CN113016608B

CN113016608B - 一种木豆组培苗的生根培养基、应用和生根培养方法

Info

Publication number: CN113016608B
Application number: CN201911355287.9A
Authority: CN
Inventors: 孟冬; 付玉杰; 牛丽丽; 杨清; 宋治华; 董碧莹
Original assignee: Beijing Forestry University
Current assignee: Beijing Forestry University
Priority date: 2019-12-25
Filing date: 2019-12-25
Publication date: 2022-01-25
Anticipated expiration: 2039-12-25
Also published as: CN113016608A

Abstract

本发明提供了一种木豆组培苗的生根培养基、应用和生根培养方法，涉及植物组织培养技术领域。所述生根培养基以MS为基础培养基，每升包括：0.1～0.2mg IBA、0.05～0.1mg NAA、琼脂8～10g和蔗糖30～35g。利用本发明提供的生根培养基对木豆组培苗进行生根培养，生根率达到75％以上，且根系发育良好，植株生长健壮，移栽成活率高；且具有使生根苗中黄酮活性成分牡荆素与染料木素含量显著积累提高等特点。

Description

一种木豆组培苗的生根培养基、应用和生根培养方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种木豆组培苗的生根培养基、应用和生根培养方法。

背景技术

植物组织培养技术，又称为离体培养，是指在无菌环境下利用人工培养条件，对植物器官、细胞、原生质体等组织进行培养，并使之生长、发育再生出完整植株的过程。其原理是根据植物细胞的全能性，既植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。植物组织培养具有生长周期短，繁殖率高，培养条件可以人为控制，管理方便等优点。由于其生产方法的独特，使组织培养技术对植物资源的保质、保纯和反季节生产有着特殊作用，同时，采用组织培养技术可以直接诱变和筛选出具有抗病、抗炎等优良性状的品种，因而为植物资源的工厂化生产奠定基础。

木豆[Cajanus cajan(L.)Millsp.]，英文常用名为pigeonpea。原产东半球,我国热带及亚热带地区常见栽培。木豆为蝶形花科常绿灌木，是豆科木豆属一年生或多年生木本植物。木豆作为迄今为止世界上唯一的一种食用木本且用途最多的豆类作物，其根、茎、叶、化、荚全身是宝，价值极高。木豆植株中含有大量的黄酮类化合物，除具有很高的经济、生态利用价值外，还具有显著的药用价值，常用于改善血管的通透性、降低血脂和胆固醇，防治老年高血压和脑溢血，清除自由基等作用，临床上使用木豆牡荆素作为主要原材料治疗股骨头坏死等疾病具有明显的疗效。此外，木豆中含有的黄酮类成分染料木素具有显著的抗氧化活性，同时具有诱发细胞程序性死亡、提高抗癌药效、抑制血管生成等作用，是一种很有潜力的癌症化学预防剂，其抗癌作用及机制具有广泛的应用前景。

目前木豆的产地主要在印度及我国南部地区，其繁殖方式主要以种子繁殖、扦插繁殖为主，因其繁殖方法受到季节限制，且扦插繁殖需要大量的母本，难以满足日益增长的市场需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种木豆组培苗生根培养基及其生根培养方法。利用本发明提供的生根培养基对木豆组培苗进行生根培养，生根率达到75％以上，且根系发育良好，植株生长健壮，移栽成活率高，经生根培养基培养的木豆生根苗具有更高含量的牡荆素和染料木素等黄酮活性成分，绿色环保，为工厂化获取黄酮活性成分牡荆素与染料木素提供材料来源，具有实际应用意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种木豆组培苗的生根培养基，所述生根培养基以MS为基础培养基，每升包括：0.1～0.2mg IBA、0.05～0.1mg NAA、琼脂8～10g和蔗糖30～35g；

所述MS包括以下质量浓度的组分：硝酸钾23.75g/L、硝酸铵20.625g/L、硫酸镁4.625g/L、磷酸二氢钾2.125g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L。

优选地，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0。

本发明还提供了所述生根培养基在提高木豆生根苗牡荆素与染料木素含量中的应用。

本发明还提供了一种木豆组培苗的生根培养方法，将木豆组培苗的茎尖3～5cm接入上述技术方案所述的生根培养基中生根培养至少28d，得到木豆生根植株。

优选地，所述生根培养的条件为：生根培养温度为20～30℃，光照周期为14～18h/d，光照强度为1600～2000Lx。

优选地，所述生根培养条件为：生根培养温度为25℃，光照周期为16h/d，光照强度为1800Lx。

优选地，所述组培苗的生根培养的时间为30～35d。

优选地，所述木豆组培苗的培养方法包括：将木豆种子用乙醇溶液消毒，用无菌水漂洗后，再用次氯酸钠溶液浸洗后，用无菌水漂洗，得到消毒后的木豆种子；将所述消毒后的木豆种子转接至MS培养基中培养至少12d，得到木豆组培苗；

所述MS包括以下质量浓度的组分：硝酸钾47.5g/L、硝酸铵41.25g/L、硫酸镁9.25g/L、磷酸二氢钾4.25g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L。

优选地，所述次氯酸钠溶液的浓度为10％～30％。

优选地，将所述木豆生根植株接入无菌基质中培养至少25d，得到移栽木豆苗；所述无菌基质由蛭石、珍珠岩和黏土组成；所述蛭石、珍珠岩和黏土的质量比为(2.5～3.5):(1.5～2.5):(0.5～1.5)。

本发明提供了一种木豆组培苗生根培养基及其生根培养方法。利用本发明提供的生根培养基对木豆组培苗进行生根培养，生根率达到75％以上，且根系发育良好，植株生长健壮，移栽成活率高。本发明以木豆的种子为外植体，通过种子培养、茎段选择、生根培养、炼苗移栽过程获得了木豆的生根植株，将此木豆生根植株移栽至室外自然生长存活率高。

利用本发明提供的生根培养基对木豆组培苗进行生根培养，能够显著提高其活性成分牡荆素与染料木素的含量。

附图说明

图1为实施例1木豆种子置于MS培养基培养图；

图2为实施例1木豆无菌苗顶尖腋芽，接种于木豆生根培养基生根培养图；

图3为实施例1木豆生根苗图；

图4为实施例1木豆组培苗生根图；

图5为实施例1木豆移栽苗；

图6为实施例1木豆使用生根培养基前后其活性成分牡荆素与染料木素液相色谱分析图。

具体实施方式

本发明提供了一种木豆组培苗生根培养基，所述生根培养基以MS为基础培养基，每升包括：0.1～0.2mg IBA、0.05～0.1mg NAA、琼脂8～10g和蔗糖30～35g；所述MS包括以下质量浓度的组分：硝酸钾23.75g/L、硝酸铵20.625g/L、硫酸镁4.625g/L、磷酸二氢钾2.125g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L。

本发明对上述所述生根培养基的配方中的原料的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。

在本发明中，所述生根培养基的pH值优选为5.8～6.0。

本发明还提供了上述所述的生根培养基在提高木豆生根苗黄酮成分牡荆素与染料木素含量中的应用。

本发明还提供了一种木豆组培苗的生根培养方法，将木豆组培苗的茎尖3～5cm接入上述技术方案所述的生根培养基中培养至少28d，得到木豆生根植株。

在本发明中，所述生根培养的条件优选为：生根培养温度为20～30℃，光照周期为14～18h/d，光照强度为1600～2000Lx；更优选为培养温度为25℃，光照周期为16h/d，光照强度为1800Lx。

在本发明中，所述生根培养的时间优选为28～35d，更优选为30d。

在本发明中，所述木豆组培苗的培养方法优选包括：将木豆种子用乙醇溶液消毒，用无菌水漂洗后，再用次氯酸钠溶液浸洗后，用无菌水漂洗，得到消毒后的木豆种子；将所述消毒后的木豆种子转接至MS培养基中进行培养至少12d，得到木豆组培苗；所述MS包括以下质量浓度的组分：硝酸钾47.5g/L、硝酸铵41.25g/L、硫酸镁9.25g/L、磷酸二氢钾4.25g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L。

在本发明中，所述乙醇溶液的体积分数优选为70～80％，更优选为75％；所述乙醇消毒的时间优选为30～60s，更优选为40～50s。

在本发明中，所述次氯酸钠溶液的浓度优选为10％～30％；所述次氯酸钠溶液消毒的时间优选为6～8min，更优选为7min。

在本发明中，用无菌水漂洗的次数优选为1～4次，更优选为2～3次。

在本发明中，所述消毒后的木豆种子转接至MS培养基中进行培养至少12d，优选为13～20d，更优选为15d。

在本发明中，所述消毒后的木豆种子转接至MS培养基中培养的条件优选为培养温度为20～30℃，光照周期为14～18h/d，光照强度为1600～2000Lx；更优选为培养温度为25℃，光照周期为16h/d，光照强度为1800Lx。

在本发明中，将所述木豆生根植株接入无菌基质中培养至少25d，得到移栽木豆苗；所述无菌基质由蛭石、珍珠岩和黏土组成。所述蛭石、珍珠岩和黏土的质量比为(2.5～3.5):(1.5～2.5):(0.5～1.5)，优选为3:2:1。

在本发明中，所述木豆生根植株接入无菌基质中培养至少25d，优选为26～35d，更优选为30d。

在本发明中，所述组培苗移栽时，优选先用镊子轻轻的将组培苗取出，小心洗掉根部的培养基，将其移栽入已高温灭菌的无菌基质中，首次移栽需浇足量的水，以后每天根据苗的状态进行浇水，经炼苗后的组培苗可移到室外自然生长。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

MS培养基母液的配制：

(1)MS 25倍大量元素母液的配制：称取硝酸钾23.75g，硝酸铵20.625g，硫酸镁4.625g，磷酸二氢钾2.125g，分别添加适量的蒸馏水，搅拌使其完全溶解，溶液混合后定容至1000mL，置于4℃保存。

(2)MS 100倍钙盐母液的配制：称取氯化钙22g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至500mL，置于4℃保存。

(3)MS 100倍铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠1.865g和硫酸亚铁1.39g，先将乙二胺四乙酸二钠加热煮沸，然后边搅拌边慢慢的倒入含有硫酸亚铁的溶液，使其成透亮的黄色液体，加入蒸馏水定容至500mL，避光置于4℃保存。

(4)MS 1000倍微量元素母液的配制：分别称取硼酸3.1g，硫酸锰8.45g，硫酸锌4.3g，钼酸钠0.125g，硫酸铜12.5mg，氯化钴12.5mg，碘化钾0.415g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至500mL，避光置于4℃保存。

(5)MS 200倍有机元素母液的配制：分别称取甘氨酸200mg，盐酸硫胺素10mg，盐酸吡哆素50mg，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至250mL，置于4℃保存。

(6)MS 200倍肌醇母液的配制：称取肌醇5g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至250mL，置于4℃保存。

利用上述母液配制MS培养基硝酸钾23.75g/L、硝酸铵20.625g/L、硫酸镁4.625g/L、磷酸二氢钾2.125g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L。

实施例2

木豆无菌苗培养：选择健康饱满的木豆种子，首先用75％乙醇浸洗30s，无菌水漂洗4次，再用次氯酸钠溶液浸洗6min，无菌水漂洗4次。将木豆种子接种于MS培养基中，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养15天后获得木豆无菌苗。

实施例3

木豆无菌苗培养：选择健康饱满的木豆种子，首先用75％乙醇浸洗60s，无菌水漂洗4次，再用次氯酸钠溶液浸洗8min，无菌水漂洗4次。将木豆种子接种于MS培养基中，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养15天后获得木豆无菌苗。

对比例1

木豆无菌苗培养：选择健康饱满的木豆种子，首先用75％乙醇浸洗10s，无菌水漂洗4次，再用次氯酸钠溶液浸洗4min，无菌水漂洗4次。将木豆种子接种于MS培养基中，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养15天后获得木豆无菌苗。

实施例2、3和对比例1不同消毒方法对木豆种子发芽的影响，见表1：

表1实施例2、3和对比例1不同消毒方法对木豆种子发芽的影响

由表1可知，当使用75％乙醇消毒10s、次氯酸钠消毒4min时，木豆种子的发芽率达到70％，污染率为25％；当使用75％乙醇消毒30s、次氯酸钠消毒6min时，木豆种子的发芽率为75％，污染率为5％；当使用75％乙醇消毒60s、次氯酸钠消毒8min时，木豆种子的发芽率达到60％，污染率为0％。可见，利用实施例2和3的消毒方法使得木豆种子发芽污染率在0～5％之间。

实施例4

木豆无菌苗培养：选择健康饱满的木豆种子，首先用75％乙醇浸洗30s，无菌水漂洗4次，再用次氯酸钠溶液浸洗8min，无菌水漂洗4次。将木豆种子接种于MS培养基中，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养15天后获得木豆无菌苗；

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.1mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

实施例5

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.2mg/L IBA+0.1mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

对比例2

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.01mg/L IBA+0.02mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

对比例3

木豆无菌苗培养除与对比例2的生根培养基不同外，其余同对比例2完全相同。其中，生根培养基为MS+0.02mg/L IBA+0.01mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8。

对比例4

木豆无菌苗培养除与对比例2的生根培养基不同外，其余同对比例2完全相同。其中，生根培养基为MS+0.05mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8。

对比例5

木豆无菌苗培养除与对比例2的生根培养基不同外，其余同对比例2完全相同。其中，生根培养基为MS+0.5mg/L IBA+0.2mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8。

对比例6

木豆无菌苗培养除与对比例2的生根培养基不同外，其余同对比例2完全相同。其中，生根培养基为MS+1mg/L IBA+0.5mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8。

对比例7

木豆无菌苗培养除与对比例2的生根培养基不同外，其余同对比例2完全相同。其中，生根培养基为MS+2mg/L IBA+1mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8。

实施例4、5和对比例2～7不同种类的植物生长调节剂对木豆组培苗生根的影响，见表2：

表2实施例4、5和对比例2～7不同种类的植物生长调节剂对木豆组培苗生根的影响

由表2可知，对比例2～4的植物生长调节剂导致木豆组培苗生根速度缓慢，缺乏相应的调节激素导致木豆组培苗出现褐化、枯萎等现象；对比例5～7的植物生长调节剂则会抑制木豆组培苗的生长及生根；实施例4和5的植物调节剂使木豆组培苗保持正常生长发育进而生根。

实施例6

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.1mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖35g/L，pH6.0中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

对比例8

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.1mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖20g/L，pH5.4中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

对比例9

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.1mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖25g/L，pH5.6中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30d后统计生根率。

实施例4、6和对比例8、9对木豆组培苗生根的影响，见表3：

表3实施例4、6和对比例8、9对木豆组培苗生根的影响

由表3可知，实施例4和6使得木豆组培苗的生根速度快，同时组培苗生长状态良好；对比例8和9使得木豆组培苗生长缓慢，难以生根。可见，实施例4和6的蔗糖浓度和pH值有助于木豆组培苗的生根。

实施例7

生根培养：增殖培养获得的无菌苗生长15天后，剪取无菌苗茎尖3cm，将其转移至生根培养基MS+0.1mg/L IBA+0.05mg/L NAA+琼脂8g/L和蔗糖30g/L，pH5.8中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30后统计生根率，生根率为92％。

木豆生根苗优势在于在生根培养基中生根培养30天后，将其粉碎，过40目筛，使用70％乙醇提取木豆植物材料粉末获得粗提物，用高效液相色谱仪进行分析检测。色谱条件为Agilent 1260色谱仪，HiQ sil C18W色谱柱，流动相：水(A)-甲醇(B)，柱温30℃，检测波长254nm，流速1mL/min，进样量20uL，梯度洗脱条件：0-15min，45-75％(B)；15-20mn，75-80％(B)；20-45min，80-90％(B)。

检测结果表明：通过生根培养基培养的木豆生根苗，可提高其黄酮类活性成分的含量，其中牡荆素的含量从0.206mg/g增加到0.487mg/g，染料木素的含量从6.7ug/g增加到9.2ug/g[如图6所示]。表明通过该培养基进行培养的木豆生根苗具有更高的黄酮类活性成分，可作为传统的田间栽培木豆植物材料来源的替代品，生长速度快，绿色无污染，可实现规模化扩繁培养，具有较高的应用价值。

再生植株炼苗与移栽：将木豆生根植株移栽入无菌基质(蛭石：珍珠岩：黏土＝3:2:1)中进行培养。组培苗移栽时，先用镊子轻轻的将组培苗取出，小心洗掉根部的培养基，将其移栽入已高温灭菌的无菌基质中，首次移栽需浇足量的水，以后每天根据苗的状态进行浇水，经炼苗30天后的组培苗可移到室外自然生长。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种木豆组培苗的生根培养方法，其特征在于，将木豆组培苗的茎尖3～5cm接入生根培养基中生根培养至少28d，得到木豆生根植株；

所述生根培养基以MS为基础培养基，每升包括：0.1～0.2mgIBA、0.05～0.1mgNAA、琼脂8～10g和蔗糖30～35g；

所述MS包括以下质量浓度的组分：硝酸钾23.75g/L、硝酸铵20.625g/L、硫酸镁4.625g/L、磷酸二氢钾2.125g/L、氯化钙44g/L、乙二胺四乙酸二钠3.73g/L、硫酸亚铁2.78g/L、硼酸6.2g/L、硫酸锰16.9g/L、硫酸锌8.6g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜25mg/L、氯化钴25mg/L、碘化钾0.83g/L、甘氨酸800mg/L、盐酸硫胺素40mg/L、盐酸吡哆素200mg/L和肌醇20g/L；

所述生根培养基的pH值为5.8～6.0；

所述生根培养的条件为：生根培养温度为20～30℃，光照周期为14～18h/d，光照强度为1600～2000Lx；

所述生根培养的时间为30～35d；

所述木豆组培苗的培养方法包括：将木豆种子用乙醇溶液消毒，用无菌水漂洗后，再用次氯酸钠溶液浸洗后，用无菌水漂洗，得到消毒后的木豆种子；将所述消毒后的木豆种子转接至所述MS中培养至少12d，得到木豆组培苗；

所述次氯酸钠溶液的浓度为10％～30％；

将所述木豆生根植株接入无菌基质中培养至少25d，得到移栽木豆苗；所述无菌基质由蛭石、珍珠岩和黏土组成；所述蛭石、珍珠岩和黏土的质量比为(2.5～3.5):(1.5～2.5):(0.5～1.5)。

2.根据权利要求1所述的生根培养方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：生根培养温度为25℃，光照周期为16h/d，光照强度为1800Lx。

3.根据权利要求1所述的生根培养方法，其特征在于，所述生根培养的时间为30～35d。

4.根据权利要求3所述的生根培养方法，其特征在于，所述生根培养的时间为30d。

5.根据权利要求1所述的生根培养方法，其特征在于，所述木豆组培苗的培养时间为13～20d。

6.根据权利要求5所述的生根培养方法，其特征在于，所述木豆组培苗的培养时间为15d。

7.根据权利要求1所述的生根培养方法，其特征在于，所述移栽木豆苗的培养时间为26～35d。

8.根据权利要求7所述的生根培养方法，其特征在于，所述移栽木豆苗的培养时间为30d。

9.根据权利要求1所述的生根培养方法，其特征在于，所述蛭石、珍珠岩和黏土的质量比为3:2:1。