CN112924561A - 一种中药组合物中多指标成分的检测方法 - Google Patents

一种中药组合物中多指标成分的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种中药组合物中多指标成分的检测方法，所述中药组合物中的多指标成分包括山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草酸。本发明采用双波长超高效液相检测方法，按照下述高效液相色谱条件进行检测：色谱柱：Waters cortecs T3或Agilent poroshell AQ9或Waters HSS T3或Thermo Accucore Vanquish或Waters ACQUITY CORTECS T3；DAD检测器，检测波长236‑240nm，278‑282nm；流动相A：0.03%‑0.05%磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱。本发明提供的检测方法，能够实现上述7种指标成分的有效分离，建立了标准、可靠的定量方法，为所述中药组合物的开发和质量控制提供了参考。

Description

一种中药组合物中多指标成分的检测方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种中药组合物中多指标成分的检测方法。
背景技术
清金化痰汤出自《杂病广要》引《医学统旨》，由明•叶文龄撰写，该方由黄芩、炒瓜蒌仁、栀子、橘红、甘草等11味药味组成。是一种主治清肺化痰的中医汤剂，治咳嗽，咯痰黄稠腥臭，或带血丝，面赤，鼻出热气，咽喉干痛，舌苔黄腻，脉象濡数。现多用于上呼吸道感染，急慢性支气管炎属痰热证者。
清金化痰汤作为中医药传承与发展过程中保留下来的中药方剂杰出代表之一，在现代临床上有着广泛的应用，尤其对以咳嗽咳痰为主要症状的呼吸道感染疗效显著。但是，目前清金化痰汤的质量控制较为简单，主要采用薄层色谱法对其化合物进行鉴别，或者采用高效液相色谱法对清金化痰汤主要成分中的单个化合物进行含量检测，不能全面反映清金化痰汤的质量。因此，开发一种可以同时检测清金化痰汤中多种指标成分的含量测定方法，实现对清金化痰汤中多个指标成分的控制，对今后清金化痰汤的开发和质量控制具有十分重要的意义。
发明内容
针对现有检测方法无法实现清金化痰汤中多个指标成分同时检测的问题，本发明提供一种中药组合物中多指标成分的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
一种中药组合物中多指标成分的检测方法，所述中药组合物中的多指标成分包括山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草酸，所述检测方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液和对照品溶液的配制：
将中药组合物的原料经提取后制得供试品溶液；
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品混合，用溶剂配制成对照品溶液；
（2）采用双波长检测方法，按照下述超高效液相色谱条件对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测，色谱条件为：
色谱柱：Waters cortecs T3或Agilent poroshell AQ9或Waters HSS T3或ThermoAccucore Vanquish或Waters ACQUITY CORTECS T3；
DAD检测器，检测波长236-240nm，278-282nm；
流动相A：0.03%-0.05%磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱。
本发明还提供一种优选的梯度洗脱条件：
0-12 min，95% -91%流动相A，5% -9%流动相B；
12-18 min，91%-90%流动相A，9%-10%流动相B；
18-25 min，90%-81%流动相A，10%-19%流动相B；
25-35 min，81%-78%流动相A，19%-22%流动相B；
35-42 min，78%-70%流动相A ，22%-30%流动相B；
42-47 min，70%-60%流动相A，30%-40%流动相B；
47-50 min，60%-55%流动相A，40%-45%流动相B；
50-52 min，55%-10%流动相A ，45%-90%流动相B；
52-54 min，10%-95%流动相A，90%-5%流动相B。
优选的梯度洗脱条件，可以提高各组分峰之间的分离度和检测的灵敏度，使检测结果定量准确，且精密度高。
本发明根据DAD检测器的全波长扫描特性，测定了供试品溶液的三维UHPLC-DAD光谱，优选检测波长为236-240 nm 、278-282nm，更优选238nm、280nm。
本发明对流动相体系进行了考察，结果显示水-乙腈作为流动相体系时分离效果更佳，且在水相中加入磷酸对基线的改善效果较好，加入其他酸如醋酸、甲酸等基线漂移，优选加入体积比0.03%-0.05%的磷酸水溶液，进一步优选加入体积比0.04%磷酸水溶液，即优选的流动相为以0.04%磷酸水溶液为A相，以乙腈为B相，梯度洗脱；
本发明还对色谱柱进行筛选，考虑到有效成分的极性及UHPLC的特性，分别考察了Agilent poroshell AQ9，Waters HSS T3，Waters cortecs T3、Thermo AccucoreVanquish、Waters ACQUITY CORTECS T3等不同色谱柱， 优选色谱柱Waters cortecs T3，更优选的色谱柱为Waters cortecs T3，（150mm×2.1mm，1.6μm）；
本发明考察了不同的柱温（20-30℃）、不同流速（0.25-0.4 mL/min），和不同的进样量（0.5-1.5 μL），结果显示，在色谱柱适用的范围内，各条件下待测成分的测定结果RSD值均小于2.7%
优选地，柱温 25 ℃；
优选地，流速 0.30 mL/min；
优选地，进样量 1μL。
所述中药组合物的原料为黄芩、栀子、炒瓜蒌仁、橘红、知母、桔梗、麦门冬、茯苓、川贝母、桑白皮和甘草。
优选地，中药组合物中多指标成分的检测方法，所述供试品溶液的配制包括如下步骤：
步骤a，取黄芩5.63 g，栀子5.63 g，甘草1.5 g，知母3.75 g，炒瓜蒌仁3.75 g，茯苓3.75 g，麦门冬4.5 g，桔梗7.5 g，橘红3.75 g，桑白皮3.75 g，川贝母3.75 g共46.51 g。第一煎加入8倍量水，加热回流30 min，120目筛趁热过滤，第二煎加入6倍量水，加热回流25min，120目筛趁热过滤，合并两煎液，65 ℃减压浓缩至85 ml即得中药组合物煎液；
步骤b，精密量取上述中药组合物煎液加入量瓶中，加入无水甲醇或乙醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，过滤，得供试品溶液。
所述对照品溶液是由山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成的混合溶液。
优选地，所述对照品溶液每1 mL中含山栀子苷B 249.6μg、新芒果苷212.3μg、栀子苷2120μg、芒果苷136.3μg、黄芩素118.0μg、汉黄芩素32.0μg、甘草酸202.5μg。
优选地，所述供试品溶液的配制：取所述中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇或乙醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
供试品溶液配制中，本发明对不同的稀释溶剂、萃取溶剂进行考察，考察了水、75%-100%甲醇和乙醇作为稀释溶剂，乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷等作为萃取溶剂时7种有效成分的含量。水作为稀释溶剂时色谱图中峰数量较少，采用乙酸乙酯、正丁醇中等极性溶剂萃取时，所得色谱图中峰数量也较少。最终优选100%甲醇或乙醇作为稀释溶剂，更优选100%甲醇。为了简便，除特殊指明外，下文中“甲醇”、“乙醇”均指无水甲醇或无水乙醇。
本发明所述检测方法还可用于所述中药组合物煎液中山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸等指标成分的含量测定。
本发明提供的中药组合物的检测方法，可以用于所述中药组合物的定性和定量检测。
根据古代医籍的描述，确定了清金化痰汤的君臣佐使，黄芩为该方的君药，其主要有效成分为黄芩素、汉黄芩素，具有解热抗炎的作用；栀子为该方的臣药，主要有效成分为山栀子苷B、栀子苷，具有抗炎、平喘的作用；知母为该方的佐药，其主要成分为新芒果苷、芒果苷，二者合用具有抗病毒作用；甘草为该方的使药，其主要成分为甘草苷、甘草酸，具有解毒、抗炎、镇咳作用，本发明对君臣佐使中作为君药的黄芩，臣药的栀子，佐药的知母，使药的甘草四味药的指标成分进行质量控制，同中国药典各药指标成分相比，君药黄芩增加了黄芩素、汉黄芩素的测定，臣药栀子增加了山栀子苷B的测定，佐药知母增加了新芒果苷的测定，从而更加全面的对该方进行质量控制。
采用现代化方法对中成药进行开发与研究具有重要意义，为中成药的质量提供一个客观、整体的评价依据。本发明采用UHPLC-DAD法对清金化痰汤中的7种成分进行含量测定，建立了标准、可靠的定量方法，为今后对清金化痰汤的开发和质量控制提供了参考。
附图说明
图1 实施例2专属性项下对照品溶液在238nm条件下的色谱图；
图2 实施例2专属性项下供试品溶液在238nm条件下的色谱图，峰1：山栀子B，峰2：新芒果苷，峰3：栀子苷， 峰4：芒果苷，峰5：甘草酸；
图3 实施例2专属性项下对照品溶液在280 nm条件下的色谱图；
图4 实施例2专属性项下供试品溶液在280 nm条件下谱图， 峰6：黄芩素, 峰7：汉黄芩素；
图5 实施例2专属性项下阴性对照溶液238nm条件下UHPLC 色谱图：（E）：238 nm条件下缺少栀子的清金化痰汤阴性对照溶液色谱图，（F）：238nm条件下对照品溶液色谱图，（G）：238 nm条件下空白对照溶液色谱图，（H）：238nm条件下供试品溶液色谱图，（I）：238 nm条件下缺少知母的清金化痰汤阴性对照溶液色谱图，（J）：238 nm条件下缺少甘草的清金化痰汤阴性对照溶液色谱图；
图6 实施例2专属性项下阴性对照溶液280nm条件下UHPLC色谱图：（K）：280 nm条件下空白对照溶液色谱图，（L）：280 nm条件下混合对照品溶液色谱图，（M）：280 nm条件下供试品溶液色谱图，（N）：280 nm条件下缺少黄芩的清金化痰汤阴性对照溶液色谱图；
图7 实施例4供试品溶液在238nm条件下色谱图；
图8 实施例5供试品溶液在236nm条件下色谱图；
图9 实施例6供试品溶液在240nm条件下色谱图；
图10 对比例1供试品溶液在238nm条件下色谱图；
图11 对比例2供试品溶液在238nm条件下色谱图；
图12 对比例3供试品溶液在200nm条件下色谱图。
具体实施方式：
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
仪器与试剂：
Aglient Technology 1290II超高效液相色谱仪（美国Aglient公司），AB135-S天平（METTLER TOLEDO仪器有限公司），KH200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），SHZ循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）。
山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸（均购自成都克洛玛生物科技有限公司纯度均≥98%）。
黄芩、栀子、炒瓜蒌仁、橘红、知母、桔梗、麦门冬、茯苓、川贝母、桑白皮、甘草均有市售。
实施例1
1.1 色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm 、280 nm。
表1 梯度洗脱程序：
Time (min) A (%) B (%)
0-12 95-91 5-9
12-18 91-90 9-10
18-25 90-81 10-19
25-35 81-78 19-22
35-42 78-70 22-30
42-47 70-60 30-40
47-50 60-55 40-45
50-52 55-10 45-90
52-54 10-95 90-5
1.2 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
1.3 供试品溶液的配制
步骤a，取黄芩5.63 g，栀子5.63 g，甘草1.5 g，知母3.75 g，炒瓜蒌仁3.75 g，茯苓3.75 g，麦门冬4.5 g，桔梗7.5 g，橘红3.75 g，桑白皮3.75 g，川贝母3.75 g共46.51 g。第一煎加入8倍量水，加热回流30 min，120目筛趁热过滤，第二煎加入6倍量水，加热回流25min，120目筛趁热过滤，合并两煎液，65 ℃减压浓缩至85 ml即得中药组合物煎液；
步骤b，取上述中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
1.4 阴性对照溶液制备：按照清金化痰汤配方分别称取除黄芩、栀子、知母、甘草外的其他药材，依组合物煎液制备方法提取，按上述供试品溶液配制方法制成阴性对照溶液。
1.5 将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液分别注入超高效液相色谱仪测定。
实施例2 方法学验证：
2.1 系统适应性试验
分别取对照品溶液和供试品溶液，按照1.1项下色谱条件进样分析，待测物色谱峰与其相邻色谱峰之间的分离度均大于1.5，理论塔板数以栀子苷计不低于2000，拖尾因子均在0.70-0.90之间，取1.2项下对照品溶液，连续进样6次，计算峰面积的RSD均小于2%，表明系统适用性良好。
2.2 专属性
按照1.1项下色谱条件进样分析混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，结果显示，山栀子B、栀子苷来自于栀子；新芒果苷、芒果苷来自于知母；黄芩素、汉黄芩素来自于黄芩；甘草酸来自于甘草，空白及阴性对照溶液在测定成分出峰时间处均无干扰，表明该方法专属性良好。
2.3 线性关系考察
分别精密量取1.2项下对照品溶液0.8 mL，1.6mL，3.2mL，4.0 mL，6.4mL，8.0mL置于10mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，配制成不同质量浓度的混合对照溶液，按1.1项下色谱条件进行分析，记录峰面积，以各质量浓度x (μg/mL) 为横坐标，峰面积A为纵坐标y，绘制标准曲线，计算回归方程。结果如表2所示，山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸在考察范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999。以对照品溶液逐级稀释法进样检测，以信噪比（S/N）为3:1和10:1为基准分别测得各化合物的检测限和定量限，结果见表2。
表2 7个指标成分线性关系考察
Figure 138867DEST_PATH_IMAGE001
2.4 精密度试验
重复性
精密量取同一批供试品溶液2.5 mL，5 mL，7.5 mL，按实施例1供试品溶液的配制方法操作，配制低、中、高3个浓度的供试品溶液，每一种浓度平行操作3份，按实施例1色谱条件进行分析，测定7种指标成分的峰面积，并计算含量和RSD，如表3所示，结果表明方法重复性良好。
日间精密度
精密量取同一批供试品溶液5 mL，按实施例1中供试品溶液的配制方法操作，制备相同浓度的供试品溶液9份，在实施例1色谱条件下，连续三天进样分析，测定7种指标成分的峰面积，并计算含量和RSD，如表3所示，结果表明方法日间精密度良好。
表3 精密度和稳定性结果
Figure 866127DEST_PATH_IMAGE002
2.5 加样回收率试验
取已知含量的供试品溶液9份，每份精密量取2.5 mL，分别按已知含量的50%、100%、150% 3个浓度水平加入对照品，按1.3项下供试品溶液的配制方法制备低、中、高3个不同浓度的供试品溶液，每一种浓度平行制备3份，按实施例1色谱条件进样分析，测定7种指标成分的峰面积，并计算各成分的平均回收率和RSD，结果如表4所示。
表4 7个指标成分加样回收率试验结果(n=9)
Figure 645864DEST_PATH_IMAGE003
2.6 稳定性试验
取同一批清金化痰汤煎液按1.3项下供试品溶液的配制方法操作，制备成供试品溶液，按实施例1色谱条件分别于 0，2，4，6，8，10，12，24 h进样分析，记录峰面积，计算RSD值，各成分在24 h内稳定 (RSD<2.0%)，表明供试品在室温放置24 h内稳定。
2.7 耐用性
取实施例1配制的对照品溶液和供试品溶液按实施例1色谱条件进样分析。参考分别考察色谱条件的不同进样体积（0.5 μL，1μL ，1.5μL），检测波长（236 nm，238 nm，240 nm）、（278 nm，280 nm，282 nm），不同流速（0.25 ml·min-1，0.30 ml·min-1，0.35 ml·min-1），不同柱温（20℃，25℃，30℃），不同酸度（0.02%磷酸-水、0.03%磷酸-水、0.04%磷酸-水、0.05%磷酸-水、0.1%磷酸-水）条件下，测定待测成分的总含量并计算不同条件的RSD。结果表明，各条件下待测成分的测定结果RSD值均小于2.7%，说明方法耐用性良好。
实施例3 样品含量测定
分别取按1.2项下配制的对照品溶液、按1.3项下配制的10批供试品溶液，按实施例1色谱条件进样分析，记录各成分峰面积，采用外标法将各成分峰面积计算各批次样品中有效成分的含量。含量测定结果见表5。
表5 10批供试品溶液中7种指标成分含量
Figure 103390DEST_PATH_IMAGE004
实施例4
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.03%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.4mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：30 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm、280nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例5
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.05%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.25mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：236 nm、278nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例6
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.05%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.25mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：30 ℃；进样量：1 μL；检测波长：240 nm、282nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例7
（1）色谱条件
色谱条件：Thermo Accucore Vanquish （2.1×100mm，1.5μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm 、280 nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例8
（1）色谱条件
色谱条件：Waters ACQUITY CORTECS T3（2.1×100 mm，2.7 μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm 、280 nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例9
（1）色谱条件
色谱条件：Agilent poroshell AQ9(2.1 nm×100 mm，2.7 μm)；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm 、280 nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
实施例10
（1）色谱条件
色谱条件：Waters HSS T3(2.1 nm×100 mm，1.8 μm)；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm 、280 nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
试验结果证明，实施例4-10各成分色谱峰完全分离且峰形良好，考察范围内线性关系良好，方法具有较好的重复性和稳定性。
对比例1
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1；柱温：25 ℃；进样量：1 μL；检测波长：238 nm、280nm；
梯度洗脱程序：同表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，用二氯甲烷萃取3次，每次10ml，合并二氯甲烷层，蒸干，残渣加2ml的甲醇溶解，离心取上清，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液和供试品溶液分别注入UHPLC测定。
对比例2
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-甲醇（B）；流速：0.3mL/min；柱温：25 ℃；进样量：1μL；检DAD测波长：238 nm，梯度洗脱程序如表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液、供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪测定。
对比例3
（1）色谱条件
色谱条件：Waters cortecs T3色谱柱（150mm×2.1mm，1.6μm）；流动相：0.04%磷酸水（A）-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；柱温：25 ℃；进样量：1μL；检DAD测波长：200 nm，梯度洗脱程序如表1。
(2) 对照品溶液的配制
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的配制
取1.3项下中药组合物煎液，摇匀，精密量取5 mL，置20mL的瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心并取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）将对照品溶液、供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪测定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种中药组合物中多指标成分的检测方法，所述多指标成分包括山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草酸，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液和对照品溶液的配制：
将中药组合物的原料经提取后制得供试品溶液；
取山栀子苷B、新芒果苷、栀子苷、芒果苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸对照品混合，用溶剂配制成对照品溶液；
（2）采用双波长检测方法，按照下述超高效液相色谱条件对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测，色谱条件为：
色谱柱：Waters cortecs T3或Agilent poroshell AQ9或Waters HSS T3或ThermoAccucore Vanquish或Waters ACQUITY CORTECS T3；
DAD检测器，检测波长236-240nm，278-282nm；
流动相A：0.03%-0.05%磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
0-12 min，95% -91%流动相A，5% -9%流动相B；
12-18 min，91%-90%流动相A，9%-10%流动相B；
18-25 min，90%-81%流动相A，10%-19%流动相B；
25-35 min，81%-78%流动相A，19%-22%流动相B；
35-42 min，78%-70%流动相A ，22%-30%流动相B；
42-47 min，70%-60%流动相A，30%-40%流动相B；
47-50 min，60%-55%流动相A，40%-45%流动相B；
50-52 min，55%-10%流动相A ，45%-90%流动相B；
52-54 min，10%-95%流动相A，90%-5%流动相B。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，检测波长238nm，280nm。
4.根据权利要求1或2所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，流动相A为0.04%磷酸水溶液。
5.根据权利要求1或2所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，流速0.25-0.4 mL/min，柱温20-30℃，进样体积0.5-1.5µL。
6.根据权利要求5所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，流速优选0.3mL/min，柱温优选25℃，进样体积优选1µL。
7.根据权利要求1或2所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters cortecs T3 ，优选Waters cortecs T3，150mm×2.1mm，1.6μm。
8.根据权利要求1或2所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的原料为黄芩、栀子、炒瓜蒌仁、橘红、知母、桔梗、麦门冬、茯苓、川贝母、桑白皮和甘草。
9.根据权利要求1所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的配制包括如下步骤：
步骤a， 取黄芩5.63 g，栀子5.63 g，甘草1.5 g，知母3.75 g，炒瓜蒌仁3.75 g，茯苓3.75 g，麦门冬4.5 g，桔梗7.5 g，橘红3.75 g，桑白皮3.75 g，川贝母3.75 g共46.51 g，第一煎加入8倍量水，加热回流30 min，120目筛趁热过滤，第二煎加入6倍量水，加热回流25min，120目筛趁热过滤，合并两煎液，65 ℃减压浓缩至加85 ml即得中药组合物煎液；
步骤b，精密量取步骤a的中药组合物煎液加入量瓶中，加入无水甲醇或乙醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，过滤，得供试品溶液。
10.根据权利要求1所述的中药组合物中多指标成分的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液每1 mL中含山栀子苷B 249.6 μg、新芒果苷212.3 μg、栀子苷2120 μg、芒果苷136.3 μg、黄芩素118.0 μg、汉黄芩素32.0 μg、甘草酸202.5 μg。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060216251A1 (en) * 2005-03-24 2006-09-28 Tracie Martyn International, Llc Topical formulations and methods of use
CN104825872A (zh) * 2015-05-07 2015-08-12 河南省康星药业股份有限公司 一种清瘟败毒超微粉的常温制备及薄层鉴别方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060216251A1 (en) * 2005-03-24 2006-09-28 Tracie Martyn International, Llc Topical formulations and methods of use
CN104825872A (zh) * 2015-05-07 2015-08-12 河南省康星药业股份有限公司 一种清瘟败毒超微粉的常温制备及薄层鉴别方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YI PENG等: "Analysis of the HPLC Fingerprint and QAMS for Sanhuang Gypsum Soup", 《JOURNAL OF ANALYTICAL METHODS IN CHEMISTRY》 *
李玉娟等: "RP-HPLC测定酸枣仁汤中芒果苷和甘草酸的含量", 《中成药》 *
校军彦等: "RP-HPLC同时测定健阳片中3种成分", 《中国现代中药》 *
邓俊杰: "HPLC 双波长法同时测定炎热清片中6种有效成分的含量", 《中国现代应用药学》 *

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