CN112730701A - 一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 - Google Patents
一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112730701A CN112730701A CN202011600949.7A CN202011600949A CN112730701A CN 112730701 A CN112730701 A CN 112730701A CN 202011600949 A CN202011600949 A CN 202011600949A CN 112730701 A CN112730701 A CN 112730701A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- imidafenacin
- sample
- plasma
- concentration
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为咪达那新的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.01～2ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中咪达那新的浓度。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法。
背景技术
咪达那新适用于由膀胱过度活动症引起的尿急、尿频、尿失禁。膀胱收缩受乙酰胆碱的控制，由毒蕈碱型胆碱受体(M型胆碱受体)亚型M3介导。此外，刺激毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M1，可以促进膀胱神经末梢释放乙酰胆碱。
在体外，咪达那新可以拮抗受体亚型M3和M1；在膀胱中，咪达那纳新可以通过M1拮抗作用抑制乙酰胆碱的释放，通过M3拮抗作用抑制膀胱平滑肌收缩。与唾液腺的分泌抑制作用相比，咪达那新对膀胱收缩的抑制作用更强，这有助于该药物在临床中的有效性和安全性。
目前，现有关于咪达那新测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。
为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：
(1)血浆样本预处理：
血浆以K2EDTA为抗凝剂，以咪达那新-d10为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液；
(2)试样测定：
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中咪达那新和内标咪达那新-d10的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的咪达那新浓度。
液相色谱测定条件为：色谱柱为SynergiTM Polar-RP
柱规格为75×2mm，4μm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min；
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为480℃，喷雾气压力为45Psi，辅助加热气压力为45Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为9Psi，咪达那新和内标咪达那新-d10的去簇电压均为60eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室入口电压均为10eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞电压均为20eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 320.0→m/z 238.2，其为咪达那新；和m/z 330.0→m/z248.2，其为咪达那新-d10。
优选的，所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：
| 总时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0.00 | 65.0 | 35.0 |
| 2.50 | 65.0 | 35.0 |
优选的，所述步骤(2)中，采用内标法，以咪达那新和内标咪达那新-d10的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的咪达那新的浓度。
优选的，所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中，并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品，所述零浓度样品中含有内标咪达那新-d10溶液，不含咪达那新溶液，用于排除内标咪达那新-d10溶液对检测结果造成的干扰；所述空白样品中不含咪达那新溶液和内标咪达那新-d10溶液，用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰；
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为0.0002ng/μL、0.0004ng/μL、0.001ng/μL、0.002ng/μL、0.01ng/μL、0.02ng/μL、0.03ng/μL、0.04ng/μL的咪达那新溶液至最低定量下限样本、标样1～6、最高定量上限样本中，分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，将上述十份样品分别混匀，再分别向除空白样品外的九份样品中加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，向空白样本中加入10μL体积比为1：1的甲醇水溶液，再将上述十份样品分别混匀，再向十份样本中分别加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液；
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中的咪达那新和内标咪达那新-d10的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的咪达那新的浓度。
进一步的，所述步骤(3)中的液相色谱测定条件还包括：自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)预处理方法简便，两步有机溶液萃取，适用于常规测定；
(2)专属性强：在本实验所采用的色谱条件下，咪达那新保留时间为1.103min左右，内标咪达那新-d10保留时间在1.080min左右，咪达那新和内标咪达那新-d10的峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳；
(3)灵敏度高：血浆最低定量限为0.01ng/mL，能准确测定血浆中咪达那新的浓度，灵敏度高，特异性强；
(4)本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为咪达那新的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为0.01～2ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％。
附图说明
图1为HPLC-MS/MS法测得的咪达那新在人血浆中的标准曲线图；
图2为人空白血浆的HPLC-MS/MS图；
图3为人空白血浆加入咪达那新-d10的HPLC-MS/MS图；
图4为人空白血浆加入咪达那新和咪达那新-d10的HPLC-MS/MS图；
图5为健康受试者口服咪达那新药物后血浆样本再加入内标咪达那新-d10的HPLC-MS/MS图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例：人类K2EDTA血浆中咪达那新浓度的测定
一、实验材料与分析设备咪达那新(分析物):TLC Pharmaceutical Standards或相同、更高等级的标准品咪达那新-d10(内标):TLC Pharmaceutical Standards或相同、更高等级的标准品使用试剂见下表1：
表1试剂明细
| 试剂名称 | 级别 | 制造商 |
| 乙腈(ACN) | HPLC | J.T.Baker |
| 醋酸铵(CH<sub>3</sub>COONH<sub>4</sub>) | HPLC | J.T.Baker |
| 甲酸(FA) | ACS | Adamas |
| 甲醇(MeOH) | HPLC | J.T.Baker |
注：亦可使用相同级别或更高级别的试剂
使用分析设备见下表2：
表2使用设备明细
相同的LC/MS/MS系统亦可被使用。
二、液质条件
1、液相色谱条件
色谱柱为SynergiTM Polar-RP
柱规格为75×2mm，4μm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min。
自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
表3梯度洗脱程序
| 总时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0.00 | 65.0 | 35.0 |
| 2.50 | 65.0 | 35.0 |
2、质谱条件
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为480℃，喷雾气压力为45Psi，辅助加热气压力为45Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为9Psi，咪达那新和内标咪达那新-d10的去簇电压均为60eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室入口电压均为10eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞电压均为20eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 320.0→m/z 238.2，其为咪达那新；和m/z 330.0→m/z248.2，其为咪达那新-d10。
三、实验过程
1、咪达那新标准溶液的配制
咪达那新标准曲线用标准溶液(含贮备液及工作液)的称量及配制过程如下：
| 称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
| 1.034 | 10207 | 100 |
按上述配制过程得100ng/μL的咪达那新贮备液，再以体积比为1：1的甲醇水溶液依次稀释配制咪达那新标准溶液，具体稀释浓度见下表4：
表4咪达那新标准溶液配制浓度
a：直接从咪达那新(分析物)制备而成
咪达那新标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存，体积可视需要依比例增加或减少。
2、咪达那新-d10内标标准溶液的配制
咪达那新-d10内标标准溶液的称量及配制过程如下：
| 称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
| 1.039 | 10338 | 100 |
按上述配制过程得100ng/μL的咪达那新-d10贮备液，再以体积比为1：1的甲醇水溶液稀释配制成浓度为0.001ng/μL咪达那新-d10内标溶液，具体稀释浓度见下表5：
表5咪达那新-d10标准溶液配制浓度
a：直接从咪达那新-d10(内标)制备而成
b：用于样本制备步骤
咪达那新-d10内标标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存，体积可视需要依比例增加或减少。
3、线性试验
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻；转移100μL的空白血浆10份至96深孔板中(每一个标准曲线样本、空白样本-00及零浓度样本-0)，依下表6所列，分别精密加入不同浓度的咪达那新标准溶液5μL或稀释溶液制备每一个样本并混匀，配成不同浓度的含药血浆，按“血浆样本预处理”操作。计算咪达那新峰面积As和咪达那新-d10峰面积Ai的比值Y(Y＝As/Ai)，以峰面积比值Y对血药浓度X作回归计算，结果见图1和表7。以平均比值Y对血药浓度X做回归计算，得回归方程Y＝17.7X-0.00291，r＝0.9995，权重系数W＝1/X2，按该方法测得的咪达那新的血药浓度的最低定量限为：0.01ng/mL。
表6咪达那新标准曲线配制浓度
b：分析物的稀释溶液：MeOH/H2O＝50/50
表7 HPLC-MS/MS法测得的咪达那新在人血浆中的标准曲线(n＝15)
4、准确度和精密度
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻；转移适当体积的空白血浆至适当的容器并添加咪达那新标准溶液制备5种不同浓度的含药血浆质控样本(LLOQ、QL、QLM、QM、QH)及一条随行标准曲线，按“血浆样本预处理”操作，质控样本制备如下表8所示。每天做一批及一条随行标准曲线，连续做3天，共三批，第一批和第二批每个浓度分别做6份样本，第三批每个浓度分别做16份样本，计算咪达那新峰面积As和内标咪达那新-d10峰面积Ai的比值Y，代入当天的标准曲线中求得实测浓度，由实测浓度计算批内与批间精密度，实测浓度与加入浓度的比值即为准确度，结果见表9。结果表明，咪达那新血浆样本批内、批间精密度、准确度小于±15％符合要求。
表8质控样本配制浓度
a：最终体积＝来源溶液体积+血浆体积
依每一分析批所需，分装足够的体积至已标示的样本瓶瓶中并储存于理论温度-80℃。体积可视需要依比例增加或减少。
表9 HPLC-MS/MS法测定血浆中咪达那新的批内、批间精度和准确度
注：评价结果的数据来自于表9的3个批内共28组质控样本的相关数据。
5、干扰性
九个不同空白血浆样本分别来源不同健康人体，将九个不同空白血浆样本于同一分析批依样本制备步骤制备及分析，来评价不同空白血浆对咪达那新分析物及内标咪达那新-d10的干扰。
九个不同来源空白健康人体血浆样本制备分析后，在符合咪达那新保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的咪达那新响应的20.0％，结果见表10。结果表明该分析方法对咪达那新的分析具有专属性。
九个不同来源空白健康人血浆样本制备分析后，在符合内标咪达那新-d10保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的内标咪达那新-d10响应的5.0％，见附录中的表11。结果表明该分析方法对内标咪达那新-d10的分析具有选择性。
表10九个不同来源空白健康人体血浆对咪达那新分析物的干扰性数据对比表
a：分析物峰面积(选择性样本)/分析物峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0％≤20.0％
b：当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”，该区域峰面积认为是零。
表11九个不同来源空白健康人体血浆对内标咪达那新-d10的干扰性数据对比表
a：分析物峰面积(选择性样本)/内标峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0％≤5.0％
b：当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”，该区域峰面积认为是零。
从表10和表11中可以看出，不同人体的空白血浆对咪达那新的检测结果没有造成干扰。因此，该方法可以用于检测不同人体血浆中的咪达那新浓度。
6、人血浆样本的检测
(1)取没有给予过咪达那新的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入15μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图2所示；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液。
(2)取没有给予过咪达那新的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图3所示；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液。
(3)取没有给予过咪达那新的人空白血浆，于96深孔板中精密加入100μL的空白血浆样本，加入5μL的咪达那新标准溶液，混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图4所示；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液。
(4)采集健康受试者口服咪达那新后的血浆，于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合10min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析，代表性图谱结果如图5所示；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液。
综上所述，本发明提供了一种预处理方法简便的血浆中咪达那新浓度的测定方法，采用两步有机溶液萃取法，适用于常规测定；同时，在本实验所采用的色谱条件下，咪达那新保留时间为1.103min左右，内标咪达那新-d10保留时间在1.080min左右，咪达那新和内标咪达那新-d10的峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳；本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中的咪达那新的浓度，灵敏度较高，血浆最低定量限为0.01ng/mL；同时，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为咪达那新的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为0.01～2ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％。
Claims (5)
1.一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：
(1)血浆样本预处理：
血浆以K2EDTA为抗凝剂，以咪达那新-d10为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，混匀后加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液；
(2)试样测定：
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中咪达那新和内标咪达那新-d10的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的咪达那新浓度；
液相色谱测定条件为：色谱柱为SynergiTM Polar-RP
柱规格为75×2mm，4μm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间2.5min；
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为480℃，喷雾气压力为45Psi，辅助加热气压力为45Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为9Psi，咪达那新和内标咪达那新-d10的去簇电压均为60eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室入口电压均为10eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞电压均为20eV；咪达那新和内标咪达那新-d10的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 320.0→m/z 238.2，其为咪达那新；和m/z 330.0→m/z248.2，其为咪达那新-d10。
2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：
3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以咪达那新和内标咪达那新-d10的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的咪达那新的浓度。
4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中，并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品，所述零浓度样品中含有内标咪达那新-d10溶液，不含咪达那新溶液，用于排除内标咪达那新-d10溶液对检测结果造成的干扰；所述空白样品中不含咪达那新溶液和内标咪达那新-d10溶液，用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰；
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为0.0002ng/μL、0.0004ng/μL、0.001ng/μL、0.002ng/μL、0.01ng/μL、0.02ng/μL、0.03ng/μL、0.04ng/μL的咪达那新溶液至最低定量下限样本、标样1～6、最高定量上限样本中，分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，将上述十份样品分别混匀，再分别向除空白样品外的九份样品中加入10μL的0.001ng/μL的内标咪达那新-d10溶液，向空白样本中加入10μL体积比为1：1的甲醇水溶液，再将上述十份样品分别混匀，再向十份样本中分别加入400μL的乙腈，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有200μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.1：0.05混合得到的混合溶液；
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中的咪达那新和内标咪达那新-d10的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的咪达那新的浓度。
5.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的液相色谱测定条件还包括：自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011600949.7A CN112730701A (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011600949.7A CN112730701A (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112730701A true CN112730701A (zh) | 2021-04-30 |
Family
ID=75611591
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011600949.7A Withdrawn CN112730701A (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112730701A (zh) |
-
2020
- 2020-12-29 CN CN202011600949.7A patent/CN112730701A/zh not_active Withdrawn
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111175394A (zh) | 一种液相色谱串联质谱检测血浆儿茶酚胺及其代谢物的方法 | |
| CN110927307A (zh) | 一种液质联用测定血浆中他达拉非浓度的方法 | |
| CN111272902A (zh) | 一种艾地骨化醇血药浓度的检测方法 | |
| CN112986433A (zh) | 检测人血清样本中类固醇含量的方法 | |
| CN112834657A (zh) | 一种液质联用测定血浆中氨氯地平浓度的方法 | |
| CN112782323A (zh) | 一种液质联用测定血浆中奥美拉唑浓度的方法 | |
| CN112630352A (zh) | 一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法 | |
| CN109828071B (zh) | 一种同时检测猪肉中9种注水类药物残留的方法 | |
| CN110865137A (zh) | 一种血浆中醛固酮检测方法及检测试剂盒 | |
| CN112630339B (zh) | 一种沉香醇提物中4个入血成分的同时定量测定方法 | |
| CN112730701A (zh) | 一种液质联用测定血浆中咪达那新浓度的方法 | |
| CN114544796B (zh) | 一种液相质谱联用测定血浆中司替戊醇的方法 | |
| CN112748205A (zh) | 一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法 | |
| CN112763619A (zh) | 一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法 | |
| CN115963200A (zh) | 一种同时测定人血浆中利多卡因及丁卡因浓度的方法 | |
| CN110927308A (zh) | 一种液质联用测定血浆中西替利嗪浓度的方法 | |
| CN115078621B (zh) | 一种测定血浆中依喜替康衍生物Dxd浓度的方法 | |
| CN112834660A (zh) | 一种液质联用测定血浆中双氯芬酸浓度的方法 | |
| CN110927304A (zh) | 一种液质联用测定血浆中格列美脲浓度的方法 | |
| CN112763621A (zh) | 一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法 | |
| CN112630351A (zh) | 一种液质联用测定血浆中普芦卡必利浓度的方法 | |
| CN112834659A (zh) | 一种液质联用测定血浆中阿德福韦浓度的方法 | |
| CN111796035A (zh) | 一种定量分析人血浆维格列汀浓度的lc-ms/ms检测方法 | |
| CN112903888A (zh) | 一种液质联用测定血浆中缬沙坦浓度的方法 | |
| CN111044658A (zh) | 一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20210430 |