CN112961932A - 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 - Google Patents
用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112961932A CN112961932A CN202110371488.9A CN202110371488A CN112961932A CN 112961932 A CN112961932 A CN 112961932A CN 202110371488 A CN202110371488 A CN 202110371488A CN 112961932 A CN112961932 A CN 112961932A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- seq
- nucleotide sequence
- primer set
- ginger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 title claims abstract description 61
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 title claims abstract description 61
- 241000234314 Zingiber Species 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 57
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 57
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 12
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 12
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 102100023706 Steroid receptor RNA activator 1 Human genes 0.000 abstract description 14
- 101710187693 Steroid receptor RNA activator 1 Proteins 0.000 abstract description 14
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 abstract description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(I) nitrate Inorganic materials [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 229910000906 Bronze Inorganic materials 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000010974 bronze Substances 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- KUNSUQLRTQLHQQ-UHFFFAOYSA-N copper tin Chemical compound [Cu].[Sn] KUNSUQLRTQLHQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001841 zingiber officinale Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术领域，公开了用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合，包括如下引物组中的任意一组或多组：引物组SJ1、引物组SJ2、引物组SJ3、引物组SJ4、引物组SJ5、引物组SJ6、引物组SJ7、引物组SJ8、引物组SJ9、引物组SJ10、引物组SJ11、引物组SJ12、引物组SJ13；还公开了鉴定方法和应用。本发明应用SRAP分子标记技术以更灵敏和高效的鉴定手段对生姜品种进行准确鉴定，与常规的形态检验相比，本发明的引物组和鉴定平台的检测结果更稳定、可靠，且具有快速简单、直观实用等特点，可应用于生姜品种纯度的快速鉴定、亲缘关系分析、品种知识产权保护和分子标记辅助育种等方面。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用。
背景技术
生姜是世界上广泛应用的调味蔬菜和中药材，也是我国出口创汇的主要蔬菜之一。我国是世界上生姜生产总量最多的国家，生姜在我国已有两千多年的栽培历史，经过长期的自然和人工选择，使得我国各生姜产区均有传统地方品种分布。目前为了保护生姜品种知识产权，或定向改变生姜的某一性状以满足当前生姜加工与消费对产品多样化的需求，或对生姜种质资源进行合理利用，均需要对生姜品种进行科学的鉴定和评价。由于生姜在植株与根状茎形态上直接鉴别的难度较大，因而需要依赖分子标记中的SRAP标记法对相关生姜品种进行指纹图谱的比较，以快速鉴别出品种。因此，发明人利用SRAP分子标记对生姜品种进行了快速鉴定的研究，研发了用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用。
发明内容
基于以上问题，本发明提供用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用，本发明可有效鉴别筛选相应的生姜品种，既可应用相应品种的知识产权保护领域，还可用于相应品种的种质资源改进领域。
为解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：
用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合，包括如下引物组中的任意一组或多组：引物组SJ1，引物组SJ2，引物组SJ3，引物组SJ4，引物组SJ5，引物组SJ6，引物组SJ7，引物组SJ8，引物组SJ9，引物组SJ10，引物组SJ11，引物组SJ12，引物组SJ13；
所述SJ1包括正向引物me2和反向引物em12；
所述SJ2包括正向引物me2和反向引物em17；
所述SJ3包括正向引物me4和反向引物em22；
所述SJ4包括正向引物me10和反向引物em9；
所述SJ5包括正向引物me10和反向引物em12；
所述SJ6包括正向引物me10和反向引物em23；
所述SJ7包括正向引物me20和反向引物em9；
所述SJ8包括正向引物me25和反向引物em15；
所述SJ9包括正向引物me28和反向引物em1；
所述SJ10包括正向引物me28和反向引物em13；
所述SJ11包括正向引物me30和反向引物em12；
所述SJ12包括正向引物me31和反向引物em21；
所述SJ13包括正向引物me34和反向引物em18；
所述me2的核苷酸序列见SEQ ID NO.1，me4的核苷酸序列见SEQ ID NO.2，me10的核苷酸序列见SEQ ID NO.3，me20的核苷酸序列见SEQ ID NO.4，me25的核苷酸序列见SEQID NO.5，me28的核苷酸序列见SEQ ID NO.6，me30的核苷酸序列见SEQ ID NO.7，me31的核苷酸序列见SEQ ID NO.8，me34的核苷酸序列见SEQ ID NO.9，em1的核苷酸序列见SEQ IDNO.10，em9的核苷酸序列见SEQ ID NO.11，em12的核苷酸序列见SEQ ID NO.12，em13的核苷酸序列见SEQ ID NO.13，em15的核苷酸序列见SEQ ID NO.14，em17的核苷酸序列见SEQ IDNO.15，em18的核苷酸序列见SEQ ID NO.16，em21的核苷酸序列见SEQ ID NO.17，em22的核苷酸序列见SEQ ID NO.18，em23的核苷酸序列见SEQ ID NO.19。
为解决以上技术问题，本发明还提供了利用引物组进行生姜品种快速PCR鉴定的方法，包括提取生姜DNA、以生姜DNA为模板进行PCR扩增、扩增产物采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；所述PCR反应体系为10μl，包括：模板DNA 1.5μl，dNTPs 0.2μl，含Mg2+10×Taq Buffer 1μl，Taq酶0.2μl，me引物0.5μl，em引物0.5μl，ddH2O 6.1μl；所述PCR反应程序：94℃预变性6min；94℃30s，52-44.8℃30s，72℃30s，进行18个循环，退火温度每循环下降0.4℃；94℃30s，47℃30s，72℃30s，进行35个循环；72℃延伸7min，12℃保存。
为解决以上技术问题，本发明还提供了引物组在制备用于快速鉴定生姜品种或分析生姜品种的亲缘关系的试剂盒中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明应用SRAP分子标记技术以更灵敏和高效的鉴定手段对生姜品种进行准确鉴定，与常规的形态检验相比，本发明的引物组和鉴定平台的检测结果更稳定、可靠，且具有快速简单、直观实用等特点，可应用于生姜品种纯度的快速鉴定、亲缘关系分析、品种知识产权保护和分子标记辅助育种等方面。
附图说明
图1为本发明的实施例的SRAP引物me31-em21在96个生姜品种中的48个品种的扩增图谱；
图2为本发明的实施例的SRAP引物me31-em21在96个生姜品种中的48个品种的扩增图谱；
图3为本发明的实施例的UPGMA树状图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例：
本实施例以96个生姜品种的嫩芽为材料，每个品种随机选取10块根状茎进行催芽，每块根状茎选取1个壮芽，将10个壮芽的嫩芽部分等重量混合，采用改进的CTAB法提取每个品种的基因组DNA，在提取液中加入2％的β-巯基乙醇以除去酚类物质。在微量核酸浓度测定仪上测定提取的DNA的纯度及浓度，然后通过用1％的琼脂糖凝胶95V电泳30min，检测所提DNA的质量与完整性。之后，取各品种少量原始DNA溶液稀释至50ng/μL，于-20℃保存备用。本实施例的96个生姜品种及来源地具体见下表：
96个生姜品种及来源地
从上表可看出，96个生姜品种中75份来自贵州省的8个市、自治州，其余21份分别来自云南、湖北、山东、四川等11个省，将其按地区划分为13个群体，利用软件NTSYS-pc 2.1对13个生姜群体进行聚类分析，得到相应的UPGMA树状图，见附图3，在遗传相似系数为0.93时将供试生姜群体分为四类：第Ⅰ类包含：黔西南州、遵义市、黔南州、黔东南州、铜仁市、其它省、山东省、安顺市、六盘水市、云南省10个生姜群体；第Ⅱ类为湖北省生姜群体；第Ⅲ类为四川省生姜群体；第Ⅳ类为贵阳市生姜群体。由此可知，生姜种质资源多样性主要由品种差异决定，受地域影响较小。
在后续研究中，将上述保存的DNA溶液解冻，进行SRAP引物PCR扩增，PCR反应体系为10μl，包括：
PCR反应程序：94℃预变性6min；94℃30s，52-44.8℃30s，72℃30s，进行18个循环，退火温度每循环下降0.4℃；94℃30s，47℃30s，72℃30s，进行35个循环；72℃延伸7min，12℃保存。
上述扩增所选用的SRAP引物见下表，上述所用引物包括多个组合，均是由下表所示的正向引物和反向引物两两组合而成：
SRAP引物序列
对上述PCR扩增产物采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，每孔上样4μL，电泳缓冲液为0.5×TBE，恒定电压300V，电泳1h，直至指示带距胶底部5cm，停止电泳；用0.1％AgNO3染色，在NaOH溶液中显影，拍照。统计每对SRAP引物扩增产物的凝胶电泳图上有差异且易识别的多态性条带，在相同迁移率的位置上，有扩增谱带就标记为“1”，无扩增谱带就标记为“0”，分别绘制每对引物对96个供试品种的DNA指纹图谱。
最终，本实施例筛选出13对差异性核心SRAP引物组，分别是SJ1(me2-em12)、SJ2(me2-em17)、SJ3(me4-em22)、SJ4(me10-em9)、SJ5(me10-em12)、SJ6(me10-em23)、SJ7(me20-em9)、SJ8(me25-em15)、SJ9(me28-em1)、SJ10(me28-em13)、SJ11(me30-em12)、SJ12(me31-em21)、SJ13(me34-em18)，具体见下表：
13对SRAP引物组合及序列
所述me2的核苷酸序列见SEQ ID NO.1，me4的核苷酸序列见SEQ ID NO.2，me10的核苷酸序列见SEQ ID NO.3，me20的核苷酸序列见SEQ ID NO.4，me25的核苷酸序列见SEQID NO.5，me28的核苷酸序列见SEQ ID NO.6，me30的核苷酸序列见SEQ ID NO.7，me31的核苷酸序列见SEQ ID NO.8，me34的核苷酸序列见SEQ ID NO.9，em1的核苷酸序列见SEQ IDNO.10，em9的核苷酸序列见SEQ ID NO.11，em12的核苷酸序列见SEQ ID NO.12，em13的核苷酸序列见SEQ ID NO.13，em15的核苷酸序列见SEQ ID NO.14，em17的核苷酸序列见SEQ IDNO.15，em18的核苷酸序列见SEQ ID NO.16，em21的核苷酸序列见SEQ ID NO.17，em22的核苷酸序列见SEQ ID NO.18，em23的核苷酸序列见SEQ ID NO.19。
上述13对SRAP引物组对96个生姜品种的扩増条带多态性见下表：
表13对SRAP引物组对96个生姜品种的扩増条带多态性
上表显示，本实施例的13对引物组共扩增出108条带，其中多态性条带为96条，多态性比例范围为75.00％-100.00％，多态性比例的大小决定了引物的扩增效果，比例越高，扩增效果越好。结合附图1和附图2，本实施例公布的13对引物组序列中，效果最好的为me31-em21，可以扩增出10条多态性条带，且多态性比例达到100.00％。不同引物所扩增出的条带不同，相同引物、不同地区的生姜品种扩增的条带也不相同，表明96个样品间丰富的多态性和复杂的遗传背景，为分析生姜品种的亲缘关系提供技术支撑。
见下表，由等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei’s基因多样度(H)、Shannon's信息指数这几个参数可以反映多样性。Ne越大，说明等位基因越重要，等位基因作用越大；I和H值越大，说明该样品遗传多样性越高。整体样品物种水平可知，生姜的Na值为1.7228，Ne值为1.3602，H值为0.2243，I值为0.3463。不同地区生姜居群总基因多样度(Ht)为0.2747，居群内基因多样性(Hs)为0.2244，居群间遗传分化系数(Gst)为0.1832。其中Hs>Gst，说明居群内遗传分化度比居群间遗传分化度更高，基因流(Nm)为2.2289。表明本实施例的引物组具有较好地鉴别出生姜品种之间亲缘关系的优势。
本实施例研发的13对引物组可应用于制备快速鉴定生姜品种或分析生姜品种之间亲缘关系的试剂盒中，鉴定时所选用的引物组可以是本实施例的13对引物组中的任意一组或是多组的组合或是全部，试剂盒可以包含本实施例所述的PCR反应体系，也可由其他体系取代。
如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书及附图内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 贵州省香料研究所
<120> 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用
<130> 2021
<160> 19
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 17
<212> DNA
<213> me2
<400> 1
tgagtccaaa ccggagc 17
<210> 2
<211> 17
<212> DNA
<213> me4
<400> 2
tgagtccaaa ccggacc 17
<210> 3
<211> 17
<212> DNA
<213> me10
<400> 3
tgagtccaaa ccggtaa 17
<210> 4
<211> 17
<212> DNA
<213> me20
<400> 4
gtacatagaa ccggagt 17
<210> 5
<211> 17
<212> DNA
<213> me25
<400> 5
atcagtcgga ccggatt 17
<210> 6
<211> 17
<212> DNA
<213> me28
<400> 6
tgagtccaaa ccggaaa 17
<210> 7
<211> 17
<212> DNA
<213> me30
<400> 7
taggtccaaa ccggaag 17
<210> 8
<211> 17
<212> DNA
<213> me31
<400> 8
taggtccaaa ccggaat 17
<210> 9
<211> 17
<212> DNA
<213> me34
<400> 9
tgagtccaaa ccggact 17
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> em1
<400> 10
gactgcgtac gaattaat 18
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> em9
<400> 11
gactgcgtac gaattctg 18
<210> 12
<211> 18
<212> DNA
<213> em12
<400> 12
gactgcgtac gaattaaa 18
<210> 13
<211> 18
<212> DNA
<213> em13
<400> 13
gactgcgtac gaattaag 18
<210> 14
<211> 18
<212> DNA
<213> em15
<400> 14
gactgcgtac gaattacc 18
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> em17
<400> 15
gactgcgtac gaattact 18
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> em18
<400> 16
gactgcgtac gaattaga 18
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> em21
<400> 17
gactgcgtac gaattagt 18
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> em22
<400> 18
gactgcgtac gaattata 18
<210> 19
<211> 18
<212> DNA
<213> em23
<400> 19
gactgcgtac gaattatc 18
Claims (3)
1.用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合，其特征在于，包括如下引物组中的任意一组或多组：引物组SJ1，引物组SJ2，引物组SJ3，引物组SJ4，引物组SJ5，引物组SJ6，引物组SJ7，引物组SJ8，引物组SJ9，引物组SJ10，引物组SJ11，引物组SJ12，引物组SJ13；
所述SJ1包括正向引物me2和反向引物em12；
所述SJ2包括正向引物me2和反向引物em17；
所述SJ3包括正向引物me4和反向引物em22；
所述SJ4包括正向引物me10和反向引物em9；
所述SJ5包括正向引物me10和反向引物em12；
所述SJ6包括正向引物me10和反向引物em23；
所述SJ7包括正向引物me20和反向引物em9；
所述SJ8包括正向引物me25和反向引物em15；
所述SJ9包括正向引物me28和反向引物em1；
所述SJ10包括正向引物me28和反向引物em13；
所述SJ11包括正向引物me30和反向引物em12；
所述SJ12包括正向引物me31和反向引物em21；
所述SJ13包括正向引物me34和反向引物em18；
所述me2的核苷酸序列见SEQ ID NO.1，me4的核苷酸序列见SEQ ID NO.2，me10的核苷酸序列见SEQ ID NO.3，me20的核苷酸序列见SEQ ID NO.4，me25的核苷酸序列见SEQ IDNO.5，me28的核苷酸序列见SEQ ID NO.6，me30的核苷酸序列见SEQ ID NO.7，me31的核苷酸序列见SEQ ID NO.8，me34的核苷酸序列见SEQ ID NO.9，em1的核苷酸序列见SEQ IDNO.10，em9的核苷酸序列见SEQ ID NO.11，em12的核苷酸序列见SEQ ID NO.12，em13的核苷酸序列见SEQ ID NO.13，em15的核苷酸序列见SEQ ID NO.14，em17的核苷酸序列见SEQ IDNO.15，em18的核苷酸序列见SEQ ID NO.16，em21的核苷酸序列见SEQ ID NO.17，em22的核苷酸序列见SEQ ID NO.18，em23的核苷酸序列见SEQ ID NO.19。
2.利用权利要求1所述的引物组进行生姜品种快速PCR鉴定的方法，其特征在于，包括提取生姜DNA、以生姜DNA为模板进行PCR扩增、扩增产物采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；所述PCR反应体系为10μl，包括：模板DNA 1.5μl，dNTPs 0.2μl，含Mg2+10×TaqBuffer 1μl，Taq酶0.2μl，me引物0.5μl，em引物0.5μl，ddH2O 6.1μl；所述PCR反应程序：94℃预变性6min；94℃30s，52-44.8℃30s，72℃30s，进行18个循环，退火温度每循环下降0.4℃；94℃30s，47℃30s，72℃30s，进行35个循环；72℃延伸7min，12℃保存。
3.权利要求1所述的引物组在制备用于快速鉴定生姜品种或分析生姜品种的亲缘关系的试剂盒中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110371488.9A CN112961932A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110371488.9A CN112961932A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112961932A true CN112961932A (zh) | 2021-06-15 |
Family
ID=76279968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110371488.9A Pending CN112961932A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112961932A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100842446B1 (ko) * | 2007-04-11 | 2008-07-01 | 대한민국 | 생강에서 유래된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도 |
-
2021
- 2021-04-07 CN CN202110371488.9A patent/CN112961932A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100842446B1 (ko) * | 2007-04-11 | 2008-07-01 | 대한민국 | 생강에서 유래된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| LI A等: "Development of molecular linkage maps in sweet potato (Ipomoea batatas L.) using sequence‐related amplified polymorphism markers", 《PLANT BREEDING》 * |
| MAYTHESYA OKTAVIONI等: "Sequence-related amplified polymorphism (SRAP) marker system for identification of Indonesian ginger (Zingiber sp.) genetic diversity", 《BIOSCIENCE RESEARC》 * |
| 李秀等: "生姜种质遗传多样性和亲缘关系的 SRAP 分析", 《中国农业科学》 * |
| 王向东等: "ISSR标记在生姜品种遗传多样性中的应用", 《中国农业科技导报》 * |
| 蔡长春等: "白肋烟分子标记遗传图谱的构建及部分性状的遗传剖析", 《作物学报》 * |
| 谭玉莲等: "不同海拔高度的野古草的遗传多样性分析", 《西南师范大学学报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107164476B (zh) | 一种利用issr反应体系分析草果遗传多样性的方法 | |
| CN112280881B (zh) | 用于青花菜种质资源和品种鉴定的snp标记组合及应用 | |
| CN113621731A (zh) | 一种贵州蓝莓蜜的产地溯源和鉴别方法 | |
| CN114875169A (zh) | 基于黄连全基因组开发的ssr分子标记引物组及其应用 | |
| CN105713981A (zh) | 利用ssr分子标记进行仁用杏种质鉴定的方法 | |
| CN109652411B (zh) | 一种荧光ssr引物组合及其在构建白蜡新品种分子指纹图谱中的应用 | |
| CN110878376B (zh) | 用于鉴定霍山石斛的ssr分子标记引物及其应用 | |
| CN108823327B (zh) | 樟树全基因组ssr分子标记及其制备方法和应用 | |
| CN110592253A (zh) | 鉴定云南茶树品种的dna组合条形码及其鉴定方法 | |
| CN112961932A (zh) | 用于快速鉴定生姜品种纯度的引物组组合、鉴定方法及应用 | |
| CN108588244A (zh) | 一种用于鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的分子标记及其引物与应用 | |
| CN109022610B (zh) | 一种金线莲的分子特异性标记引物及其鉴别方法 | |
| CN112481406A (zh) | 一种基于ssr标记的木纳格葡萄种质资源亲缘鉴定方法 | |
| CN108330164B (zh) | 薄壳山核桃品种Moore的特征序列、引物及鉴定方法 | |
| CN113684294A (zh) | 一种鉴别四川地区金荞麦的ssr分子标记引物及其方法 | |
| CN115873986B (zh) | 一种est-ssr分子标记引物组及其应用 | |
| CN112111591B (zh) | 白皮松est-ssr引物及其在群体遗传多样性分析中的应用 | |
| CN113549616B (zh) | 鉴定文心兰品种的caps分子标记、筛选方法与应用 | |
| CN114807430B (zh) | 鉴定白肉灵芝云白灵芝2号品种的特异性分子标记及方法 | |
| CN113699263B (zh) | 槭属园艺品种的ssr引物序列对、分子指纹图谱的构建方法、鉴别方法及应用 | |
| CN114703314A (zh) | 地黄品种遗传关系、种类鉴别用分子标记ssr引物、试剂盒、应用 | |
| CN106967791A (zh) | 瘿椒树亲缘关系鉴定方法 | |
| CN114657278A (zh) | 鉴别‘大玉兰’滇山茶品种的分子特异性标记引物及鉴定方法 | |
| CN114574619A (zh) | 鉴别‘洋红松子壳’滇山茶品种的分子特异性标记引物及鉴定方法 | |
| CN116904633A (zh) | 一种英山居群苍术鉴定的ssr引物及鉴定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210615 |