CN112920270A - 一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用 - Google Patents

一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基因工程领域，本发明公开了一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用，该抗体包括：轻链CDR1‑3序列和重链CDR1‑3序列；轻链CDR1‑3和重链CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑3之一、SEQ ID NO.4‑6之一、SEQ ID NO.7‑9之一、SEQ ID NO.10‑12之一、SEQ ID NO.13‑15之一和SEQ ID NO.16‑18之一所示。本发明提供的抗体能与引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体特异性结合，且具有较好的灵敏度、活性和亲和力，可用于胶体金法检测沙眼衣原体的标记抗体使用，从而用于沙眼衣原体的早期筛查、诊断与治疗。

Description

一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用
技术领域
本发明涉及基因工程领域，尤其涉及一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用。
背景技术
沙眼衣原体是一种在细胞内寄生的微生物，大小为250-450nm，革兰阴性，通过细菌滤器、发育周期独特、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；A、B/Ba、C型主要引起沙眼，D-K型主要引起泌尿生殖道感染。另外3个则与性病性淋巴肉芽肿(Lymphor Ganuloma Venereun，LGV)的发生有关。
沙眼衣原体引起的泌尿生殖道感染是我国目前最常见的性传播疾病之一。据世界卫生组织报道，全球每年约有1.3个亿新增病例。超过70％的泌尿生殖道沙眼衣原体感染无症状，因此容易被忽视，延误诊治，若未及时治疗可造成慢性持续性感染，引起盆腔炎、异位妊娠和输卵管性不孕等严重并发症。而长期反复的生殖道沙眼衣原体感染，可增加宫颈鳞状上皮细胞癌和艾滋病发病的风险。目前，沙眼衣原体仍缺乏有效疫苗，因此对沙眼衣原体的防治主要依赖于早期筛查、早诊断和早治疗，选择高效的实验室检测诊断方法对控制沙眼衣原体感染具有重要的影响。
目前，对于沙眼衣原体病原学检测主要包括直接涂片法、细胞培养法、核酸检测法和抗原检测法。直接涂片法应用于眼部感染标本的敏感性可达95％，但用于尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断时其敏感性和特异性均低。细胞培养法被公认是检测沙眼衣原体感染的金标准，是检测衣原体活体唯一的实验方法，该方法敏感性受标本采集、储存、运输以及污染的影响较大，且耗时长，费用大，技术设备要求高，不适合处理大量样本。核酸检测法(PCR)灵敏度高，特异性好，检测速度也较快，是沙眼衣原体病原体检测的主要方法之一，但PCR法容易污染出现假阳性，而且设备昂贵。抗原检测方法主要包括酶免(EIA)、直接免疫荧光法 (DFA)和免疫层析(ICA)。EIA法因操作简便、可自动化判读，适宜标本，但需耗费时间较长。DFA法适用多种标本，具有敏感、特异、快速的优点，但由于判读受主观因素影响，且荧光标记物不稳定，不适宜标本筛查。ICA法(如胶体金法)因操作简单，省时快捷，对场地和设备要求低，目前在我国临床上被广泛应用。
胶体金法检测沙眼衣原体，主要利用抗原抗体特异性结合的原理，因此，筛选出灵敏度高，特异性好的单克隆抗体是提高胶体金法检测沙眼衣原体产品质量的关键。目前用于检测沙眼衣原体的单克隆抗体在灵敏度、特异性及亲和力上都存在一些缺陷，需要不断地开发更好的抗沙眼衣原体单克隆抗体。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用。本发明提供的抗体能与引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体特异性结合，且具有较好的灵敏度、活性和亲和力，可用于胶体金法检测沙眼衣原体的标记抗体使用，从而用于沙眼衣原体的早期筛查、诊断与治疗。
本发明的具体技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，包括：
轻链CDR1-3序列；和
重链CDR1-3序列。
所述轻链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3之一所示；
所述轻链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6之一所示；
所述轻链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.7-9之一所示；
所述重链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.10-12之一所示；
所述重链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.13-15之一所示；
所述重链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.16-18之一所示。
作为优选，
所述轻链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述轻链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述轻链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
所述重链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；
所述重链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；
所述重链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。
最优选地，包含如SEQ ID NO.20和28所示的氨基酸序列。
第二方面，本发明提供了一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，其各骨架区的氨基酸序列与上述的抗体或功能性片段具有至少80％的同源性。
作为优选，各骨架区的氨基酸序列与上述的抗体或功能性片段具有至少95％的同源性。
作为优选，所述抗体为鼠源抗体或人源化抗体。
作为优选，所述抗体或功能性片段还包含恒定区。
作为优选，所述恒定区选自鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM中的一种。
第三方面，本发明提供了上述的抗体或功能性片段在制备检测沙眼衣原体试剂盒中的应用。
第四方面，本发明提供了一种载体，其含有核酸分子，所述核酸分子编码上述的抗体或功能性片段。
在本发明公开了上述抗体或其功能性片段的氨基酸序列基础上，本领域技术人员根据氨基酸对应的密码子容易获得编码上述抗体或其功能性片段的核酸序列，并根据密码子的简并性，可以得到多种编码上述抗体或其功能性片段的核酸序列，无论是何种核酸序列，只要其编码上述抗体或其功能性片段，其均属于本发明的保护范围。
第五方面，本发明提供了一种宿主细胞，含有上述的载体。
第六方面，本发明提供了一种生产能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或其功能性片段的方法，包括：培养所述的宿主细胞，从培养基中或从所培养的宿主细胞中分离纯化得到所述抗体或功能性片段。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：本发明提供的抗体能与引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体特异性结合，且具有较好的活性和亲和力，灵敏度高，可用于胶体金法检测沙眼衣原体的标记抗体使用，从而用于沙眼衣原体的早期筛查、诊断与治疗。
附图说明
图1为实施例所得抗体的电泳图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
总实施例
本发明的具体技术方案为：
一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，包括：
轻链CDR1-3序列；和
重链CDR1-3序列。
所述轻链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3之一所示；
所述轻链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6之一所示；
所述轻链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.7-9之一所示；
所述重链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.10-12之一所示；
所述重链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.13-15之一所示；
所述重链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.16-18之一所示。
一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，其各骨架区的氨基酸序列与上述的抗体或功能性片段具有至少80％的同源性。作为优选，具有至少95％的同源性。
作为优选，所述抗体为鼠源抗体或人源化抗体。
作为优选，所述抗体或功能性片段还包含恒定区。进一步地，所述恒定区选自鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM中的一种。
上述的抗体或功能性片段在制备检测沙眼衣原体试剂盒中的应用。
一种载体，其含有核酸分子，所述核酸分子编码上述的抗体或功能性片段。
一种宿主细胞，含有上述的载体。
一种生产能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或其功能性片段的方法，包括：培养所述的宿主细胞，从培养基中或从所培养的宿主细胞中分离纯化得到所述抗体或功能性片段。
本发明抗体的L1-L3轻链CDRs以及抗体的H1-H3重链CDRs见表1-2，相应的核苷酸序列见表3。
表1：轻链可变区L1-L3序列
Figure BDA0002940791180000041
表2：重链可变区H1-H3序列
Figure BDA0002940791180000042
表3：轻重链可变区的多核苷酸和氨基酸序列
Figure BDA0002940791180000043
Figure BDA0002940791180000051
本发明抗体的具体实施方案包含上文所列CDRs和/或FRs的氨基酸序列相同的一个或多个氨基酸序列。在进一步的实施方案中，该抗体包含L1H1，L1H2，L1H3，L2H1，L2H2，L2H3， L3H1，L3H2，L3H3中任何之一的CDRs。
实施例1：抗沙眼衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选
1.1小鼠免疫
将纯化后的沙眼衣原体脂多糖(1mg/ml)与氢氧化铝佐剂按1∶1的体积通过注射器混匀，并乳化完全，选择6-8周龄的BALB/c雌鼠进行首次皮下免疫，免疫4只小鼠，每只小鼠注射100ul 佐剂。每隔14天免疫一次，皮下和腹腔交替进行，免疫3次后，加强免疫进行细胞融合。
1.2脾细胞与骨髓瘤细胞的融合
1.2.1饲养细胞制备：
小鼠摘眼球放血处死，浸泡于75％酒精中消毒5min，固定于泡沫板上，剪开小鼠腹外皮肤，暴露其腹膜，在腹腔中注入37℃预热的DMEM无血清培养基5ml，轻揉小鼠腹腔1分钟，悬浮腹腔细胞，吸出腹腔液；剪开小鼠胸腔取胸腺研磨后过滤收集悬液，与腹腔液合并离心，沉淀物用HAT完全培养液重悬，得到饲养细胞悬液。
1.2.2小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的培养：
把小鼠骨髓瘤细胞SP2/0用含体积分数为10％FBS的DMEM培养基进行传代培养，细胞融合前保证小鼠骨髓瘤细胞SP2/0处于对数生长期，并在前一天换液以保证生长状态良好用于细胞融合。
1.2.3脾细胞制备：
取经上述免疫的BALB/c雌鼠处死，泡75％的酒精中消毒5min后剖腹，无菌取出脾脏。用不完全的培养基洗一次，置平皿中不锈钢筛网上，用注射器针芯研磨成细胞悬液，铜网过滤后离心，弃上清用无血清培养液重复离心一次，待用。
1.2.4脾细胞与骨髓瘤细胞融合：
采用聚乙二醇融合法。将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0混合均匀，离心洗涤细胞，去除上清液，置于37℃水浴预热1min，加入1ml 37℃预温的PEG 4000，90s内加完，然后静止1min。在1min内加入1ml DMEM无血清培养液，之后直接加入DMEM无血清培养液终止PEG作用；离心，弃上清；然后用HAT培养基重悬沉淀并加入饲养细胞悬液，接种到96孔细胞培养板中，铺板12块。
1.3杂交瘤单克隆抗体的筛选
融合细胞于96孔板中培养7天，换液两次，取上清进行酶免间接法检测，包被抗原为沙眼衣原体脂多糖，根据检测结果选择OD相对较高的孔进行有限稀释，静置培养7天，再取上清进行酶免间接法检测，如此重复2-3次，当检测孔全部为阳性且孔内细胞为单克隆时挑OD 最高的细胞孔进行扩培保种，得到抗沙眼衣原体杂交瘤细胞株5D6。
实施例2：表达质粒的构建
1抗体基因制备
从抗沙眼衣原体杂交瘤细胞株5D6中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物。按照 mRNA抽提试剂盒操作规程，提取杂交瘤细胞株的mRNA。然后将提取后的mRNA反转录成cDNA。然后以加了polyA的cDNA为模板，PCR扩增抗体重、轻链可变区的基因。PCR 产物连接到PMD 18-T载体中，连接产物转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取重链和轻链的基因克隆各4个克隆送基因测序公司进行测序。
2抗体基因序列的分析
将上述测序得到的基因序列放在IMGT抗体数据库中进行分析，并利用NVTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中重链扩增出的可变区基因序列为 354bp，前面有48bp信号肽序列；轻链扩增出的可变区序列为324bp，前面有48bp信号肽序列。
3重组抗体表达质粒的构建
pcDNA 3.1为构建的重组抗体真核表达载体，根据上述pMD 18-T中抗体可变区基因测序结果，设计抗体VH和VL的基因引物，两端分别带有EcoRI、BamHI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增出0.7KB的重链基因片段和1.4KB的轻链基因片段。扩增得到的重链基因片段，轻链基因片段以及pcDNA 3.1表达载体分别用EcoRI、BamHI，进行双酶切，将片段和载体回收后进行连接，得到重链和轻链的重组表达质粒。
实施例3：重组抗体的表达纯化
1抗体的瞬时表达
接种5×105/ml的Expi293细胞至1L摇瓶中，接种体积为400ml，培养基为义翘的SMM-293TII 培养基，置于37℃，5％CO2，转速为120rpm的摇床中培养。待细胞密度长至2×106/ml，细胞活率＞98％，进行转染实验。转染过程中使用PEI作为转染试剂，重轻链比例为1∶1，PEI 和DNA的比例为5∶1。PEI和DNA的混合后，静置10分钟加入到细胞中，放入37℃，5％CO2摇床中培养。转染24h后添加5％的补料液，在转染后第5天收集细胞培养上清进行抗体纯化。
2抗体的分离纯化
收集细胞培养上清进行离心(10000rpm，20min)除去细胞及细胞碎片，上清移至干净的玻璃瓶中，再用0.45um的滤膜过滤后，用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。纯化后得到的抗体取5ug跑还原性SDS-PAGE，电泳图如图1所示，图中显示两条带，1条为分子量为50KD，另一条分子量为25KD。
实施例4：抗体ELISA活性测试
间接ELISA方法检测实施例3制备的抗沙眼衣原体重组抗体，测定其OD450值，以抗沙眼衣原体抗体OD450值/阴性对照OD450值＞2.5为阳性值。如表4所示：
表4：不同抗原浓度下实施例3制备的抗沙眼衣原体重组抗体的OD450值
Figure BDA0002940791180000081
由表中数据可知，抗沙眼衣原体重组抗体组合L1H2活性最佳，ELISA灵敏度可以达到 0.031ug/ml。
实施例4：抗体的性能检测
用胶体金双抗体夹心法免疫亲和层析方法进行灵敏度的测定，在最佳的浓度下将沙眼衣原体单抗划膜于尼龙膜上，胶体金标记纯化的沙眼衣原体重组单抗，制备免疫亲和层析条。同时，配制4-64×103IFU/ml不同浓度的沙眼衣原体标准品，测试3种不同抗体制备的胶体金检测条，结果呈阳性的最低样品的浓度即为该抗体的灵敏度。
表5抗沙眼衣原体重组抗体灵敏度检测
Figure BDA0002940791180000082
Figure BDA0002940791180000091
金标法检测抗沙眼衣原体重组抗体不同组合的灵敏度结果显示，L1H2组合重组抗体制备的沙眼衣原体检测试剂盒的灵敏度比目前已公开的检测试剂盒更高，可以达到2×103IFU/ml。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
序列表
<110> 杭州隆基生物技术有限公司
<120> 一种抗沙眼衣原体重组抗体及其应用
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Phe Ile Ser Ala Ala His Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
cagatcgtgc tgacccagtc ccccgccctc atgagcgctt cgctgggcga gagggtgacc 60
atgcagtgca ccgcctctag cagcgtgtcc tcctctgtga tcttctggta tcagcagaag 120
ccaggctctt ctttcaagct gtggatctac tccacatcca cactcgcttc cgtggtgcca 180
acacggttct ccggcagcgg ctctggctac tcttacagcc tgacaatcag cacaatggag 240
gccgacgacg ctgctacata ctactgcaga cagtaccacc ggtctccatt caccttcggc 300
ggcggcacaa agttagaaat caag 324
<210> 20
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Gln Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Val Ile Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Phe Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Val Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Arg Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
cagatcgtgc tgacccagtc tcccgccctc atgagcgcct ctctgggcga gagagtgaca 60
atgcagtgca ccgctacatc cagcgtgtcc tctagcttca tcttctggta tcagcagaag 120
cctggctctt ccttcaagct gtggatctac agcacctcta acatcgcttc cgtggtgcca 180
acacggttct ccggctccgg ctctggctac tcttacagcc tgacaatcag cacaatggag 240
gccgacgacg ccgccacata ctactgccac cagtaccaca agtccccttt cacattcggc 300
ggcggcacaa agctggaaat caag 324
<210> 22
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Gln Cys Thr Ala Thr Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Ile Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Phe Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Ile Ala Ser Val Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Lys Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
cagatcgtgc tgacccagtc tcccgccctg atgagcgcga gcctgggcga gagggtgacc 60
atgcagtgca ccgcttcctc ttccgtgtct agctccttca tcttctggta tcagcagaag 120
ccaggctcct ctttcaagct gtggatctac tccacatcta acctcgcttc cgtggtgcca 180
acacggttct ctggctctgg cagcggctac tcttacagcc tgacaatcag cacaatggag 240
gccgacgacg ccgctacata ctactgccac cagtaccacc ggtccccatt cacattcggc 300
ggcggcacaa agctggaaat caag 324
<210> 24
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Gln Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Ile Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Phe Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Val Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
caggtgcagc tgcgggagtc cggccccggc ctgtctgctc catcccagtc cctgtctatc 60
acatgctacg tgagcggccc ttctctcaga aactacaacg tgcactgggt gagacagcca 120
ccaggcaagg gcctcgaatg gctcggcgtg atctggggcc tcggcagcac aaactacaac 180
agcgccctga tgtctaggct gagcatctct aaggacaact ccaagaccca ggtgttcctc 240
aagatgaact ctctgcagac atacgacacc gctatgtact actgcgctag attcatcacc 300
gccgctcacg gcttcgctta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc cgcc 354
<210> 26
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ser Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Tyr Val Ser Gly Pro Ser Leu Arg Asn Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Leu Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Thr Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Ile Thr Ala Ala His Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 27
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
caggtgcagc tgcgggagtc tggccccggc ctgtccgctc catcccagag cctgtctatc 60
acatgctacg tgtccggctt ctctctccac aactacaacg tgcactgggt gaggcagcca 120
ccaggcaagg gcctggaatg gctcggcgtg atctggccac tcggctccac aaactacaac 180
agcgccctca tgagtcgtct gagcatcagc aaggacaact ctaagaccca ggtgttcctc 240
aagatgaaca gcctgcagac atacgacacc gctatgtact actgcgctag attcatctcc 300
gccgctgccg gcttcgctta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgag cgcc 354
<210> 28
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ser Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Tyr Val Ser Gly Phe Ser Leu His Asn Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Pro Leu Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Thr Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Ile Ser Ala Ala Ala Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 29
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
caggtgcagc tgcgggagtc tggcccaggc ctgagcgccc catcccagag cctgtctatc 60
acatgctacg tgtccggctt ctccctgaga aactacaacg tgcactgggt gaggcagcca 120
cccggcaagg gcctggaatg gctcggcgtg atctgggccc tcggctctac caactacaac 180
tccgctctca tgagcagact gtccatctcc aaggacaact ctaagacaca ggtgttcctc 240
aagatgaaca gcctgcagac atacgacacc gctatgtact actgcgctag attcatcagc 300
gccgctcacg gcttcgctta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc tgcc 354
<210> 30
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ser Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Tyr Val Ser Gly Phe Ser Leu Arg Asn Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Leu Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Thr Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Ile Ser Ala Ala His Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115

Claims (10)

1.一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，其特征在于包括：
轻链CDR1-3序列；和
重链CDR1-3序列；
所述轻链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3之一所示；
所述轻链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6之一所示；
所述轻链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.7-9之一所示；
所述重链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.10-12之一所示；
所述重链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.13-15之一所示；
所述重链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.16-18之一所示。
2.如权利要求1所述的抗体或功能性片段，其特征在于：
所述轻链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述轻链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述轻链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
所述重链CDR1序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；
所述重链CDR2序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；
所述重链CDR3序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。
3.如权利要求2所述的抗体或功能性片段，其特征在于：包含如SEQ ID NO.20和28所示的氨基酸序列。
4.一种能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或功能性片段，其特征在于：各骨架区的氨基酸序列与权利要求1所述的抗体或功能性片段具有至少80%的同源性。
5.如权利要求1-4之一所述的抗体或功能性片段，其特征在于：所述抗体为鼠源抗体或人源化抗体。
6.如权利要求5所述的抗体或功能性片段，其特征在于：所述抗体或功能性片段还包含恒定区。
7.如权利要求1-4之一所述的抗体或功能性片段在制备检测沙眼衣原体试剂盒中的应用。
8.一种载体，其含有核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码如权利要求1-6之一所述的抗体或功能性片段。
9.一种宿主细胞，其特征在于：含有如权利要求8所述的载体。
10.一种生产能与沙眼衣原体特异性结合的抗体或其功能性片段的方法，其特征在于包括：培养如权利要求9所述的宿主细胞，从培养基中或从所培养的宿主细胞中分离纯化得到所述抗体或功能性片段。
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