然后加入剩余物质，加热并搅拌均匀后定容至1000mL，分装至2个1000mL三角瓶，每瓶500mL；称取5g 200～300目的活性炭，分装到2个50ml三角瓶中，每瓶2.5g，使用密封膜密封后置于高压灭菌锅中，121℃灭菌18min，灭菌结束后，取出三角瓶置于超净工作台，待温度降至约50℃时按照质量体积比为0.5％的浓度，将活性炭倒至装有培养基的三角瓶中，摇匀，然后分装至无菌培养皿，冷却凝固后即得。
6.根据权利要求1～4任一项所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，其特征在于，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，加入1000mL去离子水煮沸15～20min，然后称取20g琼脂粉继续加入并搅拌溶解，定容至1000mL，转移至1000mL的三角瓶中，然后称取5g200～300目的活性炭，加到三角瓶中，将三角瓶转移至磁力搅拌器上，加入转子到三角瓶中，以500～600rpm的搅拌速度搅拌培养基，同时分装培养基至18*180mm的玻璃试管中，盖上胶塞后置于118～121℃中灭菌18～25min，灭菌结束后，取出试管轻摇混匀后，将试管平置于倾斜斜面上，待凝固后即得。
7.根据权利要求6所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，其特征在于，以500rpm的搅拌速度搅拌培养基的同时，使用智能液体分装泵分装培养基至18*180mm的玻璃试管中。
8.根据权利要求1～4任一项所述的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，其特征在于，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH2PO4 1.5g、MgSO4 0.5g、Vb 0.01g，加入500mL去离子水煮沸15～20min，转移至规格为1L的三角瓶中，然后称取5g 200～300目的活性炭，加到该三角瓶中，使用玻璃棒搅拌并摇匀，称取20g琼脂粉至另一规格为1L的三角瓶中，加入500mL去离子水后转移至水浴锅中加热溶解，培养基和琼脂封口后至于118～121℃中灭菌18～25min，转移至超净台后混合摇匀，倒平板，待凝固后即得。
9.根据权利要求1～4任一项所述的培养基在食用菌菌种培养、保藏及复壮中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110459093.4A CN113025503A (zh) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110459093.4A CN113025503A (zh) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113025503A true CN113025503A (zh) | 2021-06-25 |
Family
ID=76454714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110459093.4A Pending CN113025503A (zh) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113025503A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106588278A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-04-26 | 颍上县唐垛湖现代农业科技有限公司 | 一种出菇率高的食用菌栽培方法 |
| CN108739057A (zh) * | 2018-05-09 | 2018-11-06 | 山东省科创食用菌产业技术研究院 | 一种可以延长食用菌固体菌种贮藏时间的方法 |
| WO2020171786A1 (en) * | 2019-02-19 | 2020-08-27 | T.C. Tarim Ve Orman Bakanliği Doğu Akdeni̇z Geçi̇t Kuşaği Tarimsal Araştirma Ensti̇tüsü Müdürlüğü | A new nutrient media and method ensuring the multiplication of anatolian orchids |
-
2021
- 2021-04-27 CN CN202110459093.4A patent/CN113025503A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106588278A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-04-26 | 颍上县唐垛湖现代农业科技有限公司 | 一种出菇率高的食用菌栽培方法 |
| CN108739057A (zh) * | 2018-05-09 | 2018-11-06 | 山东省科创食用菌产业技术研究院 | 一种可以延长食用菌固体菌种贮藏时间的方法 |
| WO2020171786A1 (en) * | 2019-02-19 | 2020-08-27 | T.C. Tarim Ve Orman Bakanliği Doğu Akdeni̇z Geçi̇t Kuşaği Tarimsal Araştirma Ensti̇tüsü Müdürlüğü | A new nutrient media and method ensuring the multiplication of anatolian orchids |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| L.M. VARGAS-DEL-RLO 等: "Preserving and Maintaining Culinary-Medicinal Royal Sun Mushroom, Agaricus brasiliensis (Agaricomycetes), in Sterile Distilled Water", 《INT J MED MUSHROOMS》 * |
| 刘远超 等: "食用菌菌种保藏方法的研究进展", 《中国食用菌》 * |
| 史钏 等: "灵芝菌种复壮方法的比较研究", 《中国菌物学会2018年学术年会论文汇编》 * |
| 濮智颖: "《土壤环境的新型生物修复》", 31 August 2017, 西安：陕西人民教育出版社 * |
| 赫士海: "《现代细菌学培养基和生化试验手册》", 28 February 1992 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104805023B (zh) | 蜜环菌菌剂的制备方法及该方法制成的蜜环菌菌剂 | |
| CN105238693B (zh) | 一种草菇菌种的常规低温保存方法 | |
| CN111248026B (zh) | 一种栎松茸培养基及其应用 | |
| CN111100825B (zh) | 一株芽孢杆菌及其在工业中的应用 | |
| CN107432135B (zh) | 利用真菌促进锁阳种子萌发的方法 | |
| CN106434368A (zh) | 一种云南白灵芝液体菌种的培养方法 | |
| CN100506996C (zh) | 一种肉灵芝多糖的发酵制备方法 | |
| CN113025503A (zh) | 一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用 | |
| CN111437224A (zh) | 一种利用微生物从大麻花叶中提取抗氧化成分的方法和应用 | |
| CN1478886A (zh) | 一种中国被毛孢液体菌种发酵工艺方法 | |
| CN109082385B (zh) | 羊肚菌液体菌种的制备方法 | |
| CN105420131A (zh) | 一种耐高糖酵母菌及其应用 | |
| CN103535284A (zh) | 野生松乳菇菌种分离培养基及栽培驯化方法 | |
| CN107245458B (zh) | 一种高抗性产海藻糖酿酒酵母菌株的筛选及应用 | |
| CN1045043C (zh) | 塑料袋代用料地栽黑木耳菌种及培养方法 | |
| CN106190898A (zh) | 一种溶解池塘甲藻的蜡样芽孢杆菌jzbc1的工业化液体发酵方法 | |
| CN112899216A (zh) | 一种人参皂苷含量高的人参细胞培养方法 | |
| CN107034145B (zh) | 一种韦司梅拟盘多毛孢camt66351及其应用 | |
| CN113207554B (zh) | 一种双孢蘑菇母种培养基及其应用 | |
| JP3704818B2 (ja) | ブクリョウの人工栽培方法 | |
| CN104711304A (zh) | 一种采用红茶菌和棉籽糖生产细菌纳米纤维素的方法 | |
| CN113604362B (zh) | 一种提高印度梨形孢产孢的方法 | |
| CN102154221B (zh) | 猪圆环病毒ⅱ型毒种的制备和保存方法 | |
| CN106967751B (zh) | 一种松露菌代谢产物的制备方法 | |
| CN110872564A (zh) | 一种野生木耳组织分离方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |