CN112972421B - 基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用 - Google Patents

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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof

Abstract

本发明提供一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统，包括纳米蛋白复合物与包裹在纳米蛋白复合物中药物；所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成。与现有技术相比，本发明提供的纳米药物系统直接以多正电荷蛋白为核心，将带有负电荷的聚合物表面活性剂及药物结合在多正电荷蛋白上，得到具有高生物相容性的纳米药物系统，用于肿瘤治疗尤其是用于骨癌及其转移癌的治疗可使药物在体内缓慢释放，延长药效，并显著减少副作用，具有较好的医学前景。

Description

基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于生物医学材料技术领域，尤其涉及一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用。
背景技术
骨肉瘤(osteosarcoma)是儿童和青少年最常见的原发恶性骨肿瘤，约占骨源性肿瘤的20％，发病的中位年龄为16岁，同时也是儿童和青少年的第二大肿瘤性死因。据统计，每年发病率约为5例/100万人，男性略高于女性。约80％～90％发生于生长迅速的长骨干骺端，其中，股骨远端和胫骨近端最为多见，其次是肱骨近端，其他部位如腓骨近端、髂骨、股骨近端等也可发生。并且骨肉瘤临床起病隐匿，最早出现的症状是局部疼痛，约80％患者就诊时就已经发生了微小肺转移，其中20％的患者在胸部CT检查时就能发现转移灶。随着手术方式的改进、化疗的规范化以及新的化疗药物的诞生，使得骨肉瘤的五年生存率提高到60％～70％，但出现肺转移的骨肉瘤患者五年生存率仍低于20％。
目前临床常用的骨肉瘤化疗药物有：阿霉素(Doxorubicin,DOX)、甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)、顺铂(Cisplatin,DDP)、异环磷酰胺(Ifosfamide,IFO)等。阿霉素作为经典骨肉瘤一线化疗的有效用药，在骨肉瘤化疗中起到基石的作用，但由于其累加剂量引起的心脏毒性限制了其在临床中的使用次数。由此，如何有效的减少或避免阿霉素引起的心脏毒性是现阶段亟待解决的临床问题。
阿霉素是蒽环类抗生素的代表，可以抑制细胞DNA复制，是一种泛癌种的化疗药。自1960年代应用于临床试验后，阿霉素为不计其数的患者带来了治疗的希望。阿霉素是骨肉瘤和软组织肉瘤化疗中的基石药物，临床上可单独或与其他药物联合用于治疗骨肉瘤和软组织肉瘤的一线化疗。但其剂量依赖性和累积毒性特征已经得到广泛证实，特别是在心脏组织中，这将阿霉素的最大终生累积剂量限制在550mg/m2。因此如何在提升疗效的同时减少化疗药物的不良反应，一直是研究者们进行研究与新药开发的重点。
恶性肿瘤的特征是肿瘤内血管过度生长和组织、细胞处于乏氧状态。在这种情况下，肿瘤细胞通过糖酵解途径获取能量，导致乳酸的大量产生和堆积，形成肿瘤的酸性微环境。Aldoxorubicin(ALDOXO，CAS No.:1361644-26-9)是阿霉素的白蛋白结合前药，可在酸性微环境中释放阿霉素。静脉给药后，Aldoxorubicin通过其酸敏感的N-ε-maleimidocaproic acid hydrazide linker以共价方式迅速结合循环白蛋白的半胱氨-34氨基酸，然后被转运到肿瘤的富含酸的环境中并积累，肿瘤的酸性微环境引起N-ε-maleimidocaproic acid hydrazide linker的裂解。因此，与同等剂量的阿霉素相比，Aldoxorubicin可以以更高的浓度被递送到肿瘤细胞周围部位，被释放并杀死肿瘤细胞，从而达到靶向化疗的目的。
目前，Aldoxorubicin用于治疗乳腺癌、大肠癌、软组织肉瘤及其它实体瘤、胶质母细胞瘤、卡波西肉瘤、胰腺癌及小细胞肺癌的临床实验都取得了不错的疗效。由美国CytRx公司发起的Aldoxorubicin治疗软组织肉瘤的Ⅲ期临床实验结果显示：Aldoxorubicin组中位无进展生存期为5.32个月，整体缓解率为37.5％；而其他常规标准化疗组的中位无进展生存期为2.96个月，整体缓解率为23.0％。这对于难治性软组织肉瘤来说，这样的疗效是具有突破性的。
尽管Aldoxorubicin与阿霉素的血浆半衰期相当，约为20.1～21.1h，但与阿霉素相比，使用Aldoxorubicin导致的心肌病和心脏毒性显著降低。当前的临床和药理学数据表明，Aldoxorubicin是治疗晚期软组织肉瘤的有效且耐受性良好的药物，并且Aldoxorubicin产生的低心脏毒性可以使该药在六个化疗周期后继续使用。但Aldoxorubicin作为传统阿霉素的前体药，其在骨肉瘤中的相关研究甚少。观察Aldoxorubicin对骨肉瘤细胞的作用、提高Aldoxorubicin的血浆半衰期及生物利用度及进一步减少Aldoxorubicin的副作用是本领域的研究重点。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用，该纳米药物系统具有较高生物相容性且可较少药物副作用。
本发明提供了一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统，包括纳米蛋白复合物与包裹在纳米蛋白复合物中药物；所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成。
优选的，所述多正电荷电白包括顺序连接的N端氨基酸、中间氨基酸与C端氨基酸；
所述N端氨基酸的序列如SEQ ID NO:1所示；
所述中间氨基酸的序列为n个重复的如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；n为3～15的整数；
所述C端氨基酸的序列如SEQ ID NO:3所示。
优选的，所述多正电荷蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
优选的，所述多正电荷蛋白的C端氨基酸的末端还连接有多聚组氨酸标签。
优选的，所述带负电荷的聚合物表面活性剂选自羧基封端的聚乙二醇；所述药物选自Aldoxorubicin。
优选的，所述纳米药物系统的粒径为180～200nm。
本发明还提供了一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统的制备方法，包括：
S1)将多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂在水溶液的混合，得到蛋白复合物溶液；
S2)将药物加入所述蛋白复合物溶液中搅拌，离心，收取上清后透析，得到纳米药物系统。
优选的，所述多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂的摩尔比为1：(72～720)；所述药物与蛋白复合物溶液的比例为(1～10)mg：1ml；混合后透析取分子量大于5000的产物，得到蛋白复合物溶液；所述步骤S2)中透析取分子量大于5000的产物，得到纳米药物系统。
本发明还提供了上述纳米药物系统在制备治疗骨癌及其转移癌的药物中的应用。
本发明还提供了一种多正电荷蛋白，所述多正电荷电白包括顺序连接的N端氨基酸、中间氨基酸与C端氨基酸；
所述N端氨基酸的序列如SEQ ID NO:1所示；
所述中间氨基酸的序列为n个重复的如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；n为3～15的整数；
所述C端氨基酸的序列如SEQ ID NO:3所示。
本发明提供了一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统，包括纳米蛋白复合物与包裹在纳米蛋白复合物中药物；所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成。与现有技术相比，本发明提供的纳米药物系统直接以多正电荷蛋白为核心，将带有负电荷的聚合物表面活性剂及药物结合在多正电荷蛋白上，得到具有高生物相容性的纳米药物系统，用于肿瘤治疗尤其是用于骨癌及其转移癌的治疗可使药物在体内缓慢释放，延长药效，并显著减少副作用，具有较好的医学前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中蛋白纳米药物系统的制备流程示意图；
图2为本发明实施例1中的得到的蛋白纳米药物系统的TEM图；
图3为本发明实施例2中的得到的蛋白纳米药物系统的TEM图；
图4为本发明实施例2中得到的蛋白纳米药物系统的粒径分布图；
图5为本发明实施例2中得到的蛋白纳米药物系统的肿瘤细胞毒性结果图；
图6为本发明实施例2中得到的蛋白纳米药物系统对皮下骨癌治疗效果图；
图7为本发明实施例2中得到的蛋白纳米药物系统对原位骨癌的治疗效果图；
图8位本发明实施例2中得到的蛋白纳米药物系统对ALD的副作用抑制效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种多正电荷蛋白，所述多正电荷电白包括顺序连接的N端氨基酸、中间氨基酸与C端氨基酸；
所述N端氨基酸的序列为如SEQ ID NO:1所示；
所述中间氨基酸的序列为n个重复的如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；n为3～15的整数；n为3～15的整数，优选为5～12的整数，更优选为5～10的整数，再优选为7～9的整数；
所述C端氨基酸的序列如SEQ ID NO:3所示；
在本发明中，所述多正电荷蛋白的氨基酸序列最优选如SEQ ID NO:4所示。
按照本发明，为方便蛋白的纯化及检测，所述多正电荷蛋白的C端氨基酸的末端优选还连接有蛋白标签，更优选连接有融合蛋白标签，再优选连接有多聚组氨酸标签，最优选连接有六聚组氨酸标签。
本发明还提供了一种基于多正电荷的纳米药物系统，包括纳米蛋白复合物与包裹在纳米蛋白复合物中药物；所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成。
其中，所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成；所述多正电荷蛋白同上所述，在此不再赘述；所述带负电荷的聚合物表面活性剂优选为羧基封端的聚乙二醇，更优选为单羧基封端的聚乙二醇；所述聚乙二醇的分子量优选为2000～10000，更优选为3000～7000，再优选为4000～6000，最优选为5000。
所述纳米蛋白复合物内包裹有药物，所述药物优选为治疗肿瘤的药物，更优选为Aldoxorubicin。
所述纳米药物系统的粒径优选为180～200nm。
本发明提供的纳米药物系统直接以多正电荷蛋白为核心，将带有负电荷的聚合物表面活性剂及药物结合在多正电荷蛋白上，得到具有高生物相容性的纳米药物系统，用于肿瘤治疗尤其是用于骨癌及其转移癌的治疗可使药物在体内缓慢释放，延长药效，并显著减少副作用，具有较好的医学前景。
本发明还提供了一种上述基于多正电荷蛋白的纳米药物系统的制备方法，包括：S1)将多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂在水溶液的混合，得到蛋白复合物溶液；S2)将药物加入所述蛋白复合物溶液中搅拌，离心，收取上清后透析，得到纳米药物系统。
其中，本发明对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售即可；所述多正电荷蛋白、带负电荷的聚合物表面活性剂及药物均同上所述，在此不再赘述。
将多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂在水溶液的混合；在本发明中，优选将多正电荷蛋白水溶液与带负电荷的聚合物表面活性剂水溶液混合；所述多正电荷蛋白水溶液的浓度优选为1～5mg/ml，更优选为1～3mg/ml，再优选为2mg/ml；所述带负电荷的聚合物表面活性剂水溶液的浓度优选为80～120mg/ml，更优选为90～110mg/ml，再优选为100～105mg/ml；在本发明提供的实施例中，所述带负电荷的聚合物表面活性剂水溶液的浓度具体为102.9mg/ml；所述多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂的摩尔比优选为1：(72～900)，更优选为1：(72～800)，再优选为1：(72～720)，再优选为1：(300～720)，再优选为1：(500～720)，再优选为1：(600～720)，最优选为1：(700～720)。
混合后，优选透析以除去多余的带负电荷的聚合物表面活性剂，得到蛋白复合物溶液；所述透析优选取分子量大于带负电荷的聚合物表面活性剂的产物；在本发明提供的实施例中，具体取分子量大于5000的产物。
将药物加入纳米蛋白复合物溶液中搅拌，离心，收取上清后透析，得到纳米药物系统；所述药物与蛋白复合物溶液的比例优选为(1～10)mg：1ml，更优选为(3～7)mg：1ml，再优选为(4～6)mg：1ml，最优选为5mg：1ml；所述透析优选取分子量大于带负电荷的聚合物表面活性剂的产物；在本发明提供的实施例中，具体取分子量大于5000的产物。
本发明以多正电荷电白为核心与带负电荷的聚合物表面活性剂进行静电力结合，然后通过物理吸附作包裹药物，制备方法简单，反应效率高，收率高，具有较高的工业应用前景，并且在生物医学治疗实验中该纳米药物系统效果非常好，具有较好的医学前景。
本发明还提供了一种上述基于多正电荷蛋白的纳米药物系统在制备治疗肿瘤的药物中的应用，尤其是在制备治疗骨癌及其转移癌的药物中的应用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售。
实施例1
1.1将具有如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的多正电荷蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/ml的溶液，同时配置浓度为102.9mg/ml的单羧酸封端的聚乙二醇(分子量5000)水溶液。
1.2将步骤1.1中所得溶液按照10：1进行混合，确保蛋白与聚乙二醇摩尔比为1：72，之后进行透析除去多余的PEG-COOH，得到未包裹药物的蛋白复合物溶液。
(3)取5mg ALDOXO加入到步骤1.2得到的蛋白复合物溶液(1mL)中，之后进行搅拌，离心，收取上清，透析后得到完整的蛋白纳米药物系统。
上述步骤1.1所述的聚乙二醇负电荷表面活性剂具有羧基结构。
所述的步骤1.2与1.3中，透析取分子量大于5000的产物。
图1为本发明实施例1中蛋白纳米药物系统的制备流程示意图。
利用透射电子显微镜对实施例1中的得到的蛋白纳米药物系统进行分析，得到其TEM图，如图2所示。
实施例2
2.1将具有如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的多正电荷蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/ml的溶液，同时配置浓度为102.9mg/ml的单羧酸封端的聚乙二醇(分子量5000)水溶液。
2.2将步骤2.1中所得溶液1：1进行混合，确保蛋白与聚乙二醇摩尔比为1：720，之后进行透析除去多余的PEG-COOH，得到未包裹药物的蛋白复合物溶液。
2.3取5mg ALDOXO加入到步骤2.2中得到的蛋白复合物溶液(1mL)中，之后进行搅拌，离心，收取上清，透析后得到完整的蛋白纳米药物系统。
上述步骤2.1所述的的聚乙二醇负电荷表面活性剂具有羧基结构。
所述的步骤2.2与2.3中，透析取分子量大于5000的产物。
所述蛋白复合物用于骨癌及其转移癌的治疗，并减少其副作用。
利用透射电子显微镜对实施例2中的得到的蛋白纳米药物系统进行分析，得到其TEM图，如图3所示；从图3中可以看出本发明的蛋白纳米药物系统具有均匀的纳米形态。
图4为实施例2中得到的蛋白纳米药物系统的粒径分布图；可以看出本发明的蛋白纳米药物系统具有良好的稳定性，在水中具有很好的分散性和均匀性。
对比例1
取5mg ALDOXO加入到实施例1中的单羧酸封端的聚乙二醇(分子量5000)水溶液(1mL)中，之后进行搅拌，离心，收取上清，透析后得到纳米药物系统记为PEG-ALD。
性能测试
1、蛋白纳米药物系统对成纤维细胞的细胞毒性
采用标准MTT法测定体外细胞毒性。待细胞长满后，取活化好的143B细胞培养基悬浮液，用PBS洗三次，加入1mL胰酶消化后，加入1mL培养基终止消化，之后离心，PBS洗涤三次，将处理好的143B细胞接种在96孔板中，使细胞浓度至每孔约6000个，加入100μL DMEM+10％FBS培养基，放入含有5％CO2、37℃恒温培养箱中培养24h。待细胞约长满孔面积的80％后，将加入的培养基除去，向每个孔中添加100μL以培养基为溶剂的浓度为800,400,200,100,50,25,0nm/mL的蛋白纳米药物系统溶液，左右轻轻摇晃，置于含有5％CO2，37℃恒温培养箱中培养24小时。吸去上清液，然后向每个孔中添加100μL10％MTT溶液(PBS缓冲液中为5mg/ml)，在37℃下培养4h。然后弃去MTT，每孔加入150μL DMSO来溶解细胞内的紫色甲臜晶体。置于摇床上平摇10min后，酶标仪检测测量490nm处的吸光度，计算细胞生长的活力。以空白浓度为0的孔为对照，按照下面的公式分别计算不同药物浓度作用于骨癌时的细胞抑制率，结果如图5所示，由图5可以看出，本蛋白纳米药物系统对癌细胞体现了较好的杀伤效果。
抑制率(％)＝(对照组吸光值－实验组吸光值)/对照组吸光值×100％
存活率(％)＝1－抑制率(％)。
2、多电荷蛋白纳米药物系统治疗效果
模型小鼠均为BalB/c-nu种瘤产生，造模条件如下：
皮下：每只鼠于腿根部皮下注射107/200μl143B细胞，14天后形成皮下瘤；
原位：每只鼠于腿骨髓腔注射107/200μl143B细胞，14天后形成原位瘤。
将实施例2中得到的蛋白纳米药物系统、ALDOXO、对比例1中得到的纳米药物系统PEG-ALD或阿霉素取1mg，溶于PBS缓冲液之中，得到了澄清的溶液，然后通过尾静脉注射进入模型小鼠体内、从图6中可以看出，其在注射后皮下肿瘤大小得到明显抑制，直到注射14天后治疗效果依然非常明显。而从图7可以看出，其在尾静脉注射后，14天取出原位骨肉瘤区域并观察，发现原位肿瘤抑制也具有类似的效果。之后对其心脏毒性副作用减少进行了评估，连续给药14天后取心脏区域做病理切片，结果如图8所示，相比于单纯ALDOXO组，本发明提供的蛋白纳米药物系统对心脏毒性具有明显的减少作用。图6～图8中PBS为空白对照组即仅注射PBS缓冲液，ALD为注射ALDOXO组，PEG-ALD为注射对比例1得到的纳米药物系统组，PCP-PEG-ALD为注射实施例2中得到的蛋白纳米药物系统组，DOXO为注射阿霉素组。
本发明的蛋白纳米药物系统在骨癌治疗及减少副作用方面都具有很好的应用前景。
序列表
<110> 清华大学
<120> 基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用
<130> MP21003016
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Gly Ala Gly Pro Gly Val
1 5
<210> 2
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
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1 5 10 15
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20 25 30
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
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Gly Val
50
<210> 3
<211> 51
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
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1 5 10 15
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
20 25 30
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
35 40 45
Gly Trp Pro
50
<210> 4
<211> 408
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Gly Ala Gly Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
1 5 10 15
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
20 25 30
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
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Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys
100 105 110
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
115 120 125
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
130 135 140
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
180 185 190
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly
195 200 205
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
225 230 235 240
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
245 250 255
Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
260 265 270
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
275 280 285
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
290 295 300
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
305 310 315 320
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
325 330 335
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
340 345 350
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
355 360 365
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
370 375 380
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
385 390 395 400
Gly Lys Gly Val Pro Gly Trp Pro
405

Claims (7)

1.一种基于多正电荷蛋白的纳米药物系统，其特征在于，包括纳米蛋白复合物与包裹在纳米蛋白复合物中药物；所述纳米蛋白复合物由多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂形成；
所述多正电荷蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
所述带负电荷的聚合物表面活性剂选自羧基封端的聚乙二醇；
所述聚乙二醇的分子量为2000~10000；
所述纳米药物系统的粒径为180~200 nm。
2.根据权利要求1所述的纳米药物系统，其特征在于，所述多正电荷蛋白的C端氨基酸的末端还连接有多聚组氨酸标签。
3.根据权利要求1所述的纳米药物系统，其特征在于，所述药物选自Aldoxorubicin。
4.一种权利要求1所述的基于多正电荷蛋白的纳米药物系统的制备方法，其特征在于，包括：
S1）将多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂在水溶液的混合，得到蛋白复合物溶液；
S2）将药物加入所述蛋白复合物溶液中搅拌，离心，收取上清后透析，得到纳米药物系统。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述多正电荷蛋白与带负电荷的聚合物表面活性剂的摩尔比为1：（72~720）；所述药物与蛋白复合物溶液的比例为（1~10）mg：1ml；混合后透析取分子量大于5000的产物，得到蛋白复合物溶液；所述步骤S2）中透析取分子量大于5000的产物，得到纳米药物系统。
6.权利要求1~3任意一项所述的纳米药物系统或权利要求4或5所述制备方法制备的纳米药物系统在制备治疗骨癌及其转移癌的药物中的应用。
7.一种多正电荷蛋白，其特征在于，所述多正电荷蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114292621B (zh) * 2021-12-29 2023-05-02 清华大学 一种基于生物工程蛋白的高低温粘合剂及其制备方法
CN114712330A (zh) * 2022-01-18 2022-07-08 中国科学院长春应用化学研究所 一种生物工程蛋白膏药及其制备方法与应用
CN114940704B (zh) * 2022-05-13 2024-04-26 清华大学 一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101346131A (zh) * 2005-12-27 2009-01-14 Lts罗曼治疗方法有限公司 用于克服肿瘤细胞耐药性的基于蛋白质的载体系统
CN102335135A (zh) * 2010-07-19 2012-02-01 谢清河 功能性纳米粒子及其制造方法与应用
WO2018053434A1 (en) * 2016-09-16 2018-03-22 The Johns Hopkins University Protein nanocages with enhanced mucus penetration for targeted tissue and intracellular delivery
CN109553684A (zh) * 2017-09-25 2019-04-02 中国科学院过程工程研究所 一种纳米载体蛋白及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101346131A (zh) * 2005-12-27 2009-01-14 Lts罗曼治疗方法有限公司 用于克服肿瘤细胞耐药性的基于蛋白质的载体系统
CN102335135A (zh) * 2010-07-19 2012-02-01 谢清河 功能性纳米粒子及其制造方法与应用
WO2018053434A1 (en) * 2016-09-16 2018-03-22 The Johns Hopkins University Protein nanocages with enhanced mucus penetration for targeted tissue and intracellular delivery
CN109553684A (zh) * 2017-09-25 2019-04-02 中国科学院过程工程研究所 一种纳米载体蛋白及其制备方法和应用

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