CN112946260A

CN112946260A - 检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法

Info

Publication number: CN112946260A
Application number: CN202010253332.6A
Authority: CN
Inventors: 杨宇; 聂聪; 侯宝翠; 王静
Original assignee: Chinese Academy of Inspection and Quarantine CAIQ
Current assignee: Chinese Academy of Inspection and Quarantine CAIQ
Priority date: 2020-04-02
Filing date: 2020-04-02
Publication date: 2021-06-11
Anticipated expiration: 2040-04-02
Also published as: CN112946260B

Abstract

本发明涉及一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法，试剂包括由样品垫、标记物垫、包被垫、吸收垫依次搭接并贴在底衬卡上，标记物垫为包被有荧光微球标记新冠肺炎病毒S蛋白的玻璃纤维，包被垫为包被有兔抗S蛋白多克隆抗体作为质控线和包被有新冠肺炎病毒S蛋白抗原为检测线的硝酸纤维素膜。本发明提供的检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂，可用于检测感染新冠肺炎病毒后，早期出现的新冠肺炎病毒IgM抗体，也可有效检测出感染中、后期出现的IgG抗体；试剂的特异性强，检测灵敏度高，除了可检测常规的血清、血浆外，还可用于全血和指尖血检测，使用更方便，更利于筛查，可降低医护人员采样操作暴露感染的风险。

Description

检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法，属于生物技术检测技术领域。

背景技术

2020年初，突发的新型冠状肺炎疫情，给国民生命健康和生产生活带来了严峻挑战。导致这场严重疫情的是2019新型冠状病毒，其为一种不分节段的单股正链RNA病毒。病毒具有包膜、颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm，该病毒变异快、宿主多，具有较强的宿主适应性。

防控疫情的关键在于早发现、早隔离、早诊断、早治疗。各大医疗机构急需明确诊断对抗疫情，其中核酸检测方法和试剂在确诊工作中扮演最重要的角色，是疫情诊断的金标准。但目前核酸检测试剂不仅短缺，而且存在着检出率不高，经常出现假阴性的问题；连续几天进行核酸检测，直到检测3-4次后才能确诊是核酸阳性，而且受PCR实验环境设施的严格要求，具有检测资质的实验室数量有限。据统计，新冠病毒核酸阳性率目前只有30-50％，这些都在影响新型冠状病毒肺炎病人的确诊，成为影响疫情防控的瓶颈问题。专家呼吁开发新的抗体检测试剂，来提高检测率，但对于抗体检测，抗原选择及检测手段是目前要解决的技术难题。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂，该试剂可准确、有效检测新冠肺炎病毒抗体。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂，其包括由样品垫、标记物垫、包被垫、吸收垫依次搭接并贴在底衬卡上，其中，所述标记物垫为包被有荧光微球标记新冠肺炎病毒S蛋白的玻璃纤维，所述包被垫为包被有兔抗S蛋白多克隆抗体作为质控线和包被有新冠肺炎病毒S蛋白抗原为检测线的硝酸纤维素膜。

在一个优选的实施方案中，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的氨基酸序列SEQ IDNO.1所示。

在一个优选的实施方案中，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的表达采用的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

在一个优选的实施方案中，所述样品垫为含鼠抗人红细胞抗体的处理液进行浸泡处理后的样品垫。

一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂的制备方法，其包括如下步骤：

S1、将荧光微球活化后加入新冠肺炎病毒S蛋白进行标记，获得荧光微球标记抗原；

S2、将荧光微球标记抗原，包被在玻璃纤维上，干燥，获得标记物垫；

S3、硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线，质控线上包被有兔抗S蛋白多克隆抗体，检测线上包被有新冠肺炎病毒S蛋白，获得包被垫；

S4、将样品垫浸入含有鼠抗人红细胞抗体的处理液中浸泡处理2～5小时，取出烘干；

S5、将样品垫、标记物垫、包被垫、吸收垫依次搭接并贴在底衬卡组成，按包被垫靠近质控线的一端覆盖上吸收垫，靠近检测线的另一端覆盖标记物垫进行贴条，其中，所述新冠肺炎病毒S蛋白的氨基酸如SEQ ID NO.1所示。

在一个优选的实施方案中，所述在步骤S1中，所述荧光微球活化的过程为：将荧光微球用0.15～0.3mol/LPBS洗涤后，重悬；加入EDC和NHS溶液，震荡混匀，避光反应20～45分钟，获得活化的荧光微球。

在一个优选的实施方案中，将活化的荧光微球的溶液离心，弃上清液后加入标记缓冲液复溶，再加入新冠肺炎病毒S蛋白后震荡反应，然后离心，弃上清液，加入标记稀释液复溶，之后喷涂于玻璃纤维膜上，37℃烘2.5～3.5小时，作为标记物垫，干燥保存。

优选地，所述标记缓冲液的配制为将碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g，溶于1000mL水中；所述标记稀释液的配制为将柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠lg，BSA 3g，溶于1000mL水中。

将大量实验验证表明采用上述标记稀释液进行稀释荧光微球，能有效避免非特异性结合，避免假阳性。

在一个优选的实施方案中，在步骤S3中，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的基因如SEQ ID NO.2所示，所述兔抗S蛋白多克隆抗体的包被浓度为2.2mg/mL，所述新冠肺炎病毒S蛋白的包被浓度为1.5mg/mL。

在一个优选的实施方案中，在步骤S4中，所述鼠抗人红细胞抗体的浓度为0.1mg/mL，所述烘干的温度为37℃，时间为2.5～4小时。

(三)有益效果

本发明的有益效果是：

本发明制备的新冠肺炎病毒S蛋白抗原，是通过对S蛋白抗原的基因进行大肠杆菌偏爱密码子优化，增大的表达效率，外源蛋白表达效率达70％以上，制备的S蛋白抗原有较好的特异性，可用于制备免疫检测试剂。应用S蛋白抗原制备的荧光免疫层析试剂比胶体金灵敏度提高10倍，特异性强，采用特殊处理的样品垫，除了可检测常规的血清、血浆外，还可用于全血和指尖血检测，使用更方便，更利于筛查，可降低医护人员采样操作暴露感染的风险。

本发明提供的用于检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂，特异性强，灵敏度高，可准确检测是否有新冠肺炎病毒抗体，该抗体可以是感染新冠肺炎病毒后，机体早期(3天后)产生的抗新冠肺炎病毒IgM抗体，也可有效检测出感染后中后期(7～14天)出现的IgG抗体，这样使得灵敏度大大提高，能有效避免核酸检测的假阴性结果，准确性高，本发明试剂携带方便。

附图说明

图1为蛋白S纯化的电泳结果；

图2为荧光免疫检测仪YG1对检测IgG抗体试剂重复性的分别扫描读取T/C值；

图3为阳性样本的全血、血浆、血清的检测结果；

图4为阴性样本的全血、血浆、血清的检测结果。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合附图，通过具体实施方式，对本发明作详细描述。下面实施例中所用的材料来源可选自荧光微球(Bangs)；正常人血清由长春海关检验检疫中心提供；鼠抗人红细胞抗体购自洛阳佰奥通生物；所用原料来源：标记垫(Ahlstrom)、NC膜(Sartorius)、样本垫(上海杰一生物)及吸收垫(上海杰一生物)；牛血清白蛋白(BSA)购自北京沫之东。其它化学试剂均为分析纯试剂。

实施例1重组新冠肺炎病毒S抗原蛋白的制备

(1)重组质粒的构建

本发明发明人进行多次试验，最终确定选择新冠肺炎病毒刺突蛋白(S蛋白)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，依据大肠杆菌Ecoli O127:H6偏爱密码子对基因序列进行改造，并通过生物信息学对重组蛋白二级结构筛选，并经多次实验验证，最终确定的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

将SEQ ID NO.2所示序列，委托上海英俊公司合成，连接入表达载体PGEX-4T-2，获得重组质粒，将重组质粒转化于DH5α感受态细胞；培养后，用PCR和双酶切进行鉴定，筛选阳性克隆送上海英俊公司测序。

(2)重组蛋白的表达及鉴定

将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21，将鉴定正确的单菌落接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃震荡培养过夜，次日按1:100接种于新的含氨苄青霉素的LB液体培养基中震荡培养至OD600达0.8后，冷却菌液温度至22℃，加入IPTG使其终浓度为0.6mmol/L，在22℃进行诱导表达；并分别于0.5、1、2、3、4、5、6小时时吸取1mL菌液，超声裂解，收集菌液，煮沸10min后，4℃、10000r/min离心3min，冰上放置，吸取上清和沉淀进行11％的SDS-PAGN电泳检测；电泳结束后，胶用考马斯亮兰染色60min，再脱色2h后观察蛋白诱导表达情况，结果表明在沉淀中有符合目的蛋白大小的(25KD)条带，说明重组蛋白以包涵体的形式表达。

(3)重组蛋白的提取纯化

吸取2ml诱导表达菌液，4℃，10000r/min离心30分钟，收集细胞沉淀，用0.01MpH7.4的PBS洗涤三次，加入pH8.0裂解液(Tris-Nacl)悬浮，超声，离心后沉淀加入pH8.0浓度为8M的尿素悬浮，置于冰上摇2小时溶解包涵体，12000r/min，离心30分钟，上清液经0.22μm的滤膜过滤后用His Trap TMHP(组氨酸)亲和吸附柱纯化系统进行纯化，SDS-PAGN鉴定纯度，最后将纯化的蛋白透析到0.01M，pH7.4的PBS中，PNG-20000浓缩，得到分子量约25KD的纯化重组S蛋白，电泳结果如图1所示，图中从左到右，第一条带为Mark，第二条带为0.01M，pH7.4的PBS的对照，第三条带为纯化后的蛋白，进行10倍稀释的条带，第四条为纯化后的蛋白，进行100倍稀释的条带，第五条为纯化后的蛋白，进行1000倍稀释的条带。

取2mg纯化的重组S蛋白制备多克隆抗体，采用常规方法进行免疫兔子，获得阳性兔血清，纯化后获得兔抗S蛋白多克隆抗体。

实施例2用于检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂制备

(1)荧光乳胶微球活化

取200μL荧光微球，加入1mL0.2mol/L PBS，通过12000rpm离心10分钟。吸弃上清，重复离心两次后加入600μL0.2 mol/L PBS重悬后，加入200μL 10mg/mL的EDC溶液，200μL6mg/mL的NHS溶液震荡混匀，放在旋转反应架上避光反应30分钟，获得荧光乳胶微球活化液。

(2)标记物垫制备

将获得的荧光乳胶微球活化液，12000rpm离心10分钟，弃上清液后用0.2mL标记缓冲液复溶，同时加入实施例1中纯化后的新冠肺炎病毒S蛋白0.1mg震荡反应1小时，然后离心，弃上清液，以1mL标记缓冲液复溶离心，弃上清液，最后用0.3mL标记稀释液复溶，10倍稀释后喷涂于玻璃纤维之上，37℃烘3小时，作为标记物垫，干燥保存。其中，所述标记缓冲液的配制为将碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g，溶于1000mL水中；标记稀释液的配制为将柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠lg，BSA3g，溶于1000mL水中。

(3)包被垫制备

将质控抗体(兔抗S蛋白多克隆抗体)、检测抗原(即实施例1中制备的纯化后的新冠肺炎病毒S蛋白)以包被稀释液(0.01M PBS(PH7.4))分别稀释至2.2mg/mL、1.5mg/mL作为质控线和检测线的工作液，用包被机将质控线和检测线工作液划膜至硝酸纤维素膜上，置干燥箱37℃烘干3小时，获得包被垫；干燥保存。

(4)样品垫制备

将鼠抗人红细胞抗体按照0.1mg/mL以0.01M PB(PH7.4)稀释液稀释后制备成处理液，将样品垫浸泡在处理液中4个小时，取出后置干燥箱37℃烘干3小时，干燥保存。

(5)组装

将样本垫、制备标记垫、制备的硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘贴在PVC底板上，其中，包被垫(硝酸纤维素膜)靠近质控线的一端覆盖上吸收垫，靠近检测线的另一端覆盖标记物垫；将PVC底板切裁制得宽4mm的检测试剂条，最后将检测试剂条装入卡壳制得检测试剂卡。

(6)检测

将样品100uL加入样品孔，15分钟后插入，荧光层析分析仪读取结果。将样本加入加样孔，阳性抗体就会与荧光微球标记抗原反应，并沿着硝酸纤维素膜层析，分别与检测线和质控线反应。将反应后的试剂卡插入荧光免疫检测仪YG10，分别扫描T、C信号值，当测试结果有效时，C线显示一定光强度，这时T线上的光信号强度与C线的荧光信号强度的比值(T/C)与样本阴阳性相关，即：阳性T/C值高；阴性T/C值低。

实施例3参考值确定

取正常人血清50份样本，抽取按实施例2制备方法制备的三个批次的检测试剂进行依次测定，荧光免疫检测仪YG1分别扫描读取T/C，计算T/C的平均值(AVNRAGN)和标准差(STDNVP)，参考值＝AVNRAGN+3STDNVP，即：T/C≥参考值为阳性；T/C＜参考值为阴性。

表1参考值确定

检测正常人血清50份样本，荧光免疫检测仪YG1分别扫描读取T/C值，结果如表1所示，计算AVNRAGN+3STDNVP＝0.05，即检测将的判断标准为：T/C≥0.05为阳性，T/C＜0.05为阴性。

实施例4重复性

抽取3个批次的试剂，将一份阳性样本，以阴性血清2×、10×、50×稀释进行检测，每个稀释点平行测定15次，将试剂卡放入荧光免疫检测仪YG10，分别扫描检测(T)区和质控(C)区，仪器读取信号值，计算15次T、C、T/C的平均值与方差比值。即在线性范围内将一份阳性样本以健康人血清2×、10×、50×，检测同一个浓度时，T浮动明显，C基本保持不变，如图2所示；将每个浓度检测15次，分别将获得的T、C、T/C的方差与平均值的比值作为变异系数，即(CV)，结果发现T、C的信号值的CV≥15％T/C的CV≤8％，具体检测结果如表2所示，所以T/C对T起到了矫正的作用。利用T/C的拟合曲线计算3个批次检测试纸条的批内和批间浓度的变异系数。批内、批间CV均不大于10％，说明制备方法制备的试剂重复性较好。

表2重复性结果

实施例5特异性

抽取按实施例2方法制备的3个批次的试剂与对比试剂：新型冠状病毒(2019-nCoV)抗体检测试剂盒(胶体金法)同时检测3份新冠肺炎病毒阳性血清标本、10份正常人血清、甲型流感病毒阳性血清、甲型流感病毒阳性血清、腺病毒阳性血清、呼吸道合胞病毒阳性血清，验证两种检测试剂的一致性。结果是同时检测3份阳性标本，二者均为阳性(+)的结果；同时检测10份正常人血清，二者均为阴性(－)结果；同时检测特异性样本：甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒，二者均为阴性(－)结果，结果见表3。

表3新冠肺炎病毒抗体免疫荧光层析检测与现有技术对比结果

实施例6全血、血浆样本检测

本实施例对于全血、血浆样本的检测采用特殊处理过的样品垫，即实施例2中的用鼠抗人红细胞抗体处理的样品垫，与未经过处理的样品垫，进行对比，结果表明经过本实施例2中对样品垫的处理，可有效对血清、血浆和指尖血检测，检测更方便，利于筛查检测；当采用未处理的样品垫进行检测，检测指尖血上样后会出现拖尾、滞留等现象，与条带上抗原结合不完全等问题，检测结果不可靠。

取同一样本的肝素抗凝剂的全血和血清、血浆样本，20个健康人的样本；将三份新冠肺炎病毒阳性样本，分别以血清、血浆、指尖血10×稀释，抽取实施例2方法制备的三个批次的检测试剂进行依次测定，验证结果表明同一样本的全血、血浆和血清样本的检测结果是一致的，阳性样本检测结果如图3所示，健康人的阴性样本检测结果如图4所示，结果说明本发明制备的试剂可用于对血清、血浆和指尖血检测，结果是一样准确。

实施例7灵敏度检测

采用实施例2制备的试剂检测新冠肺炎病毒抗体阳性标本(由十堰市东风总医院进行操作)，用以正常人血清分别进行10倍、100倍、1000倍稀释，取100μL血清样品加样品垫，8min判断结果。检测结果检测10倍、100倍、1000倍稀释的样本均为阳性结果，说明三个稀释浓度均可检出。

采用本实施例1制备的S蛋白抗原，用于制备胶体金免疫层析试纸，采用常规方法制备，采用S蛋白标记胶体金颗粒，硝酸纤维素膜上的检测带包被有S蛋白抗原，质控带包被兔抗S蛋白多克隆抗体；获得的胶体金免疫层析试纸，采用正常人血清分别进行10倍、100倍、1000倍稀释的新冠肺炎病毒IgG阳性标本进行检测，可以检测10倍、100倍稀释的阳性样品。可见，本发明制备的荧光免疫层析试剂的灵敏度，高于现有技术制备的免疫层析试剂，比胶体金灵敏度提高了10倍。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明做其它形式的限制，任何本领域技术人员可以利用上述公开的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

序列表

<110> 中国检验检疫科学研究院

<120> 检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 227

<212> PRT

<213> S蛋白(S protein)

<400> 1

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn

210 215 220

Phe Asn Gly

225

<210> 2

<211> 684

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cgtgttcagc cgaccgaaag cattgttcgt tttccgaata tcaccaatct gtgtccgttt 60

ggcgaagttt ttaatgcaac ccgttttgca agcgtttatg cctggaatcg taaacgtatt 120

agcaattgcg ttgccgatta tagcgttctg tataatagcg caagcttcag cacctttaaa 180

tgctatggtg ttagcccgac caaactgaat gatctgtgtt ttaccaatgt gtatgccgat 240

agctttgtga ttcgtggtga tgaagttcgt cagattgcac cgggtcagac cggtaaaatt 300

gcagattata actataaact gccggatgat tttacgggtt gtgttattgc atggaatagc 360

aataacctgg atagcaaagt tggtggcaac tataactatc tgtatcgcct gtttcgtaag 420

agcaatctga aaccgtttga acgtgatatt agcaccgaaa tttatcaggc aggtagcacc 480

ccgtgcaatg gtgttgaagg ttttaattgt tattttccgc tgcagagcta tggttttcag 540

cctaccaatg gtgtgggtta tcagccgtat cgtgttgttg ttctgtcatt tgaactgctg 600

catgcaccgg caaccgtttg tggtccgaaa aaaagtacca atctggtgaa aaacaagtgc 660

gtgaacttta actttaatgg ttga 684

Claims

1.一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂，其特征在于，其包括由样品垫、标记物垫、包被垫、吸收垫依次搭接并贴在底衬卡上，所述标记物垫为包被有荧光微球标记新冠肺炎病毒S蛋白的玻璃纤维，所述包被垫为包被有兔抗S蛋白多克隆抗体作为质控线和包被有新冠肺炎病毒S蛋白抗原为检测线的硝酸纤维素膜。

2.如权利要求1所述的荧光免疫层析试剂，其特征在于，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的氨基酸序列SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的荧光免疫层析试剂，其特征在于，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的表达采用的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的荧光免疫层析试剂，其特征在于，所述样品垫为含鼠抗人红细胞抗体的处理液进行浸泡处理后的样品垫。

5.一种检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述在步骤S1中，所述荧光微球活化的过程为：将荧光微球用0.15～0.3mol/L的PBS洗涤后，重悬；加入EDC和NHS溶液，震荡混匀，避光反应20～45分钟。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将活化的荧光微球的溶液离心，弃上清液后加入标记缓冲液复溶，再加入新冠肺炎病毒S蛋白后震荡反应，然后离心，弃上清液，加入标记稀释液复溶，之后喷涂于玻璃纤维膜上，37℃烘2.5～3.5小时，作为标记物垫，干燥保存。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述标记缓冲液的配制为将碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g，溶于1000mL水中；所述标记稀释液的配制为将柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠lg，BSA 3g，溶于1000mL水中。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述新冠肺炎病毒S蛋白抗原的基因如SEQ ID NO.2所示，所述兔抗S蛋白多克隆抗体的包被浓度为2.2mg/mL，所述新冠肺炎病毒S蛋白的包被浓度为1.5mg/mL。

10.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S4中，所述鼠抗人红细胞抗体的浓度为0.1mg/mL，所述烘干的温度为37℃，时间为2.5～4小时。