CN112630352A - 一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,采用液质联用系统测定,先取待测样本,加入一定量的混合有机溶剂进行萃取,预处理后,经色谱柱分离,用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便,为拉考沙胺的血药浓度测定提供依据;本方法的血浆标准曲线线性范围为100~15000ng/mL,批内和批间精密度RSD均小于±15%,适合于测定血浆中拉考沙胺的浓度。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种药物的测定方法,特别涉及一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法。
背景技术
目前,全球已经有超过20万癫痫患者使用了拉考沙胺。拉考沙胺目前尚未在日本或中国获得批准用于癫痫治疗。2012优时比公司(UCB)宣布在日本和中国启动拉考沙胺Ⅲ期临床试验,其目的在于研究拉考沙胺作为部分性发作癫痫成年患者辅助疗法的有效性和安全性。
拉考沙胺作为抗癫痫作用被认为是调节钠通道缓慢失活,并在一些随机对照试验已显示其疗效和耐受性。一个单中心、大型队列研究中发现,连续服用拉科酰胺片治疗难治性癫痫的保留率,1年为62%,2年为45%,3年为35%。服药期间有18%患者报告发作显著减少或发作停止超过6个月,其中4例发作停止超过1年。长期疗效与唑尼沙胺和普瑞巴林相似。不良事件的报告为61%,绝大多数与中枢神经有关。大多数与中枢神经系统有关。大多数临床因素没有影响保留率,撤出不是因为不良事件的发生,而往往是因为无效。
目前,现有关于拉考沙胺测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。
为实现上述目的,本发明提供一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度,具体方法包括以下步骤:
(1)血浆样本预处理:
血浆以K2EDTA为抗凝剂,以拉考沙胺-d6为内标;于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本,加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加入10μL的0.001ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,混匀后加入400μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液;
(2)试样测定:
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中,检测样本中拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的色谱峰,并据此计算所述血浆样本中的拉考沙胺浓度;
液相色谱测定条件为:色谱柱为Agilent ZORBAX XDB-C18,柱规格为2.1×50mm,5μm;色谱柱温为40℃;流动相A为水:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;流动相B为乙腈:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;洗液为甲醇:水按照体积比50:50混合得到的混合物;自动进样器温度为15℃;梯度洗脱,流速为0.4mL/min,进样量为10μL,分析时间2.5min;
质谱测定条件为:离子源为电喷雾离子源,喷雾电压为4500V,雾化温度为450℃,喷雾气压力为30Psi,辅助加热气压力为30Psi,气帘气压力为40Psi,碰撞气压力为8Psi,拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的去簇电压均为60eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室入口电压均为15eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞电压均为70eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室出口电压均为15eV;正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测;用于定量分析的离子反应分别为:m/z 251.1→m/z 91.1,其为拉考沙胺;和m/z 257.2→m/z91.2,其为拉考沙胺-d6。
优选的,所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为:
优选的,所述步骤(2)中,采用内标法,以拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的拉考沙胺的浓度。
优选的,所述标准曲线方程的建立包括以下步骤:
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中,并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品,所述零浓度样品中含有内标拉考沙胺-d6溶液,不含拉考沙胺溶液,用于排除内标拉考沙胺-d6溶液对检测结果造成的干扰;所述空白样品中不含拉考沙胺溶液和内标拉考沙胺-d6溶液,用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰;
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为2ng/μL、4ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、100ng/μL、180ng/μL、300ng/μL的拉考沙胺溶液至最低定量下限样本、标样1~6、最高定量上限样本中,分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,将上述十份样品分别混匀,再分别向除空白样品外的九份样品中加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,向空白样本中加入10μL体积比为1:1的甲醇水溶液,再将上述十份样品分别混匀,再向十份样本中分别加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液;
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中,检测样本中的拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的色谱峰,并据此得到标准曲线,以用于计算所述血浆中的拉考沙胺的浓度。
进一步的,所述步骤(3)中的液相色谱测定条件还包括:自动进样器洗针体积为1000μL;自动进样器进样针深度为45mm;自动进样器清洗速度为35μL/s;自动进样器进样速度为5μL/s;自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s;自动进样器清洗模式为进样前。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
(1)预处理方法简便,两步有机溶液萃取,适用于常规测定;
(2)专属性强:在本实验所采用的色谱条件下,拉考沙胺保留时间为1.052min左右,内标拉考沙胺-d6保留时间在1.030min左右,拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的峰形良好,无杂峰干扰测定,基线平稳;
(3)灵敏度高:血浆最低定量限为100ng/mL,能准确测定血浆中拉考沙胺的浓度,灵敏度高,特异性强;
(4)本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便,为拉考沙胺的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为100~15000ng/mL,批内和批间精密度RSD均小于±15%。
附图说明
图1为HPLC-MS/MS法测得的拉考沙胺在人血浆中的标准曲线图;
图2为人空白血浆的HPLC-MS/MS图;
图3为人空白血浆加入拉考沙胺-d6的HPLC-MS/MS图;
图4为人空白血浆加入拉考沙胺和拉考沙胺-d6的HPLC-MS/MS图;
图5为健康受试者口服拉考沙胺药物后血浆样本再加入内标拉考沙胺-d6的HPLC-MS/MS图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例:人类K2EDTA血浆中拉考沙胺浓度的测定
一、实验材料与分析设备拉考沙胺(分析物):TLC Pharmaceutical Standards或相同、更高等级的标准品拉考沙胺-d6(内标):TLC Pharmaceutical Standards或相同、更高等级的标准品使用试剂见下表1:
表1 试剂明细
试剂名称 | 级别 | 制造商 |
乙腈(ACN) | HPLC | J.T.Baker |
醋酸铵(CH<sub>3</sub>COONH<sub>4</sub>) | HPLC | J.T.Baker |
甲醇(MeOH) | HPLC | J.T.Baker |
注:亦可使用相同级别或更高级别的试剂
使用分析设备见下表2:
表2 使用设备明细
组件 | 型号 | 制造商 |
Binary pump(二元泵) | AC Pump | AB SCIEX |
Degasser(脱气器) | Degasser | AB SCIEX |
Column oven(恒温柱箱) | AC Column oven | AB SCIEX |
Autosampler(自动取样器) | AC Autosampler | AB SCIEX |
Sample rack(样本架) | Rack Changer | AB SCIEX |
Mass spectrometer(质谱仪) | QTRAP<sup>TM</sup> 6500+ | AB SCIEX |
Data processor(数据处理器) | Analyst 1.6.3(software) | AB SCIEX |
相同的LC/MS/MS系统亦可被使用。
二、液质条件
1、液相色谱条件
色谱柱为SynergiTM Polar-RP柱规格为75×2mm,4μm;色谱柱温为40℃;流动相A为水:甲酸:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;流动相B为乙腈:甲酸:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;洗液为乙腈:水按照体积比50:50混合得到的混合物;自动进样器温度为15℃;梯度洗脱,流速为0.4mL/min,进样量为10μL,分析时间2.5min。
自动进样器洗针体积为500μL;自动进样器进样针深度为45mm;自动进样器清洗速度为35μL/s;自动进样器进样速度为5μL/s;自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s;自动进样器清洗模式为进样前。
表3 梯度洗脱程序
2、质谱条件
质谱测定条件为:离子源为电喷雾离子源,喷雾电压为4500V,雾化温度为450℃,喷雾气压力为30Psi,辅助加热气压力为30Psi,气帘气压力为40Psi,碰撞气压力为8Psi,拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的去簇电压均为60eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室入口电压均为15eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞电压均为70eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室出口电压均为15eV;正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测;用于定量分析的离子反应分别为:m/z 251.1→m/z 91.1,其为拉考沙胺;和m/z 257.2→m/z91.2,其为拉考沙胺-d6。
三、实验过程
1、拉考沙胺标准溶液的配制
拉考沙胺标准曲线用标准溶液(含贮备液及工作液)的称量及配制过程如下:
称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
20.057 | 10008 | 2000 |
按上述配制过程得2000ng/μL的拉考沙胺素贮备液,再以体积比为1:1的甲醇水溶液依次稀释配制拉考沙胺标准溶液,具体稀释浓度见下表4:
表4 拉考沙胺标准溶液配制浓度
a:直接从拉考沙胺(分析物)制备而成
拉考沙胺标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存,体积可视需要依比例增加或减少。
2、拉考沙胺-d6内标标准溶液的配制
拉考沙胺-d6内标标准溶液的称量及配制过程如下:
称量重量(mg) | 溶解体积(μl) | 最终浓度(ng/μl) |
1.038 | 10227 | 100 |
按上述配制过程得100ng/μL的拉考沙胺-d6贮备液,再以体积比为1:1的甲醇水溶液稀释配制成浓度为5ng/μL拉考沙胺-d6内标溶液,具体稀释浓度见下表5:
a:直接从拉考沙胺-d6(内标)制备而成
b:用于样本制备步骤
拉考沙胺-d6内标标准溶液于不使用时储存于塑料容器及冰箱(4℃)保存,体积可视需要依比例增加或减少。
3、线性试验
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻;转移100μL的空白血浆10份至96深孔板中(每一个标准曲线样本、空白样本-00及零浓度样本-0),依下表6所列,分别精密加入不同浓度的拉考沙胺标准溶液5μL或稀释溶液制备每一个样本并混匀,配成不同浓度的含药血浆,按“血浆样本预处理”操作。计算拉考沙胺峰面积As和拉考沙胺-d6峰面积Ai的比值Y(Y=As/Ai),以峰面积比值Y对血药浓度X作回归计算,结果见图1和表7。以平均比值Y对血药浓度X做回归计算,得回归方程Y=0.00163X-0.00393,r=0.9996,权重系数W=1/X2,按该方法测得的拉考沙胺的血药浓度的最低定量限为:100ng/mL。
表6 拉考沙胺标准曲线配制浓度
b:分析物的稀释溶液:MeOH/H2O=50/50
表7 HPLC-MS/MS法测得的拉考沙胺在人血浆中的标准曲线(n=12)
4、准确度和精密度
将空白血浆于室温环境放入水浴解冻;转移适当体积的空白血浆至适当的容器并添加拉考沙胺标准溶液制备5种不同浓度的含药血浆质控样本(LLOQ、QL、QLM、QM、QH)及一条随行标准曲线,按“血浆样本预处理”操作,质控样本制备如下表8所示。每天做一批及一条随行标准曲线,连续做3天,共三批,第一批和第二批每个浓度分别做6份样本,第三批每个浓度分别做16份样本,计算拉考沙胺峰面积As和内标拉考沙胺-d6峰面积Ai的比值Y,代入当天的标准曲线中求得实测浓度,由实测浓度计算批内与批间精密度,实测浓度与加入浓度的比值即为准确度,结果见表9。结果表明,拉考沙胺血浆样本批内、批间精密度、准确度小于±15%符合要求。
表8 质控样本配制浓度
a:最终体积=来源溶液体积+血浆体积
依每一分析批所需,分装足够的体积至已标示的样本瓶瓶中并储存于理论温度-80℃。体积可视需要依比例增加或减少。
表9 HPLC-MS/MS法测定血浆中拉考沙胺的批内、批间精度和准确度
注:评价结果的数据来自于表9的3个批内共28组质控样本的相关数据。
5、干扰性
九个不同空白血浆样本分别来源不同健康人体,将九个不同空白血浆样本于同一分析批依样本制备步骤制备及分析,来评价不同空白血浆对拉考沙胺分析物及内标拉考沙胺-d6的干扰。
九个不同来源空白健康人体血浆样本制备分析后,在符合拉考沙胺保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的拉考沙胺响应的20.0%,结果见表10。结果表明该分析方法对拉考沙胺的分析具有专属性。
九个不同来源空白健康人血浆样本制备分析后,在符合内标拉考沙胺-d6保留时间处的干扰峰响应均低于该分析批的标准曲线中定量下限样本的内标拉考沙胺-d6响应的5.0%,见附录中的表11。结果表明该分析方法对内标拉考沙胺-d6的分析具有选择性。
表10 九个不同来源空白健康人体血浆对拉考沙胺分析物的干扰性数据对比表
a:分析物峰面积(选择性样本)/分析物峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0%≤20.0%
b:当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”,该区域峰面积认为是零。
表11 九个不同来源空白健康人体血浆对内标拉考沙胺-d6的干扰性数据对比表
a:分析物峰面积(选择性样本)/内标峰面积(标准曲线的LLOQ)×100.0%≤5.0%
b:当“无显著峰值可以被积分(或没有峰)”或“峰面积的保留时间不符合样本中分析物的保留时间”,该区域峰面积认为是零。
从表10和表11中可以看出,不同人体的空白血浆对拉考沙胺的检测结果没有造成干扰。因此,该方法可以用于检测不同人体血浆中的拉考沙胺浓度。
6、人血浆样本的检测
(1)取没有给予过拉考沙胺的人空白血浆,于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本,加入15μL体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后取10μL样本进行LC-MS/MS分析,代表性图谱结果如图2所示;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液。
(2)取没有给予过拉考沙胺的人空白血浆,于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本,加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,混匀后加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后后取10μL样本进行LC-MS/MS分析,代表性图谱结果如图3所示;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液。
(3)取没有给予过拉考沙胺的人空白血浆,于96深孔板中精密加入100μL的空白血浆样本,加入5μL的拉考沙胺标准溶液,混匀后加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,混匀后加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后后取10μL样本进行LC-MS/MS分析,代表性图谱结果如图4所示;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液。
(4)采集健康受试者口服拉考沙胺后的血浆,于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本,加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,混匀后加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后后取10μL样本进行LC-MS/MS分析,代表性图谱结果如图5所示;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液。
综上所述,本发明提供了一种预处理方法简便的血浆中拉考沙胺浓度的测定方法,采用两步有机溶液萃取法,适用于常规测定;同时,在本实验所采用的色谱条件下,拉考沙胺保留时间为1.052min左右,内标拉考沙胺-d6保留时间在1.030min左右,拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的峰形良好,无杂峰干扰测定,基线平稳;本方法具有较高的特异性,能准确测定血浆中的拉考沙胺的浓度,灵敏度较高,血浆最低定量限为100ng/mL;同时,本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便,为拉考沙胺的血药浓度测定提供依据。本方法的血浆标准曲线线性范围为100~15000ng/mL,批内和批间精密度RSD均小于±15%。
Claims (5)
1.一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,其特征在于:血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度,具体方法包括以下步骤:
(1)血浆样本预处理:
血浆以K2EDTA为抗凝剂,以拉考沙胺-d6为内标;于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本,加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,混匀后加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液;
(2)试样测定:
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中,检测样本中拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的色谱峰,并据此计算所述血浆样本中的拉考沙胺浓度;
液相色谱测定条件为:色谱柱为Agilent ZORBAX XDB-C18,柱规格为2.1×50mm,5μm;色谱柱温为40℃;流动相A为水:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;流动相B为乙腈:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;洗液为甲醇:水按照体积比50:50混合得到的混合物;自动进样器温度为15℃;梯度洗脱,流速为0.4mL/min,进样量为10μL,分析时间2.5min;
质谱测定条件为:离子源为电喷雾离子源,喷雾电压为4500V,雾化温度为450℃,喷雾气压力为30Psi,辅助加热气压力为30Psi,气帘气压力为40Psi,碰撞气压力为8Psi,拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的去簇电压均为60eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室入口电压均为15eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞电压均为70eV;拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的碰撞室出口电压均为15eV;正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测;用于定量分析的离子反应分别为:m/z 251.1→m/z 91.1,其为拉考沙胺;和m/z 257.2→m/z 91.2,其为拉考沙胺-d6。
3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,其特征在于:所述步骤(2)中,采用内标法,以拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的拉考沙胺的浓度。
4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,其特征在于:所述标准曲线方程的建立包括以下步骤:
取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中,并依次命名为最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品,所述零浓度样品中含有内标拉考沙胺-d6溶液,不含拉考沙胺溶液,用于排除内标拉考沙胺-d6溶液对检测结果造成的干扰;所述空白样品中不含拉考沙胺溶液和内标拉考沙胺-d6溶液,用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰;
以贮备液的形式添加5μL浓度分别为2ng/μL、4ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、100ng/μL、180ng/μL、300ng/μL的拉考沙胺溶液至最低定量下限样本、标样1~6、最高定量上限样本中,分别向零浓度样本和空白样本加入5μL体积比为1:1的甲醇水溶液,将上述十份样品分别混匀,再分别向除空白样品外的九份样品中加入10μL的5ng/μL的内标拉考沙胺-d6溶液,向空白样本中加入10μL体积比为1:1的甲醇水溶液,再将上述十份样品分别混匀,再向十份样本中分别加入600μL的乙腈,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心10min,取上层清液50μL至另一装有600μL混合有机溶剂的96深孔板中,涡旋混匀,于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测;其中:混合有机溶剂为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比15:85:0.1混合得到的混合溶液;
分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中,检测样本中的拉考沙胺和内标拉考沙胺-d6的色谱峰,并据此得到标准曲线,以用于计算所述血浆中的拉考沙胺的浓度。
5.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中拉考沙胺浓度的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的液相色谱测定条件还包括:自动进样器洗针体积为1000μL;自动进样器进样针深度为45mm;自动进样器清洗速度为35μL/s;自动进样器进样速度为5μL/s;自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s;自动进样器清洗模式为进样前。
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