CN112961204A - 龙胆苦苷巴布剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出龙胆苦苷巴布剂及其制备方法，具体涉及医药技术领域。该方法通过甲醇溶解，乙醇重结晶秦艽正丁醇萃取浸膏，从而得到纯度>98％的龙胆苦苷晶体。再以此为原料制备龙胆苦苷巴布剂。龙胆苦苷巴布剂按原料重量份组成为龙胆苦苷、骨架材料、填充剂、增粘剂、保湿剂、交联剂、交联调节剂、透皮促进剂。该方法操作简单，成本较低，从秦艽中提取的龙胆苦苷纯度高达98％以上，且制备得到的龙胆苦苷巴布剂药效效果好，其药动实验结果证明能够实现缓控释给药。

Description

龙胆苦苷巴布剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及龙胆苦苷巴布剂及其制备方法。
背景技术
秦艽为龙胆科龙胆属秦艽组多年生草本植物，中国药典2020年版规定四种秦艽(小秦艽、大叶秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽)干燥根可入药。秦艽的干燥根具有祛风湿、清湿热、止痹痛的功效，可用于风湿痹痛，筋脉拘挛，骨节酸痛，日晡潮热，小儿疳积发热等症状。秦艽在中医学中是治疗风湿麻痹，关节病必不可少的药材。
现代药理学研究表明，龙胆苦苷是秦艽中的主要活性成分。从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法主要包括半制备高速逆流色谱法，大孔树脂吸附法等，但这些方法步骤复杂，且提取所得龙胆苦苷的纯度不够高。
目前，有关龙胆苦苷的药物制剂包括片剂、胶囊剂、注射剂、橡胶膏剂等，但仍存在诸多不足。如注射剂使用不便；片剂、胶囊剂的口服给药具有较强的首过效应，且病人往往因为外科手术或肠胃道反应造成服药困难，不能够有效维持稳定的血药水平，且龙胆苦苷的药动学不好，在体内容易很快就代谢排出；橡胶膏剥离伴随着拉痛感且容易残留，患者适应性很差。
巴布剂作为一种新型经皮给药贴剂，其主要将药物与适宜的亲水性高分子聚合物混合，然后涂布于背衬材料所得。具有载药量大，对水溶性组分和低离子强度成分的承载能力较强，生产中不使用有机溶剂，无污染，且较高的含水量能够加强皮肤中的水合作用，促进药物的经皮吸收等优点。目前，由于巴布剂生产工艺技术尚未成熟，因此，关于巴布剂的新产品开发及应用方面尚未形成规模，尚未有人公开使用龙胆苦苷制备巴布剂。
发明内容
本发明提供一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，以及以此龙胆苦苷为主药的龙胆苦苷巴布剂及其制备方法，该提取纯化龙胆苦苷的方法简单快速有效，提取所得龙胆苦苷纯度高达98％。用其制备得到的巴布剂基质具有持久的粘性，保湿、透气，载药量大，具有良好的抗炎效果，无皮肤不良反应，安全性好。
本发明提出一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，包括如下步骤：
a)制备秦艽正丁醇浸膏；
b)将上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，再用乙醇重结晶纯化。
进一步地，所述步骤b)具体为：上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，加入乙醇，搅拌，静止析出沉淀，过滤，得龙胆苦苷结晶。
进一步地，甲醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的1～3倍；
乙醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的1～3倍；
静止的时间为2～6小时。
进一步地，所述步骤b)还包括，对过滤后所得滤液进行滤液重结晶。
进一步地，所述步骤a)包括：
a1)取秦艽的干燥根茎，粉碎，用乙醇加热回流提取，合并浓缩，得浸膏；
a2)再用正丁醇萃取，合并萃取液，减压浓缩，得秦艽正丁醇浸膏。
本发明还提出一种龙胆苦苷巴布剂，包括上述任一所述的方法提取纯化得到的龙胆苦苷。
进一步地，所述龙胆苦苷巴布剂，由包括如下重量份的原料制备而得：
龙胆苦苷1～5份、骨架材料1～6份、填充剂1～3份、增粘剂0.2～1份、保湿剂20～40份、交联剂0.1～0.6份、交联调节剂0.01～0.06份、透皮促进剂 1～3份，其余为超纯水，所有原料份数总计100份。
进一步地，所述骨架材料包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸、明胶或卡波姆中至少一种。
进一步地，所述填充剂包括微粉硅胶、高岭土、氧化锌中至少一种；
所述增粘剂包括瓜尔胶、卡拉胶、聚丙烯酸、明胶中至少一种；
所述保湿剂包括甘油、丙二醇、聚乙二醇中至少一种；
所述交联剂包括甘羟铝、甘氨酸钠、甘氨酸铝中至少一种；
所述交联调节剂包括酒石酸、依地酸钠、柠檬酸中至少一种；
所述透皮促进剂包括N-甲基吡咯烷酮、月桂氮酮、冰片、油酸、薄荷醇，氮酮和丙二醇中至少一种。
本发明还提出上述任一所述龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
1)将交联剂以及透皮促进剂依次加入保湿剂中，混合，加入骨架材料，填充剂，分散搅拌均匀，得A相；
2)将交联调节剂溶解于适量水后得到B相；增粘剂逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再加入龙胆苦苷，得C相；
3)将B相、C相加入A相，混合，40～50℃水浴条件下，搅拌，趁热涂布于无纺布背衬材料上，40～60℃恒温熟化2～4h，取出冷却至20～35℃后，盖膜，放置8～12h，切割，密封，得龙胆苦苷巴布剂。
本发明具有以下优势：
本发明提出的从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，首先，制备秦艽正丁醇浸膏，然后用甲醇溶解，再用乙醇重结晶纯化，即可有效提取龙胆苦苷。该方法操作简单，成本较低，从秦艽中提取的龙胆苦苷纯度高达98％以上。
本发明提出的龙胆苦苷巴布剂，有明显抗炎作用，可显著提高龙胆苦苷临床用药的安全性和生物利用度，并增加了龙胆苦苷在炎性关节局部的药物浓度，对药物具有缓释、控释作用。同时，附着力强、渗透性好，剥离时无疼痛，对皮肤生物相容性和亲和性好。
附图说明
构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1试验例4龙胆苦苷口服给药和龙胆苦苷巴布剂给药后大鼠体内的药时曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
本发明一实施例提出一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，包括如下步骤：
a)制备秦艽正丁醇浸膏；
b)将上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，再用乙醇重结晶纯化。
相比于现有技术中采用色谱柱或者大孔树脂柱等柱分离技术进行提取的方法，本发明实施例提出的从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，首先，制备秦艽正丁醇浸膏，然后用甲醇溶解，再用乙醇重结晶纯化，即可有效提取龙胆苦苷。该方法操作简单，成本较低，从秦艽中提取的龙胆苦苷纯度高达98％以上。
本发明一实施例中，所述步骤b)具体为：上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，加入乙醇，搅拌，静止析出沉淀，过滤，得龙胆苦苷结晶。
本发明一实施例中，甲醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的1～3倍。
乙醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏的1～3倍；
本发明一实施例中，静止的时间为2～6小时。具体可以为2h、3h、4h、5h、 6h等。
本发明一实施例中，步骤b)还包括，对过滤后所得滤液进行滤液重结晶。
具体为：回收过滤后所得滤液，加入乙醇，搅拌均匀，静止析出沉淀，过滤，得白色粉末，即龙胆苦苷结晶。
本发明一实施例中，滤液重结晶的次数为3～5次。
滤液重结晶时，乙醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的2倍。
本发明一实施例中，所述步骤a)包括：
a1)取秦艽的干燥根茎，粉碎，用乙醇加热回流提取，合并浓缩，得浸膏；
a2)再用正丁醇萃取，合并萃取液，减压浓缩，得秦艽正丁醇浸膏。
本发明一实施例中，所述步骤a1)中，乙醇的体积分数为50％～80％；乙醇的添加量为秦艽质量的5～15倍；
优选的，所述步骤a1)中，回流提取的次数为2～4次，每次回流提取的时间为2～6小时。
本发明一实施例中，所述步骤a2)中，正丁醇与步骤a1)所得浸膏的体积比为 1:1；正丁醇萃取的次数为2～5次。
需要指出：浸膏通常是指用有机溶剂浸提不含有渗出物的香料植物组织中所得的香料制品，成品中不含原用的溶剂和水分。
本发明一实施例还提出一种龙胆苦苷巴布剂，包括利用上述任一方法制备得到的龙胆苦苷。本发明实施例所制备得到的龙胆苦苷巴布剂具有持久的粘性，保湿、透气，载药量大，有明显的抗炎作用，并且，使用方便，皮肤亲和性良好。
本发明一实施例中，所述龙胆苦苷巴布剂，由包括如下重量份的原料制备而得：龙胆苦苷1～5份、骨架材料1～6份、填充剂1～3份、增粘剂0.2～1份、保湿剂20～40份、交联剂0.1～0.6份、交联调节剂0.01～0.06份、透皮促进剂 1～3份，其余为超纯水，所有原料份数总计100份。
本发明实施例中，巴布剂基质由巴布剂骨架材料、填充剂、增粘剂、保湿剂、交联剂、交联调节剂、透皮促进剂相互组合而成。
优选的，所述骨架材料包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸、明胶或卡波姆中至少一种。更优选的，所述骨架材料为聚丙烯酸钠。
优选的，所述填充剂包括微粉硅胶、高岭土、氧化锌中至少一种。
优选的，所述增粘剂包括瓜尔胶、卡拉胶、聚丙烯酸、明胶中至少一种。
优选的，所述保湿剂包括甘油、丙二醇、聚乙二醇中至少一种。
优选的，所述交联剂包括甘氨酸钠、甘氨酸铝中至少一种。
优选的，所述交联调节剂包括酒石酸、依地酸钠、柠檬酸中至少一种。
优选的，所述透皮促进剂包括N-甲基吡咯烷酮、月桂氮酮、冰片、油酸、薄荷醇，氮酮和丙二醇中至少一种。透皮促进剂可以为多元促渗剂、单一促渗剂及二元促渗剂等。优选的，所述透皮促进剂为薄荷醇和丙二醇的混合、N-甲基吡咯烷酮和月桂氮酮的混合、薄荷醇和氮酮的混合等。更优选的，所述透皮促进剂为薄荷醇和丙二醇的混合。
本发明一实施例还提出上述任一龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
1)将交联剂以及透皮促进剂依次加入保湿剂中，混合，加入骨架材料，填充剂，分散搅拌均匀，得A相；
2)将交联调节剂溶解于适量水后得到B相；增粘剂逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再加入龙胆苦苷，得C相；
3)将B相、C相加入A相，混合，40～50℃水浴条件下，搅拌，趁热涂布于无纺布背衬材料上，40～60℃恒温熟化2～4h，取出冷却至20～35℃后，盖膜，放置8～12h，切割，密封，得龙胆苦苷巴布剂。
本发明实施例提出的龙胆苦苷巴布剂的制备方法，操作简单、载药量高、质量稳定、成本低，产业化可行性强。
优选的，所述龙胆苦苷巴布剂的制备方法包括如下步骤：
1)将甘氨酸钠以及薄荷醇及丙二醇依次缓慢加入甘油中，充分混合均匀，再多次少量加入聚丙烯酸钠，继续搅拌，充分混合均匀，再加入微粉硅胶充分分散搅拌均匀，得到A相；
2)将柠檬酸溶解于适量水后得到B相，瓜尔胶逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再加入龙胆苦苷得C相；
3)将C相加入A相，充分混合均匀，再将B相倒入A相中，40～50℃水浴条件下，充分搅拌均匀，趁热均匀涂布于无纺布背衬材料上，40～60℃恒温干燥箱熟化2～4h，取出冷却至室温后盖上聚乙烯薄膜，室温放置12h，切割成规定大小的巴布剂，密封包装，即得龙胆苦苷巴布剂。
下面将结合实施例详细阐述本发明。
实施例1-1一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，包括如下步骤：
称取足量秦艽药材(干燥根茎)，粗碎，用65％的乙醇加热回流提取三次，每次2小时，过滤，合并滤液，滤液回收乙醇浓缩成浸膏。加入等体积的正丁醇萃取2次，合并萃取液，减压浓缩，成秦艽正丁醇浸膏。
将秦艽正丁醇浸膏用足量甲醇悬浮溶解均匀后，再加入2倍体积乙醇，搅拌均匀，静止4小时，有沉淀析出，过滤后回收滤液，同上方法，用乙醇重结晶3 次提取正丁醇萃取物中的龙胆苦苷。
实施例1-2一种龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将0.3份甘氨酸钠以及1.5份N-甲基吡咯烷酮缓慢加入30份甘油中，充分混合均匀，再多次少量加入4.5份聚丙烯酸钠，继续搅拌，充分混合均匀，再加入1.2份微粉硅胶充分分散搅拌均匀，得到A相。
(2)将0.03份柠檬酸溶解于适量水后得到B相，0.5份瓜尔胶逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再加入2份实施例1-1所得龙胆苦苷充分混合得C相。
(3)将C相加入A相，充分混合均匀，再将B相倒入A相中，40℃水浴条件下，充分搅拌均匀，趁热使用均匀涂布于无纺布背衬材料上，50℃恒温干燥箱熟化4h，取出冷却至室温(20～35℃)后盖上聚乙烯薄膜，室温(20～35℃)放置过夜，切割成规定大小的巴布剂，密封包装，即得含有1％龙胆苦苷巴布剂。
实施例2-1一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，包括如下步骤：
称取足量秦艽药材(干燥根茎)，粗碎，用75％的乙醇加热回流提取两次，每次3小时，过滤，合并滤液，滤液回收乙醇浓缩成浸膏。加入等体积的正丁醇萃取3次，合并萃取液，减压浓缩成秦艽正丁醇浸膏。将秦艽正丁醇浸膏用足量甲醇悬浮溶解均匀后，再加入3倍体积乙醇，搅拌均匀，静止4小时，有沉淀析出，过滤后回收滤液，同上方法，用乙醇重结晶4次提取正丁醇萃取物中的龙胆苦苷。
实施例2-2一种龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将0.4份甘氨酸钠以及3份薄荷醇缓慢加入35份甘油中，充分混合均匀，再多次少量加入5份聚丙烯酸钠，继续搅拌，充分混合均匀，再加入1.6份微粉硅胶充分分散搅拌均匀，得到A相。
(2)将0.04份柠檬酸溶解于适量水后得到B相，0.6份瓜尔胶逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再依次加入4份实施例2-1所得龙胆苦苷充分混合得C相。
(3)将C相加入A相，充分混合均匀，再将B相倒入A相中，50℃水浴条件下，充分搅拌均匀，趁热使用均匀涂布于无纺布背衬材料上，50℃恒温干燥箱熟化3h，取出冷却至室温后盖上聚乙烯薄膜，室温放置过夜，切割成规定大小的巴布剂，密封包装，即得龙胆苦苷巴布剂。
实施例3-1一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，包括如下步骤：
称取足量秦艽药材(干燥根茎)，粗碎，用70％的乙醇加热回流提取两次次，每次4小时，过滤，合并滤液，滤液回收乙醇浓缩成浸膏。加入等体积的正丁醇萃取5次，合并萃取液，减压浓缩成秦艽正丁醇浸膏。将秦艽正丁醇浸膏用足量甲醇悬浮溶解均匀后，再加入3倍体积乙醇，搅拌均匀，静止6小时，有沉淀析出，过滤后回收滤液，同上方法，用乙醇重结晶2次提取正丁醇萃取物中的龙胆苦苷。
实施例3-2一种龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将0.35份甘氨酸钠以及1.5份薄荷醇和1.5份丙二醇缓慢加入25份甘油中，充分混合均匀，再多次少量加入4份聚丙烯酸钠，继续搅拌，充分混合均匀，再加入1.8份微粉硅胶充分分散搅拌均匀，得A相。
(2)将0.03份柠檬酸溶解于适量水后，得B相，0.8份瓜尔胶逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再依次加入4份实施例3-1所得龙胆苦苷充分混合，得C相。
(3)将C相加入A相，充分混合均匀，再将B相倒入A相中，50℃水浴条件下，充分搅拌均匀，趁热使用均匀涂布于无纺布背衬材料上，50℃恒温干燥箱熟化2h，取出冷却至室温后盖上聚乙烯薄膜，室温放置过夜，切割成规定大小的巴布剂，密封包装，即得龙胆苦苷巴布剂。
对比例1
同实施例1-1，不同之处在于，加入等体积乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，减压浓缩，成秦艽乙酸乙酯浸膏。
对比例2
同实施例1-1，不同之处在于，加入等体积石油醚萃取2次，合并萃取液，减压浓缩，成秦艽石油醚浸膏。
对比例3～8
同实施例2-2中龙胆苦苷巴布剂的制备方法，不同之处在于，透皮促进剂分别选用N-甲基吡咯烷酮、丙二醇、氮酮、油酸、丙二醇和氮酮的混合物(1:1)、薄荷醇和氮酮的混合物(1:1)替换薄荷醇。
试验例1龙胆苦苷收率及纯度的测试
对实施例1-1、对比例1～2所得龙胆苦苷的收率进行测试，采用HPLC分析该龙胆苦苷结晶的纯度，结果如表4所示。
表4龙胆苦苷萃取溶剂的筛选
Figure RE-GDA0003014129450000081
由表4可得，采用正丁醇进行萃取，相对于采用乙酸乙酯和石油醚进行萃取，得到的龙胆苦苷收率更高，纯度更高。由于化合物极性正丁醇＞乙酸乙酯＞石油醚，正丁醇是所选萃取溶剂中极性最大的溶剂，而龙胆苦苷极性较大，根据相似相溶原理，龙胆苦苷能够更多的溶解在正丁醇中。
试施例2不同种类的透皮促渗剂对龙胆苦苷巴布剂性能的影响
采用改良Franz扩散装置，将制备好的大鼠腹部离体皮肤置于上、下两室之间，皮肤角质层面朝向供给池，真皮层面朝向接收池。角质层一面先后贴上实施例2-2、实施例3-2、对比例3～8所得龙胆苦苷巴布剂(含有不同含量的促渗剂)，接受液为PBS缓冲溶液，然后用封口膜封住供给池口防止水分蒸发，接受池内置磁力搅拌子，将接收池置于磁力搅拌器上,在恒温(32)℃下保持恒速,不断搅拌，分别于2h、4h、6h、8h、10h、12h取样0.5ml,然后向接收池中补加相同体积新鲜接受液，将样品液以0.45μm滤膜过滤后使用HPLC分析，计算龙胆苦苷的累积透过量Q(μg/cm2)和透皮速率J[μg/(cm2·h)]，公式如下：
Figure RE-GDA0003014129450000091
其中V为接收池体积，A为皮肤有效扩散面积，Ci为第i(i≤n-1)个取样点药物浓度的测定值。以Q对t进行回归，得到回归方程：Q＝Jt+b。式中，J 为渗透速率，t为取样时间，b为回归直线截距。结果见表1。
表1不同促渗剂及配方对龙胆苦苷透皮动力学的影响
Figure RE-GDA0003014129450000092
由表1可得，在不含促渗剂的情况下，龙胆苦苷巴布剂的透皮性能较差，加入适量促渗剂能够明显的增强龙胆苦苷透过皮肤的含量。不同促渗剂均能够不同程度地促进龙胆苦苷穿透皮肤阻碍，因皮肤角质层的主要成分包括脂质与角蛋白，促渗剂不同，对脂质紊乱程度影响不同，从而影响渗透效果。其中薄荷醇效果最为明显，氮酮和丙二醇其次。1.5％的薄荷醇-1.5％丙二醇多元促渗剂对龙胆苦苷的促渗效果最好，而丙二醇还可减少其他促渗剂的刺激作用,具有应用优势。
试验例3龙胆苦苷巴布剂抗炎作用试验研究
取昆明种小鼠40只，重量约为20g，随机分为5组，实验前一天用8％Na2S 脱去小鼠背部皮肤约3cm×4cm大小区域的毛发，脱毛后背部给药，贴剂面积为 2cm×2cm，实验前一晚禁食不禁水，A组为巴布剂空白基质组(不含龙胆苦苷)；B 组为龙胆苦苷巴布剂低剂量给药组(含有1％龙胆苦苷)；C组为龙胆苦苷巴布剂中剂量给药组(含有2％龙胆苦苷)；D组为龙胆苦苷巴布剂高剂量给药组(含有4％龙胆苦苷)；E组为阳性对照组吲哚美欣巴布剂(含有0.35％吲哚美欣)。
各组每天9点给药，连续给药三天，于各组最后一次给药1h后用1％角叉菜胶生理盐水溶液致炎，4h后处死小鼠后称量小鼠左右足跖重量差异，计算足跖肿胀度。结果见表2。
表2龙胆苦苷巴布剂对小鼠足跖肿胀的影响(n＝8)
Figure RE-GDA0003014129450000101
注：*表示该试验组与空白基质组比P＜0.05
结果表明，龙胆苦苷巴布剂能明显抑制小鼠由角叉菜胶引起的小鼠足跖肿胀。说明龙胆苦苷巴布剂有很好的抗炎作用。
试验例4龙胆苦苷巴布剂与口服龙胆苦苷药动学研究
(1)药动学实验
取250g左右雄性SD大鼠12只，随机分为2组，每组6只。一组灌胃给予龙胆苦苷水溶液(182.88mg/kg，给药量同巴布剂组)，灌胃后分别于0.25、0.5、 0.75、1、1.5、2、3、4、6h从眼后静脉丛采血0.3mL左右，置于1.5mL肝素化离心试管中,12000r·min－1离心5min取上清即得血浆，取100ul血浆，加入 150μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，12000r·min－1离心5min，分离上清液，进样10ul。
另一组给药前一天对大鼠背部使用8％Na2S溶液进行脱毛处理。每只大鼠给予自制龙胆苦苷巴布剂面积为6*6cm(给药量为182.88mg/kg)的龙胆苦苷巴布剂，并用透气胶带加以固定。在实验开始后的1、2、4、6、8、12、24h如灌胃组采取血样，并如上处理。
(2)液相条件
检测波长为254nm，流动相:A相:甲醇(HPLC级)，B相:水(+0.1％甲酸)，25％A+75％B，流速：1mL/min，色谱柱：ZORBAX SB-C18，(4.6*150mm，5 μm)，柱温:30℃，进样量为10μL。
(3)数据处理
采用DAS2.1版软件非室模型进行药代动力学参数计算，对各药动学参数进行统计学分析，p<0.05为具有统计学差异。
(4)实验结果
口服组和巴布剂组大鼠给药后的平均药时曲线见下图,主要药动学参数见下表3和图1。
表3龙胆苦苷口服给药和龙胆苦苷巴布剂给药后在大鼠体内的统计矩药动学参数(n＝6)
Figure RE-GDA0003014129450000111
注：*表示与口服组比较，P<0.05，有显著差异
由图1和表3可得，灌胃给药后，龙胆苦苷在大鼠体内被快速吸收，并在体内快速消除(t1/2＝0.79±0.29h)，而大鼠给予龙胆苦苷巴布剂后，其达到最大血药浓度的时间延长到2h，并且血药浓度相对于灌胃给药下降缓慢(t1/2＝3.26±0.66 h)，能维持至少12h。且透皮给药后，与口服给药相比各药动学参数具有显著的统计学差异。
通过药动学实验可以看到，贴剂组比口服组有更平稳的血药浓度，贴剂组比口服组有更长的t1/2、Tmax和更高的AUC(0～∞)以及MRT(0～∞)，说明该发明制备得到的龙胆苦苷巴布剂经皮给药效果很好，能够实现缓控释给药。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种从秦艽中提取纯化龙胆苦苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)制备秦艽正丁醇浸膏；
b)将上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，再用乙醇重结晶纯化。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述步骤b)具体为：上述秦艽正丁醇浸膏用甲醇溶解，加入乙醇，搅拌，静止析出沉淀，过滤，得龙胆苦苷结晶。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，
甲醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的1～3倍；
乙醇的添加体积为秦艽正丁醇浸膏体积的1～3倍；
静止的时间为2～6小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤b)还包括，对过滤后所得滤液进行滤液重结晶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述步骤a)包括：
a1)取秦艽的干燥根茎，粉碎，用乙醇加热回流提取，合并浓缩，得浸膏；
a2)再用正丁醇萃取，合并萃取液，减压浓缩，得秦艽正丁醇浸膏。
6.一种龙胆苦苷巴布剂，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的方法提取纯化得到的龙胆苦苷。
7.根据权利要求6所述的龙胆苦苷巴布剂，其特征在于，由包括如下重量份的原料制备而得：
龙胆苦苷1～5份、骨架材料1～6份、填充剂1～3份、增粘剂0.2～1份、保湿剂20～40份、交联剂0.1～0.6份、交联调节剂0.01～0.06份、透皮促进剂1～3份，其余为超纯水，所有原料份数总计100份。
8.根据权利要求7所述的龙胆苦苷巴布剂，其特征在于，
所述骨架材料包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸、明胶或卡波姆中至少一种。
9.根据权利要求7所述的龙胆苦苷巴布剂，其特征在于，
所述填充剂包括微粉硅胶、高岭土、氧化锌中至少一种；
所述增粘剂包括瓜尔胶、卡拉胶、聚丙烯酸、明胶中至少一种；
所述保湿剂包括甘油、丙二醇、聚乙二醇中至少一种；
所述交联剂包括甘羟铝、甘氨酸钠、甘氨酸铝中至少一种；
所述交联调节剂包括酒石酸、依地酸钠、柠檬酸中至少一种；
所述透皮促进剂包括N-甲基吡咯烷酮、月桂氮酮、冰片、油酸、薄荷醇，氮酮和丙二醇中至少一种。
10.权利要求7～9任一项所述龙胆苦苷巴布剂的制备方法，包括如下步骤：
1)将交联剂以及透皮促进剂依次加入保湿剂中，混合，加入骨架材料，填充剂，分散搅拌均匀，得A相；
2)将交联调节剂溶解于适量水后得到B相；增粘剂逐渐加入适量的水，充分搅拌溶解，再加入龙胆苦苷，得C相；
3)将B相、C相加入A相，混合，40～50℃水浴条件下，搅拌，趁热涂布于无纺布背衬材料上，40～60℃恒温熟化2～4h，取出冷却至20～35℃后，盖膜，放置8～12h，切割，密封，得龙胆苦苷巴布剂。
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