CN101711522A - 军曹鱼精子超低温保存方法 - Google Patents

军曹鱼精子超低温保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101711522A
CN101711522A CN200910193584A CN200910193584A CN101711522A CN 101711522 A CN101711522 A CN 101711522A CN 200910193584 A CN200910193584 A CN 200910193584A CN 200910193584 A CN200910193584 A CN 200910193584A CN 101711522 A CN101711522 A CN 101711522A
Authority
CN
China
Prior art keywords
spermia
sperm
ultralow
temperature
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200910193584A
Other languages
English (en)
Inventor
汤保贵
陈刚
张建东
周晖
施钢
潘传豪
黄建盛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Ocean University
Original Assignee
Guangdong Ocean University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Ocean University filed Critical Guangdong Ocean University
Priority to CN200910193584A priority Critical patent/CN101711522A/zh
Publication of CN101711522A publication Critical patent/CN101711522A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于水产养殖技术领域，特别是一种军曹鱼精子超低温保存方法，该方法是将采集的新鲜精液按体积比1∶3的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在20秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度-70～-80℃，然后再放入-196℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在37～40℃温度下解冻，时间3～4秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。本发明的军曹鱼精子超低温保存方法，有助于提高军曹鱼精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。该技术不仅可以用于鱼类人工繁育，对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要的意义。

Description

军曹鱼精子超低温保存方法
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，特别是一种军曹鱼精子超低温保存方法。
背景技术
目前，军曹鱼养殖生产所需的苗种全部来自于人工繁育，而人工繁殖经常会出现雌雄鱼成熟不一致或性比不当导致精子不能充分利用的问题。而且，鱼类精子质量、数量存在季节性变化，导致阶段性受精率不足。因此，开发应用精子保存技术，有助于提高军曹鱼精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。
关于鱼类精子的保存，一般分为常温、低温和超低温等三种方法。常温保存可将精子寿命延长几分钟至几小时；低温保存可将精子寿命延长几天至十几天；超低温保存则是在-196℃条件下，让精子的运动和代谢完全停止，理论上可以无限期的保存，解冻复活后恢复授精能力。国外研究者已经对大西洋比目鱼、大菱鲆、虹鳟、金头鲷、尖吻鲈、大西洋鳕等少数几种海水鱼类的精子超低温保存技术开展了研究。国内的相关研究主要侧重于鲫鱼、南方鲇、鲤鱼等淡水鱼类。迄今，国内外关于军曹鱼精子超低温保存方面的研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的不足，提供一种军曹鱼精子超低温保存方法。
为了实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是：该军曹鱼精子超低温保存方法是将采集的新鲜精液按体积比1∶3的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在20秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度-70～-80℃，然后再放入-196℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在37～40℃温度下解冻，时间3～4秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。
所述精子保存液的配方及配制方法：
精子保存基液的配方：NaCl 65～75mmol/l、KCl 1.45～1.5mmol/l、CaCl22.5～2.7mmol/l、NaHCO3 20～25mmol/l、MgCl2 5.7～6.1mmol/l、葡萄糖150～200mmol/l；小牛血清9.4～10mg/ml，按配方制备精子保存基液，然后调PH值至7.8，再加入9～10％体积的抗冻剂，得到精子保存液；
所述活化液配方为：NaCl 7.6～8g/l，KCl 0.4～0.45g/l，CaC12·2H2O0.18～0.19g/l，NaHCO3 0.35～0.4g/l MgSO4 0.09～0.10g/l，KH2PO4 0.06～0.07g/l，Na2HPO4 0.045～0.05g/l，D-glucose 0.8～1.2g/l。
所述活化液配方为：NaCl 8g/l，KCl 0.4g/l，CaC12·2H2O 0.185g/l，NaHCO3 0.35g/l，MgSO4 0.098g/l，KH2PO4 0.06g/l，Na2HPO4 0.048g/l，D-glucose 1g/l。
所述抗冻剂为二甲亚枫。
本发明的军曹鱼精子超低温保存方法，有助于提高军曹鱼精子利用率，增加苗种繁育量，提高经济效益。该技术不仅可以用于鱼类人工繁育，对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要的意义。
附图说明
图1是本发明技术流程图。
具体实施方式
准确配制精子保存基液和精子活化液，精子保存液的配方及配制方法：先配制精子保存基液，精子保存基液的配方：氯化钠(NaCl)65～75mmol/l、氯化钾(KCl)1.45～1.5mmol/l、氯化钙(CaCl2)2.5～2.7mmol/l、碳酸钠(NaHCO3)20～25mmol/l、氯化镁(MgCl 2)5.7～6.1mmol/l、葡萄糖150～200mmol/l、小牛血清9.4～10mg/ml，按配方制备精子保存基液，用1mol/l的碳酸氢钠将精子保存基液的pH值调至7.8，再加入9～10％体积的二甲亚枫作为抗冻剂，得到精子保存液。
精子活化液的配方：所述活化液配方为：氯化钠(NaCl)8g/l，氯化钾(KCl)0.4g/l，氯化钙(CaC12·2H2O)0.185g/l，碳酸氢钠(NaHCO3)0.35g/l，硫酸镁(MgSO4)0.098g/l，磷酸二氢钾(KH2PO4)0.06g/l，磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.048g/l，D-葡萄糖(D-glucose)1g/l。
将精子保存液置于碎冰上，将采集的新鲜精液按1∶3比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，应在20秒内完成，平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度约-80℃，然后再投入-196℃的液氮中长期保存。应用时，将保存的精子在40℃左右温水中解冻3-4秒，再移入装有精子活化液的容器中涡旋2-3秒以混和均匀，立即进行授精。

Claims (5)

1.一种军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是将采集的新鲜精液按体积比1∶3的比例与精子保存液逐步稀释并混和均匀，在20秒内完成，然后平置于液氮液面上预冷5分钟，预冷温度-70～-80℃，然后再放入-196℃的液氮中长期保存；使用时将保存的精子在37～40℃温度下解冻，时间3～4秒，再移入精子活化液中活化，然后进行授精。
2.据权利要求1所述军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是所述精子保存液的配方及配制方法：
精子保存基液的配方：NaCl 65～75mmol/l、KCl 1.45～1.5mmol/l、CaCl22.5～2.7mmol/l、NaHCO3 20～25mmol/l、MgCl2 5.7～6.1mmol/l、葡萄糖150～200mmol/l；小牛血清9.4～10mg/ml，按配方制备精子保存基液，然后调PH值至7.8，再加入9～10％体积的抗冻剂，得到精子保存液。
3.据权利要求1所述军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是所述活化液配方为：NaCl 7.6～8g/l，KCl 0.4～0.45g/l，CaC12·2H2O 0.18～0.19g/l，NaHCO3 0.35～0.4g/l MgSO4 0.09～0.10g/l，KH2PO4 0.06～0.07g/l，Na2HPO40.045～0.05g/l，D-glucose 0.8～1.2g/l。
4.据权利要求3所述军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是所述活化液配方为：NaCl 8g/l，KCl 0.4g/l，CaC12·2H2O 0.185g/l，NaHCO3 0.35g/l，MgSO4 0.098g/l，KH2PO4 0.06g/l，Na2HPO4 0.048g/l，D-glucose 1g/l。
5.据权利要求2所述军曹鱼精子超低温保存方法，其特征是所述抗冻剂为二甲亚枫。
CN200910193584A 2009-10-28 2009-10-28 军曹鱼精子超低温保存方法 Pending CN101711522A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910193584A CN101711522A (zh) 2009-10-28 2009-10-28 军曹鱼精子超低温保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910193584A CN101711522A (zh) 2009-10-28 2009-10-28 军曹鱼精子超低温保存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101711522A true CN101711522A (zh) 2010-05-26

Family

ID=42415827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200910193584A Pending CN101711522A (zh) 2009-10-28 2009-10-28 军曹鱼精子超低温保存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101711522A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102077823A (zh) * 2010-11-16 2011-06-01 佛山市生生水产股份有限公司 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法
CN104814005A (zh) * 2015-03-26 2015-08-05 谢光玉 一种重口裂腹鱼精液保存方法
CN107711822A (zh) * 2017-10-09 2018-02-23 安徽省农业科学院水产研究所 一种大鳞副泥鳅精子保存液、活化液和孵化方法
CN110892874A (zh) * 2019-12-04 2020-03-20 成都市农林科学院 一种花*和唇*的人工杂交繁殖方法
CN114557296A (zh) * 2022-02-28 2022-05-31 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种静水压法批量诱导大菱鲆三倍体的方法

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102077823A (zh) * 2010-11-16 2011-06-01 佛山市生生水产股份有限公司 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法
CN102077823B (zh) * 2010-11-16 2013-06-26 生生农业集团股份有限公司 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法
CN104814005A (zh) * 2015-03-26 2015-08-05 谢光玉 一种重口裂腹鱼精液保存方法
CN107711822A (zh) * 2017-10-09 2018-02-23 安徽省农业科学院水产研究所 一种大鳞副泥鳅精子保存液、活化液和孵化方法
CN110892874A (zh) * 2019-12-04 2020-03-20 成都市农林科学院 一种花*和唇*的人工杂交繁殖方法
CN114557296A (zh) * 2022-02-28 2022-05-31 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种静水压法批量诱导大菱鲆三倍体的方法
CN114557296B (zh) * 2022-02-28 2022-12-02 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种静水压法批量诱导大菱鲆三倍体的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Muchlisin Current status of extenders and cryoprotectants on fish spermatozoa cryopreservation
CN1295956C (zh) 鱼类精子冷冻保存的实用化方法
CN102077823B (zh) 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法
CN101711522A (zh) 军曹鱼精子超低温保存方法
Liu et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) to evaluate the quality of cryopreserved sperm in red seabream (Pagrus major)
CN104521943A (zh) 一种云斑尖塘鳢精子超低温冷冻保存及复苏方法
Liu et al. An efficient methodology for cryopreservation of spermatozoa of red seabream, Pagrus major, with 2‐mL cryovials
Rideout et al. The development of a sperm cryopreservation protocol for winter flounder Pseudopleuronectes americanus (Walbaum): evaluation of cryoprotectants and diluents
Pan et al. Development of cryopreservation for maintaining yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco sperm
Tian et al. Sperm cryopreservation of sex-reversed seven-band grouper, Epinephelus septemfasciatus
CN100569071C (zh) 中华鲟精子超低温冷冻保存的方法
Yavas et al. Effect of different thawing rates on motility and fertilizing capacity of cryopreserved grass carp (Ctenopharyngodon idella) sperm
CN114258911A (zh) 一种黄鳍鲷精子的冷冻保存溶液及冷冻保存方法
CN106818708B (zh) 棕点石斑鱼精子超低温冷冻保护剂及其保存方法
CN100435630C (zh) 鲈鱼冷冻精子诱导半滑舌鳎卵减数雌核发育方法
CN104604776A (zh) 达氏鲟人工授精液及其制备方法
CN108552161A (zh) 一种泥鳅精子的超低温冷冻保存液及其冷冻复苏方法和应用
He et al. Evaluation of activation and storage conditions for sperm of yellow drum Nibea albiflora
CN115088707A (zh) 一种高体鰤精子稀释液及其制备方法与应用
CN101948800B (zh) 一种大鲵精子保护剂
Horváth et al. Improved cryopreservation of sperm of paddlefish (Polyodon spathula)
CN103404508B (zh) 花*精子超低温冷冻保存和复苏方法
Khara et al. The effect of cations on sperm motility performance and fertilizing ability of silver carp Hypophtalmychtis molitrix
CN103518705A (zh) 一种黄颡鱼精液保存液及其制备方法
Khara et al. Effect of different activation solutions on motility and fertilizing ability of spermatozoa in common carp Cyprinus carpio Linnaeus, 1758

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20100526