CN112903860B - 苯佐那酯中有关物质mpeg的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，该检测方法为高效液相色谱联合蒸发光散射检测法，具体检测过程包括1)配制不同浓度的MPEG标准溶液，利用高效液相色谱法建立MPEG溶液浓度与峰面积的标准曲线；2)取苯佐那酯样品溶解至乙腈和水的混合液中制备得到苯佐那酯样品溶液；3)利用高效液相色谱法测定步骤2)中苯佐那酯样品溶液的峰面积，然后对应步骤1)中标准曲线得到苯佐那酯样品溶液中MPEG的浓度；该检测方法不仅能快速准确的测出苯佐那酯中有关物质MPEG含量，同时检测限低，适用于实际生产过程中样本的大批量检测。

Description

苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法

技术领域

本发明涉及一种药品中有关物质的检测方法，属于分析化学技术领域，具体地涉及一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法。

背景技术

苯佐那酯由辉瑞研发，并于1958年2月10日获美国食品药品监督管理局批准上市销售，其属于非麻醉性口服咳嗽遏制剂，具有递送速释组合物后持续6～8小时的治疗效果，其正式名称为2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-基对丁基氨基苯甲酸酯。由于它不是阿片样物质，因此像一些其他咳嗽药例如可待因一样，苯佐那酯不易被滥用。

MPEG是合成苯佐那酯的初始物料，因此检测成品苯佐那酯中MPEG含量是工艺探究及原料质量研究中的重要项目之一。

MPEG的中文名称为聚乙二醇单甲醚，分子结构式如下：

现有检测苯佐那酯原料中MPEG杂质常采用质谱法，但是实验室配置率较低，导致之后多为送检方式，检测周期长、检测准确度不高且检测时间不可控，这对于指导苯佐那酯的实际生产十分不利。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明公开了一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法。该检测方法不仅能快速准确的测出苯佐那酯中有关物质MPEG含量，同时检测限低，适用于实际生产过程中样本的大批量检测。

为实现上述目的，本发明公开了一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱联合蒸发光散射检测法。

进一步地，所述高效液相色谱条件如下：

色谱柱为SUPELCO SUPLEX PKB-100 250×4.6mm,5um；

流动相包括乙腈和水混合而成的流动相；所述流动相中还加入甲酸，且所述甲酸的加入量为流动相体积的0.005～0.02％；

所述蒸发光散射检测器条件如下：

雾化器功率：65～75％；

漂移管温度：50～110℃；

气体压力：10～50psi；

增益梯度：0～4.5min，300～100Gain；

4.5～25min，100～50Gain；

该检测方法包括如下过程：

1)配制不同浓度的MPEG标准溶液，利用高效液相色谱法建立MPEG溶液浓度与峰面积的标准曲线；

2)取苯佐那酯样品溶解至乙腈和水的混合液中制备得到苯佐那酯样品溶液；

3)利用高效液相色谱法测定步骤2)中苯佐那酯样品溶液的峰面积，然后对应步骤1)中所述标准曲线得到苯佐那酯样品溶液中MPEG的浓度；

且步骤1)和步骤3)的色谱条件相同。

进一步地，所述蒸发光散射检测器的增益梯度：

0～4.5min，200～100Gain；

4.5～25min，100～50Gain。

进一步地，所述流动相中乙腈与水的体积比为(40～60):(60～40)，且所述流动相流速为0.5～2mL/min。

进一步地，所述色谱柱柱温为25±2℃，样品室温度为10℃，进样量为20～100μL。

进一步地，所述色谱柱柱温为25℃，所述进样量为20μL。

进一步地，步骤1)中，所述MPEG标准溶液的浓度为0.0036～0.36mg/mL。优选的，本发明的MPEG为MPEG-420。

进一步地，步骤2)中所述苯佐那酯样品溶液浓度为10～70mg/mL。

进一步地，步骤2)中，所述混合液中乙腈和水的体积比为(40～60):(60～40)。

进一步地，所述检测方法还包括制备MPEG对照溶液，所述MPEG对照溶液浓度为0.036～0.144mg/mL。

有益效果：

本发明设计的检测方法不仅能快速准确的测出苯佐那酯中有关物质MPEG含量，同时检测限低至0.004mg/mL，准确度和精密度较高，该检测方法适用于实际生产过程中样本的大批量检测。

附图说明

图1为本发明选择的稀释剂的色谱图；

图2为对照溶液的色谱图；

图3为苯佐那酯样品的色谱图；

图4为100％加标样品的色谱图。

具体实施方式

本发明为解决现有技术检测苯佐那酯原料中相关物质的手段准确度不高，检测周期长，以及检测时间不可控的技术问题，公开了一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法。该检测方法通过将高效液相色谱法与蒸发光散射检测法联合在一起使用，不仅能够快速准确的，并且稳定的测定苯佐那酯原料中MPEG含量，同时，最低检测限可达到0.004mg/mL，其中该最低检测限相当于样品质量百分比浓度为0.02％；该检测方法适用于实际生产过程中样本的大批量检测。

1、本发明检测方法涉及使用的检测仪器及相关型号如下：

分析天平：梅特勒；

移液器：Brand移液管；

高效液相色谱系统：Waters e2695；

蒸发光散射检测器：Waters 2424ELS检测器；

2、具体检测过程如下：

(1)标准工作溶液的配制：

首先配制浓度为0.36mg/mL的MPEG储备液：精密称取MPEG标准品36mg至100mL容量瓶，用稀释剂乙腈与水的混合液溶解并定容至刻度，其中，所述混合液中乙腈与水的体积比为(40～60):(60～40)。本发明优选采用乙腈与水的体积比为50:50的混合液作为稀释剂进行稀释。

具体的对上述MPEG储备液进行稀释，得到浓度为0.0036～0.36mg/mL的系列标准工作液，且各标准工作液的浓度如表1所示：

表1标准工作液浓度列表

(2)苯佐那酯样品的处理：

取苯佐那酯样品240mg溶解至乙腈和水的混合液中，并继续定容至10mL容量瓶中，其中，所述混合液中乙腈和水的体积比为50:50，制备得到浓度为24mg/mL的苯佐那酯样品溶液。

(3)制备对照溶液：

精密称取MPEG标准品3.6mg至100mL、50mL、25mL容量瓶，用稀释剂乙腈与水的混合液溶解并定容至刻度，其中，本发明优选采用乙腈与水的体积比为50:50的混合液作为稀释剂进行稀释。得到所述MPEG对照溶液浓度为0.036～0.144mg/mL。

(4)高效液相色谱联合蒸发光散射检测法工作条件为：

(4.1)色谱条件：

色谱柱：SUPELCO SUPLEX PKB-100 250*4.6mm,5um；

流动相：乙腈/水/甲酸(v/v＝(40～60):(60～40)，甲酸的加入量为流动相体积的0.005～0.02％)；

洗针液：乙腈/水(v/v＝(40～60):(60～40))；

流速：0.5～2.0mL/min；

柱温：25±2℃；

样品室温度：10℃；

进样量：20～100μL；

样品运行时间：20～40min；

对照样运行时间：8min；

(4.2)蒸发光散射检测条件：

气体压力：10～50psi；

雾化器功率：65～75％；

漂移管温度：50～110℃；

增益梯度：0～4.5min，300～100Gain；

4.5～25min，100～50Gain；

同时，本发明还对色谱条件及蒸发光散射检测条件进行筛选，得到如下表2；

表2检测条件筛选列表

(5)分析结果：

利用高效液相色谱法建立步骤(1)中MPEG标准工作溶液与峰面积的标准曲线；且标准曲线为y＝1.346x+6515(R²＝0.9948，R＝0.997)，由该标准曲线可知最低检测限可达到0.004mg/mL，其中该最低检测限相当于样品质量百分比浓度为0.02％，同时在样品质量百分比浓度0.03～150％范围内，线性良好。

由图1可知，空白溶液在MPEG保留时间处无任何干扰峰；并且采用上述检测方法得到浓度为0.072mg/mL的对照溶液图谱如图2所示，浓度为24mg/mL的苯佐那酯样品溶液图谱如图3所示，100％加标样品溶液图谱如图4所示，由图2可知对照溶液在MPEG保留时间处无干扰峰，MPEG峰型正常，由图3及图4可知，样品溶液中MPEG峰与相邻峰分离度良好，MPEG峰型正常。

(6)准确度及精密度评价：

取步骤(1)配制的浓度为0.0036mg/mL的MPEG标准工作溶液各6份，按照上述检测方法测定，计算准确度和精密度，其中准确度如表3所示；

表3准确度评价表

由表3可知，本发明设计的检测方法精密度良好。

另一分析人员在不同时间，使用不同色谱柱，按照精密度方法测定上述6个样品。结果如表3所示；

表4精密度评价表

由表4可知，即使是不同分析人员采用不同色谱柱，精密度测定方法的测量结果一致，这再次说明该方法重现性良好。

(7)待测物提取回收率：

利用上述制备的浓度为0.36mg/mL的MPEG标准储备液按照下表5配置溶液一式三份，并测定回收率，如表6所示。

表5加标样品浓度列表

表6加标样品回收率列表(一)

在原方法基础上改变色谱条件，分别测定其回收率。

色谱条件改变分别为：

流速±0.1mL/min；

柱温+5℃；

流动相中乙腈比例：±1％；

结果如表7所示：

表7加标样品回收率列表(二)

由上述表5～表6可知，回收率合格，这说明本发明设计的测量方法准确度高，测量值与真实值接近程度高。

由表7可知，在一定程度上稍微的改变柱温，流速，流动相比例情况下验证该分析方法不受影响能力。这说明该分析方法耐用性较强。

(8)样品稳定性：

使用精密度项下样品溶液与对照溶液分别放置室温72h和冷藏72h测定MPEG含量

结果如表8和表9所示：

表8对照溶液稳定性列表

表9样品溶液稳定性列表

由上述表8～表9可知，对照溶液与样品溶液在室温与冷藏条件下放置72小时仍然比较稳定。

由上述检测方法可知，本发明设计的检测方法准确度和精密度均较高，且检测下限低至0.004mg/mL，适用于实际生产过程中样本的大批量检测。

以上实施例仅为最佳举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。除上述实施例外，本发明还有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，所述检测方法为高效液相色谱联合蒸发光散射检测法，

所述高效液相色谱条件如下：

色谱柱为SUPELCO SUPLEX PKB-100 250×4.6mm,5μm；

流动相包括乙腈和水混合而成的流动相；所述流动相中还加入甲酸，且所述甲酸的加入量为流动相体积的0.005～0.02％；

所述蒸发光散射检测器条件如下：

雾化器功率：65～75％；

漂移管温度：50～110℃；

气体压力：10～50psi；

增益梯度：0～4.5min，300～100Gain；

4.5～25min，100～50Gain；

所述流动相中乙腈与水的体积比为(40～60):(60～40)，且所述流动相流速为0.5～2mL/min；

该检测方法包括如下过程：

1)配制不同浓度的MPEG标准溶液，利用高效液相色谱法建立MPEG溶液浓度与峰面积的标准曲线；

2)取苯佐那酯样品溶解至乙腈和水的混合液中制备得到苯佐那酯样品溶液；

3)利用高效液相色谱法测定步骤2)中苯佐那酯样品溶液的峰面积，然后对应步骤1)中所述标准曲线得到苯佐那酯样品溶液中MPEG的浓度；

且步骤1)和步骤3)的色谱条件相同。

2.根据权利要求1所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，所述蒸发光散射检测器的增益梯度：0～4.5min，200～100Gain；4.5～25min，100～50Gain。

3.根据权利要求1所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，所述色谱柱柱温为25±2℃，样品室温度为10℃，进样量为20～100μL。

4.根据权利要求3所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，所述色谱柱柱温为25℃，所述进样量为20μL。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述MPEG标准溶液的浓度为0.0036～0.36mg/mL。

6.根据权利要求1～4中任意一项所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述苯佐那酯样品溶液浓度为10～70mg/mL。

7.根据权利要求1～4中任意一项所述苯佐那酯中有关物质MPEG的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括制备MPEG对照溶液，所述MPEG对照溶液浓度为0.036～0.144mg/mL。

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