CN113018286B

CN113018286B - 阿魏酸桂皮酸组合物及在制备防治人肿瘤药物的应用

Info

Publication number: CN113018286B
Application number: CN201911251443.7A
Authority: CN
Inventors: 刘立仁; 潘博宇
Original assignee: Tianjin cancer hospital
Current assignee: Tianjin cancer hospital
Priority date: 2019-12-09
Filing date: 2019-12-09
Publication date: 2022-12-23
Anticipated expiration: 2039-12-09
Also published as: CN113018286A

Abstract

本发明公开了阿魏酸桂皮酸组合物及在制备防治人肿瘤药物的应用。包括阿魏酸和桂皮酸。本发明运用细胞生物功能实验证明：将阿魏酸与桂皮酸在质量比(1.69‑300.45):1范围内联合配伍运用可较好地协同抑制人恶性肿瘤细胞的活性，同时起到增效的作用，因此体现出对肿瘤的发生有很好的治疗效果。因此，可以将阿魏酸与桂皮酸组合成药物组合物用于治疗人肿瘤包括肺癌、乳腺癌、卵巢癌或胃癌等。

Description

阿魏酸桂皮酸组合物及在制备防治人肿瘤药物的应用

技术领域

本发明属于医药应用领域，涉及阿魏酸桂皮酸组合物及在制备防治人肿瘤药物的应用。

背景技术

当前，恶性肿瘤已成为严重威胁人类健康和生命的疾病。由于人口增长、老龄化过快以及人们不良生活习惯等影响，近年来在全世界范围内恶性肿瘤的发病率均持续上升^[1]。然而对于恶性肿瘤的预防与治疗，一直是业内专家学者们的研究热点。始于上个世纪四十年代的药物治疗作为癌症治疗的三大疗法之一，与手术及放射治疗相比，药物治疗的历史要短的多。但经过后来几十年的发展，目前全球各国发明并获批使用的抗肿瘤药物总数已有上百种，用这些原料药物配制的各种抗癌药物制剂总数约为1200-1400种，这些药物主要是化疗药物或生物药品。尽管这些药物具有高效、特异性强等特性，但其毒性、耐药性等问题也是不容忽视的。因此，继续深入探寻筛选新型临床抗癌药物，对于发现人恶性肿瘤防治的新方法，寻求恶性肿瘤广谱性治疗的突破具有重要意义。

中药在我国一直有着举足轻重的地位。近年来，相关专家学者不断从中草药中分离提取出了一系列抗肿瘤活性成分，这些都为今后的研究提供了广阔的应用前景。阿魏酸(Ferulic acid，FA) 是一种属于植物来源的酚酸^[2]，而且它还是阿魏、当归、升麻和川芎等中药的主要成分之一^[3,4]，是以桂皮酸为母核的酚酸类成分的代表^[5]。近年来一系列的相关研究表明：阿魏酸具有广泛的药理学作用，比如抗肿瘤、抗氧化、解毒、保肝等作用，且其性质较稳定^[6]。与此同时，桂皮酸也是传统中药肉桂中的主要成分。近年来的相关药理学研究证实，桂皮酸在抗氧化、抗肿瘤活性等方面也具有一定的作用^[7-8]。但由于两种单体在单独作用时，所用的IC₅₀药物浓度数值较大，因此其临床应用价值不高。目前，阿魏酸与桂皮酸组合物在制备防治人肿瘤药物的作用效果方面，目前还未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种阿魏酸桂皮酸药物组合物。

本发明的第二个目的是提供阿魏酸桂皮酸药物组合物在制备防治人肿瘤药物的用途。

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一种阿魏酸桂皮酸药物组合物，由阿魏酸和桂皮酸组成。所述药物组合物，阿魏酸和桂皮酸的质量比优选为(1.69-300.45):1，优选是151.56:1。

本发明所述阿魏酸的分子式为C₁₀H₁₀O₄；结构式如式(I)所示：

(I)

桂皮酸的分子式为C₉H₈O₂；结构式如式(II)所示：

(II)

本发明进一步公开了阿魏酸桂皮酸药物组合物在制备防治人肿瘤药物的应用。所述的人肿瘤为肺癌、乳腺癌、卵巢癌或胃癌。运用细胞生物学实验证明：将阿魏酸与桂皮酸在质量比(1.69-300.45):1范围内联合应用可较好地协同发挥对人恶性肿瘤细胞的杀伤作用，特别是所述阿魏酸和桂皮酸的质量比为151.56:1时，可显著地协同杀伤人恶性肿瘤细胞，对多种恶性肿瘤均具有潜在的治疗效果。

本发明公开的阿魏酸桂皮酸药物组合物包含所述的活性成分或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂组成的药物组合物。该药物组合物可以制成固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂（例如静脉注射）等剂型。

本发明的公开的药物组合物还可以通过非肠道形式给药。优选的非肠道给药形式为注射剂给药。所述固体及液体口服制剂包括：片剂、胶囊、糖浆剂、颗粒剂、口服溶液剂等等。

本发明化合物的药物组合物制备如下：使用标准和常规的技术，使本发明化合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成微粒或微球。固体剂型包括片剂、胶囊、缓释片、缓释微丸等等。固体载体可以是至少一种物质，其可以充当稀释剂、香味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、崩解剂以及包裹剂。惰性固体载体包括磷酸镁、硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液体剂型包括溶剂、悬浮液例如注射剂、粉剂等等。

附图说明

图1为阿魏酸对人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行24h作用处理后的IC50值；

图2为桂皮酸对人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行24h作用处理后的IC50值；

图3为实施例2、3、4的组合物对人源性肺癌细胞LTEP-A-2（a）、GLC-82（b），人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231（c）、MDA-MB-453（d），人源性卵巢癌细胞SKOV-3（e）、3AO（f），人源性胃癌细胞SGC-7901（g）、AGS（h）进行24h作用处理后的细胞活率情况，以百分比计（%）；每张图中：1--代表空白组；2--代表实施例2组；3--代表实施例3组；4--代表实施例4组。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明所用原料及试剂均有市售。其中阿魏酸、桂皮酸（均有市售）：

实验用人源性肺癌细胞LTEP-A-2购买于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；

人源性肺癌细胞GLC-82购买于中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心；

人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231(ATCC® HTB-26™)和MDA-MB-453(ATCC® HTB-131™)购买于美国ATCC保藏中心；

人源性卵巢癌细胞SKOV-3(ATCC® HTB-77™)购买于美国ATCC保藏中心；

人源性卵巢癌细胞3AO购买于上海继和生物科技有限公司；

人源性胃癌细胞SGC-7901购买于上海吉凯基因科技有限公司；

人源性胃癌细胞AGS购买于美国ATCC细胞保藏库（ATCC No. CRL—1739）。

下面结合具体实例对本发明作进一步的说明：

实施例1

阿魏酸的分子式为C₁₀H₁₀O₄；结构式如式(I)所示：

(I)

桂皮酸的分子式为C₉H₈O₂；结构式如式(II)所示：

(II)。

以阿魏酸桂皮酸组合物为活性成分，加入药学可接收的辅料按常规方法可制成各种规格的液体注射剂。阿魏酸桂皮酸组合物的给药途径包括多种，如注射给药、静脉给药、腔内给药等。

实施例2

阿魏酸桂皮酸组合物，按质量比1.69:1的比例由阿魏酸和桂皮酸组成。将活性成分辅料分别过100目筛，称取处方量的主药和辅料（一半羧甲基淀粉钠）充分混合，加入聚乙烯吡咯烷酮水溶液适量制软材，过24目筛，制得湿颗粒于50-60℃烘箱中干燥约2-3小时，将剩余羧甲基淀粉钠，硬脂酸镁和微粉硅胶与颗粒混合均匀，整粒，测定中间体含量，用Φ9mm浅冲压片。

实施例3

阿魏酸桂皮酸组合物，按质量比300.45:1的比例由阿魏酸和桂皮酸组成。将活性成分辅料分别过100目筛，称取处方量的主药和辅料充分混合，加入羟丙甲纤维素溶液适量制软材，过24目筛，制得湿颗粒于50-60℃烘箱中干燥约2-3小时，将硬脂酸镁和滑石粉与颗粒混合均匀，整粒，测定中间体含量，用2号胶囊灌装。

实施例4

阿魏酸桂皮酸组合物，按质量比151.56:1的比例由阿魏酸和桂皮酸组成。工艺：取注射用水50ml，称取处方量的柠檬酸、磷酸二氢钠、氯化钠搅拌使溶解，加入样品搅拌溶解，用0.1mol/L的盐酸或氢氧化钠调pH值为4.0-7.0，加入0.1%的活性炭吸附20分钟。先用0.45μm滤膜滤过，再用0.22μm精滤。按每安剖2毫升灌装，105℃高温灭菌30分钟即得注射液。

药理实验：

本发明的组合物的药效试验如下：

1.阿魏酸抑制多种人源性恶性肿瘤细胞的活性。

选用人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行实验，通过CCK-8法细胞活性的检测，发现FA能有效抑制人源性恶性肿瘤细胞的生长增殖活性。

FA处理人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS在24h对应的IC₅₀分别为：294.13μg/mL、317.45μg/mL、205.56μg/mL、243.63μg/mL、186.35μg/mL、202.32μg/mL、127.10μg/mL、192.20μg/mL（图1）。

2. 桂皮酸对多种人源性恶性肿瘤细胞的杀伤作用。

选用人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行实验，通过CCK-8法细胞活性的检测，发现桂皮酸能有效抑制人源性恶性肿瘤细胞的生长增殖活性。桂皮酸处理人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS在24h对应的IC₅₀分别为：85.14μg/mL、97.36μg/mL、105.29μg/mL、121.48μg/mL、94.87μg/mL、102.93μg/mL、75.38μg/mL、68.15μg/mL（图2）。

3. 实施例2、3、4的组合物对多种人源性恶性肿瘤细胞的杀伤作用。

选用人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行实验，通过CCK-8法检测，发现对应的组合物能有效杀伤人源性恶性肿瘤细胞。与此同时，药物间协同治疗效果较好，达到增效的目的，减少了各自单体用药的剂量。混合组处理人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS在24h对应的IC₅₀见表1。

实施例2、3、4的组合物对恶性肿瘤的治疗与单纯阿魏酸与桂皮酸药物治疗相比，均可不程度的起到协同增效的疗效，特别是实施例4的效果非常好。选用人源性肺癌细胞LTEP-A-2、GLC-82，人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453，人源性卵巢癌细胞SKOV-3、3AO，人源性胃癌细胞SGC-7901、AGS进行实验，通过CCK-8法检测细胞活性的结果详见图3，从图3中可以看出实施例2,3,4的组合物的抗肿瘤效果优势均明显，其中实施例4的效果最好。

表1 CCK-8法抗肿瘤活性试验结果

主要参考文献：

1. Jemal A, Bray F, Center MM, et al. Global cancer statistics. CACancer J Clin.2011; 61(2):69-90.

2. Sung J, Gim S, Koh P. Ferulic acid attenuates the cerebralischemic injury-induced decrease in peroxiredoxin-2 and thioredoxinexpression[J]. Neurosci Lett, 2014, 26(2):62-67.

3. 胡益勇, 徐晓玉. 阿魏酸的化学和药理研究进展[J]. 中成药, 2006, 28(2): 253-255.

4. 刘毅, 刘素香, 张铁军, 等. HPLC法测定川芎中阿魏酸和藁本内酯[J]. 药物评价研究, 2010, 33(3): 210-212.

5. 莫李立, 王素军, 杨本坤, 等. 阿魏酸在 Caco-2 细胞模型的通透性及其在大鼠体内吸收特性研究[J]. 中草药, 2012, 43(5): 947-951.

6. 殷华芳, 钱晓萍, 刘宝瑞, 等. 阿魏酸抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 现代中西医结合杂志, 2010, 19(32): 4238-4240.

7. Kwon BM, Lee SH, Choi SU, et al. Synthesis and in vitrocytotoxicity of cinnamaldehydes to human solid tumor cells. Arch Pharm Res.1998,21(2):147-152.

8. Ka H, Park HJ, Jung HJ, et al. Cinnamaldehyde induces apoptosis byROS-mediated mitochondrial permeability transition in human promyelocyticleukemia HL-60 cells. Cancer Lett.2003,196(2):143-152.。

Claims

1.阿魏酸桂皮酸药物组合物，其特征是由阿魏酸和桂皮酸组成；所述阿魏酸和桂皮酸的质量比为151.56:1。

2.权利要求1所述的阿魏酸桂皮酸药物组合物在制备防治人肿瘤药物的应用；所述肿瘤为肺癌、乳腺癌、卵巢癌或胃癌。

3.权利要求1所述的阿魏酸桂皮酸药物组合物在制备防治人肿瘤药物的应用；所述肿瘤为卵巢癌。