CN112972389A - 甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用 - Google Patents

甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了一种通过水热法合成基于甘草酸的纳米颗粒(GANPs)的方法，并将其应用于COVID‑19的抗炎及抗病毒联合作用中。该方法是通过水热法利用中草药的活性成分(甘草酸)为基础合成纳米颗粒的方法。该方法原理简单、方法快速、操作简单、成本低廉、易于普及，且合成的纳米颗粒具有改善原料甘草酸生物相容性差的作用，同时对COVID‑19具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用。该方法适用于缓解SARS‑CoV‑2引起的过度炎症反应，因此，本发明在现有基础上，为COVID‑19提供了一种具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用的纳米颗粒前药物。

Description

甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治 疗应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体的，涉及甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用。
背景技术
新型冠状病毒肺炎，简称“新冠肺炎”(COVID-19)是一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。新冠肺炎大流行在世界范围内造成了广泛的发病和死亡，对全球经济和健康造成了相当大的影响。严重COVID-19患者宿主过度炎症可导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官功能衰竭，导致死亡。然而，目前的管理是支持性，没有特定的药物对抗COVID-19。因此，迫切需要安全有效的治疗策略，以抑制严重急性呼吸综合征2冠状病毒(SARS-CoV-2)，同时缓解COVID-19失控的免疫应答。
纳米颗粒由于其独特的水溶性、生物相容性以及低成本、低毒性等特性，被广泛应用于医学研究，包括生物成像、生物传感、生物标记、光动力治疗和药物给药。已有研究将纳米技术实际集成到基于小分子的纳米材料中，改善原料的毒副作用，增强其功效，并通过增强通透性和保留效应(EPR效应)靶向递送药物。如银纳米颗粒和硒纳米颗粒的合成可以提高原料的生物相容性。基于角鲨烯的纳米颗粒具有较低的毒性，并能在多种小鼠模型中靶向炎症组织。基于迷迭香的纳米颗粒具有较好的水溶性和生物利用度。最近，水热法合成的甘草酸功能化量子点具有较低的毒性。
中药具有抗氧化、抗炎、抗病毒免疫调节和抗肿瘤作用，在许多疾病的治疗中显示出巨大潜力。甘草酸(GA)是中草药甘草的常见成分，已被用于治疗肝病(包括病毒性肝炎)和特殊皮肤炎症(如特应性皮炎)。同时，甘草酸已被证明对不同病毒具有活性，包括SARS相关的人和动物冠状病毒。甘草酸的抗炎和抗病毒作用，使其成为单独或与其他药物联合对抗SARS-CoV-2冠状病毒的良好候选药物。然而，由于甘草酸具有一定的细胞毒性，且在水和生物液体中溶解性差，导致其生物利用度较低，因此其治疗潜力受到了限制。
因此，为了抗COVID-19，以甘草酸的活性成分为基础，合成一种具有高生物相容性的甘草酸纳米颗粒(GANPs)，对于COVID-19的治疗具有非常重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，首先提供了一种以甘草酸为基础合成甘草酸纳米颗粒的方法。
本发明的第二个目的是提供上述方法得到的甘草酸纳米颗粒。
本发明的第三个目的是提供上述甘草酸纳米颗粒在制备COVID-19的体内外抗病毒及抗炎药物中的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种甘草酸纳米颗粒的合成方法，包括以下步骤：
(1)将甘草酸溶液逐滴加入饱和碳酸氢钠溶液中得到混合溶液，并调整pH值9.5～10.5；
(2)将混合溶液至于高压釜中150～200℃反应一段时间；
(3)冷却、去除沉淀，透析、冷冻干燥即得甘草酸纳米颗粒。
优选的，上述合成方法中，步骤(3)透析使用截止分子量为14kDa的透析袋进行。
优选的，上述合成方法中，步骤(1)中甘草酸与饱和碳酸氢钠的用量比为1：3～1：5。
本发明还提供上述合成方法得到的甘草酸纳米颗粒。
本发明还提供上述甘草酸纳米颗粒在制备COVID-19的体内外抗病毒及抗炎药物中的应用。
具体的，在体外抗病毒方面，所述甘草酸纳米颗粒具有以下效果：1、降低体外细胞内/细胞上清液中病毒滴度；2、降低细胞内病毒基因mRNA的表达水平；3、体外抑制病毒增殖；4、直接灭活病毒；在体外抗炎方面，所述甘草酸纳米颗粒既能够抑制由于SARS-CoV-2引起的细胞炎性因子(例如IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12)的表达水平；也能够降低SARS-CoV-2N蛋白刺激引起的IL-1α、IL-1β和IL-6mRNA表达水平，缓解SARS-CoV-2引起的人体细胞过度炎症反应。
具体的，在体内抗病毒方面，所述甘草酸纳米颗粒能够抑制病毒在肺内的增殖能力；缓解病毒在体内的感染，在体内抗炎性方面，所述甘草酸纳米颗粒能够减轻病毒感染小鼠的肺部炎症损伤。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种通过水热法合成基于甘草酸的纳米颗粒(GANPs)的方法，并将其应用于COVID-19的抗炎及抗病毒联合作用中。该方法是通过水热法利用中草药的活性成分(甘草酸)为基础合成纳米颗粒的方法。该方法原理简单、方法快速、操作简单、成本低廉、易于普及，且合成的纳米颗粒具有改善原料甘草酸生物相容性差的作用，同时对COVID-19具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用。该方法适用于缓解SARS-CoV-2引起的过度炎症反应，因此，本发明在现有基础上，为COVID-19提供了一种具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用的纳米颗粒前药物。
附图说明
图1为通过水热法合成甘草酸纳米颗粒(GANPs)的原理图及其表征图；
图2是GANPs的体内外生物安全性表征；
图3是GANPs对于SARS-CoV-2感染细胞的体外治疗效果；
图4是GANPs对SARS-CoV-2的N蛋白刺激的THP-1和PBMC细胞炎性因子的影响；
图5是GANPs对于SARS-CoV-2感染小鼠的靶向性及总体治疗效果；
图6是GANPs对于SARS-CoV-2感染小鼠肺脏的治疗效果。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1甘草酸纳米颗粒(GANPs)的合成及其表征
合成甘草酸纳米颗粒时，使用甘草酸作为碳源基础，并使用饱和氢氧化钠溶液使pH值调整为10.0±0.5，随后将混合物在180℃孵育7h。
甘草酸纳米颗粒的合成主要包括以下步骤：
a、0.10克(0.12mmol)甘草酸溶解在10ml去离子水；
b、随后一滴一滴添加饱和氢氧化钠溶液使pH值调整为10.0±0.5；
c、将混合物倒入一个25ml聚四氟乙烯衬里高压釜180℃孵育7h；
d、自然冷却至室温后，10 000rpm离心10min从混合物中去除大量沉淀；
e、随后收集上层清液，通过0.22μm过滤器过滤进一步去除小的沉淀；
f、最后，使用截止分子量为14kDa的透析袋对GANPs进行8小时的透析，在透析过程中每2小时更换一次去离子水；
g、然后收集GANPs粉末并冷冻干燥以供进一步使用；
h、将cy5标记的PEG通过酰胺键连接到GANPs表面(GANPs-cy5)。
通过透射电子显微镜(TEM)对其尺寸和表面形貌进行了表征。如图1B的TEM图像所示，GANPs颗粒呈圆形，分散良好，粒径分布均匀。此外，动态光散射(DLS)测定的GANPs水和粒径分布相对狭窄(图1C)。与TEM结果一致，GANPs具有较高的单分散性，计算平均粒径为70.65nm。平均δ电位测量显示，GANPs的表面负电荷为-32.7mV(图1D)。GANPs的紫外-可见吸收光谱显示在267nm处有一个微小的吸收峰，进一步证实了GANPs的形成(图1E)。GANPs的荧光光谱如图1F所示。GANPs在438nm处表现出明显的蓝色特征荧光，最大激发波长为356nm。图1G为傅里叶变换红外光谱(FT-IR)测得的结果。在GANPs的光谱中，在3421cm-1、2944cm-1、1621cm-1、1396cm-1和1072cm-1处有5个明显的吸收峰，分别对应O-h、C-h、C＝C、C＝O和C-O，说明GANPs表面富含-OH和-COOH。FT-IR谱的初步分析结果表明，GANPs中存在部分GA官能团。
实施例2GANPs的体内外生物相容性评估
铺板，96孔板(一般用平底即可)，细胞数为5000cell/孔，每个孔100ul培养基；配制不同的材料浓度梯度(0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.2mg/ml)(每组浓度梯度重复6次)；每个孔对应加样100ul，一纵排一纵排加样。(从左到右，低浓度到高浓度)；37℃过夜孵育24h；配置CCK8溶液，多配一个孔(43个孔)，430ul的CCK8溶液加入4.000ml培养基；吸弃孔里原有的培养基，每个孔加入10％CCK8溶液100ul(先加对照组，再由材料浓度低到高加，纵排加样)，37℃孵育，于450nm处测量紫外吸收峰每10min测定一次吸收峰，待对照组OD值达1左右时可终止实验。
细胞存活率的计算公式：细胞存活率＝【(As-Ab)/(Ac-Ab)】*100％；
As：实验孔，即含有细胞的培养基+CCK8+待测药物的吸光度；
Ac：对照孔，即含有细胞的培养基+CCK8，但不含待测药物的吸光度；
Ab：空白孔，即只含10％CCK8混合液，但不含细胞，不含细胞培养基，不含待测药物的孔，(即往空白的96孔板的6个孔中直接加入100ul的10％的CCK8混合液即可)。
结果如图2所示，在体外评估GANPs和原料甘草酸(GA)的生物相容性。在本实验及后续实验中，分别对L929细胞(小鼠成纤维细胞)、RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)、THP-1细胞(人单核细胞)和人外周血单个核细胞(PBMC)进行评价。随着GANPs浓度逐渐从0.2mg/mL到1.2mg/mL增加，几乎所有细胞的存活率是100％(图2B)，表明GANPs是生物相容性的，可以安全地用于后续实验。但与GANPs不同的是，随着GA浓度的增加，所有细胞的活力都下降。当GA浓度为1.2mg/mL时，THP-1细胞的存活率甚至低于20％，其他三种细胞的存活率约为60％(图2A)。这些数据表明，GANPs的生物相容性较GA明显提高，说明将甘草酸合成纳米颗粒的确能够改善原材料毒性大的问题。
为评价GANPs的安全性，Balb/C小鼠尾静脉注射GANPs 200μL(3mg/mL)或PBS，7天后收集小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏，用10％的福尔马林固定24小时，切片进行苏木精和伊红(H&E)染色。GANPs对小鼠主要脏器心、肝、脾、肺、肾也没有毒性(图2C)，生物安全性较高，有望用于新冠病毒抗病毒及抗炎研究。
实施例3GANPs对于SARS-CoV-2感染细胞的体外治疗效果
简单地说，L929细胞在DMEM(含2％胎牛血清)中和0.40mg/mL的GANPs孵育2小时，病毒在4℃下和0.40mg/mL的GANPs孵育1小时。然后，去除含有GANPs的培养基，用预处理的MOI为1的病毒取代。置培养箱孵育1h后，弃上清，用DMEM洗涤2次，然后用不同剂量的GANPs孵育24h。用空斑法和RT-qPCR法评价GANPs对病毒感染的抑制作用。在不同的时间点收集上清液，然后将新鲜培养基加入细胞中，在-80℃保存细胞；冻融3次后，作为细胞裂解液收集样品。所有收集的样本保存在-80℃，并通过空斑试验定量样本中的病毒数量。
用空斑试验检测病毒颗粒数，结果以滴度表示。采用实时定量反转录PCR(RT-qPCR)检测病毒RNA的表达。如图3A～3C所示，GANPs的添加显著降低了细胞内和细胞上清中的病毒滴度，也降低了细胞内病毒基因的RNA表达。在细胞上清液中，GANPs使病毒滴度最大降低了105倍。此外，我们发现GANPs对病毒的抑制作用呈剂量依赖性，当GANPs浓度为0.4mg/mL时，抑制作用达到近80％。随后发现，在感染12、24、36和48h(hpi)时，添加GANPs显著降低了病毒mRNA的表达(图3D)，进一步证明了GANPs对病毒具有强大的抗病毒作用。如图3E所示，通过空斑实验，GANPs使病毒的数量减少约20倍，表明GANPs可以直接灭活病毒。此外，用QD605标记的病毒感染L929细胞进行灭活分析，激光共聚焦显微镜结果显示，与GANPs未处理相比，GANPs处理组病毒的红色荧光明显降低(图3F)，进一步表明GANPs的直接失活作用。以上结果表明，GANPs能显著抑制病毒的增殖。
接下来验证抑炎效果。如图3H所示，与正常RAW 264.7细胞(CTL组)相比，仅用GANPs处理的(GANPs组)细胞因子水平相近，说明GANPs不能刺激炎症反应。病毒刺激后，促炎细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12mRNA表达水平均显著升高，提示成功构建细胞炎症模型。GANPs治疗后，促炎细胞因子mRNA表达水平均显著降低。随后，ELISA结果显示IL-6蛋白表达(图3G)也表现出同样的抑制作用。这些数据表明，GANPs不仅具有抗病毒作用，还可减轻病毒引起的过度炎症。
实施例4SARS-CoV-2的N蛋白刺激THP-1细胞和PBMC细胞
将健康人血液天平配平，离心：1800rpm，5-10min，21℃(分离血浆和血细胞)；分层后取上层血浆至EP管保存；在15ml离心管中加入下层血细胞等体积淋巴细胞分离液(通常3ml)，同时按照体积1：1比例加入生理盐水和下层血细胞混合，用巴氏吸管吹匀；将装有淋巴细胞分离液的15ml离心管和桌面呈30°管口朝上斜放，用巴氏吸管沿管壁缓慢加入血细胞和生理盐水的混合液，可以看到血细胞混合液全部位于淋巴细胞分离液上层(淋巴分离液密度在红细胞和淋巴细胞之间)；天平配平，离心：1800rpm，30min，升加速度5降加速度2
(避免破坏分层)；取出可见分层：上层血浆，中层淋巴细胞白膜和分离液，下层红细胞；用巴氏吸管吸取中层白膜，转移至新的15ml离心管，加生理盐水10ml，天平配平；离心：1800rpm，10min，升降加速度调制正常(将分离液和淋巴细胞分开)；弃去上清，加冻存液重悬细胞，放至冰箱保存；铺板，24孔板，细胞数为5*10^5cell/孔，每个孔500ul培养基；设置4个组，CTL、GANPs、N、N+GANPs；其中，N蛋白终浓度为1ug/mL；在相应的组中先加入N蛋白进行刺激，使其产生炎性细胞因子，N蛋白以1ug/mL的浓度加入培养基中，刺激12h；收集细胞及细胞上清，利用qPCR及ELISA测定其细胞内及细胞外促炎细胞因子变化情况：IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12。
为了研究GANPs是否能有效保护SARS-CoV-2诱导的人细胞过度炎症，我们首先建立了体外炎症损伤细胞模型。如图4A所示，SARS-CoV-2N蛋白刺激后，促炎细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6mRNA表达水平明显升高，提示我们成功构建了炎症损伤细胞模型。与单纯N刺激相比，GANPs处理可显著降低IL-1α、IL-1β和IL-6mRNA表达水平。ELISA结果也显示了相同的抗炎作用(图4B和4C)。这些数据表明，GANPs在体外对不可控炎症具有高度的保护作用。
为了进一步模拟人类感染SARS-CoV-2的真实情况，我们使用SARS-CoV-2的N蛋白刺激来自健康供体的人类外周血单个核细胞(hPBMCs)。如图4D～4F所示，经N蛋白刺激后，IL-1α、IL-1β、IL-6mRNA表达水平显著升高，经GANPs处理后，这三种促炎细胞因子表达水平显著下降。ELISA结果也显示了相同的抗炎作用(图4G和4H)。这些结果表明，GANPs对SARS-CoV-2N蛋白刺激的人PBMC也有良好的抗炎作用。综上所述，GANPs也可用于缓解SARS-CoV-2引起的人体细胞过度炎症反应。
实施例5GANPs对于SARS-CoV-2感染小鼠的靶向性及总体治疗效果
10只雌性Balb/C小鼠随机分为两组：未感染和感染小鼠，尾静脉注射GANPs-Cy5。注射后12小时，用动物活体成像仪对不同实验组小鼠的肝、脾、肾、心、肺进行成像。如图5A所示，未感染组的Cy5荧光主要出现在肝脏和肾脏，提示GANPs通过肝胆系统和肾脏系统进行代谢。感染组Cy5荧光主要见于肺、肝、肾，且肺、肝荧光强于未感染组。病毒感染小鼠肺、肝组织广泛发生炎性损伤，血管通透性和血液灌注增强，长时间循环的GANPs可能有更高的概率优先定位于这些组织。这些结果提示，GANPs可能能够通过EPR作用靶向严重炎症部位，进一步发挥抗病毒和抗炎作用。
接下来，我们在体内验证了GANPs的治疗效果。健康的雌性Balb/C小鼠(6周)被随机分为四组每组(n＝12)，PBS(CTL组)或GANPs(GANPs组)分别是通过尾静脉注入未感染的小鼠，PBS(Virus组)或GANPs(Virus+GANPs组)分别是通过尾静脉注入病毒感染小鼠。与CTL组小鼠相比，Virus组小鼠食欲下降，体重增加减少，而Virus+GANPs组小鼠体重逐渐回升(图5C)。Virus组小鼠在第三天开始死亡，而GANPs治疗给感染小鼠带来了显著的生存优势(图5D)。血清IL-6和其他炎症细胞因子水平升高与COVID-19呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征和不良临床结局相关。因此，小鼠眼眶采血后，采用ELISA定量检测血清中IL-6的表达水平(图5E)。结果表明：与CTL组相比，GANPs组细胞因子水平相近，说明GANPs不能刺激全身炎症反应，提示GANPs在小鼠免疫系统中具有良好的隐藏作用。进一步的结果表明，GANPs可显著降低病毒感染小鼠IL-6的表达水平，进一步提示GANPs可能具有缓解全身炎症的作用。
实施例6GANPs对于SARS-CoV-2感染小鼠肺脏的治疗效果
更重要的是，在用GANPs经尾静脉注射治疗后7天采集肺后，分析并比较不同处理下的肺组织病理学改变(图6A)。可以看出：Virus组小鼠肺损伤严重，表现为水肿、弥漫性肺泡损伤和炎性白细胞浸润。而Virus+GANPs组小鼠肺损伤较少。Virus组小鼠肺部CT显示严重毛玻璃影，提示严重炎症浸润和渗出，这是COVID-19重症患者的主要CT改变。而GANPs治疗明显减轻了肺损伤(图6B)。检测肺组织中病毒滴度及细胞因子，从图6C的结果可以看出，与Virus组相比，Virus+GANPs组的病毒载量明显降低，说明GANPs也可以缓解病毒在体内的感染。这些结果证实了GANPs抑制病毒在肺内增殖的能力。取肺组织检测炎性细胞因子和趋化因子的表达。通过ELISA定量检测肺组织中IL-1β(图6D)、IL-6(图6E)、IFN-γ(图6F)、TGF-β(图6G)的表达水平，结果显示，这些细胞因子和趋化因子的表达水平在GANPs作用下明显降低。提示GANPs可减轻病毒感染小鼠的肺部炎症损伤。
本领域技术人员应该理解的是，本发明的使用不受限于上述特定应用。就本文描述或描绘的特定元素和/或特征而言，本发明也不局限于其优选实施方案。应当理解的是，本发明不限于所公开的实施方案例或各个实施方案，且在不脱离由以下权利要求所阐述和限定的本发明的范围的情况下能够进行许多重新布置、修改和替换。

Claims (9)

1.一种甘草酸碳量子点的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将甘草酸溶液逐滴加入饱和碳酸氢钠溶液中得到混合溶液，并调整pH值9.5～10.5；
(2)将混合溶液至于高压釜中150～200℃反应一段时间；
(3)冷却、去除沉淀，透析、冷冻干燥即得甘草酸碳量子点。
2.根据权利要求1所述的甘草酸纳米颗粒的合成方法，其特征在于，步骤(3)透析使用截止分子量为14kDa的透析袋进行。
3.根据权利要求1所述的甘草酸纳米颗粒的合成方法，其特征在于，步骤(1)中甘草酸与饱和碳酸氢钠的用量比为1：3～1：5。
4.权利要求1至3任一项所述合成方法得到的甘草酸纳米颗粒。
5.权利要求4所述甘草酸纳米颗粒在制备新型冠状病毒体内外抗病毒及抗炎药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在体外，所述甘草酸纳米颗粒具有以下至少一种功能：
(1)降低体外细胞内/细胞上清液中病毒滴度；
(2)降低细胞内病毒基因mRNA的表达水平；
(3)抑制病毒增殖；
(4)直接灭活病毒；
(5)抑制由于SARS-CoV-2引起的细胞炎性因子的表达水平。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在体内，所述甘草酸纳米颗粒具有以下至少一种功能：
(1)抑制病毒在肺内的增殖能力；
(2)缓解病毒在体内的感染；
(3)减轻病毒感染小鼠的肺部炎症损伤。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述炎性因子包括IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述细胞包括PBMC和THP-1。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023063811A1 (es) * 2021-10-14 2023-04-20 Dragustinovis Ruiz Maria Esther Formulación para el manejo y tratamiento antiviral, inmunomodulador y desinflamatorio de la infección por el virus del sars-cov2 (covid-19) y sus variantes, formulada a partir de la sal del ácido glicirricinico y sus derivados de su estructura química, así como agentes antitusivos y antihistamínicos en jarabe

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019046664A1 (en) * 2017-08-30 2019-03-07 Applied Biological Laboratories, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR PROTECTING AGENTS FROM PATHOGENS AND IRRITANTS
CN110507665A (zh) * 2019-09-17 2019-11-29 中国医学科学院医学实验动物研究所 甘草酸在制备抗呼吸道病毒感染的药物中的应用
CN111758963A (zh) * 2020-05-14 2020-10-13 宁波荷仁健康科技有限公司 甘草次酸防治干细胞衰老的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019046664A1 (en) * 2017-08-30 2019-03-07 Applied Biological Laboratories, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR PROTECTING AGENTS FROM PATHOGENS AND IRRITANTS
CN110507665A (zh) * 2019-09-17 2019-11-29 中国医学科学院医学实验动物研究所 甘草酸在制备抗呼吸道病毒感染的药物中的应用
CN111758963A (zh) * 2020-05-14 2020-10-13 宁波荷仁健康科技有限公司 甘草次酸防治干细胞衰老的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SEIDU A RICHARD: "Exploring the Pivotal Immunomodulatory and Anti-Inflammatory Potentials of Glycyrrhizic and Glycyrrhetinic Acids", 《MEDIATORS INFLAMM》 *
SHAOPENG YU等: "Glycyrrhizic acid exerts inhibitory activity against the spike protein of SARS-CoV-2", 《PHYTOMEDICINE》 *
TING TONG等: "Glycyrrhizic-Acid-Based Carbon Dots with High Antiviral Activity by Multisite Inhibition Mechanisms", 《SMALL》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023063811A1 (es) * 2021-10-14 2023-04-20 Dragustinovis Ruiz Maria Esther Formulación para el manejo y tratamiento antiviral, inmunomodulador y desinflamatorio de la infección por el virus del sars-cov2 (covid-19) y sus variantes, formulada a partir de la sal del ácido glicirricinico y sus derivados de su estructura química, así como agentes antitusivos y antihistamínicos en jarabe

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