CN113005214B - 筛选毛白杨抗旱新品种的分子标记及其组合、方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了与毛白杨抗旱性状相关的分子标记及其单倍型组合，所述分子标记选自SNP1、SNP2和SNP3中的一个，分子标记组合由SNP1、SNP2和SNP3三个标记组合而成，所述分子标记组合按SNP 1～SNP3依次为A、T、C纯合基因型，即为AA‑TT‑CC基因型组合时，对应的毛白杨具有最强的抗旱能力，利用上述分子标记及其组合，能够在分子水平对毛白杨的抗旱性状做出精准评价，在杨树幼苗期精准、高效地筛选出抗旱种质。本发明还公开了利用上述分子标记鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的方法及对毛白杨进行遗传改良的方法等，为毛白杨分子标记辅助选择育种提供了有效手段。

Description

筛选毛白杨抗旱新品种的分子标记及其组合、方法和应用

技术领域

本发明属于植物分子育种技术领域，具体涉及一种与杨树气孔、生理生化性状共同连锁的分子标记及其组合，尤其涉及基于该基因标记组合进行高抗旱毛白杨新品种选育的方法、引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

森林是地球陆地生态系统的主要组成部分，对人类生活、自然界的碳循环及维持生态平衡都具有不可替代的地位和作用。杨树是一种在全球广泛分布的工业用材与生态树种，是世界人工林建设的第一大树种，具有早期速生、适应性强、分布广、品种多、易杂交、易改良遗传性、易繁殖等优点，广泛应用于集约栽培。近年来，受全球气候变暖的影响，干旱事件的频次和强度显著增加，已经对森林生态系统的健康、分布、结构、组成和生态多样性造成了巨大的影响。杨树人工林的栽培也受到越来越严重的水资源缺乏的影响，给栽种范围和栽种后的管理带来很大的挑战。因此，开展杨树抗旱育种对扩大困难立地造林面积、提升杨树人工林质量具有重要意义。

其中，毛白杨作为中国特有的乡土树种，分布较为广泛，其以黄河流域中、下游为中心分布区，在水土保持和维护生态平衡方面发挥重要作用，是北方地区重要的生态先锋树种和工业用材树种。毛白杨是多年生乔木树种，具有高大的主干和强大根系，对于干旱胁迫的响应和适应具有极其复杂的调控过程，包含形态、生理、生化和分子水平多层面的调控机制。对毛白杨进行传统的抗旱遗传育种，需要经过杂交、回交等多个世代，育种周期较长且表型选育稳定性差。随着现代分子育种技术的不断发展，从分子水平对毛白杨抗旱能力进行分子标记辅助遗传改良成为一种趋势。

单核苷酸多态性(SNP)标记指由基因组单核苷酸变异引起的DNA序列多态性，被公认为是最新的第三代DNA分子标记，以广泛应用于基因定位、克隆、遗传育种以及遗传多样性等研究领域。然而，受到不同实验群体的遗传背景差异、奠基者效应、多基因互作效应、基因-环境互作效应、不完全选择/平衡选择效应、遗传标记数量的限制以及连锁不平衡等因素的干扰，导致目前毛白杨抗旱育种实践中仍然缺少功能明确、效应显著的、可直接应用的分子标记。

因此，基于多组学联合分析方法精准解析标记位点的分子机制，并最终发掘通用的、效应巨大的、准确的与毛白杨抗旱能力相关的分子标记，以提高毛白杨优异抗旱种质资源选育效率和精度，是目前亟需解决的问题。

发明内容

为了克服上述问题，本发明人进行了锐意研究，通过全基因组关联分析的方法，发掘了与毛白杨抗旱性状显著相关的SNP位点及其组合，同时获得了与抗旱能力相关的SNP位点的基因型及分子标记组合的基因型组合，能够在分子水平对杨树的抗旱性状做出精准评价，在杨树幼苗期精准、高效地筛选抗旱树种，缩短杨树育种周期。此外，还提供了鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的引物组合、试剂盒及方法和应用等，能够早期、快速、低成本、有效的预测毛白杨的抗旱能力，为毛白杨分子标记辅助选择育种提供了有效手段，从而完成了本发明。

具体来说，本发明的目的在于提供以下方面：

第一方面，本发明提供了一种与毛白杨抗旱性状相关的分子标记，其中，所述分子标记选自SNP1、SNP2和SNP3中的一个，所述分子标记SNP1位于杨树基因组DUF538基因上游第100位碱基，具有G/A多态性；所述分子标记SNP2位于杨树基因组TRA2基因上游第105位碱基，具有A/T多态性；所述分子标记SNP3位于杨树基因组AbFH2基因上游第2040位碱基，具有T/C多态性。

第二方面，本发明提供了与毛白杨抗旱性状相关的分子标记组合，其中，所述分子标记组合由SNP1、SNP2和SNP3中的两个或三个标记组合而成。

第三方面，本发明提供了用于扩增上述分子标记组合的引物组合，所述引物组合由分别用于扩增SNP1～SNP3的引物组成，其中，所述扩增分子标记SNP1的引物为P1和P2，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示，所述扩增分子标记SNP2的引物为P3和P4，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示；所述扩增分子标记SNP3的引物为P5和P6，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示。

第四方面，本发明提供了含有上述引物组合的检测试剂或试剂盒。

第五方面，本发明提供了上述SNP分子标记或分子标记组合的获得方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，选择毛白杨群体，进行表型性状测定；步骤2，对毛白杨群体进行基因组DNA提取；

步骤3，获得与毛白杨抗旱性状相关的SNP分子标记。

第六方面，本发明提供了上述SNP分子标记、分子标记组合、引物组合、检测试剂或试剂盒、所述方法获得的SNP标记或分子标记组合在如下(1)至(6)任一方面中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定毛白杨的抗旱能力；(2)筛选或辅助筛选抗旱能力强的毛白杨新品种；

(3)杨树分子标记辅助育种；(4)制备鉴定或辅助鉴定毛白杨抗旱能力的产品；(5)制备筛选或辅助筛选抗旱能力强的毛白杨新品种的产品；(6)制备杨树分子标记辅助育种的产品。

第七方面，本发明提供了一种鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的方法，所述方法包括检测上述的SNP分子标记的多态性或基因型的步骤。

第八方面，本发明提供了一种毛白杨遗传改良的方法，所述方法包括继代选育SNP1分子标记的AA基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；或继代选育SNP2分子标记的TT基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；或继代选育SNP3分子标记的CC基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；或继代选育分子标记组合的AA-TT-CC基因型组合的个体，淘汰该标记组合的所有其他基因型组合个体的步骤；

优选地，所述方法包括继代选育上述分子标记组合的AA-TT-CC基因型组合的个体，淘汰该标记组合的所有其他基因型组合个体的步骤。

本发明所具有的有益效果包括：

(1)本发明提供的与毛白杨抗旱性状相关的分子标记及其组合，能够在分子水平对杨树的抗旱性状做出精准评价，在杨树幼苗期精准、高效地筛选抗旱树种，缩短杨树育种周期；(2)本发明提供的鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的方法，能够早期、快速、低成本、有效的预测毛白杨的抗旱能力，为毛白杨分子标记辅助选择育种提供了有效手段；(3)本发明提供的分子标记或毛白杨遗传改良方法，适用范围广，具有广阔的应用前景，能够取得优异的经济价值。

附图说明

图1示出本发明实施例1所述的SNP1～SNP3分子标记的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体气孔长宽比的基因型效应图；图2示出本发明实施例1所述的SNP1～SNP3分子标记的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体气孔宽度的基因型效应图；图3示出本发明实施例1所述的SNP1～SNP3分子标记的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体气孔密度的基因型效应图；图4示出本发明实施例1所述的SNP1～SNP3分子标记的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体总抗氧化酶活性的基因型效应图；图5示出本发明实施例1所述的SNP1～SNP3分子标记的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体甜菜碱含量的基因型效应图；图6～8分别示出本发明SNP1～SNP3分子标记与各自相邻基因的物理位置关系示意图。

具体实施方式

下面通过优选实施方式和实施例对本发明进一步详细说明。通过这些说明，本发明的特点和优点将变得更为清楚明确。

在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

为了寻找能准确鉴定毛白杨抗旱性的指标，本发明人进行了大量研究，结果发现：首先，气孔作为树木与外界进行气体交换的直接通道，能够平衡叶片内部的水分蒸腾与碳获取，气孔表型的多样性对于植物的生长发育和在逆境中生存的适应能力具有实质性的意义。

其次，与毛白杨适应干旱反应相关的生理生化性状，如呼吸速率、光合速率、蒸腾速率、MDA含量、甜菜碱含量、总抗氧化酶活性(过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性)等，是杨树对干旱胁迫适应程度的反映。

基于上述研究，本发明中优选选择气孔形态和生理生化性状作为毛白杨抗旱性鉴定指标，采用全基因组关联分析的方法获得了与毛白杨抗旱能力显著相关的SNP标记。

本发明的第一方面，提供了与毛白杨抗旱性状相关的分子标记，所述分子标记选自SNP1、SNP2和SNP3中的一个，

其中，所述分子标记SNP1位于杨树基因组DUF538基因上游第998位碱基，具有G/A多态性；

所述分子标记SNP2位于杨树基因组TRA2基因上游第105位碱基，具有A/T多态性；

所述分子标记SNP3位于杨树基因组AbFH2基因上游第2040位碱基，具有T/C多态性。

在本发明中，所述杨树基因组的版本为杨树参考基因组v3.0(http://popgenie.org/)。

根据本发明一种优选的实施方式，所述分子标记SNP1位于如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第14位，DUF538基因的核苷酸序列为第1012-1869位；

所述分子标记SNP2位于如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的第6位，TRA2基因的核苷酸序列为第111-3747位；

所述分子标记SNP3位于如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的第21位，AbFH2基因的核苷酸序列为第2060-18929位。

其中，DUF为未知功能结构域蛋白家族(domains of un-known function proteinfamilies,DUFs)，占据整个蛋白家族的26.5％，是许多还没有进行功能注释的蛋白家族。DUF538蛋白超家族由几种功能未知的植物蛋白组成，其广泛分布于单子叶植物和双子叶植物种类中，DUF538家族蛋白分子量约为19-21kDa，编码约170个氨基酸，其唯一可显著识别的保守结构叫做DUF538，在不同的胁迫激发的植物中起重要的调节作用。

TRA2为前体mRNA剪辑蛋白，AbFH2基因的拟南芥同源基因为AT2G25050，编码肌动蛋白结合FH2(formin2)家族蛋白，只在保卫细胞中表达。

本发明人通过单倍型分析软件haploview v5.0发现，所述SNP位点与各自相邻基因处于高度连锁平衡状态。

进一步地，所述分子标记SNP1～SNP3与各自相邻基因的物理位置关系分别如图6～8所示。

在进一步优选的实施方式中，所述抗旱性状包括气孔形态和生理生化性状，

所述气孔形态选自气孔宽度、气孔长宽比和气孔密度中的一种或多种；

所述生理生化性状为总抗氧化酶活性和/或甜菜碱含量。

在本发明中，所述总抗氧化酶活性指的是过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性的总和。

本发明人发现，在干旱、水涝、高温、低温、盐渍等逆境条件下，植物通过体内积累小分子量的有机渗透调节物质的含量等来降低胞内渗透势，提供植物在低水势下的吸水能力，从而稳定膜结构和大分子构象，提高植物对逆境的适应能力。甜菜碱为高等植物中最重要的渗透调节物质之一，在胁迫下诱导合成，与植物对盐害、干旱等的抗性直接相关。

此外，植物在自身有氧代谢过程中以及外界逆境胁迫下，体内会产生大量活性氧，将会对植物的生长发育产生严重的毒害作用。植物为了维持正常的生长，通过抗氧化酶系统和抗氧化剂对活性氧进行清除。在抗氧化酶系统中，超氧化物歧化酶(SOD)是植物抗氧化的第一道防线，能清除细胞中多余的超氧阴离子。过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)可以使H₂O₂歧化成水和氧分子。通过这三种酶的作用，有效的控制植物体内活性氧的积累。

因此，本发明中优选选择上述气孔宽度、气孔长宽比、气孔密度以及总抗氧化酶活性和甜菜碱含量作为毛白杨抗旱能力的鉴定指标。

根据本发明一种优选的实施方式，所述SNP1标记的基因型为AA、GG和GA，SNP1标记的基因型为AA的毛白杨的气孔宽度、总抗氧化酶活性显著高于GG和GA基因型。

其中，AA基因型是杨树SNP1标记为A的纯合型，GG基因型是杨树SNP1标记为G的纯合型，GA基因型是杨树SNP1标记为G和A的杂合型。

优选地，所述SNP2标记的基因型为AA、TT和AT，SNP2标记的基因型为TT的毛白杨的气孔长宽比、甜菜碱含量显著高于AA和AT基因型。

更优选地，所述SNP3标记的基因型为TT、CC和CT，SNP3标记的基因型为CC的毛白杨的气孔密度、甜菜碱含量显著高于TT和CT基因型。

为了排除表型选择中外部环境等因素对毛白杨优良基因的误淘和误选，需要对SNP位点进行基因分型，以增强目标选择的准确性。

基因分型的方法有多种，如重测序法、直接测序法、飞行时间质谱法、芯片技术等，在本发明中，优选采用重测序的方法(利用Illumina GA II平台对所选种质进行重测序)对所述SNP进行基因分型。

本发明的第二方面，提供了与毛白杨抗旱性状相关的分子标记组合，所述分子标记组合由上述SNP1、SNP2和SNP3中的两个或三个标记组合而成，优选由SNP1、SNP2和SNP3三个标记组合而成。

根据本发明一种优选的实施方式，所述分子标记组合按SNP1～SNP3依次为A、T、C纯合基因型(即为AA-TT-CC基因型组合)时，对应的毛白杨具有最强的抗旱能力；

所述分子标记组合按SNP1～SNP3依次为G、A、T纯合基因型(即为GG-AA-TT基因型组合)时，对应的毛白杨具有最弱的抗旱能力。

在进一步优选的实施方式中，所述分子标记组合按SNP1～SNP3依次为A、T、C纯合基因型(即为AA-TT-CC基因型组合)时，对应的毛白杨气孔宽度最大，气孔长宽比以及气孔密度最小，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量最高；

所述分子标记组合按SNP1～SNP3依次为G、A、T纯合基因型(即为GG-AA-TT基因型组合)时，对应的毛白杨气孔宽度最小，气孔长宽比以及气孔密度最大，抗氧化酶活性和甜菜碱含量最低。

本发明的第三方面，提供了用于扩增第一方面所述与毛白杨抗旱性状相关的分子标记的引物，其中，

所述扩增分子标记SNP1的引物为P1和P2，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：4和SEQID NO：5所示；所述扩增分子标记SNP2的引物为P3和P4，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示；所述扩增分子标记SNP3的引物为P5和P6，其核苷酸序列分别如SEQ IDNO：8和SEQ ID NO：9所示。

本发明的第四方面，提供了用于扩增第二方面所述分子标记组合的引物组合，所述引物组合由上述分别用于扩增SNP1～SNP3的引物组成，即由引物P1～P6组成。

本发明的第五方面，提供了含有上述检测分子标记引物或引物组合的检测试剂或试剂盒。

优选地，所述检测试剂或试剂盒还包括PCR扩增试剂，所述PCR扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTP和DNA聚合酶。

本发明的第六方面，提供了上述SNP分子标记的获得方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，选择毛白杨群体，进行表型性状测定。

根据本发明一种优选的实施方式，所述选择的毛白杨群体包括自然群体和旱胁迫种质资源群体。

其中，毛白杨自然群体由自然生长的毛白杨个体组成，旱胁迫种质资源群体由毛白杨不同基因型个体组成，在生长初期(苗龄期小于三个月)正常生长，土壤含水量保持在40％以上，之后停止供水一个月至土壤含水量降至10％以下，土壤含水量在10％以下的阶段为旱胁迫生长阶段，此阶段的群体为毛白杨旱胁迫种质资源群体。

在本发明中，首先采用毛白杨自然群体筛选与毛白杨抗旱性状显著相关的SNP分子标记，再采用旱胁迫种质资源群体对自然群体的筛选结果进行验证，与现有技术相比，提高了获得的分子标记的准确性，更有利于对毛白杨进行高效、精确地抗旱品种选育。

在进一步优选的实施方式中，所述自然群体和旱胁迫种质资源群体中毛白杨个体的株数相同。

根据本发明一种优选的实施方式，所述表型性状包括气孔形态和生理生化性状，

其中，气孔形态选自气孔宽度、气孔长宽比和气孔密度中的一种或多种；

生理生化性状为总抗氧化酶活性和/或甜菜碱含量。

在本发明中，气孔形态性状可以按照现有技术中常用的方法测定，优选按照下述步骤进行：先用胶带清理毛白杨叶片背面的纤毛，再将指甲油均匀涂抹在叶背，待风干后撕下放置于显微镜下观察，每个样品选取三个不重叠的区域进行拍照，利提取照片表型进行分析测定。

总抗氧化酶活性和甜菜碱含量采用现有技术中常用的方法测定，如：利用TecanInfiniteM200型酶标仪，采用分光光度法分别在特定的波长下测定酶活性与甜菜碱含量。

步骤2，对毛白杨群体进行基因组DNA提取。

其中，对群体中每个个体的叶片组织进行DNA提取，可以采用现有技术中常用的方法或DNA提取试剂盒进行，例如：利用DNeasy Plant Mini Kit(Qiagen China,Shanghai,China)试剂盒。

优选地，采用紫外分光光度计和凝胶电泳进行DNA质量检测，将检验合格的DNA放置于-20℃保存，以用于后续分型测定。

步骤3，获得与毛白杨抗旱性状相关的SNP分子标记。

在本发明中，采用全基因组关联分析的方法获得与毛白杨抗旱性状相关的SNP分子标记，优选按照下述步骤进行：

(1)对每个个体的DNA进行重测序获得原始数据，对其进行质量控制后得到干净数据，将其比对到杨树参考基因组v3.0(http://popgenie.org/)，在全基因组水平鉴定单核苷酸多态性位点(SNP)；同时获得SNP位点的基因型；

(2)对全基因组水平的SNPs进行筛选，获得高质量SNPs标记集合，利用其进行群体结构分析；

(3)对全基因组高质量SNPs与毛白杨抗旱性状数据进行关联分析，获得显著关联的SNP位点及其基因型。

本发明的第七方面，提供了上述SNP分子标记、分子标记组合、引物、引物组合、检测试剂、试剂盒或上述方法获得的SNP标记及其组合在如下(1)至(6)任一方面中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定毛白杨的抗旱能力；(2)筛选或辅助筛选抗旱能力强的毛白杨新品种；

(3)杨树分子标记辅助育种；(4)制备鉴定或辅助鉴定毛白杨抗旱能力的产品；(5)制备筛选或辅助筛选抗旱能力强的毛白杨新品种的产品；(6)制备杨树分子标记辅助育种的产品。

本发明的第八方面，提供了一种鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的方法，所述方法包括检测毛白杨上述SNP分子标记的多态性或基因型，或检测分子标记组合的基因型的步骤。

其中，所述毛白杨的抗旱能力优选通过气孔宽度、气孔长宽比、气孔密度、总抗氧化酶活性及甜菜碱含量来鉴定。

优选地，所述鉴定或筛选抗旱能力强的毛白杨的方法包括以下步骤：

步骤I，提取待测毛白杨的基因组DNA；

步骤II，以上述提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增；

步骤III，确定待测毛白杨上述SNP分子标记的多态性或基因型，或分子标记组合的基因型；

步骤IV，根据基因型检测结果确定待测毛白杨的抗旱能力。

其中，步骤II中，所述PCR扩增采用的引物为分子标记SNP1的检测引物、分子标记SNP2的检测引物和分子标记SNP3的检测引物中的至少一种。

步骤III中，可以通过确定分子标记SNP1～SNP3中任意一个标记的多态性或基因型来鉴定毛白杨的抗旱能力，也可以通过确定分子标记组合的基因型来鉴定毛白杨的抗旱能力，优选通过确定分子标记组合的基因型来鉴定毛白杨的抗旱能力。

其中，确定分子标记多态性或基因型的方法包括但不限于测序。

步骤IV中，若待测毛白杨的SNP1位点的基因型为AA，则其气孔宽度和总抗氧化酶活性高；

若待测毛白杨的SNP1位点的基因型为GG或GA，则其气孔宽度和总抗氧化酶活性低；

若待测毛白杨的SNP2位点的基因型为TT，则其气孔长宽比和甜菜碱含量高；

若待测毛白杨的SNP2位点的基因型为AA或AT，则其气孔长宽比和甜菜碱含量低；

若待测毛白杨的SNP3位点的基因型为CC，则其气孔密度和甜菜碱含量高；

若待测毛白杨的SNP3位点的基因型为TT或CT，则其气孔密度和甜菜碱含量低；或

若待测毛白杨的SNP1、SNP2、SNP3三个位点的基因型组合为AA-TT-CC，其气孔宽度最大，气孔长宽比以及气孔密度最小，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量最高，杨树抗旱能力最强；

若待测毛白杨的SNP1、SNP2、SNP3三个位点的基因型组合为GG-AA-TT，其气孔宽度最小，气孔长宽比以及气孔密度最大，抗氧化酶活性和甜菜碱含量最低，杨树抗旱能力最弱。

其中，当待测毛白杨的SNP1位点的基因型为AA、或SNP2位点的基因型为TT、或SNP3位点的基因型为CC、或待测毛白杨的SNP1、SNP2、SNP3三个位点的基因型组合为AA-TT-CC时，保留该个体。

优选地，当待测毛白杨的SNP1、SNP2、SNP3三个位点的基因型组合为AA-TT-CC时，保留该个体；

当待测毛白杨的SNP1、SNP2、SNP3三个位点的基因型组合为GG-AA-TT时，淘汰该个体。

本发明的第九方面，提供了一种毛白杨遗传改良的方法，所述方法包括继代选育上述SNP1分子标记的AA基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；

或包括继代选育上述SNP2分子标记的TT基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；

或包括继代选育上述SNP3分子标记的CC基因型的纯合子个体，淘汰该位点所有其他基因型个体的步骤；

或包括继代选育上述分子标记组合的AA-TT-CC基因型组合的个体，淘汰该标记组合的所有其他基因型组合个体的步骤。

优选地，所述方法包括继代选育上述分子标记组合的AA-TT-CC基因型组合的个体，淘汰该标记组合的所有其他基因型组合个体的步骤。

实施例

以下通过具体实例进一步描述本发明，不过这些实例仅仅是范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。

实施例1与毛白杨抗旱性状相关的SNP分子标记及其组合的获得

1、试验群体

毛白杨正常生长条件下的自然群体：2019年3月，在山东省冠县通过嫁接克隆的方法获得104株毛白杨一年生自然群体，抽样种群几乎代表了毛白杨全部的自然分布区域。

毛白杨旱胁迫种质资源群体：2019年3月，在山东冠县通过嫁接克隆的方法获得104株毛白杨一年生自然群体，抽样种群几乎代表了毛白杨全部的自然分布区域。在生长初期(苗龄期小于三个月)正常生长，土壤含水量保持在40％以上，之后停止供水一个月至土壤含水量降至10％以下，土壤含水量在10％以下为旱胁迫生长阶段，此阶段的群体为毛白杨旱胁迫种质资源群体。

2、气孔形态和生理生化性状的测定

于毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体中各采集104株个体的6片功能叶，其中3片分别用于测定气孔宽度、气孔长宽比和气孔密度，另外3片用于测定总抗氧化酶活性(过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性)和甜菜碱含量。

气孔形态的测定方法为：先用胶带清理毛白杨叶片背面的纤毛，再将指甲油均匀涂抹在叶背，待风干后撕下放置于显微镜下观察，每个样品选取三个不重叠的区域进行拍照，利用ImageJ软件提取照片表型。

总抗氧化酶活性和甜菜碱含量的测定方法为：利用TecanInfiniteM200型多功能酶标仪，采用分光光度法进行。

3、DNA的提取

利用DNeasy Plant Mini Kit(Qiagen China,Shanghai,China)试剂盒提取自然群体和抗旱群体叶片组织的基因组DNA。

4、与毛白杨抗旱性状相关的SNP分子标记的获得

(4.1)、对自然群体每株个体的DNA进行重测序获得原始数据(Rawdata)，对DNA原始数据进行质量控制(Quality Control)后得到干净数据(Cleandata)；

其中，DNA重测序为双末端测序，所述测序的深度为30×；所述测序采用IlluminaGA2重测序平台；

质量控制的标准是：(i)去除掉含有≥10％未识别核苷酸的读取(reads)；(ii)去除掉碱基质量＜5的数量＞50％的reads；(iii)去除掉＞10nt比对到适配器(adapter)的reads，允许≤10％的错配；(iv)删除在文库构建过程中通过PCR扩增产生的推定PCR重复片段(两个完全相同的配对的read1和read2)；

利用Burrows-WheelerAlignerv0.7.5a-r405(默认参数)将每个样本的cleandata比对到杨树参考基因组v3.0(http://popgenie.org/)上；利用SAMtoolsv1.1过滤掉低质量reads(MQ＜20)；利用Genome Analysis Toolkit(GATK)v4.0鉴定全基因组单核苷酸多态性位点(SNP)，参数如下：SNP:QD<5.0||MQ<40.0||FS>60.0||SOR>3.0||MQRankSum<-12.5||ReadPosRankSum<-8.0；Indel:QD<5.0||FS>200.0||SOR>10.0||MQRankSum<-12.5||ReadPosRankSum<-8.0；利用Vcftools_0.1.13得到双等位SNPs。

最终，利用104株毛白杨自然群体得到最小等位基因频率(Minor AlleleFrequency，MAF)＞0.05，缺失基因型(Missing Genotype,MG)＜0.2的共计13,063,406个SNPs。

(4.2)、利用vcftools软件对全基因组SNP进行筛选，得到803,837个SNP的集合，筛选的条件为：MAF＞0.05，MG＜0.2，连锁不平衡(r²)<0.2；利用该SNP集合通过Admixturev1.3.0软件进行群体结构分析；K值的范围是1-10，在K＝3时，取得最小交叉验证误差值。

(4.3)使用Efficient Mixed-Model Association eXpedited(EMMAX)软件中的混合线性模型(Mixed linear model,MLM)，进行步骤(4.2)筛选得到的SNP集合与104株自然群体表型SNP-性状关联分析，确定与气孔形态和生理生化性状显著关联的SNP位点；

其中，利用EMMAX软件计算亲缘关系，作为随机效应的方差-协方差矩阵，以步骤(4.2)中的群体结构作为固定效应。

筛序显著关联的SNP位点的阈值为P<1.24E-06(1/n，其中n为有效SNP位点的数量)。

经过上述筛选，获得3个与气孔形态和生理生化性状显著关联的SNP位点，分别为位于DUF538基因附近的SNP1、位于TRA2基因附近的SNP2和位于AbFH2基因附近的SNP3，具体地，SNP1位点位于DUF538基因上游第998位碱基，SNP2位点位于TRA2基因上游第105位碱基，SNP3位点位于AbFH2基因上游第2040位碱基。其中，DUF538基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，TRA2基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，AbFH2基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。

通过NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)网站在线保守结构域比对工具发现 TRA2基因第1878位至第2183位碱基、第2429位至第3319位碱基编码一大类类似于磷酸丙糖异构酶(TIM)的结构域，AbFH2基因第5915位至第6061位碱基、第7123位至7362位碱基以及第13431位至13562位碱基编码一个Formin同源2结构域，DUF538基因无保守结构域。

采用上述方法获得与抗旱性状相关的SNP分子标记及其基因型，结果如表1所示。

表1

由表1可知，毛白杨自然群体的基因组DNA中编码DUF538基因上游第100位碱基，编码TRA2基因上游第105位碱基，编码AbFH2基因上游第2040位碱基基因型组合为GG-AA-TT时，杨树样品的气孔宽度最小，气孔长宽比以及气孔密度最大，抗氧化酶活性和甜菜碱含量最低，杨树抗旱能力最弱。体现在候选个体气孔宽度比整体水平低26.98％，气孔长宽比、气孔密度比整体水平高42.30％和39.25％，与此同时，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量比整体平均水平低18.86％和23.70％。

当杨树样品基因型组合为AA-TT-CC时，气孔宽度最大、气孔长宽比以及气孔密度最小，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量最高，杨树抗旱能力最强，体现在候选个体气孔宽度比整体水平高36.09％，气孔长宽比、气孔密度比整体水平低28.18％和37.06％，与此同时，抗氧化酶活性和甜菜碱含量比整体平均水平高19.66％和27.93％。

5、对上述SNP分子标记准确性的验证

上述分子标记组合与毛白杨旱胁迫种质资源群体表型数据的关联分析结果如表2所示。

表2

图1～5分别示出了SNP1～SNP3的不同基因型组合对毛白杨自然群体和旱胁迫种质资源群体的气孔长宽比、气孔宽度、气孔密度、总抗氧化酶活性、甜菜碱含量的基因型效应图。

由表2及图1～5可知，在旱胁迫处理下，气孔宽度为自然群体的2.95倍，而气孔长宽比和气孔密度分别为自然群体的51.85％和72.55％，在干旱条件下总抗氧化酶活性和甜菜碱含量分别增加了40.50％和41.08％。

与此同时，当杨树样品基因型组合为GG-AA-TT时，杨树样品的气孔宽度最小、气孔长宽比以及气孔密度最大，抗氧化酶活性和甜菜碱含量最低，杨树抗旱能力最弱；当杨树样品基因型组合为AA-TT-CC时，杨树样品的气孔宽度最大、气孔长宽比以及气孔密度最小，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量最高，杨树抗旱能力最强。

实施例2对分子标记组合的有效性进行验证

利用上述基因型组合位点在2年生毛白杨种质资源群体(300株，山东冠县基地)随机选取了3组携带不同基因型组合的毛白杨个体(其中8株携带GG-AA-TT组合、8株携带AA-TT-CC组合，8株携带不规律的中间基因型组合)，通过采集叶片进行组织培养，2个月获得相应组培苗，进行气孔表型以及总抗氧化酶、甜菜碱含量的测定，结果如表3所示。

表3

由表3可知，当杨树样品基因型组合为GG-AA-TT时，杨树组培苗样品的气孔宽度最小、气孔长宽比以及气孔密度最大，抗氧化酶活性和甜菜碱含量最低，杨树抗旱能力最弱；当杨树样品基因型组合为AA-TT-CC时，杨树样品的气孔宽度最大、气孔长宽比以及气孔密度最小，总抗氧化酶活性和甜菜碱含量最高，杨树抗旱能力最强。

以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京林业大学

<120> 筛选毛白杨抗旱新品种的分子标记及其组合、方法和应用

<130> 2021

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1869

<212> DNA

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 1

aaactacatt ttagtcgatg tgatcattaa caattaggtg aaccacctct tgaacaccat 60

ccttattcgg ttcaacctcc agccaactat cctctccttt cctcttcata tatatatata 120

gagaccccag caccgctaat attctcagtc attcagagct ctgaaacaca accacttctt 180

gataaaatgg caagcatgat taggtcaaag gaagatgaac gtgcaggggc agaaattgtg 240

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aagggtgtcc tccctctaaa agatcttgaa gagtgtggaa gggttaagga aactgggttt 360

gtgtggatga aacaaaaggc cccctgtgaa cattttttcg ttggatccaa cagcaaggta 420

agctatgcca cagaggtgac tggttatgta gagaagttca agatgaagaa aatgactgga 480

attaagagca agcagatgtt tttatgggtg ccaatatctg aaatgagcat cggagatccg 540

tcgagcaaga aaattctctt caagactccc atgggaattg gcaagtcttt ccccatctct 600

tctttcatga ccgatgagga gaagcaggaa aagctggagg aagtccataa atgaaatcga 660

cttttttgat tgctgtagtt cttgttgcgt tcatcaataa actcactgtt gttcatgttt 720

ccgtgagttt ttctcgtgtc gttgatttca tctgaggtgt ggaagaatta tattttgtga 780

tgtctattat ttatctgtag ctaacctcat catcctttcg tgtattttgc tatggttatg 840

gttttagtta tagccacgaa ctataaccga aataaaaaac aataattata atcattaatt 900

tattaacggt tacagatttt gaataattgt aactataata atcgattctc cattaagtta 960

accatttact ccatctattt tatttatttt ttaaatctaa attaataaat aaattttaca 1020

aattcagata attacatttt aacaatagtg tatataataa taacagccac gcccttaaca 1080

acaaccacaa taaaaacatt acaaaccatg caagatattt attcataatt agaattatta 1140

atagaaacta aacattgtgg gaaaaacagt ttagctgaaa ttagtgttca tcctagagtt 1200

aaactgttgg cctaccgtgc acatgcgctt catcaccagt aaaaatacca catgatgctt 1260

tcaatttcat cgcaaaggca gcatttgatt gccaagaaac gtcacatgca tttctcaaag 1320

aaaaaggacg tttctaattt attaataata tttatatttg ttaaaaaact aaattttctt 1380

tcattcaaat taataataac taaaaatcca tgaaaaaaat atgaaaaaaa acccttggat 1440

gttattgttg ttgttattat tattattatt attttgcttt taaagataat attatagtca 1500

tttcattttg caattaaagt gttaaaagac ggaaaatata tttaacccca attttatttt 1560

tatttttgct tttatgagtt ttaaagccat ttaactatgt atctagaatg taaaaaaaga 1620

gacatgtttt ttattaatat aataatgaca aatagactct atgagaaaaa ctattatgct 1680

cttaatagct agttaaataa ttatgtttaa gaagggcaaa ataatcattt tattattata 1740

atcaataata agatgtgtct ttgcaaatag taaaatatga atccctttta gtgttatata 1800

tatataagtt ttgacatttt atatacaatg atccatttta gattaaaaaa tagaaactac 1860

attttagtc 1869

<210> 2

<211> 3747

<212> DNA

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 2

taaaataaaa aataaaatat atattttaat atattatcaa ataaaaataa aaatagcatt 60

cactattttc aaacagcact gaaagccccc cacctgtccc gttaaatgag gggggaaaaa 120

aacactgatc aaattttgca ataccttctc ctaaaatttt caccaaaccc tctctgcacc 180

cccccctctc tctcggtttg tgatctgaat cactatggct acaatttcaa agctatcaaa 240

tccaagccct gctgcctctc taccagctcg ttcttcttct tcttcttctt tgcctagagt 300

tttccttggt ttcaatacca aaacttcttt ctccaaagtt gcatcatctt cttctaggtt 360

gtctttgaca aacacccaac cttggaggac ctcctttgtg taagtatttt tacttcattt 420

ttatgatctc tctatctctc tctctctatc ggtgtttatt tggcggtgat catcttagct 480

ctcgtgttct tgcttggttt cgccttctga tcttttcata cgtcgatgat caagcgtctt 540

cttttttatg aatatgtgat acagtttcta cgctttagac cttgctttaa cgtatattct 600

ctagccttct aggggcttga ggtaccggtt tatgataaat aattagtatc attattgagg 660

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tgtcaatgtg actgtatgtt ctttctgtgc gttctttctt gcttaggcat tattgttggc 2340

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gcaatcttga atgatcatgt agttttaaga agtgactctt ttattaaatc agattcagac 2520

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gatgcctact tggatggcct tgaggcatct ggactaagtg acctctccag agttacaagt 2640

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tatgttgctc ccctcattgg acctgacaca gtaagccatc ttatatctca gaaccctgtc 3060

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<210> 3

<211> 18929

<212> DNA

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 3

ccctcccatt tctttatttg ctttaaatta cgattataac tttttaaaaa tctctttaat 60

catggctttg tagtttttat tttattttat ttctcaaata attaattaca taaaaggata 120

atcttatgta ttctttccaa tgttttcctt ttgtgaatac aagtaaatta ctttgtataa 180

caaactaaca ttattgctaa tgagttatac tttaattgac actaattttt tttattattc 240

taaaaggttt tgagtttaag cttctttggt gctaaaataa aattaacaac gatagagagg 300

ttttatgtat ctctaataaa aacactaagt aatttatact tgaattgttt ttttttattt 360

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gtcttttttt tttatttttt ttcttgatta tttagtcaaa ttttttatgt cttttaattt 720

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tgacaatata tcctatacga gtgacatgta atttataacc attaagtatt tcaatctaag 1080

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aatataatga taatactaaa taaattttac accaacatag cttttttaat gttcagattt 1560

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ggttagattt taactcgtaa ataaaaaatg aaagcttgtc aaactagtgc gggcttggaa 1740

accagtaaat aaactaaatc actaacaatg ctagagcctc gtataagatt acatgcatga 1800

tgagctcacc aatttcttag atgtcggttg taaatggcat ccacgtaaga caaaacaacc 1860

cgccatgcca tccccatcga gcagttcggt aataattagt gaaaatgaaa tttaggtagg 1920

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aagccaactt taattaagga aaattatatt tctttgttac taccaaacca aactctttgt 2160

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gacagagtaa ttgaaagatg tcactgtttc gcaaattgtt ttataggaaa ccccctgatg 2280

gccttcttga gatctccgag cgtgtttatg gtcagttttt tattttattt tgttactttg 2340

tttttaagaa agattgcatt tttgttttgt tttcaagttc attttctatt catggagaaa 2400

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gttattttct gttaggttgc taagaaaatg gaatttgggt tttgtgaatt ttgattatta 2520

ctttcttaag ttgtactcat ctttagggcg cctattagaa actgattagc ttaattacaa 2580

tgctaattta caaagtattg aattcttttt tatattgtag ggattttgac attgtgaatt 2640

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ctctcccttg gacagcagaa tattctgtta atgcactgtg aacgtggtgg ttggccggtt 3120

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ccacctcccc cccctcctct tcatttagga ccaactaccg ggccaatagt ttcatctcgg 6180

atgccactag cgccgccgct gcctcctatt atgtcaacca attcctcccg tgttccttct 6240

gcacctcctg tttcttatgg taagggaact ttaaatacaa gcaccaatgg agataataaa 6300

ttgcctgggc ctccatctcc tgcaccaccc ttaggctccc cctccatgcc caagggacgt 6360

ttatctcgta ctataagttc acggaccagt caaacaaaaa agttgaagcc attgcattgg 6420

ttgaagttaa caagagctgt acaaggaagc ttatgggctg aggcacaaaa gtctggtgaa 6480

gcctccaagt atgtgctgct ttccaaacaa tttatgttat accatgctct catattctta 6540

agtattacac ctttcctttt gtgatctctt cacatagggc cccagagatc gacatgtcag 6600

aactcgagaa tcttttttct gcagcagttt caaatacaga tcatggcgag aaatcaagtg 6660

tgcggggctc acagggacct aaagttgaaa aagtgcaact ggtaatttaa tatgttatct 6720

gcaatgcatg atcgccacct tttttctctc agttgagaaa gtgtagatca atccttttct 6780

ttcaatccac agactactgt tgttatttat taatttttga cagtcctaag atcaaaatta 6840

atacttcacc cataactggt gtaatggatg actgctacaa tttctttttg ttacctgaaa 6900

ttatctacat ttaccttttg cttttatcat ccagacttct tggcaatttt gttgtaagag 6960

tctattagtc attctagtgt ttgaagcatc ttggtttaaa ggttacataa gcaacctcct 7020

gttatgggtc ataatgtaag ataagtaata tattcttttg ctaactgata acatattact 7080

ttatgaaaag tttcagcatt tcagttttta tatcatggaa atggaactga gggggtatat 7140

catatgtgtg tatctaatta tttgtgtgtt ctccttttta tttttttctt gcaggttgac 7200

catagacgag catacaattg tgaaatcatg ctttcaaagg tgaaagtgcc accacatgag 7260

ttaatggtaa gctgaatgta agagttaggc tactagtata gcacttttaa cataaatgaa 7320

tccggaagtc aactttatta tctctttctc tacccatata tgctcagcaa cacaaatgat 7380

atgttatatc taggataatg tttgtgaatt atgccattct ctgaacttgt gtttggcatg 7440

ctccaagacc atgaatgcat tttaggtgtt ttggaaaagc actgccattg atgctttggg 7500

aaactaccca gattggcttt tgtggaccaa gaccacaaca ccaaacacat tgtaactact 7560

gtagctacaa ttatttactc atgcagccat aaaagaacct taaataaaat atatagagaa 7620

ctcaaatgca tgttctccta agaaatcatg atactcctga tgccattact agcatttcta 7680

tagctttcat tactgtcatc ctgcttaata tcttctcaat agttatgcca gcgcatttat 7740

ttggaatctc ttttacaatt ttgaaaaaga aattctatcc cttgaaatga cagtcagatt 7800

gcattattga gatctaggaa ttgtaaatca cacaataagc attattgaaa tttccgttca 7860

tgtcattgcc tgttctctcc ttcttcttgt tcttgctctg tctataaaat gtttctgtgt 7920

ctgcaatggt tttctttatt ttctgctagt tatcgctttc agtcacaacc atacaacaga 7980

atatttcact gtcctcatta cattgcatga tacattgaca gagtttagta cttgtcctcg 8040

aggattcagc attagacatt gatcaggttg ataacctcat aaagttctgt ccaacaaaag 8100

aggagatgga acttcttaag gtgagtgttt tttttttttt tttttaaagt ttagtattat 8160

gctctatcat ttatcattta gggctattgc taggtataat ggtttgcact tgcaaccaca 8220

agggtgcata ttcaaatctt gggccagcca tccattaaaa aatgttcaca agtaggattg 8280

tcttcacttc tttctatgac tccattttgc cgggttcata actgggagag cacttttttt 8340

cgctctgtat tttataatca tagttttcaa ctcaataatt ttgtctgact atcccttggg 8400

ctctaattga ttacaaacag tcaggagctt caagatgaaa ctttcatgtg ttttgggcta 8460

taattgcctt ctcatttcta tgtccaggga tacaccggag aaaaggaaaa gttaggaaaa 8520

tgtgaacagg tcagtagtaa agttgttttt gtctttacaa ttgtcagtta ttatctctcg 8580

ttgaaaggtt gaacaagaat ttctcagaac tacattacac attgatattt atgatacttc 8640

aaaattgcta cttctttcag ttgaactttg gatggactca atgttttttt gttgtgtatt 8700

gatgtcatgt cttttgttga cagtgtttag atttgtgagg gtaacctggg tatgttttga 8760

atgtatattt tttcttcttt atgtcaaaac caacattcat aggagtttga ggttgcattg 8820

ttgatacaat tcctatgatt caaatctatc tccatgttct caattagcat ggctacatta 8880

tttagttaaa tattcctggg tacccactgt tgagaaagag tcaaccagag aatgagagaa 8940

tttgtgttta attgaaataa ttgtttttgg cacgtattta ttttttcgta agtttatgga 9000

tctttttggc agttcttctt agagttgatg aaggtgccaa gagtagaatc taaactcaga 9060

gttttctcat tcaagatgca gtttcattcc caggtttaaa aatgcattca agtgctcgct 9120

accttattat gcttggtttc atgtttgatt tgagcctatc cttttctgtt tgcaatatta 9180

ggtttctgac ctaagaagaa gcctgaatgt tgtgaactct gcagcagaag aggcaagtta 9240

tactatagta ctctctctct ttatttatgt tattttttgg gtactatttc acatgttcta 9300

aatgttggaa ccactcttgt taacggttct ttatcagata aagaattctg ccaaattgaa 9360

gagaatcatg cagactattc tttccctagg aaatgctttg aatcagggaa ctgcaagggg 9420

taagcagtaa cttttattgg tctaccatct tgctatggtg tagttctcat atacttggag 9480

ctataaagat tttctggtcc aatgattgtt aatgggaaat agtagactta ttaagggtcc 9540

tgtgagggct tccctctgca tgtggaaatt tttaaagtac atttcatttg ctaattttag 9600

atggtgaatt atgcagttgg tatttttgga acatgtggaa taatctttct gctgatgaca 9660

gattagaaaa gcacagtaaa gagagagaga tgatgagaga tgaaaaaaaa acaagggata 9720

gagaaaatga gaaagcttaa tttcaataac atccaaagca gcctcaaaac ataataggta 9780

atttcaataa catccaaagc agcctcaaaa cataataggt gctcaaaaaa aaaatataat 9840

agatttttct ttctagcata aaaacaatga gatctgtagt tgattaatgg tgggtttttg 9900

cacaaactct agaagatttt gttattaggt cattaatagg ttttgaaatg gagaaagctt 9960

gtacatttct gggaaacatg caccaatttt ggttatttgg tgtatttgga cagaagggag 10020

ttcttgattt tgtttcctat aggattgttt tagctgtgat attaaattgg atttgaaaaa 10080

ctctattttt gcatttgtgt ttatatagaa ggattcctga taaaaacttt gtattgtcat 10140

acttttgcat ttctccgtta ttgataaata tttctttgtt gataagagaa aaccctttca 10200

tacttatgga ctaattcatt tccataaaat aggaaggttt gctaattggt attcttctaa 10260

cattattctt gaaagctcgt tacttcatcc cacacttcta ctagcacctc gaggcagtta 10320

tctatttctt taaaatagtt aatgaaggta agtttattat tattattgta ataattagtc 10380

atttcttcta acctttgctt attaatcgtt atttaccgga tgaaatgcaa aaaatgcatg 10440

ggtgaccaac aatggaccac tcctttgtac taagattatc taagccctat tcaacgagca 10500

gttactcata gccattaaga taaatcatgc ttatcaatga tgttttggat tacttttgcg 10560

gagttcatgg attatgatga ttagaaagaa ataagacatt ttggtgcttt ttatttactc 10620

acaagaatag gattccttat ttgaagatgc tagagtctta ttgaaataga ataattatcc 10680

caagagttta gtcaagcttg aaaagaagtt cgcaacaaaa cctagaagca ttttatatga 10740

agcctgaagt tattgttttt ctattttaat tgtttttcta tttggatttt aattatttgt 10800

tttctattta gcttagaact tttaatttaa ttagtatttt actatttaaa tatactaatg 10860

ctagataaat tctattaatt agctagattg tcattaaaaa acgataacaa ctttaaaggg 10920

gcgaatgcaa actgggtttg gctacatcaa tgccagattt gatgatctta cattcaggct 10980

tgagatgata gggttgcgcg gaaacatgaa ctgggaaaga agagaggcac gtgtcgggga 11040

tgaagccggc aactaacctt tctttgaact agttcatgca aatccccttg gtcaatatga 11100

ctacaggtat tcatatgatg aaggtctatt ttgactgatg ggagacatat aaatgaatca 11160

caaagagagg aacgtgtttg gagacttaac ttgaggctaa ccttacttta gacctatttc 11220

taaaattcta cctagacaac cacttgttta tgtaaagggt gttggtgaag ataaaattta 11280

ttatcacaag ttgagtactt ttgtttagcc tcgttaagcc tcttactaaa atagactgct 11340

aggtgacatt cttgattaag tacaccattt attctaattt ctgacacatc acggtccact 11400

tcaaacacat taataaagtc aggaagctac ataactaggg ccttgtcatc ctccttttga 11460

tctctttaaa tgccttgcta gctattttgt ttcaaacaat ttgtgattag agatataata 11520

gtgctaaatc ctttgataaa ttgacgataa aaaatagcaa gcctattaaa actatgaacc 11580

ttatgaatgt tcacaagctt aggccaatct ataattgctt ggattttttt aggatcaatt 11640

gagattttct cttacaatac tatgaatcct aagaaaatca ctctgttaat gaagaaagaa 11700

caatttttga cattagcaca caaactttcc tttcttataa tggtgcagac ttgaatgagg 11760

tgatccaaat gcccctcttt gattttgtta taaatgagga catcatcaaa atgtaccacc 11820

caagactttt tcatgaaagg ttttagcacg tgtcatttct ctcataaaag tacagggtgc 11880

attagaaatg tcaaaagata tggctaatca ctcatacaat ttatctttgg ttttaaatgc 11940

agtttttcat tcatccttgg gacaaattct actatgatga tacttgctct ttaagtcaat 12000

cttagagaaa atttgagctg ctacaatcat atccaacatg tcatttaatc taggaatagg 12060

gaaacgatat ttaacagtaa ctctattgat agatcgacta tctacacata tccttcaaga 12120

accatttttc ttagatttca ggagggtagg tactacacaa ggacttaacc tttctcttat 12180

aaagcctttt tgtaataact cattatcttg tcttttcaat ttagcatgtt gactagaatt 12240

cattgtatag tgggccaagt ttaagaaagt agtaccaagg acaatttatg acgtgttgaa 12300

tgtcacacat agaaggtttt gaatcaggaa gctcggagga aaagatatct tgaaattctt 12360

tcagcactac acttaactcc ttaggtggct catttgaaga gttttctata acctccttgg 12420

caactaggac aaacacaaca tactccttgt gaacttcttt ttcaaactcc ttagaactta 12480

ttatgttaag ttcattttct cacattttct tgcttcttgc tattgttgtt aggccttgat 12540

agtaatctaa taagtttaat ctttttatct tgaaaaatga atgaacaaga atttcactga 12600

ttaaagatgg taacattcaa attatataac caagtcttgt ttaaaatgac atgtcctcca 12660

tcaatgggaa tcacttcacg tcaactttca tctagggaaa aaacatctat ctttgatttc 12720

tattggggtg ttgttaaccc atgatacatt atatgattga gggtgagaaa taaactttaa 12780

gcctaagcag attacgttac caaactcttc aatatgatta gataactttg aaattttgct 12840

ttcaccaaac tcttccatgt tttttctctt tgctttttga gaaggttgaa tataaaacaa 12900

ataataataa taataacaat aatcatctat ttgtttattt acccaatata aaatttcttc 12960

ataatcatct ttgtataaac tccaaaatca atgattggct aaaatcttgc caagaagaaa 13020

ttaaaggtat accgatacga gttctaaagt ctagaaattc aaaccaccat tctcaagcac 13080

tataagaaat tttgtgtact gcacgtgcta tttttttatg ataaggaacc ttgttgaaat 13140

aaaagtaaac taccaactat atcaaccaat taataaacct ttttctttaa aaatctctca 13200

tcatataatg aaatctcatc aaattcagga ataggtctgg ggtttggctt gtctcgaggt 13260

aagtctccag gaaagctcct cttctcttca cgatccatgt ttgagtgaac cattagcaaa 13320

gctagatctg ctatggtttg ctccaaacga tctaatgtat gcttctaagc ccgcataaaa 13380

ccctagaggg tccactcctg cattgcgaag tgagttgttg tcgtctttgt ccatcaaaga 13440

ggctaaccta ctgtgatatc aattgatgtg gtgtatataa cgtggttaaa aattaggatt 13500

ctcaagcttt aaggttatag acctaagttg tagagagatt tagagaaaac tttctagtgt 13560

tttattaaaa gttttaataa taattctctt gacaaaataa actagacatg tctatttata 13620

ttagttttaa aatcctttat gggaaatgat tcttaattaa aactaaaatt atttataaaa 13680

aaagaattta taattaaaac ttatctaatg aatagaattc ttttaacatt aggatttcta 13740

aatagtaaaa tactaattaa gttaaaaatc ttaagctaaa tagaaaaaaa atctaaatac 13800

aataaggtaa ataaagataa ttttgcacag agctcttctg atatttgatc aacatgaaat 13860

tttaacctta taagaaacat aaccttcata attttttatc aaaattttag ctcgatccaa 13920

ttatcagttt aaaatttgct tgatttacta aactacatct tagatcattc ttaaactctt 13980

caaaacctag aaatcttaac cattaataaa ataatacaat agaaattatt atgcaaaaat 14040

acagaagaaa tttccctaca tcacaatggt tgtgtgactg ctctgatgga cgttcacaac 14100

tgtgcttgag agaggcgtaa ctatcaactg gctgaacgag gtactagttg cagctgtggg 14160

tttttgtctg ttgcggtggt ggtgttggag gatcttcctc tgtgctggtt gcacagggtg 14220

gagaagatga tcagttgctg tgatggaatg aattggagtg aatctttgga caccgactgt 14280

gacaataggt ctttgtttgt tgatatggca ctgttggagg atttgttggt gtgggtggtt 14340

ttcattgttg tgttggccta atctgtatgg acttggcagc gggcttgggt ctgtgaggtg 14400

tgaggaaggt gaacactagc ttagggtttt tgtaaaacta agggtgtgct tggatagtct 14460

tttttcaaaa atgatctgga ttgtaaaaga aaggctaaaa gaaacaaatt tgaagattga 14520

tgatgattta cgatctagaa attgtgttga attttgaata tttgcacaat ttttttagta 14580

aatcgattaa ttgtaggaac aattgaaagc ttatattctg atatcaaagt tgatgtgggg 14640

ggaaataaac taaaaaagtt aaagcaagga aataaagaac ttttagagaa aggtgctaag 14700

attaaaagtt aagagttaaa agcaaataag agaaaagcta gaaagaaaga gagaattcag 14760

aggaggaaaa gtttgctatt ttatcaaatc ataaaaaact gaacgtaatg tcttaaaaat 14820

tacatataaa taataagcca taagaaaaac cagctattgg gctcagcccc ctaaataaga 14880

ctgtccaata taaataaagg ccaaattata actcaaataa aaaaaataca atgaaatatg 14940

tctaaataag tctaatctcc caatcaaaga gtgacatgcc aagccatcct ctgttatctt 15000

cgttaatata ctcgtgtaat tagttgtgta ggtttggtat ccccgccact tattctacat 15060

ttttgtgtac tgatttcctc aaactcatac cctgtgatca cttgagagtt ctttttattt 15120

ttttaccttt ttataaatct tgggttacca aacccaattt atccagttgt ttcgcatctt 15180

gatgctggct ttatgtgtac tcacatttga tatcagttaa gagggttttg ttttcatggt 15240

attttgcaca tcttgttgta aacctttgca gtttcttgtc ctgagacctg atattcattt 15300

tgcaacactg ttttcatggt atcagttaag agggttttgt tttcatggtg ttgtgcacat 15360

cttgttgtaa acctttgcag tttcttgtcc tgtgacctga tattcatttt gcaacactgt 15420

tttcccttgc agctggtaac tgctttttat tcctatagtt gaatagaaaa ttctttcccc 15480

tttctgttag gttcagctat tggttttaga ttggatagcc ttcttaaact aactgatacg 15540

tgggcaagga acaacaagat gactctcatg cattatcttt gcaaggtaca aattgatgtt 15600

tttcctatga aactaacttt taatttaatg atttgagaat tctttggaga cctgctgtca 15660

ttttcacgtc tcattcttgt gtgcatgctt cttcatagca tatgtttttg tactagtaag 15720

tgtatttctt caaccgataa attacgggaa attcattcaa gagaatggga gcaagatagg 15780

tattacactt ggttgccacc ttattctatt ttcctggaaa ggcttttcaa ctcaatttct 15840

ttcctggctg gataacctga aaatgagtta cccatatgcc cacctgttct ttaagtgcat 15900

tctctcattt gtctgtaacg agtgtaaacc acaattgaag ttcgtacttt atttaggaaa 15960

agaaagatgt attttacact ggcttttgac ctagaattaa cagatggatt ggccttgcct 16020

actttaatga cactgcctgg taaacatgta taaaaaagac agtttaacct aacaagtcag 16080

atctaaaaca tgaaatattt gtatatttgt tttatatgat tgtatacagt atacacatgt 16140

atgctcttat atatgttata aagtcaatgc atggttttga actatgccaa ctatacccat 16200

ggaactcaac tgacccatta atttgtttct gttatctttg tttttctggt cctgttttga 16260

ttcccgtttt tccagaacca agagatctgt tcttttgtta ttattttgtt tgaacttgca 16320

gtagacatgg cttctatttt ctgttttcag aggcatatca atggaaatga gatcatgtta 16380

cgtgcatcaa atttatagat gttatgttta ccgccatact gaggattgaa ctttctattg 16440

cttatttcac agagaatttt atgcaaatca tatacattct gcttgacatg ttgtaggtac 16500

ttgctgacaa gctaccagaa cttctagatt tttcaaaaga tcttgctagt ttggaaactg 16560

caacaaaggt acaactgttg gttttgttga tcatttcaag gcatttggaa aagccactgt 16620

cttgtgacta aaatttgggt tttccatcta gatacaattg aaatttttgg cagaggaaat 16680

gcaagccata agcaaaggac tggaaaaagt tttacaggaa ctgtctgcct cagaaagtga 16740

tggtcctata tcagataatt tctgtaaggt actgcagatc agctgatgtt tttcatcatg 16800

catatgtgag aaaacagttt tgtccattgt tacttattta tcaaatgcaa ttctttgctt 16860

cctaagtaga ttaatttgta ctcagtattc aagcttaaat attgtttcta tgatcacata 16920

tttttcttaa agcaagcttt aatacattat cgattcaggt aagggcttaa attaacatac 16980

gggtctcgat gcaagtaaat ctttgcctta gatataataa taggactctg ggcaatttag 17040

aaatgttatg tatgaagaag aggagcaata ataaagagtt tggtagatac atatatttag 17100

cacgcccaca cctattgttt acatgctgct ttgaatccgc aataccaatt acaattttct 17160

gacctttgga gggaaagatc ctcctctttt ggcaagttgt cgttgaggag ggatatattt 17220

ttaagttata ttggacatgc atgagatcag agtccatctt ataactattt aaaatacttc 17280

tgcagttgta tcaactctgt tcaattttgt gcggctgttc cacaaagcca atgaggagaa 17340

ctgcaagcag ctagaaatag aaatgaagaa atcaacagaa aatgacaact caaaactggg 17400

tgctcataag gagtccaaaa gcttcttaca agctcgaatc gagagtggca ttgtcaaatg 17460

agatactgtt caaagatgaa caaatttttt cttctctagg gagaactctg gcatagtaga 17520

ggcatctgat acagttaatt gagctgacag atagggatct tgttgatgtc aatatcttgt 17580

aaagtgacaa tgtgctacaa actccgagat cgagttgtct ttttaaaggt gagcttctac 17640

cccattctcc ctacaatgca ccttgccttt ttcactgttg ctgaaacaac taatgcaaac 17700

aactattatt atcttcggta cagatacaga ggagtctgca gaaccctttt cttctggaag 17760

gcaacttgta aagtatccat tagccaaatt tgttgtagat attcaagtaa ggagcttgga 17820

gactttcttc ccttacaatt tttgtcttta cagtcggttg aggttacaac ttatttcctg 17880

aatttgtttt tgtcaatatc aacctgtata tgtacagata ttctgttcga ttgtatatat 17940

ttctgtcagt aagatgctaa gcttcgaaca gtcttttgcc aggaaccgga catcctttgc 18000

attcgaaagt atggtggccg cacacttgaa tataaagaag cagaattgtt gccggtttac 18060

aagctgaact agtcaacttg tattgagtgg attgtggata tcctttacag aatatatatg 18120

gctcaagtat ataacaatat caatgggatg gctaatgatg ttgaagaatt tgcgagtaaa 18180

caaactatga tacctgtaaa ccaatgatgg tgacaaacat ttgactctac aagttttctt 18240

ctccattgtt aacctgttag gtcttattgt attagagaat atttgacagt ggatgtccca 18300

atttcttttt tattttaaca gtggcatatg acaagataga atttaattct gagctctgtt 18360

cttagtttct aagtttacgt attggatagc acctaggctt ttggctccta caagagacta 18420

aaccttaccc cttatctaca gcatgtattc aaccactttt gataacttgt cattcctaaa 18480

caaaatcttg atgatttcat taaattgcca tgcttgcttg cacaatgatc cctttgctgg 18540

tgacttacgt aatgatctta ccaaaagaat cataattgta ttgatacatg ttttccacaa 18600

taaagagaga agtcattgaa gcccgaaggt ttcaggtcat tggtttcttg gagaggtggt 18660

aaaccactca tgaggcgtcc aaaactttga tctcaaaata caggaatggt ggggtactgg 18720

gaatcttttc aaaaatatag gtgcgaagaa tacaatattc tatattgagc atattgatca 18780

acttatctat ctaaaaaatc atttttaacg acaaaaaaat aaaaaattgt tatccatttt 18840

gtaagttgta attcccatgc aatccccatt gttatgttct ttaatatatg gacttctagc 18900

cacatgaatg caagcaaatg atttagaca 18929

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 引物P1（人工序列）

<400> 4

aacgggaaga atttgtatta a 21

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> 引物P2（人工序列）

<400> 5

gcctcgattt aaagtacgta attcc 25

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> 引物P3（人工序列）

<400> 6

tcttgaaact tatacaaacc taca 24

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 引物P4（人工序列）

<400> 7

tgcagagagg gtttggtgaa 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 引物P5（人工序列）

<400> 8

agcactacaa caagccatgt g 21

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 引物P6（人工序列）

<400> 9

ctcattagca ataatgttag tttgc 25

<210> 10

<211> 155

<212> PRT

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 10

Met Ala Ser Met Ile Arg Ser Lys Glu Asp Glu Arg Ala Gly Ala Glu

1 5 10 15

Ile Val Tyr Gly Pro Glu Glu Cys His Arg His Ser Ile Glu Leu Leu

20 25 30

Glu Glu Leu Gly Phe Pro Lys Gly Val Leu Pro Leu Lys Asp Leu Glu

35 40 45

Glu Cys Gly Arg Val Lys Glu Thr Gly Phe Val Trp Met Lys Gln Lys

50 55 60

Ala Pro Cys Glu His Phe Phe Val Gly Ser Asn Ser Lys Val Ser Tyr

65 70 75 80

Ala Thr Glu Val Thr Gly Tyr Val Glu Lys Phe Lys Met Lys Lys Met

85 90 95

Thr Gly Ile Lys Ser Lys Gln Met Phe Leu Trp Val Pro Ile Ser Glu

100 105 110

Met Ser Ile Gly Asp Pro Ser Ser Lys Lys Ile Leu Phe Lys Thr Pro

115 120 125

Met Gly Ile Gly Lys Ser Phe Pro Ile Ser Ser Phe Met Thr Asp Glu

130 135 140

Glu Lys Gln Glu Lys Leu Glu Glu Val His Lys

145 150 155

<210> 11

<211> 441

<212> PRT

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 11

Met Ala Thr Ile Ser Lys Leu Ser Asn Pro Ser Pro Ala Ala Ser Leu

1 5 10 15

Pro Ala Arg Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Pro Arg Val Phe Leu Gly

20 25 30

Phe Asn Thr Lys Thr Ser Phe Ser Lys Val Ala Ser Ser Ser Ser Arg

35 40 45

Leu Ser Leu Thr Asn Thr Gln Pro Trp Arg Thr Ser Phe Val Val Arg

50 55 60

Cys Ser Gln Ser Ser Gly Asn Gly Ser Pro Ile Lys Arg Thr Thr Leu

65 70 75 80

His Asp Leu Tyr Glu Arg Glu Gly Gln Ser Pro Trp Tyr Asp Asn Leu

85 90 95

Cys Arg Pro Val Thr Asp Leu Ile Pro Leu Ile Glu Ser Gly Val Arg

100 105 110

Gly Val Thr Ser Asn Pro Ala Ile Phe Gln Lys Ala Ile Ser Ser Ser

115 120 125

Asn Ala Tyr Asn Asp Gln Phe Arg Glu Leu Val Gln Ala Gly Lys Asp

130 135 140

Ile Glu Thr Ala Tyr Trp Glu Leu Val Val Lys Asp Ile Gln Asp Ala

145 150 155 160

Cys Lys Leu Phe Glu Pro Ile Tyr Asp Gln Thr Asp Gly Gly Asp Gly

165 170 175

Tyr Val Ser Val Glu Val Ser Pro Arg Leu Ala Asp Asp Thr Gln Gly

180 185 190

Thr Val Glu Ala Ala Lys Trp Leu His Lys Val Val Asp Arg Pro Asn

195 200 205

Val Tyr Ile Lys Ile Pro Ala Thr Ala Pro Cys Ile Pro Ser Ile Lys

210 215 220

Glu Val Ile Ser Leu Gly Ile Ser Val Asn Val Thr Leu Ile Phe Ser

225 230 235 240

Leu Thr Arg Tyr Glu Ala Val Ile Asp Ala Tyr Leu Asp Gly Leu Glu

245 250 255

Ala Ser Gly Leu Ser Asp Leu Ser Arg Val Thr Ser Val Ala Ser Phe

260 265 270

Phe Val Ser Arg Val Asp Thr Leu Ile Asp Lys Met Leu Glu Lys Ile

275 280 285

Gly Thr Pro Glu Ala Leu Asp Leu Arg Gly Lys Ala Ala Val Ala Gln

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Ala Gly Leu Ala Tyr Lys Leu Tyr Gln Lys Lys Phe Ser Gly Pro Arg

305 310 315 320

Trp Glu Ala Leu Val Lys Lys Gly Ala Lys Lys Gln Arg Leu Leu Trp

325 330 335

Ala Ser Thr Ser Val Lys Asn Pro Ala Tyr Pro Asp Thr Leu Tyr Val

340 345 350

Ala Pro Leu Ile Gly Pro Asp Thr Val Ser Thr Met Pro Asp Gln Ala

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Leu Gln Ala Phe Val Asp His Gly Ser Val Ala Arg Thr Ile Asp Ser

370 375 380

Asn Val Ser Glu Ala Glu Gly Ile Tyr Asn Ala Leu Glu Lys Leu Gly

385 390 395 400

Ile Asp Trp Gly Tyr Val Gly Asp Gln Leu Glu Val Glu Gly Val Asp

405 410 415

Ser Phe Lys Lys Ser Phe Asp Ser Leu Leu Asp Thr Leu Gln Glu Lys

420 425 430

Ala Asn Ser Leu Lys Leu Val Ser Pro

435 440

<210> 12

<211> 1086

<212> PRT

<213> 毛白杨（Populus tomentosa）

<400> 12

Met Thr Leu Met Glu Tyr Pro Trp Gln Tyr Glu Gly Ser Pro Leu Leu

1 5 10 15

Thr Met Glu Met Ile His His Phe Leu Arg Ser Gly Glu Ser Trp Leu

20 25 30

Ser Leu Gly Gln Gln Asn Ile Leu Leu Met His Cys Glu Arg Gly Gly

35 40 45

Trp Pro Val Leu Ala Phe Met Leu Ala Gly Leu Leu Ile Tyr Arg Lys

50 55 60

Gln Tyr Ser Gly Glu Gln Lys Thr Leu Asp Met Ile His Arg Gln Ala

65 70 75 80

Pro Arg Glu Leu Leu Gln Leu Leu Ser Pro Phe Asn His Val Pro Ser

85 90 95

Gln Leu Arg Tyr Leu Gln Tyr Val Thr Arg Arg Asn Ala Ala Ser Glu

100 105 110

Trp Pro Pro Leu Asp Arg Ala Leu Thr Leu Asp Cys Val Ile Leu Arg

115 120 125

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130 135 140

Val Tyr Gly Gln Asp Pro Phe Leu Val Ser Asp Gln Thr Ser Lys Leu

145 150 155 160

Leu Tyr Ser Thr Pro Lys Lys Gly Asn Ile Leu Arg Ala Tyr Lys Gln

165 170 175

Ile Glu Cys Glu Leu Val Lys Ile Asp Ile Asn Cys His Ile Gln Gly

180 185 190

Asp Val Val Leu Glu Cys Ile Ser Leu Lys Asp Asp Met Glu Leu Glu

195 200 205

Glu Met Met Phe Arg Ala Val Phe Asn Thr Ala Phe Ile Arg Ser Asn

210 215 220

Ile Leu Met Leu Asn Arg Asp Glu Met Asp Met Leu Trp Asp Val Lys

225 230 235 240

Asp Arg Phe Pro Lys Asn Phe Arg Ala Glu Ile Leu Phe Ser Glu Met

245 250 255

Asp Ala Ala Ala Ser Ile Val Ala Glu Asn Leu Ser Gly Phe Glu Glu

260 265 270

Lys Glu Gly Leu Pro Val Glu Ala Phe Ala Asn Val Lys Glu Ile Phe

275 280 285

Ser Ser Val Glu Trp Ser Tyr Pro Lys Ser Asp Phe Glu Leu Asn Val

290 295 300

Leu Gln Gln Ile Ser Ala Ser Asn Ile Ala Gln Glu Asn Ser Ser Ala

305 310 315 320

Asp Leu Gln His Gly Ala Glu Ile Ser Thr Gln Lys Gln Glu Thr Ser

325 330 335

Pro Arg Lys Gly Leu Ala Gly Gln Ser Thr Val Thr Asn Ala Thr Val

340 345 350

Ser Thr Ala Ser Ser Glu His Ala Leu Ile Val Ser Ala Gly Ile Glu

355 360 365

Leu Met Glu Pro Lys Gly Gly Ser Ile Ser Pro Ser Thr Pro Ala Gln

370 375 380

Pro Leu Leu Leu Gly Leu Ala Val Thr Ser Ser Val Val Lys Val His

385 390 395 400

Pro His Pro Pro Pro Thr Leu His Leu Ser Ala Ser Glu Pro Ser Asp

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Pro Ser Ser Val Lys Glu Thr Glu Thr His Leu Glu Gly Arg Gly Lys

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Ser Leu Ser Val Ser Leu Gln Pro Thr Ala Leu Pro Thr Thr Pro Pro

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Pro Pro Thr Pro Pro Leu Lys Glu Asn Ser Thr Val Gly Val Gly Ser

485 490 495

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Gly Pro Pro Pro Pro His Leu Met Pro Pro Leu Lys Glu Asn Asn Thr

515 520 525

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530 535 540

Gly Ala Gly Pro Pro Pro Pro Pro Pro Thr Pro Pro Leu Lys Glu Asn

545 550 555 560

Lys Thr Thr Gly Thr Cys Pro Pro Pro Ala Pro Leu Pro Pro Leu Lys

565 570 575

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580 585 590

Lys Glu Lys Ile Thr Val Gly Ala Gly Pro Pro Pro Pro Pro Pro Met

595 600 605

Pro Pro Leu Lys Glu Asn Lys Thr Phe Gly Ala Gly Thr Leu Pro Pro

610 615 620

Pro Pro Pro Leu Pro Pro Leu Lys Glu Asn Ser Thr Ile Gly Ala Gly

625 630 635 640

Ala Phe Pro Pro Pro Pro Pro Pro His Leu Lys Glu Lys His Ala Ile

645 650 655

Gly Ala Gly Pro Cys Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu His Leu

660 665 670

Gly Pro Thr Thr Gly Pro Ile Val Ser Ser Arg Met Pro Leu Ala Pro

675 680 685

Pro Leu Pro Pro Ile Met Ser Thr Asn Ser Ser Arg Val Pro Ser Ala

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Pro Pro Val Ser Tyr Gly Lys Gly Thr Leu Asn Thr Ser Thr Asn Gly

705 710 715 720

Asp Asn Lys Leu Pro Gly Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Leu Gly Ser

725 730 735

Pro Ser Met Pro Lys Gly Arg Leu Ser Arg Thr Ile Ser Ser Arg Thr

740 745 750

Ser Gln Thr Lys Lys Leu Lys Pro Leu His Trp Leu Lys Leu Thr Arg

755 760 765

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Ser Lys Ala Pro Glu Ile Asp Met Ser Glu Leu Glu Asn Leu Phe Ser

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Ala Ala Val Ser Asn Thr Asp His Gly Glu Lys Ser Ser Val Arg Gly

805 810 815

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820 825 830

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835 840 845

Glu Leu Met Ser Leu Val Leu Val Leu Glu Asp Ser Ala Leu Asp Ile

850 855 860

Asp Gln Val Asp Asn Leu Ile Lys Phe Cys Pro Thr Lys Glu Glu Met

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Glu Leu Leu Lys Gly Tyr Thr Gly Glu Lys Glu Lys Leu Gly Lys Cys

885 890 895

Glu Gln Phe Phe Leu Glu Leu Met Lys Val Pro Arg Val Glu Ser Lys

900 905 910

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930 935 940

Asn Ser Ala Lys Leu Lys Arg Ile Met Gln Thr Ile Leu Ser Leu Gly

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Asn Ala Leu Asn Gln Gly Thr Ala Arg Gly Ser Ala Ile Gly Phe Arg

965 970 975

Leu Asp Ser Leu Leu Lys Leu Thr Asp Thr Trp Ala Arg Asn Asn Lys

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1010 1015 1020

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1025 1030 1035

Ser Lys Gly Leu Glu Lys Val Leu Gln Glu Leu Ser Ala Ser Glu

1040 1045 1050

Ser Asp Gly Pro Ile Ser Asp Asn Phe Cys Lys Leu Tyr Gln Leu

1055 1060 1065

Cys Ser Ile Leu Cys Gly Cys Ser Thr Lys Pro Met Arg Arg Thr

1070 1075 1080

Ala Ser Ser

1085

Claims (2)

1.一种与毛白杨抗旱性状相关的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合由SNP1、SNP2和SNP3组成，

其中，所述SNP1位于如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第14位，具有G/A多态性；

所述SNP2位于如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的第6位，具有A/T多态性；

所述SNP3位于如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的第21位，具有T/C多态性；

所述抗旱性状包括气孔形态和生理生化性状，

所述气孔形态选自气孔宽度、气孔长宽比和气孔密度中的一种或多种；

所述生理生化性状为总抗氧化酶活性和甜菜碱含量；总抗氧化酶活性为过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性。

2.根据权利要求1所述的分子标记组合，其特征在于，所述SNP1标记的基因型为AA、GG和GA，SNP2标记的基因型为AA、TT和AT，SNP3标记的基因型为TT、CC和CT；

所述分子标记组合按SNP1、SNP2、SNP3依次为A、T、C纯合基因型，即为AA-TT-CC基因型组合时，对应的毛白杨具有最强的抗旱能力；

所述单倍型分子标记按SNP1、SNP2、SNP3依次为G、A、T纯合基因型，即为GG-AA-TT基因型组合时，对应的毛白杨具有最弱的抗旱能力。

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