CN112931483B - 一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法 - Google Patents

一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法，每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.08～0.10g、氯化镁0.05～0.08g、氯化钾0.1～0.2g、氯化钠1～2g、乙二胺四乙酸二钠0.1～0.2g、氯化锌0.03～0.05g、二水合钼酸钠0.05～0.08g、硒脲酸0.1～0.2g、复合多糖0.3～0.5g，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得。本发明冷冻液显著提高了浪人鲹精子长时间的存活率以及活力。

Description

一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法
技术领域
本发明涉及精子冷冻液技术领域，特别涉及一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法。
背景技术
浪人鲹，英文名：Giant trevally，拉丁学名：Caranx ignobilis(1775)。浪人鲹，属于鲹科鲹属的一种海水鱼类。鲹科中最大的食肉鱼种，能够跃出水面捕食海鸟。为鲹科鲹属的鱼类，俗名白面弄鱼。分布于印度洋、红海、东至日本、澳大利亚以及中国南海、台湾海峡等海域。浪人鲹体呈卵圆形，侧扁而高，随着成长，身体逐渐向后延长。头背部强度弯曲，头腹部则几乎呈直线。脂性眼睑普通发达，前部达眼之前缘，后部达瞳孔后缘，留下略呈半圆的缝隙。吻钝。体背蓝绿色，腹部银白色。各鳍淡色至淡黄色。鳃盖后缘不具任何黑斑，体侧亦无任何斑纹。长居深海浪人鲹的精子往往质量上佳，采集新鲜精液后，如不及时使用，而运输往往需要较长的时间，采用现有精子冷冻液保存后120h后，出现精子损耗大，活力明显下降，存活率低等问题。
发明内容
鉴于此，本发明提出一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液及其制备方法，解决上述技术问题。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液，每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.08～0.10g、氯化镁0.05～0.08g、氯化钾0.1～0.2g、氯化钠1～2g、乙二胺四乙酸二钠0.1～0.2g、氯化锌0.03～0.05g、二水合钼酸钠0.05～0.08g、硒脲酸0.1～0.2g、复合多糖0.3～0.5g，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得。
进一步的，所述复合多糖中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1.2-1.5：0.5-0.8。优选地，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖按质量比1：1.3：0.7制得。
进一步的，每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.09g、氯化镁0.07g、氯化钾0.13g、氯化钠1.5g、乙二胺四乙酸二钠0.13g、氯化锌0.04g、二水合钼酸钠0.06g、硒脲酸0.15g和复合多糖0.4g。
本发明还提供一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液的制备方法，包括以下步骤：首先将枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖加入水中，搅拌混合，然后加入乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠、硒脲酸，于超声震荡，最后再加入氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠、氯化锌，搅拌混合，灭菌，制得冷冻液。
进一步的，所述超声震荡的温度为5-10℃，震荡时间为15-20min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明冷冻液采用枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖复合多糖结合乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠和和硒脲酸等，科学配比，有效降低对精子损耗，更好保护精子结构，提高精子的质量，显著提高了浪人鲹精子长时间的存活率以及活力。使用本发明冷冻液保存120h后，浪人鲹精存活率可以保持在94％以上，精子平均直线运动速度为75um/s以上。其中，乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠和和硒脲酸不但可以提高冷冻液的抗冻性，还可以促进枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖更好发挥互补作用，协同增效。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1-浪人鲹精子冷冻液制备
(1)配方：每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.08g、氯化镁0.08g、氯化钾0.1g、氯化钠1.2g、乙二胺四乙酸二钠0.1g、氯化锌0.03g、二水合钼酸钠0.05g、硒脲酸0.2g、复合多糖0.3g和余量去离子水，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得，其中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1.2：0.8。
(2)制备：首先将枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖加入去离子水中，搅拌混合均匀，然后加入乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠、硒脲酸，于5-10℃超声震荡15min，最后再加入氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠、氯化锌，搅拌混合，灭菌，制得冷冻液。
实施例2-浪人鲹精子冷冻液制备
(1)配方：每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.10g、氯化镁0.05g、氯化钾0.2g、氯化钠1.8g、乙二胺四乙酸二钠0.2g、氯化锌0.05g、二水合钼酸钠0.08g、硒脲酸0.1g、复合多糖0.5g和余量去离子水，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得，其中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1.5：0.5。
(2)制备：首先将枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖加入去离子水中，搅拌混合均匀，然后加入乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠、硒脲酸，于5-10℃超声震荡20min，最后再加入氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠、氯化锌，搅拌混合，灭菌，制得冷冻液。
实施例3-浪人鲹精子冷冻液制备
(1)配方：每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.09g、氯化镁0.07g、氯化钾0.13g、氯化钠1.5g、乙二胺四乙酸二钠0.13g、氯化锌0.04g、二水合钼酸钠0.06g、硒脲酸0.15g和复合多糖0.4g和余量去离子水，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得，其中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1.3：0.7。
(2)制备：首先将枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖加入去离子水中，搅拌混合均匀，然后加入乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠、硒脲酸，于5-10℃超声震荡18min，最后再加入氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠、氯化锌，搅拌混合，灭菌，制得冷冻液。
对比例1-本对比例与实施例3区别在于：每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.09g、氯化镁0.07g、氯化钾0.13g、氯化钠1.5g、乙二胺四乙酸二钠0.13g、氯化锌0.04g、二水合钼酸钠0.06g、硒脲酸0.15g和复合多糖0.2g。
对比例2-本对比例与实施例3区别在于：乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠和和硒脲酸替换为等量氯化钠。
对比例3-本对比例与实施例3区别在于：复合多糖替换等量枸杞多糖。
对比例4-本对比例与实施例3区别在于：复合多糖替换等量黄精多糖。
对比例5-本对比例与实施例3区别在于：复合多糖替换等量淫羊藿多糖。
对比例6-本对比例与实施例3区别在于：所述复合多糖中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1：1。
试验例1
以新鲜浪人鲹精液为受试对象，精子冻存120h后解冻激活，采用计算机辅助精子分析系统CASA检测精子激活后20s的精子活率和精子平均直线运动速度，并用软件SPSS22.0进行数据处理。结果见下表：
Figure BDA0002922964240000041
上述结果表明，使用实施例1-3冷冻液保存120h后，浪人鲹精存活率可以保持在95-98％，精子平均直线运动速度为75-82um/s。
对比例1存活率、精子平均直线运动速度明显下降，表明本发明的配比对冷冻液效果有较大的影响。
对比例2冷冻液中不含有乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠和和硒脲酸，其存活率以及活力明显下降。
对比例3-5采用单一多糖，其存活率、精子平均直线运动速度也明显下降，表明本发明采用枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖复合多糖显著提高了浪人鲹精子长时间的存活率以及活力。
对比例6与实施例3表明，采用特定配比的枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖，进一步提高了浪人鲹精子长时间的存活率以及活力。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液，其特征在于，每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.08～0.10g、氯化镁0.05～0.08g、氯化钾0.1～0.2g、氯化钠1～2g、乙二胺四乙酸二钠0.1～0.2g、氯化锌0.03～0.05g、二水合钼酸钠0.05～0.08g、硒脲酸0.1～0.2g、复合多糖0.3～0.5g，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖制得；
所述复合多糖中枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖的质量比为1：1.2-1.5：0.5-0.8。
2.根据权利要求1所述的一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液，其特征在于，每升精子冷冻液中含有以下重量的原料：氯化钙0.09g、氯化镁0.07g、氯化钾0.13g、氯化钠1.5g、乙二胺四乙酸二钠0.13g、氯化锌0.04g、二水合钼酸钠0.06g、硒脲酸0.15g和复合多糖0.4g。
3.根据权利要求1或2所述的一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液，其特征在于，所述复合多糖由枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖按质量比1：1.3：0.7制得。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：首先将枸杞多糖、黄精多糖和淫羊藿多糖加入水中，搅拌混合，然后加入乙二胺四乙酸二钠、二水合钼酸钠、硒脲酸，于超声震荡，最后再加入氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠、氯化锌，搅拌混合，灭菌，制得冷冻液。
5.根据权利要求4所述的一种保持高存活的浪人鲹精子冷冻液的制备方法，其特征在于，所述超声震荡的温度为5-10℃，震荡时间为15-20min。
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