CN112998261A - 一种木棉花酵素及其制备方法与在制备保肝产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品加工技术领域，尤其涉及一种木棉花酵素及其制备方法与在制备保肝产品中的应用。本发明提供的制备方法中，先将木棉花、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合加热处理获得基料，再利用丝枝蜡蚧霉菌进行一次发酵处理，利用酵母菌及植物乳杆菌进行二次发酵处理，最后再对发酵液超滤处理，得到木棉花酵素液即液体酵素。对酵素液干燥处理后可得到酵素粉。采用上述处理方法制得酵素产品含有较高的酶活性和丰富菌种，且具有保肝功效，大大提高了木棉花的药用价值。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，尤其涉及一种木棉花酵素及其制备方法与在制备保肝产品中的应用。
背景技术
木棉花属于木棉科木棉属，是木棉(Bombaxmal abaricum DC.或B.ceiba L.)的干燥花，别名斑芝花、英雄花、攀枝花，分布在中国南部、印度、澳大利亚北部等热带和亚热带地区。在我国主要分布在四川、云贵、广西、广东等地区，生于山地阳坡、路旁川。木棉花于早春2、3月份盛开，颜色鲜艳，具有很高的观赏价值。此外，木棉花还有很高的药用价值，民间采摘或拾取盛开花朵晒干，用于清热利湿、活血消肿，在中医治疗中常被用作治疗慢性胃炎、肠炎、痔疮出血和细菌性痢疾等疾病。此外，木棉花也是凉茶的重要材料。近年人们对保健和养生越来越关注,随着凉茶被列为首批国家“非物质文化遗产”名录,凉茶市场也迅速扩展。广东凉茶具有悠久的历史，是传统凉茶文化的代表，有清热解毒、祛火除湿、生津止渴等功效。由金银花、木棉花、槐花、鸡蛋花、野菊花配方而成的凉茶五花茶具有清热解毒，消暑祛湿，预防夏季风热感冒等功效。
微生物发酵中草药集合了中草药、酶制剂、益生素3种物质优点，具有天然无毒、无副作用、无残留、安全和清洁的优势。中草药的有效药用成分十分复杂，主要包括生物碱、皂苷类、挥发油、黄酮类、多糖类、有机酸以及矿物元素和维生素，这些活性成分有助于增强机体免疫功能、抗应激功能和抗菌等作用。很多中草药物由于自身结构不能被机体有效直接吸收利用，而是作为前体物，经肠道菌群的处理后，才能发挥药效。研究表明，含苷类物质的中草药需要经微生物分泌的丰富酶类分解，成为具有药物活性的苷元后，才能发挥其药效。
虽然目前以木棉花为原料进行发酵制备产品的方案较多，但因未经有针对性的研究，所得产品的生理活性有限，且不恰当的制备工艺制备的产品容易产生毒副作用。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种木棉花酵素及其制备方法与在制备保肝产品中的应用。
本发明提供了一种木棉花酵素的制备方法，其包括：
将鲜木棉花制成木棉花茶；
将所述木棉花茶经水浸提取，获得提取液；
将所述提取液浓缩至固形物含量为40％～60％，获得浓缩液；
所述浓缩液与氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合后，灭菌获得基料；
在所述基料中接种丝枝蜡蚧霉菌至活菌密度为1×106CFU/ml～5×106CFU/ml，28℃～32℃有氧发酵10d～20d获得发酵液A；
调节所述发酵液A的pH至为5～6，然后添加蔗糖，接种酵母菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml、接种植物乳杆菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml和蔗糖，26℃～32℃发酵8d～12d获得发酵液B；
所述发酵液B经超滤后，获得木棉花酵素液。
本发明中，所述木棉花茶的制备方法为将鲜木棉花洗净，晾干水分，160℃～200℃炒制杀青，60℃～120℃烘干，得木棉花茶。
本发明中，所述提取液的制备方法包括：
所述木棉花茶加10～20倍质量的水，85℃～100℃保温提取90min～150min，过滤得滤液①和滤渣；
所述滤渣加8～15倍质量的水，85℃～100℃保温提取60min～120min，过滤，得滤液②；
合并滤液①和滤液②为提取液。
所述基料中，浓缩液与水的质量比1:(5～10)。
所述氯化钙添加至浓缩液质量的0.1％～0.2％。
所述磷酸二氢钾添加至浓缩液质量的0.1％～0.15％。
所述硫酸铵添加至浓缩液质量的0.2％～0.5％。
所述灭菌包括将混合后的液体加热至80℃处理60min，然后冷却至30℃。
本发明中，所述添加蔗糖至发酵液A质量的12％～18％。
本发明中，所述超滤的超滤膜的孔径为0.45～0.55μm，所述超滤的压力为0.1～0.3MPa。
本发明中，所述超滤后，还包括将木棉花酵素液浓缩后与辅料混合，经真空喷雾干燥至含水量小于5％的步骤。一些实施例中，所述辅料选自麦芽糊精、β-环糊精、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶中的至少一种。一些具体实施例中，先将木棉花酵素液浓缩至固含量为20％～40％，再将所得浓缩液与辅料以1:(0.1～0.3)的质量比混合；所述真空喷雾干燥的真空度为680～740mmHg，进料速度为10～30ml/min，输送带速为10～20mm/min，进风温度依次为140～200℃，出风温度为50～60℃。
本发明所述制备方法制得的木棉花酵素。
本发明所述制备方法制得的木棉花酵素在制备保肝产品中的应用。
本发明还提供了一种上述技术方案所述的制备方法制得的木棉花酵素粉。
一种保肝的产品，其包括本发明所述制备方法制得的木棉花酵素，或木棉花酵素粉。
本发明还提供了一种保肝的方法，其为给予本发明所述的保肝产品。
本发明提供的制备方法中，先将木棉花、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合加热处理获得基料，再利用丝枝蜡蚧霉菌进行一次发酵处理，利用酵母菌及植物乳杆菌进行二次发酵处理，最后再对发酵液超滤处理，得到木棉花酵素液即液体酵素。对酵素液干燥处理后可得到酵素粉。采用上述处理方法不仅将木棉花废料重新得到利用，减少环境污染，而且获得对人体十分重要的功能食品-酵素液和酵素粉，所得酵素产品含有较高的酶活性和丰富菌种，且具有保肝功效，大大提高了木棉花的药用价值。
试验结果表明，本发明制得的木棉花酵素液及酵素粉口感酸甜适口，具有木棉花特有的清香味；由表结果可知，木棉花酵素粉能够明显抑制CCl4致急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性升高，减轻肝组织的变形和坏死，且显著优于对比例组，显示其具有保肝降酶作用。
具体实施方式
本发明提供了一种木棉花酵素及其制备方法与在制备保肝产品中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的木棉花中的主要成分为:水分85.66％，粗蛋白质1.38％，粗脂肪0.2％，灰分0.8％，粗纤维11.95％；其中，灰分中主要为钾、钙、镁、铁和锌。除水分和水溶性活性物质外，含量较高的不溶性固形物主要为纤维素，本发明采用丝枝蜡蚧霉菌进行有氧发酵，能够将人体不易利用的大分子水解成易于微生物和人体利用的小分子物质，然后再以酵母菌和植物乳杆菌进行二次发酵。具体的，本发明提供的木棉花酵素的制备方法包括如下步骤：
将鲜木棉花制成木棉花茶；
将所述木棉花茶经水浸提取，获得提取液；
将所述提取液浓缩至固形物含量为40％～60％，获得浓缩液；
所述浓缩液与氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合后，灭菌获得基料；
在所述基料中接种丝枝蜡蚧霉菌至活菌密度为1×106CFU/ml～5×106CFU/ml，28℃～32℃有氧发酵10d～20d获得发酵液A；
调节所述发酵液A的pH至为5～6，然后添加蔗糖，接种酵母菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml、接种植物乳杆菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml和蔗糖，26℃～32℃发酵8d～12d获得发酵液B；
所述发酵液B经超滤后，获得木棉花酵素液。
在本发明提供的制备方法中，先将木棉花制备成花茶，提取花茶浓缩液，再将木棉花茶浓缩液、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合加热处理获得基料，再利用丝枝蜡蚧霉菌进行一次发酵处理，利用酵母菌及植物乳杆菌进行二次发酵处理，最后再对发酵液超滤处理，得到木棉花酵素液即液体酵素。采用上述处理方法不仅将木棉花废料重新得到利用，减少环境污染，而且获得对人体十分重要的功能食品-酵素液，该酵素液含有较高的酶活性和丰富菌种，且具有保肝功效，大大提高了木棉花的药用价值。
按照本发明，先将木棉花制成花茶，提取花茶制成提取液，然后将提取液浓缩制成浓缩液，再将木棉花茶浓缩液、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合加热，得到基料。
所述木棉花茶的制备过程中，炒制的温度为160℃、180℃或200℃，烘干的温度为60℃、90℃或120℃。
所述提取液的制备过程中，木棉花与水的质量比为1:10、1:15或1:20，滤渣与水的质量比为1:8、1:10或1:15。
所述滤液①或滤液②的提取皆在常压下进行。滤液①的提取条件为85℃提取90min，或95℃提取12min，或100℃提取150min；滤液②的提取条件为85℃提取60min，或95℃提取90min，或100℃提取120min。
本发明中，将所述提取液浓缩至固形物含量为40％、50％或60％，
本发明所述基料是丝枝蜡蚧霉菌发酵的基质。其中，木棉花茶浓缩液与水的质量比为1:(5～10)。在一些实施例中，木棉花茶浓缩液与水的质量比为1:5、1:8或1:10。
本发明中，添加氯化钙至木棉花茶浓缩液质量分数的0.1％～0.2％。在一些实施例中，添加氯化钙至木棉花茶浓缩液质量分数的0.15％、0.175％或0.2％；添加磷酸二氢钾至木棉花茶浓缩液质量分数的0.1％～0.15％。一些实施例中，添加磷酸二氢钾至木棉花茶浓缩液质量分数的0.125％或0.15％。添加硫酸铵至木棉花茶浓缩液的质量分数的0.2％～0.5％。一些实施例中，添加硫酸铵至木棉花茶浓缩液的质量分数的0.2％、0.3％或0.5％。
本发明中，灭菌采用加热灭菌的方式，所述加热灭菌的温度为70～80℃；所述加热的时间为40～90min。一些实施例中，所述灭菌的条件为80℃加热60min，或70℃加热70min。
本发明中，在所述加热处理后，优选还进行冷却。所述冷却的温度优选为25～35℃。一些实施例中，冷却至32℃、28℃或30℃。在所述冷却后，得到基料。
按照本发明，在得到基料后，将所述基料与丝枝蜡蚧霉菌混合发酵，得到发酵液A。
本发明中，所述丝枝蜡蚧霉菌的接种量优选为5％～10％，接种至活菌数1×106～5×106CFU/ml。所述接种量指丝枝蜡蚧霉菌与培养液即基料的体积比。
本发明中，所述发酵为有氧发酵。所述有氧发酵的温度优选为25～35℃。所述发酵的时间优选为10～20天。在一些实施例中，有氧发酵14天，发酵温度为28℃、30℃或32℃。在所述发酵后，得到发酵液A。
按照本发明，在得到发酵液A后，将所述发酵液A与酵母菌、植物乳杆菌混合发酵，得到发酵液B。
本发明中，在混料前，优选先调节发酵液A的PH值至5～6；若PH值低于5或高于6，均易导致酵素产品中酵母菌和乳酸菌的繁殖速度过慢，不利于获得菌种丰富的酵素产品。本发明对调节PH所用的调节剂种类没有特殊限制，为本领域技术人员熟知的调节剂即可，如柠檬酸、山梨酸、碳酸氢钠、磷酸氢二钠等。
本发明中，混料时，酵母菌的接种量优选为0.1％～0.2％，接种至酵母菌的活菌数为1×107～5×107CFU/ml，植物乳杆菌的接种量优选为0.2％～0.8％，接种至植物乳杆菌的活菌数为1×107～5×107CFU/ml。所述接种量指菌类与培养液即发酵液A的体积比。
本发明中，在混料后及发酵前，优选调节混合料的糖度至12％～18％；若糖度低于12％，易导致发酵不完全，若糖度高于18％，容易抑制酵母菌和乳酸菌的发酵。本发明中，调节糖度所用的调剂优选包括蔗糖和葡萄糖中的一种或几种，本发明中所述蔗糖添加至唐都为12％或15％。
本发明中，第二次发酵时，优选控制发酵的温度为26～32℃，更优选为30℃。所述发酵的时间优选为8～12天。在一些实施例中，所述发酵为通风干燥发酵。在所述发酵后，得到发酵液B。
按照本发明，在得到发酵液B后，将发酵液B进行超滤处理，得到木棉花酵素液。
本发明中，在进行超滤处理前，优选先进行沉淀。所述沉淀优选为自然沉淀，即静置沉淀。所述沉淀的时间优选为12～36小时，更优选为24小时。
本发明中，所述超滤处理所用超滤膜的孔径优选为0.45～0.55μm，更优选为0.5μm。所述超滤的压力优选为0.1～0.3MPa。所述超滤膜优选为陶瓷膜或中孔纤维素膜，更优选为陶瓷膜。所述超滤膜为中孔纤维素膜时，超滤压力优选为0.2MPa以下。所述超滤处理是使用油泵将发酵液从超滤膜中间流过，除去发酵液中的大分子物质，使混沌物、漂浮物及其它杂质过滤出来，进而获得澄清液体酵素；而且其具有较好的除菌效果，可达到巴氏灭菌的水平，但相比于巴氏灭菌，又不会破坏酵素酶活性、菌种及抗氧性。超滤产生的残渣可用作生物有机肥或菌类培养基，因充分发酵过，容易分解，易被植物或微生物吸收，不存在环境污染问题，且可进一步提高木棉花的经济附加值。
本发明还提供了一种上述技术方案所述的制备方法制得的木棉花酵素液。
试验结果表明，由表结果可知，木棉花酵素粉能够明显抑制CCl4致急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性升高，减轻肝组织的变形和坏死，且显著优于对比例组，显示其具有保肝降酶作用。
本发明还提供了一种具有保肝功能的木棉花酵素及其制备方法，包括：
将木棉花酵素液与辅料混合后干燥，得到木棉花酵素粉；
所述干燥为真空喷雾干燥，干燥至含水量小于5％；
所述木棉花酵素液为上述技术方案所述的木棉花酵素液。
本发明中，在混料前，优选先将木棉花酵素液浓缩至固含量为20％～40％。所述固含量为可溶性固形物的质量百分含量。所述浓缩的方式没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的浓缩手段即可。在一些实施例中，采用旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发浓缩的水浴温度为30～40℃。
在上述浓缩后，将所得浓缩液与辅料混合。本发明中，所述浓缩液与辅料的质量比优选为1:(0.1～0.3)。本发明中，所述辅料优选包括麦芽糊精和/或β一环糊精或阿拉伯胶或羧甲基纤维素钠，更优选包括β一环糊精。
在上述混合后，进行干燥。本发明中，所述干燥优选为真空喷雾干燥。干燥程度优选为使含水量小于5％。采用常规热风干燥会破坏酵素酶活性、菌种及抗氧性，而本发明采用真空喷雾干燥能够产生高酶活性和高量菌种，及优异的抗氧性。
所述真空喷雾干燥的条件优选为:真空度为680～740mmHg，进料速度为10～30ml/min，输送带速为10～20mm/min，进风温度依次为140～200℃，出风温度为50～60℃；优选的，进风温度依次为160℃，出风温度为55℃。在所述干燥后，得到酵素粉。
本发明还提供了一种上述技术方案所述的制备方法制得的木棉花酵素粉。
试验结果表明，本发明制得的木棉花酵素液及酵素粉口感酸甜适口，具有木棉花特有的辛香味；由表结果可知，木棉花酵素粉能够明显抑制CCl4致急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性升高，减轻肝组织的变形和坏死，且显著优于对比例组，显示其具有保肝降酶作用。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
取新鲜木棉花，洗净，晾干水分，160℃进行炒制杀青，60℃烘干，得木棉花茶，加10倍水，加热至85℃，保温提取90min，过滤，得滤液①，滤渣加8倍水，加热至85℃，保温提取60min，过滤，得滤液②，合并滤液，浓缩至固形物40％，备用。
将木棉花茶浓缩液与纯净水按料液比1:5混合后，再加入占木棉花茶浓缩液质量0.175％的氯化钙、0.125％的磷酸二氢钾和0.3％的硫酸铵，加热至80℃处理60min，冷却至30℃，得到基料。
按照接种量5％活菌数1×107～5×107CFU/ml向所得基料中加入丝枝蜡蚧霉菌，形成菌液，于30℃下有氧发酵14d，得到发酵液A。
调节发酵液A的PH为5，按酵母菌接种量0.15％活菌数1×107～5×107CFU/ml、植物乳杆菌接种量0.5％活菌数1×107～5×107CFU/ml加入酵母菌和植物乳杆菌，再加入白砂糖调节糖度为15％，于30℃下在通风干燥处发酵10d，得到发酵液B。
将所得发酵液B自然沉淀24小时后，采用板框式超滤设备进行超滤处理，陶瓷膜孔径为0.5um，过滤压力为0.2MPa，超滤后得到木棉花酵素液。
将所得木棉花酵素液在30℃水浴温度下旋转蒸发浓缩，直至酵素液中总的可溶性固形物含量为35％，再以浓缩液:辅料为1:0.1的质量比加入辅料β-环糊精，混匀后进行真空喷雾干燥，使水分含量小于5％，干燥条件为:真空度680mmHg，进料速度20ml/min，进风温度温度160℃，出风温度为55℃。经干燥后，得到木棉花酵素粉。
实施例2
取新鲜木棉花，洗净，晾干水分，180℃进行炒制杀青，90℃烘干，得木棉花茶，加15倍水，加热至95℃，保温提取120min，过滤，得滤液①，滤渣加10倍水，加热至95℃，保温提取90min，过滤，得滤液②，合并滤液，浓缩至固形物50％，备用；
将木棉花茶浓缩液与纯净水按料液比1:8混合后，再加入占木棉花茶浓缩液质量0.15％的氯化钙、0.15％的磷酸二氢钾和0.2％的硫酸铵，加热至70℃处理70min，冷却至28℃，得到基料。
按照接种量5％向所得基料中加入丝枝蜡蚧霉菌活菌数1×106～5×106CFU/ml，形成菌液，于28℃下有氧发酵14d，得到发酵液A。
调节发酵液A的PH为5，按酵母菌接种量0.1％活菌数1×107～5×107CFU/ml、植物乳杆菌接种量0.2％活菌数1×107～5×107CFU/ml加入酵母菌和植物乳杆菌，再加入白砂糖调节糖度为12％，于30℃下在通风干燥处发酵10d，得到发酵液B。
将所得发酵液B自然沉淀24小时后，采用板框式超滤设备进行超滤处理，陶瓷膜孔径为0.5μm，过滤压力为0.2MPa，超滤后得到木棉花酵素液。
将所得木棉花酵素液在30℃水浴温度下旋转蒸发浓缩，直至酵素液中总的可溶性固形物含量为35％，再以浓缩液:辅料为1:0.2的质量比加入辅料β-环糊精，混匀后进行真空喷雾干燥，使水分含量小于5％，干燥条件为:真空度680mmHg，进料速度20ml/min，进风温度温度160℃，出风温度为55℃。经干燥后，得到木棉花酵素粉。
实施例3
取新鲜木棉花，洗净，晾干水分，200℃进行炒制杀青，120℃烘干，得木棉花茶，加20倍水，加热至100℃，保温提取150min，过滤，得滤液①，滤渣加15倍水，加热至100℃，保温提取120min，过滤，得滤液②，合并滤液，浓缩至固形物60％，备用；
将木棉花茶浓缩液与纯净水按料液比1:10混合后，再加入占木棉花茶浓缩液质量0.2％的氯化钙、0.15％的磷酸二氢钾和0.5％的硫酸铵，加热至70℃处理70min，冷却至32"C，得到基料。
按照接种量8％向所得基料中加入丝枝蜡蚧霉菌活菌数1×106～5×106CFU/ml，形成菌液，于32℃下有氧发酵14d，得到发酵液A。
调节发酵液A的PH为5，按酵母菌接种量0.1％活菌数1×107～5×107CFU/ml、植物乳杆菌接种量0.2％活菌数1×107～5×107CFU/ml加入酵母菌和植物乳杆菌，再加入白砂糖调节糖度为12％，于30℃下在通风干燥处发酵10d，得到发酵液B。
将所得发酵液B自然沉淀24小时后，采用板框式超滤设备进行超滤处理，陶瓷膜孔径为0.5μm，过滤压力为0.2MPa，超滤后得到木棉花酵素液。
将所得木棉花酵素液在30℃水浴温度下旋转蒸发浓缩，直至酵素液中总的可溶性固形物含量为35％，再以浓缩液:辅料为1:0.15的质量比加入辅料β-环糊精，混匀后进行真空喷雾干燥，使水分含量小于5％，干燥条件为:真空度680mmHg，进料速度20ml/min，进风温度温度160℃，出风温度为55℃。经干燥后，得到木棉花酵素粉。
对比例1
按照一般酵素的常规制备方法“原料+糖直接发酵”进行，具体为：将木棉花粉碎至20～40目；向粉碎后木棉花粉加入白砂糖调节糖度为15％，于30℃下在通风干燥处发酵10d，经真空喷雾干燥后，得到普通木棉花酵素粉。
对比例2
按照实施例2的制备过程进行，不同的是，木棉花粉不经发酵处理，粉碎后加水提取浓缩，经真空喷雾干燥后，得到木棉花水提粉。
对比例3
按照实施例2的制备过程进行，不同的是，将真空喷雾干燥替换为常规热风干燥，干燥温度为70℃，时间为6h。
功效验证
一、对实施例1～3及对比例1～3所得产品进行保肝作用的试验。
①)小鼠急性肝损伤的保护作用试验
ICR种小鼠雌雄各半，体重18-22g，适应环境天后开始实验。小鼠随机小鼠随机分为9组，每组6只，分别为:
1)空白对照组，灌胃给予生理盐水100mg/kg；
2)模型对照组，灌胃给予生理盐水100mg/kg；
3)阳性对照组，灌胃给予联苯双酯100mg/kg；
4)对比例1组，灌胃给予对比例1的酵素，剂量100mg/kg；
5)对比例2组，灌胃给予对比例2的酵素，剂量100mg/kg；
6)对比例3组，灌胃给予对比例3的酵素，剂量100mg/kg；
7)实施例1组，灌胃给予实施例1的酵素，剂量100mg/kg；
8)实施例2组，灌胃给予实施例2的酵素，剂量100mg/kg；
9)实施例3组，灌胃给予实施例3的酵素，剂量100mg/kg。
每日给药1次，连续给药7d。小鼠自由采食。于末次给药10h后，正常组按0.1ml/10g腹腔注射大豆色拉油，其余组给予等量0.1％CCl4大豆色拉油溶液。同时禁食，自由饮水，禁食17h后经眼眶取血，常规制备血浆后测定血清ALT、AST。检测结果如下表1
表1小鼠急性肝损伤的保护作用
| 分组 | ALT(U) | AST(U) |
| 空白对照组 | 43.82±5.71<sup>**</sup> | 128.15±14.66<sup>**</sup> |
| 模型对照组 | 389.25±18.24 | 317.31±16.89 |
| 阳性对照组 | 110.19±13.22<sup>**</sup> | 131.51±17.29<sup>**</sup> |
| 对比例1 | 174.27±12.48<sup>*</sup> | 178.15±12.82<sup>*</sup> |
| 对比例2 | 175.38±11.36<sup>*</sup> | 178.42±15.27<sup>*</sup> |
| 对比例3 | 176.51±12.57<sup>*</sup> | 180.27±11.62<sup>*</sup> |
| 实施例1 | 128.57±11.69<sup>**</sup> | 145.35±14.15<sup>**</sup> |
| 实施例2 | 129.32±12.06<sup>**</sup> | 147.67±15.62<sup>**</sup> |
| 实施例3 | 129.94±11.41<sup>**</sup> | 148.18±12.54<sup>**</sup> |
与模型组对比，*P＜0.05，**P＜0.01；
由表结果可知，木棉花酵素粉能够明显抑制CCl4致急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性升高，减轻肝组织的变形和坏死，且显著优于对比例组，显示其具有保肝降酶作用。
二、对实施例1～3及对比例1～3所得产品的酶活性、菌种及抗氧性进行测试，其中，酶活性、菌种的测试参照GBT23535-2009、GBT5009.171-2003、SBT10317-1999、GB4789.15-2016和GB4789.35-2016，抗氧性的测试参照GB5009.32-2016。测试结果参见表2。
表2酶活性、菌种及抗氧性检测结果
与对比例2对比，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝3
由以上测试结果可知，按照本发明提供的制备方法制得的酵素产品，具有优异的保肝效果；而按照一般酵素的常规制备方法、或将本发明制备方法中的发酵处理或提取处理改变为常规处理后，均会降低促进保肝功效，也会破坏产品的酶活性、菌种和抗氧性。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种木棉花酵素的制备方法，其特征在于，包括：
将鲜木棉花制成木棉花茶；
将所述木棉花茶经水浸提取，获得提取液；
将所述提取液浓缩至固形物含量为40％～60％，获得浓缩液；
所述浓缩液与氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸铵和水混合后，灭菌获得基料；
在所述基料中接种丝枝蜡蚧霉菌至活菌密度为1×106CFU/ml～5×106CFU/ml，28℃～32℃有氧发酵10d～20d获得发酵液A；
调节所述发酵液A的pH至为5～6，然后添加蔗糖，接种酵母菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml、接种植物乳杆菌至活菌密度为1×107CFU/ml～5×107CFU/ml和蔗糖，26℃～32℃发酵8d～12d获得发酵液B；
所述发酵液B经超滤后，获得木棉花酵素液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述木棉花茶的制备方法为将鲜木棉花洗净，晾干水分，160℃～200℃炒制杀青，60℃～120℃烘干，得木棉花茶。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取液的制备方法包括：
所述木棉花茶加10～20倍质量的水，85℃～100℃保温提取90min～150min，过滤得滤液①和滤渣；
所述滤渣加8～15倍质量的水，85℃～100℃保温提取60min～120min，过滤，得滤液②；
合并滤液①和滤液②为提取液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
所述基料中，浓缩液与水的质量比为1:(5～10)；
所述氯化钙添加至浓缩液质量的0.1％～0.2％；
所述磷酸二氢钾添加至浓缩液质量的0.1％～0.15％；
所述硫酸铵添加至浓缩液质量的0.2％～0.5％。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭菌包括将混合后的液体加热至80℃处理60min，然后冷却至30℃。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述添加蔗糖至发酵液A质量的12％～18％。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述超滤的超滤膜的孔径为0.45～0.55μm，所述超滤的压力为0.1～0.3MPa。
8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述超滤后，还包括将木棉花酵素液浓缩后与辅料混合，经真空喷雾干燥至含水量小于5％的步骤。
9.权利要求1～8任一项所述制备方法制得的木棉花酵素。
10.权利要求1～8任一项所述制备方法制得的木棉花酵素在制备保肝产品中的应用。
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| CN107467646A (zh) * | 2017-08-23 | 2017-12-15 | 广西俊智农业科技有限公司 | 一种解酒护肝酵素及其制备方法 |
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