CN112903888A - 一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为缬沙坦的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为20～10000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中缬沙坦的浓度。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法。
背景技术
缬沙坦是一种非肽四唑衍生物，是血管紧张素II 1型(AT1)受体的选择性拮抗剂。缬沙坦主要治疗轻度到中度的高血压，相比血管紧张素转化酶抑制药ACE，对肾素-血管紧张素系统的选择性抑制作用更强。缬沙坦的疗效与年龄、性别、种族无关，每天服用的剂量范围为80mg至320mg，每天服用一次。口服缬沙坦后，2-4h内达到最大血浆浓度(Cmax)。绝对生物利用度约为25％(10～35％)。食物使药物暴露量(以AUC计)减少约40％，使Cmax减少约50％。受试者单剂量口服缬沙坦10mg、30mg、100mg或300mg，可导致受试者肾素活性的线性增加，血管紧张素II水平在服用4h后达到峰值。
缬沙坦静脉注射后稳态分布容积约为17升，不会广泛分布到组织中。与血清蛋白的高度结合率(95％)，主要与血清白蛋白结合。缬沙坦在静脉给药后呈现双指数衰减，平均消除半衰期约为6h。缬沙坦主要以原型排泄，约20％以代谢物的方式排泄。主要的代谢物为4-羟基戊酰基缬沙坦，约占给药剂量的9％，重组CYP450酶的体外代谢研究表明，CYP2C9同工酶是形成4-羟基戊酰基缬沙坦的关键，缬沙坦在临床相关浓度下不抑制CYP450同工酶。因为缬沙坦经CYP450酶途径的代谢有限，基于CYP450的药物相互作用可能性低。
缬沙坦作为口服溶液使用时，主要通过粪便(约83％的剂量)和尿液(约13％的剂量)回收。静脉给药后，缬沙坦的血浆清除率约为2L/h，肾脏清除率约为0.62L/h(约占总清除率的30％)。目前，现有关于缬沙坦测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。
为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：
(1)血浆样本预处理：
血浆以K2EDTA为抗凝剂，以缬沙坦-d3为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，混匀后加入800μL甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；
(2)试样测定：
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中缬沙坦和内标缬沙坦-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的缬沙坦浓度。
液相色谱测定条件为：色谱柱为Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为甲醇：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.6mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min；
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为60Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，缬沙坦和内标缬沙坦-d3的去簇电压均为30eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室入口电压均为10eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞电压均为25eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室出口电压均为25eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 436.0→m/z 291.1，其为缬沙坦；和m/z 439.3→m/z 294.1，其为缬沙坦-d3。
优选的，所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：
优选的，所述步骤(2)中，采用内标法，以缬沙坦和内标缬沙坦-d3的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的缬沙坦的浓度。
优选的，所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中，并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品，所述零浓度样品中含有内标缬沙坦-d3溶液，不含缬沙坦溶液，用于排除内标缬沙坦-d3溶液对检测结果造成的干扰；所述空白样品中不含缬沙坦溶液和内标缬沙坦-d3溶液，用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰；
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为0.4ng/μL、1ng/μL、2ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、120ng/μL、200ng/μL的缬沙坦溶液至最低定量下限样本、标样1～6、最高定量上限样本中，分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，将上述十份样品分别混匀，再分别向除空白样品外的九份样品中加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，向空白样本中加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，再将上述十份样品分别混匀，再向十份样本中分别加入800μL的甲醇，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为10份标准样品待检测。
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中的缬沙坦和内标缬沙坦-d3的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的缬沙坦的浓度。
进一步的，所述步骤(3)中的液相色谱测定条件还包括：自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)预处理方法简便，两步有机溶液萃取，适用于常规测定；
(2)专属性强：在本实验所采用的色谱条件下，缬沙坦保留时间为0.927min左右，内标缬沙坦-d3保留时间在0.919min左右，缬沙坦和内标缬沙坦-d3的峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳；
(3)灵敏度高：血浆最低定量限为20ng/mL，能准确测定血浆中缬沙坦的浓度，灵敏度高，特异性强；
(4)本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为缬沙坦的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为20～10000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％。
附图说明
图1为HPLC-MS/MS法测得的缬沙坦在人血浆中的标准曲线图；
图2为人空白血浆的HPLC-MS/MS图；
图3为人空白血浆加入缬沙坦-d3的HPLC-MS/MS图；
图4为人空白血浆加入缬沙坦和缬沙坦-d3的HPLC-MS/MS图；
图5为健康受试者口服缬沙坦药物后血浆样本再加入内标缬沙坦-d3的HPLC-MS/MS图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例：人类K2EDTA血浆中缬沙坦浓度的测定
一、实验材料与分析设备缬沙坦(分析物):TLC Pharmaceutical Standards或相同、更高等级的标准品缬沙坦-d3(内标):Toronto Research Chemicals或相同、更高等级的标准品使用试剂见下表1：
表1 试剂明细
注：亦可使用相同级别或更高级别的试剂
使用分析设备见下表2：
表2 使用设备明细
| 组件 | 型号 | 制造商 |
| Binarypump(二元泵) | ACPump | ABSCIEX |
| Degasser(脱气器) | Degasser | ABSCIEX |
| Columnoven(恒温柱箱) | ACColumnoven | ABSCIEX |
| Autosampler(自动取样器) | ACAutosampler | ABSCIEX |
| Samplerack(样本架) | RackChanger | ABSCIEX |
| Massspectrometer(质谱仪) | TRIPLEQUAD<sup>TM</sup>6500+ | ABSCIEX |
| Dataprocessor(数据处理器) | Analyst1.6.3(software) | ABSCIEX |
相同的LC/MS/MS系统亦可被使用。
二、液质条件
1、液相色谱条件
色谱柱为Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为甲醇：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.6mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min；
自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
表3 梯度洗脱程序
2、质谱条件
离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为60Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，缬沙坦和内标缬沙坦-d3的去簇电压均为30eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室入口电压均为10eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞电压均为25eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室出口电压均为25eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z436.0→m/z 291.1，其为缬沙坦；和m/z 439.3→m/z 294.1，其为缬沙坦-d3。
三、实验过程
1、缬沙坦标准溶液的配制
缬沙坦标准曲线用标准溶液(含贮备液及工作液)的称量及配制过程如下：
| 称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
| 10.468 | 10343 | 1000 |
按上述配制过程得1000ng/μL的缬沙坦贮备液，再以体积比为1：1的甲醇水溶液依次稀释配制缬沙坦标准溶液，具体稀释浓度见下表4：
表4 缬沙坦标准溶液配制浓度
a：直接从缬沙坦(分析物)制备而成
缬沙坦标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存，体积可视需要依比例增加或减少。
2、缬沙坦-d3内标标准溶液的配制
缬沙坦-d3内标标准溶液的称量及配制过程如下：
| 称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
| 1.053 | 10164 | 100 |
按上述配制过程得100ng/μL的缬沙坦-d3贮备液，再以体积比为1：1的甲醇水溶液稀释配制成浓度为10ng/μL缬沙坦-d3内标溶液，具体稀释浓度见下表5：
表5 缬沙坦-d3标准溶液配制浓度
a：直接从缬沙坦-d3(内标)制备而成
b：用于样本制备步骤
缬沙坦-d3内标标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存，体积可视需要依比例增加或减少。
3、线性试验
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻；转移100μL的空白血浆10份至96深孔板中(每一个标准曲线样本、空白样本-00及零浓度样本-0)，依下表6所列，分别精密加入不同浓度的缬沙坦标准溶液5μL或稀释溶液制备每一个样本并混匀，配成不同浓度的含药血浆，按“血浆样本预处理”操作。计算缬沙坦峰面积As和缬沙坦-d3峰面积Ai的比值Y(Y＝As/Ai)，以峰面积比值Y对血药浓度X作回归计算，结果见图1和表7。以平均比值Y对血药浓度X做回归计算，得回归方程Y＝0.00148X-0.00175，r＝0.9992，权重系数W＝1/X2，按该方法测得的缬沙坦的血药浓度的最低定量限为：20ng/mL。
表6 缬沙坦标准曲线配制浓度
b：分析物的稀释溶液：MeOH/H2O＝50/50
表7 HPLC-MS/MS法测得的缬沙坦在人血浆中的标准曲线(n＝14)
4、准确度和精密度
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻；转移适当体积的空白血浆至适当的容器并添加缬沙坦标准溶液制备5种不同浓度的含药血浆质控样本(LLOQ、QL、QLM、QM、QH)及一条随行标准曲线，按“血浆样本预处理”操作，质控样本制备如下表8所示。每天做一批及一条随行标准曲线，连续做3天，共三批，第一批和第二批每个浓度分别做6份样本，第三批每个浓度分别做14份样本，计算缬沙坦峰面积As和内标缬沙坦-d3峰面积Ai的比值Y，代入当天的标准曲线中求得实测浓度，由实测浓度计算批内与批间精密度，实测浓度与加入浓度的比值即为准确度，结果见表9。结果表明，缬沙坦血浆样本批内、批间精密度、准确度小于±15％符合要求。
表8 质控样本配制浓度
a：最终体积＝来源溶液体积+血浆体积
依每一分析批所需，分装足够的体积至已标示的样本瓶瓶中并储存于理论温度-80℃。体积可视需要依比例增加或减少。
表9 HPLC-MS/MS法测定血浆中缬沙坦的批内、批间精度和准确度
注：评价结果的数据来自于表9的3个批内共26组质控样本的相关数据。
5、干扰性
九个不同空白血浆样本分别来源不同健康人体，将九个不同空白血浆样本于同一分析批依样本制备步骤制备及分析，来评价不同空白血浆对缬沙坦分析物及内标缬沙坦-d3的干扰。
九个不同来源空白健康人体血浆样本制备分析后，在符合缬沙坦保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的缬沙坦响应的20.0％，结果见表10。结果表明该分析方法对缬沙坦的分析具有专属性。
九个不同来源空白健康人血浆样本制备分析后，在符合内标缬沙坦-d3保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的内标缬沙坦-d3响应的5.0％，见附录中的表11。结果表明该分析方法对内标缬沙坦-d3的分析具有选择性。
表10 九个不同来源空白健康人体血浆对缬沙坦分析物的干扰性数据对比表
a：分析物峰面积(选择性样本)/分析物峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0％≤20.0％
b：当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”，该区域峰面积认为是零。
表11 九个不同来源空白健康人体血浆对内标缬沙坦-d3的干扰性数据对比表
a：分析物峰面积(选择性样本)/内标峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0％≤5.0％
b：当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”，该区域峰面积认为是零。
从表10和表11中可以看出，不同人体的空白血浆对缬沙坦的检测结果没有造成干扰。因此，该方法可以用于检测不同人体血浆中的缬沙坦浓度。
6、人血浆样本的检测
(1)取没有给予过缬沙坦的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入10μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入800μL甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图2所示。
(2)取没有给予过缬沙坦的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，混匀后加入800μL甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图3所示。
(3)取没有给予过缬沙坦的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的空白血浆样本，加入5μL的缬沙坦标准溶液，加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，加入800μL甲醇，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL上清液至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图4所示。
(4)采集健康受试者口服缬沙坦或其药用盐后的血浆，于96深孔板中精密加入100μL的采集的人体血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，混匀后加入800μL甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图5所示。
综上所述，本发明提供了一种预处理方法简便的血浆中缬沙坦浓度的测定方法，采用两步有机溶液萃取法，适用于常规测定；同时，在本实验所采用的色谱条件下，缬沙坦保留时间为0.927min左右，内标缬沙坦-d3保留时间在0.919min左右，缬沙坦和内标缬沙坦-d3的峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳；本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中的缬沙坦的浓度，灵敏度较高，血浆最低定量限为20ng/mL；同时，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为缬沙坦的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为20～10000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％。
Claims (5)
1.一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：
(1)血浆样本预处理：
血浆以K2EDTA为抗凝剂，以缬沙坦-d3为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，混匀后加入800μL甲醇于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；
(2)试样测定：
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中缬沙坦和内标缬沙坦-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的缬沙坦浓度；
液相色谱测定条件为：色谱柱为Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18，2.7μm，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为甲醇：甲酸按照体积比100：0.2混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.6mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min；
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为60Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，缬沙坦和内标缬沙坦-d3的去簇电压均为30eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室入口电压均为10eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞电压均为25eV；缬沙坦和内标缬沙坦-d3的碰撞室出口电压均为25eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 436.0→m/z 291.1，其为缬沙坦；和m/z 439.3→m/z 294.1，其为缬沙坦-d3。
2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：
3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以缬沙坦和内标缬沙坦-d3的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的缬沙坦的浓度。
4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中，并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品，所述零浓度样品中含有内标缬沙坦-d3溶液，不含缬沙坦溶液，用于排除内标缬沙坦-d3溶液对检测结果造成的干扰；所述空白样品中不含缬沙坦溶液和内标缬沙坦-d3溶液，用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰；
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为0.4ng/μL、1ng/μL、2ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、120ng/μL、200ng/μL的缬沙坦溶液至最低定量下限样本、标样1～6、最高定量上限样本中，分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，将上述十份样品分别混匀，再分别向除空白样品外的九份样品中加入5μL的10ng/μL的内标缬沙坦-d3溶液，向空白样本中加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，再将上述十份样品分别混匀，再向十份样本中分别加入800μL的甲醇，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL至装有1000μL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比70：30：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为10份标准样品待检测。
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中的缬沙坦和内标缬沙坦-d3的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的缬沙坦的浓度。
5.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的液相色谱测定条件还包括：自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
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