CN112891062A - 一种多功能纳米纤维基复合止血贴及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其是由支撑层、敷料层和保护层组成，所述的敷料层包被于支撑层和保护层之间，多功能止血贴的敷料层是由聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白、蒲公英绒毛粉体、京尼平和卵清蛋白制备获得的纳米纤维膜构成，其赋予多功能止血贴具有抗菌、防粘连、促进伤口愈合作用；多功能止血贴更换周期长，可有效缩短创口愈合时间。

Description

一种多功能纳米纤维基复合止血贴及其制备方法
技术领域
本发明属于医疗用品领域，具体涉及一种多功能纳米纤维基复合止血贴及其制备方法。
背景技术
皮肤为人体提供保护作用，一旦皮肤受伤后，会对身体机能造成很大影响；因此皮肤受伤后，需要及时对伤口进行保护处理，避免伤口受到感染；止血贴作为一种生活中常用的外用贴剂用于对小块创口的应急治疗，具有暂时止血和保护创面的作用；现有止血贴的功能较单一，多数是以保护创口为主，而不具有消除创口炎症、促进创口愈合的作用；
止血贴中最主要成分是吸液止血材料，现有止血贴中的吸液层主要通过其吸液作用而达到物理止血的作用，止血效果较慢，不利于创口的愈合，且吸液效果不理想，易造成创口周围出现积液现象，而引起创口的再次感染，同时需要频繁更换止血贴，更换时止血贴的贴敷层易粘连创口，撕扯会对创口造成二次伤害；因此亟需一种具有抗菌、消炎、防粘连的止血材料；
采用静电纺丝方法制备纳米纤维膜具有较大的比表面积和孔隙率，在医用敷料领域受到广泛应用，然而，现有的纳米纤维膜敷料的创面愈合效果较差，且单纯纳米纤维膜的机械强度较差。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种多功能纳米纤维基复合止血贴，多功能止血贴的敷料层是由聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白、蒲公英绒毛粉体、京尼平和卵清蛋白制备获得的纳米纤维膜构成，其赋予多功能止血贴具有抗菌、防粘连、促进伤口愈合作用；
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其是由支撑层、敷料层和保护层组成，所述的敷料层包被于支撑层和保护层之间，所述的敷料层是由以下原料经静电纺丝制备而成的纳米纤维膜：聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白和蒲公英绒毛粉体；
优选地，所述的蒲公英绒毛粉体为纳米级氧化蒲公英绒毛粉体；
优选地，所述的氧化蒲公英绒毛粉体的制备方法为：将采集的蒲公英绒毛在避光条件下浸入高碘酸钾水溶液中，搅拌反应结束后清洗，冷冻干燥后粉碎得到氧化蒲公英绒毛粉体；
优选地，所述的纳米纤维膜的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)配制聚乙烯醇溶液：将聚乙烯醇加入去离子水中，在室温下搅拌溶胀后，置于60-70℃搅拌获得质量浓度为20-30％的聚乙烯醇溶液(PVA)；
(2)配制氧化海藻酸钠溶液：将氧化海藻酸钠溶于去离子水中制备获得质量浓度为2-4wt％氧化海藻酸钠溶液(OSA)；
(3)向氧化海藻酸钠溶液中加入壳聚糖搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入氧化蒲公英绒毛粉体(O-PR)，搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入丝素蛋白搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)将纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜浸泡于京尼平/卵清蛋白液中交联后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；
优选地，所述的静电纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
优选地，所述的聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白和蒲公英绒毛粉体的重量比为1∶0.1-0.5∶0.01-0.05∶0.01-0.05∶0.01-0.05；
优选地，所述的壳聚糖为脱乙酰度为65％-85％的壳聚糖；
优选地，所述的卵清蛋白液的浓度为5mg/mL；所述的京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.1-0.5g∶1000g；
优选地，所述的纳米纤维基止血贴制备方法为：将纳米纤维膜剪裁为合适尺寸粘贴于支撑层上，经敷贴机复合，在支撑层和敷料层上方覆盖保护层经包装灭菌后即可获得多功能止血贴。
优选地，所述的支撑层为医用无纺布，所述的保护层为离型纸；
壳聚糖作为一种天然高分子材料具有良好的生物相容性和生物可降解性，并具有止血抗菌作用在医用敷料领域应用广泛，但因壳聚糖水溶性差，应用于敷料中的壳聚糖皆是壳聚糖的衍生物，如羧甲基壳聚糖，而壳聚糖类衍生物的止血抗菌效果较壳聚糖稍差；另外，由于壳聚糖作为一种阳离子聚合物，在高压电场下由于排斥作用很难进行静电纺丝；因此，将壳聚糖与氧化海藻酸钠复合以提高壳聚糖的水溶性，同时有利于静电纺丝。
蒲公英绒毛纤维是自身生长出的种子上的纤维，其由成千上万微小的中空鳞片叠加而成，表面结构粗糙，且具有蓬松性能；蒲公英绒毛中不仅含有大量的蛋白质、脂肪和微量元素等成分，还含有钙，镁，钠，铁等元素，同时富含清凉消炎止痛的成分，对创口愈合具有促进作用。
有益效果
本发明以氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白、蒲公英绒毛粉体以及聚乙烯醇为原料经静电纺丝方法制备获得了纳米纤维膜，以其作为止血贴的敷料层制备获得止血贴，止血贴贴敷于创口，纳米纤维膜层经创口渗出液浸润后，纳米纤维中消炎、促创口愈合物逐渐释放，促进创口的愈合；保证了止血贴具有良好的抗菌、止血、消炎、促创口愈合的作用，可显著延长止血贴的更换时间，同时缩短创口的愈合时间；
本发明多功能止血贴具有良好的创口促愈合作用，将其用于家兔创口的修复实验，止血贴贴敷5天后，创口的感染率低，创面愈合率达到了60％以上，五天后再更换止血贴，创口愈合时间小于15天。
本发明实验发现，经氧化处理的蒲公英绒毛粉体对纳米纤维膜的机械强度的增强性能优于经碱活化处理的蒲公英绒毛粉体；氧化蒲公英绒毛可添加量大，获得的纳米纤维膜的止血消炎性能更突出，对创口的促愈合作用效果优，有效缩短创口的愈合时间；
静电纺丝原液中添加经氧化处理的蒲公英绒毛粉体在保证较高的添加量下依然能进行纺丝同时能显著提高纳米纤维膜的机械强度；而经氧化处理的蒲公英叶纤维粉体在较高的添加量下，纺丝液无法进行纺丝，且其对纳米纤维膜机械强度的增强性能较氧化蒲公英绒毛粉体弱；
随着氧化蒲公英绒毛粉体加入量的增加，纳米纤维膜的机械强度先增加后降低；同时高碘酸钾氧化的蒲公英绒毛在纺丝原液中的可加入量高于碱活化的蒲公英绒毛；制备获得的纳米纤维膜的机械强度表现为：添加氧化蒲公英绒毛粉体获得的纳米纤维膜强于添加碱活化蒲公英绒毛粉体；
本发明的纳米纤维膜的细胞粘附率随着蒲公英绒毛粉体添加量的增加，呈现增大趋势。
本发明的纳米纤维膜的交联剂采用京尼平与卵清蛋白液的混合液，一方面在保证纳米纤维膜机械强度的条件下增强了纳米纤维膜的蓬松度，丰富其孔隙结构，提高了其吸液率；另一方面还提高了纳米纤维膜的抗菌性能；同时随着交联剂混合液中，京尼平添加比例的增加，纳米纤维膜的细胞粘附率增大，保持京尼平与5mg/mL卵清蛋白液的添加比例小于0.5g/1000g，使纳米纤维膜保持较低的细胞粘附率。
本发明的止血贴敷料层纳米纤维膜制备时采用的溶剂为去离子水，未添加任何有机溶剂，有效避免了有机溶剂造成的过敏反应。
附图说明
图1是本发明实施例2制备获得的纳米纤维膜N-12、N-18和实施例7制备获得的纳米纤维膜DN-0的SEM图；其中，a为N-12，b为N-18，c为DN-0。
具体实施方式
实施例1
氧化蒲公英绒毛粉体的制备：取蒲公英绒毛浸入3wt％高碘酸钠溶液中处理后，经去离子水清洗后冷冻干燥粉碎后获得纳米级氧化蒲公英绒毛粉体(O-PR)；
活化蒲公英绒毛粉体的制备：取蒲公英绒毛浸入0.5mol/L碳酸氢钠溶液中处理后，经去离子水清洗至洗涤液呈中性后冷冻干燥粉碎获得纳米级活化蒲公英绒毛粉体(H-PR)；
氧化蒲公英叶纤维粉体的制备：从蒲公英叶中抽取蒲公英纤维，将抽取的蒲公英叶纤维浸入3wt％高碘酸钠溶液中处理后，经去离子水清洗后冷冻干燥粉碎后获得纳米级氧化蒲公英叶纤维粉体(O-PF)；
京尼平/卵清蛋白液的配制：将卵清蛋白分散于去离子水中在超声条件下搅拌均匀后获得5mg/mL卵清蛋白液，将卵清蛋白液超声搅拌发泡后，向其中加入京尼平继续搅拌后获得京尼平/卵清蛋白液；其中，京尼平添加量与卵清蛋白液重量比为：0-1g∶1000g；
聚乙烯醇溶液配制：将聚乙烯醇加入去离子水中，在室温下搅拌溶胀后，置于60-70℃搅拌获得质量浓度为20-30wt％的聚乙烯醇溶液(PVA)；聚乙烯醇的聚合度为500-2500，聚乙烯醇的醇解度为90％；
氧化海藻酸钠溶液配制：将氧化海藻酸钠溶于去离子水中制备获得质量浓度为2-4wt％氧化海藻酸钠水溶液(OSA)；
实施例2
纳米纤维膜的制备
(1)取实施例1配制的聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取实施例1配制的氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，加入聚乙烯醇溶液中获得混合液，混合液中加入氧化蒲公英绒毛粉体O-PR(实施例1制备)搅拌均匀后再向其中加入丝素蛋白，搅拌均匀获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联反应后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
调整纺丝液各原料的含量获得不同的纳米纤维膜(表1所示)；对纤维膜的性能进行测试(表2所示)。
表1.
Figure BDA0002954430860000041
Figure BDA0002954430860000051
表2.
Figure BDA0002954430860000052
Figure BDA0002954430860000061
由表2数据可知，控制聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白添加量不变，改变氧化蒲公英绒毛的添加量获得的纳米纤维膜N-1～N-18，随着蒲公英绒毛添加量的增加，纳米纤维膜的拉伸强度先逐渐增大后逐渐减小，断裂伸长率先逐渐增大后逐渐减小，当蒲公英绒毛粉体添加量为2.5g时，拉伸强度和断裂伸长率增幅最大，蒲公英绒毛添加量达到13g时；纺丝原液无法进行纺丝；因此，优选蒲公英绒毛与聚乙烯醇的重量比为0-0.05：1；更优选比例为0.01-0.05:1；
控制蒲公英绒毛、氧化海藻酸钠、聚乙烯醇的重量比为0.03∶0.3∶1，调整壳聚糖、丝素蛋白的含量，经静电纺丝获得纳米纤维膜N-21～N-28；
综合考虑纺丝液的可纺性以及获得的纳米纤维膜的机械强度以及蒲公英绒毛粉体的可添加量，本申请优选纺丝液中聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白和氧化蒲公英绒毛的重量比为1∶0.1-0.5∶0.01-0.05∶0.01-0.05∶0.01-0.05；更优选为1∶0.3∶0.03∶0.03∶0.03；
实施例3
纳米纤维膜的制备
(1)取1250g实施例1中配制的20wt％聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取1875g实施例1配制4wt％氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将12.5g壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入7.5g氧化蒲公英绒毛粉体O-PR(实施例1制备)搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入12.5g丝素蛋白，搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联反应后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
对纳米纤维膜的性能进行了测试，纳米纤维的直径为100-500nm，纳米纤维膜的拉伸强度为13.28Mpa，断裂伸长率为20.37％；
实施例4
纳米纤维膜的制备
(1)取834g实施例1中配制的30wt％聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取3750g实施例1配制2wt％氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将12.5g壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入7.5g氧化蒲公英绒毛粉体O-PR(实施例1制备)搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入12.5g丝素蛋白，搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联反应后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
对纳米纤维膜的性能进行了测试，纳米纤维的直径为100-500nm，纳米纤维膜的拉伸强度为14.78Mpa断裂伸长率为21.87％；
实施例5
纳米纤维膜的制备
(1)取1000g实施例1中配制的25wt％聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取2500g实施例1中配制的3wt％氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将125g壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入7.5g蒲公英绒毛粉体H-PR(实施例1制备)搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入12.5g丝素蛋白，搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联反应后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
对纳米纤维膜的性能进行了测试，纳米纤维的直径为100-500nm，纳米纤维膜的拉伸强度为10.54Mpa，断裂伸长率为19.26％；机械强度较N-12有所降低；
本申请中将氧化蒲公英绒毛粉体O-PR用等量的碱活化的蒲公英绒毛粉体H-PR代替时，纳米纤维膜的拉伸强度以及断裂伸长率都有所降低，说明了碱活化的蒲公英绒毛粉体对纳米纤维膜机械性能的增强作用较氧化蒲公英绒毛粉体弱。
实施例6
纳米纤维膜的制备
(1)取1000g实施例1中配制的25wt％聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取2500g实施例1中配制的3wt％氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将12.5g壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入氧化蒲公英叶纤维粉体O-PF(实施例1制备)搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入12.5g丝素蛋白，搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联后，冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
调整氧化蒲公英叶纤维粉体(O-PF)添加量获得不同的纳米纤维膜(表3所示)，并对纳米纤维膜的性能进行了测试(表4所示)。
表3.
Figure BDA0002954430860000081
Figure BDA0002954430860000091
表4.
膜编号 纳米纤维直径/nm 拉伸强度/Mpa 断裂伸长率/％
NF-1 100-500 3.17 11.37
NF-2 100-500 4.23 11.46
NF-3 100-500 4.56 12.94
NF-4 100-500 5.73 13.30
NF-5 100-500 6.64 14.97
NF-6 100-500 7.23 15.48
NF-7 100-500 8.86 16.21
NF-8 100-500 9.15 17.98
NF-9 100-500 10.82 18.34
NF-10 100-500 11.34 19.87
NF-11 100-500 12.78 20.42
NF-12 100-500 13.56 22.01
NF-13 / / /
N-14 / / /
随着蒲公英纤维的添加量增加，获得的纳米纤维膜的机械强度增大，但蒲公英纤维的最大添加量仅为7.5g；即蒲公英叶纤维粉体与聚乙烯醇的最大重量比为0.03∶1；
将表2与表4对比可以看出，在保证纺丝原液具有可纺性的条件下，蒲公英叶纤维粉体的最大添加量远远低于蒲公英绒毛纤维粉体，同时在相同的纤维粉体添加量下，添加蒲公英绒毛纤维获得的纳米纤维的机械强度高于添加蒲公英叶纤维粉体获得的纳米纤维；分析原因，可能是由于蒲公英绒毛具有蓬松的多孔结构，且蒲公英绒毛纤维的密度低于蒲公英叶纤维，蒲公英绒毛纤维的吸水膨胀性低于蒲公英叶纤维，使蒲公英绒毛粉体较蒲公英叶纤维在纺丝液中具有更好的分散性，且在纺丝液表现出一定的降黏作用，最终在保证纺丝液可纺的条件下，蒲公英绒毛粉体的最大添加量远远高于蒲公英叶纤维，同时分散性好的蒲公英绒毛粉体对纳米纤维机械强度的增强作用优于蒲公英叶纤维粉体。
实施例7
纳米纤维膜的制备
(1)取1000g实施例1中配制的25wt％聚乙烯醇溶液，备用；
(2)取2500g实施例1中配制的3wt％氧化海藻酸钠溶液，备用；
(3)将12.5g壳聚糖(脱乙酰度85％)先分散于氧化海藻酸钠溶液中搅拌反应后，加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入12.5g丝素蛋白，搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入7.5g蒲公英绒毛粉体O-PR搅拌均匀后获得纺丝原液；
(4)纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜揭下浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.3:1000)中交联反应后经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-0；其中纺丝条件为：纺丝电压为16-20kV；纺丝距离为16-20cm；
对纳米纤维膜的性能进行了测试，纳米纤维的直径为100-500nm，纳米纤维膜的拉伸强度为6.56Mpa，断裂伸长率为16.73％；
相比于实施例2制备获得的纳米纤维膜N-12，本实施例调整了丝素蛋白与氧化蒲公英绒毛粉体的添加顺序，发现获得的纳米纤维的拉伸强度和断裂伸长率降低；是由于先添加氧化蒲公英绒毛粉体时，氧化蒲公英绒毛粉体作为中心交联点形成高分子网络结构，有利于蒲公英绒毛粉体分散于纳米纤维的内层，而氧化蒲公英绒毛于丝素蛋白后加入时，丝素蛋白优先与氧化海藻酸钠、壳聚糖交联形成较致密的网络结构，而使氧化蒲公英绒毛纤维在纺丝液中分散性降低，使其主要分散于已交联高分子网络的外围(如图1c所示)，其作为交联中心的作用较弱，造成纳米纤维膜的机械强度减弱。
实施例8
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜浸泡于去离子水中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-1；
实施例9
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.05:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-2；
实施例10
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于京尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.1:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-3；
实施例11
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.2:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-4；
实施例12
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.4:1000)中交联后，冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-5；
实施例13
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.5:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-6；
实施例14
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.55:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-7；
实施例15
纳米纤维膜的制备：其制备方法与实施例2中N-12的制备方法基本相同，不同之处在于，步骤(4)中经静电纺丝获得纳米纤维膜仅浸泡于尼平/卵清蛋白液(京尼平与卵清蛋白液的重量比为0.6:1000)中交联后，经冷冻干燥灭菌获得纳米纤维膜DN-8；
实施例16
纳米纤维膜的细胞粘附实验
将本发明实施例2制备获得部分纳米纤维膜N-1、N-12、N-18和实施例7-15制备获得的纳米纤维膜DN-0～DN-8的细胞粘附性进行了测试，具体方法为：将纳米纤维膜剪裁为圆形，进行灭菌，将灭菌后的纳米纤维铺满48孔培养板底部，在其表面接种人体成纤维细胞，并加入培养液，置于37℃下培养8小时后取出，用磷酸盐缓冲溶液冲洗以除去未粘附的细胞，然后加入0.5wt％MTT的磷酸盐缓冲溶液，置于37℃下培养4小时后加入二甲基亚砜，振荡均匀后采用酶标仪于570纳米处测定紫色物质的吸光度；计算纳米纤维膜的细胞粘附率，结果如表5所示。
表5.
膜编号 拉伸强度/MPa 断裂伸长率/％ 细胞粘附率/％
N-1 3.17 11.37 5.2
N-12 15.24 25.79 9.3
N-18 5.86 15.27 13.1
DN-0 6.56 16.73 18.4
DN-1 3.64 10.32 7.3
DN-2 8.21 17.89 7.5
DN-3 9.43 19.62 7.8
DN-4 10.65 22.33 8.2
DN-5 16.23 22.45 9.6
DN-6 17.69 23.98 10.1
DN-7 17.97 24.13 14.5
DN-8 18.14 27.53 17.3
由表5数据可知：
纳米纤维膜N-1、N-12、N-18的细胞粘附率逐渐增大，可见，随着蒲公英绒毛粉体添加量的增加，纳米纤维膜的细胞粘附率增大；这可能与绒毛纤维粉体添加量增加，纳米纤维膜表面越粗糙，因此与细胞的粘附性增大；
纳米纤维膜DN-0的细胞粘附率也较高，也与纳米纤维膜表面的丰富的粗糙结构有关；
DN-1的拉伸强度和断裂伸长率较低，DN-2～DN-8拉伸强度和断裂伸长率呈现增大趋势，可见京尼平/卵清蛋白液交联剂交联将显著提高纳米纤维膜的机械强度，并且随着京尼平添加量的增加，纳米纤维膜的拉伸强度和断裂伸长率均增大；
纳米纤维膜DN-1～DN-6的细胞粘附率增幅小，DN-7、DN-8的细胞粘附率增幅大，即当京尼平添加量达到0.55g/1000g卵清蛋白液时，细胞粘附率迅速增大；
实施例17
纳米纤维膜的抑菌率测试
对实施2制备获得的部分纳米纤维膜、实施例8制备获得的纳米纤维膜的抑菌性能进行了测试；测试方法为抑菌圈法，具体为：将纳米纤维膜剪裁为直径为2cm的圆形，分别配制金黄色酿脓葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌菌液，将菌液滴加到蛋白胨培养基上，用玻璃棒涂布均匀后，将敷料置于培养基上，分别在恒温箱中培养24h后，观察记录抑菌圈的大小；为了使数据更准确，测试了四个方向的抑菌圈宽度，取平均值作为抑菌圈大小记录于表6中。
表6.
Figure BDA0002954430860000131
由表6可知，本发明制备获得的纳米纤维膜具有良好的抑菌性能，卵清蛋白液的添加对纳米纤维膜的抑菌性有显著影响。
实施例18
多功能止血贴的制备
以上述实施例2-15制备获得纳米纤维膜作为敷料层，以医用无纺布作为支撑层，将纳米纤维膜裁剪为合适的尺寸，在其表面涂覆医用胶，将其粘贴于无纺布基材上，经敷贴压合后，覆盖保护层即获得止血贴；止血贴中包含多层或单层纳米纤维膜；根据创口情况调节纳米纤维膜的层数；
多功能止血贴对创口的修复实验
将本发明实施例2制备获得的纳米纤维膜N-6～N-18以及实施例8-15制备获得的纳米纤维膜DN-1～DN-8剪裁为形状大小相同的膜作为敷料层制备获得多功能止血贴(依次记为BN-6～BN-18、BDN-1～BDN-8)用于家兔创口的止血实验；观察家兔创口愈合情况，实验方法如下：
取家兔210只(健康状况良好，体重为2-3kg)分为21组，每组10只，将兔子背部预留5cm×5cm的去除背毛的部位，消毒后，用手术刀在其背部作0.5cm×0.5cm的伤口，将止血贴揭除离型纸层，粘贴于家兔创口表面，止血贴贴敷5天后，观察创口的的愈合情况；此后，再更换止血贴，以后不再更换止血贴，观察记录创口的愈合时间，记录于表7中；其中，创面愈合率(％)＝(原始创面面积－未愈合创面面积)/原始创面面积。
表7.
Figure BDA0002954430860000132
Figure BDA0002954430860000141
由表7数据可知，本发明的止血贴贴敷于家兔创口5天后，家兔创口的感染率小于7％，创面愈合率达到了60％以上，在较短时间内实现创面愈合；
BN-6～BN-18创面5天愈合率基本保持不变，而创口愈合时间有所延长，是由于在二次更换止血贴时，止血贴敷料层粘连创口，揭除时不可避免对创口造成了二次伤害，造成创口愈合时间延长；
BDN-1止血贴的抑菌率较低，造成创口感染率较大，使创口愈合率降低，同时创口愈合时间延长；
BDN-2～BDN-6止血贴的5天创面感染率基本保持不变，创面愈合率逐渐升高，创面愈合时间基本保持不变，BDN-7、BDN-8的创面愈合时间有所增加，是由于更换止血贴时，敷料层粘连创口，揭除时不可避免对创口造成了二次伤害，而延长了创面愈合时间；
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，是由支撑层、敷料层和保护层组成，所述的敷料层包被于支撑层和保护层之间，所述的敷料层是由以下原料经静电纺丝制备而成的纳米纤维膜：聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白、蒲公英绒毛粉体、京尼平和卵清蛋白。
2.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，蒲公英绒毛粉体为氧化蒲公英绒毛粉体。
3.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的氧化蒲公英绒毛粉体的制备方法为：
将采集的蒲公英绒毛在避光条件下浸入高碘酸钾水溶液中，搅拌反应结束后清洗，冷冻干燥后粉碎得到氧化蒲公英绒毛粉体。
4.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的纳米纤维膜的制备方法，具体包括以下步骤：
配制聚乙烯醇溶液：将聚乙烯醇加入去离子水中，在室温下搅拌溶胀后，置于60-70℃搅拌获得质量浓度为20-30%的聚乙烯醇溶液；
配制氧化海藻酸钠溶液：将氧化海藻酸钠溶于去离子水中制备获得质量浓度为2-4wt%氧化海藻酸钠溶液；
向氧化海藻酸钠溶液中加入壳聚糖搅拌反应后，将上述混合液加入聚乙烯醇溶液中，再向其中加入氧化蒲公英绒毛粉体，搅拌均匀后获得混合液，混合液中加入丝素蛋白搅拌均匀后获得纺丝原液；
将纺丝原液经静电纺丝获得纳米纤维膜，将纳米纤维膜浸泡于京尼平/卵清蛋白液中交联后经冷冻干燥获得纳米纤维膜。
5.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的静电纺丝条件为：纺丝电压为16-20 kV；纺丝距离为16-20cm。
6.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的聚乙烯醇、氧化海藻酸钠、壳聚糖、丝素蛋白和氧化蒲公英绒毛粉体的重量比为1∶0.1-0.5∶0.01-0.05∶0.01-0.05∶0.01-0.05。
7.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的壳聚糖为脱乙酰度为65%-85%的壳聚糖。
8.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的卵清蛋白液的浓度为5mg/mL；所述的京尼平与卵清蛋白液的重量比为 0.1-0.5g∶1000g。
9.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的纳米纤维基止血贴制备方法为：将纳米纤维膜剪裁为合适尺寸粘贴于支撑层上，经敷贴机复合，在支撑层和敷料层上方覆盖保护层经包装灭菌后即可获得多功能止血贴。
10.如权利要求1所述的一种多功能纳米纤维基复合止血贴，其特征在于，所述的支撑层为医用无纺布，所述的保护层为离型纸。
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