CN112890167A - 一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，以重量份数计包括灵芝破壁孢子粉220‑230份、姬松茸提取物40‑50份、淀粉68‑75g份、硬脂酸镁0.8‑3.5份。本发明提供的灵芝孢子粉姬松茸胶囊在制备过程中，通过优化制备方法，能够提高姬松茸多糖提取率，提升产品利用率，进而提升灵芝孢子粉姬松茸胶囊中姬松茸多糖纯度，能够明显达到增强精力和提高免疫力的效果。

Description

一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊及其制备方法
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊及其制备方法。
背景技术
灵芝，外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，为多孔菌科真菌灵芝的子实体，是我国著名的食药两用真菌之一。现代医学证明，灵芝中含有多种对人体有明显作用效果的生理调节因子，其中最重要的是灵芝多糖，它具有明显的抗肿瘤、抗损伤、促进受损肝细胞恢复和改善某些老年疾病等作用。
姬松茸具有很强的保健作用，从姬松茸中提取的姬松茸多糖保健功效更加明显，经国外大量的临床应用发现其功效主要表现在：抗肿瘤，降血糖、降胆固醇、改善动脉硬化，防治中风，心肌梗塞，另外对痔疮、神经痛都有一定功效。其作用机理是：姬松茸β-葡聚糖有较强的抗癌活性，能明显抑制肿瘤细胞的生长。姬松茸还具有降低血糖、降低血压、胆固醇，改善动脉硬化的作用。姬松茸有较强的抗癌活性，具有增强人体精力的功效，近年来受到美食、保健、医药学界的极大关注。具有抗癌活性的多糖甩分，尤其是对腹水癌的抑制效果更为显著，还具有治疗痔瘘、增强精力、防治心血管病的作用，深受消费者欢迎。
但现有技术中姬松茸多糖的提取率不高，导致灵芝姬松茸原材料的大量浪费，且姬松茸胶囊中的多糖提取的精度不高导致姬松茸胶囊的多糖含量、纯度偏低和品质不高。
综上所述，如何设计一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊制备工艺，能够提高其中姬松茸多糖的提取率和纯度，是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于为了解决上述技术问题，提供一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法，能够提高灵芝孢子粉姬松茸胶囊中姬松茸多糖的纯度。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的，一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：以重量百分数计包括灵芝破壁孢子粉 220-230份、姬松茸提取物 40-50份、淀粉 68-75g份、硬脂酸镁 0.8-3.5份。
灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法：
（1）将原料药全部过100目筛，并按配比称重备用；
（2）将姬松茸提取物和硬脂酸镁、淀粉一起混合10-20min，混合均匀，得混合粉1；
（3）将混合粉1和灵芝破壁孢子粉一起混合15-30min，混合均匀，得总混物料；
（4）将上述总混物料在30万级洁净车间进行胶囊填充，0.35g/粒，得填充胶囊；再进行抛光，得灵芝孢子粉姬松茸胶囊。
所述姬松茸提取物具体制备如下：
（1）姬松茸液体发酵培养：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为8%-12％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量20%-25%，摇床150r/min培养2-4天，温度为25℃，调节PH为6-7；
3）间隔2-3天后将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达25%-30%，调节PH为6-7，温度22-26℃，摇床培养5-8天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗 3-5 遍，沥干水分后置于烘箱中，50-60℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 16%-18%、葡萄糖2%-3%、琼脂1.5%-2.5%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
所述培养基补充液组分为：姬松茸多糖酶解液15-20%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
所述姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入30-40倍重量的水溶解，加3-6%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为6-8，酶解时间1-2.5h，在55-65℃水浴中提取1-1.5h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8-9，静置20-30min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3-4次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入5-10%、0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6-7，超声30-40min后用2倍蒸馏水稀释备用。
（2）木瓜蛋白酶固定化：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌20-30min，水浴60-70℃，继续反应1-2h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为6-8，60-80℃反应2-3h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度30-40℃，聚合2-3h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱3-5次，再用饱和食盐水洗脱3-5次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：13：20。
（3）姬松茸多糖酶解方法：
取步骤（1）中姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入30-40倍的水溶解，加入3-6%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在55-65℃水浴中提取3-5h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.15-0.2%的活性炭粉，滤液6000-8000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液；
（4）PVDF超滤膜的制备方法：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声30-45min，60℃水浴4-6h；
3）氮气除氧30-40min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应24-26h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发60-80s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡20-26h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯8.6-9.6份、聚偏氟乙烯13.2-15.4份、二甲基乙酰胺1-1.5份、羟丙甲基纤维素3-5份、甲基丙烯酸钠0.5-2.5份、磷酸三乙酯 18-24份、二氯甲烷60-70份、聚乙二醇辛基醚 5.5-7.5份、2，2-偶氮二异丁腈2-4份。
（5）姬松茸多糖分离提纯方法：
用孔径0.2-0.3μm的微滤膜过滤姬松茸多糖提取液，滤液用步骤（4）中的PVDF超滤膜超滤，调节温度为40-50℃，PH为6-8，压力为0.45-0.55MPa，收集过滤液，过滤液浓缩干燥后为姬松茸提取物。
本发明的有益效果在于：
（1）本发明在制备PVDF超滤膜时，添加聚乙二醇辛基醚共混改性，优化制备工艺，提高了PVDF超滤膜的分离纯化和抗污染性能，从而提高了多糖的纯度。
（2）本发明在姬松茸液体发酵培养时，在液体培养基中添加酶解处理后的姬松茸多糖液能够促进姬松茸液体发酵，但发酵液的黏度因多糖含量增加而变大，影响姬松茸液体发酵生长，通过在姬松茸多糖酶解液中加入磷脂酰胆碱能够降低多糖溶液的黏度且具有催化作用，从而促进姬松茸发酵生长。
（3）固定化酶能够增加酶的稳定性和使用效率，但固定化酶过程中交联反应易造成酶失活，本发明通过添加β-巯基乙胺对普鲁兰改性，并加入环氧树脂吸附木瓜蛋白酶，能够减少酶失活现象，从而提高姬松茸多糖提取率。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1[A1]
本实施例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：以重量百分数计包括灵芝破壁孢子粉 225份、姬松茸提取物 45份、淀粉71g份、 2份。[A2]
灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法：
（1）将原料药全部过100目筛，并按配比称重备用；
（2）将姬松茸提取物和硬脂酸镁、淀粉一起混合15min，混合均匀，得混合粉1；
（3）将混合粉1和灵芝破壁孢子粉一起混合23min，混合均匀，得总混物料；
（4）将上述总混物料在30万级洁净车间进行胶囊填充，0.35g/粒，得填充胶囊；再进行抛光，得灵芝孢子粉姬松茸胶囊。
所述姬松茸提取物具体制备如下：
（1）姬松茸液体发酵培养：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为10％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量22%，摇床150r/min培养3天，温度为25℃，调节PH为6.5；
3）间隔2.5天将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达23%，调节PH为6.5，温度24℃，摇床培养6天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗4遍，沥干水分后置于烘箱中，55℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 17%、葡萄糖2.5%、琼脂2%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
所述培养基补充液组分为：姬松茸多糖酶解液17.5%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
所述姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解，加4.5%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为7，在60℃水浴中提取4h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8.5，静置25min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入7% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6.5，超声35min后用2倍蒸馏水稀释备用。
（2）木瓜蛋白酶固定化：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌25min，水浴65℃，继续反应1.5h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为7，70℃反应2.5h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度35℃，聚合2.5h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱4次，再用饱和食盐水洗脱4次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：13：20。
（3）姬松茸多糖酶解方法：
取步骤（1）中姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入35倍的水溶解，加入4.5%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在60℃水浴中提取4h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.17%的活性炭粉，滤液7000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液；
（4）PVDF超滤膜的制备方法：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声38min，60℃水浴5h；
3）氮气除氧35min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应25h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发70s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡23h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯9.1份、聚偏氟乙烯14.2份、二甲基乙酰胺1.3份、羟丙甲基纤维素4份、甲基丙烯酸钠1.5份、磷酸三乙酯 21份、二氯甲烷65份、聚乙二醇辛基醚6.5份、2，2-偶氮二异丁腈3份。
（5）姬松茸多糖分离提纯方法：
用孔径0.25μm的微滤膜过滤姬松茸多糖提取液，滤液用步骤（4）中的PVDF超滤膜超滤，调节温度为45℃，PH为7，压力为0.5MPa，收集过滤液，过滤液浓缩干燥后为姬松茸提取物。
实施例2
本实施例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：以重量百分数计包括灵芝破壁孢子粉 220份、姬松茸提取物 50份、淀粉 75g份、硬脂酸镁 0.8份。
灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法：
（1）将原料药全部过100目筛，并按配比称重备用；
（2）将姬松茸提取物和硬脂酸镁、淀粉一起混合10min，混合均匀，得混合粉1；
（3）将混合粉1和灵芝破壁孢子粉一起混合30min，混合均匀，得总混物料；
（4）将上述总混物料在30万级洁净车间进行胶囊填充，0.35g/粒，得填充胶囊；再进行抛光，得灵芝孢子粉姬松茸胶囊。
所述姬松茸提取物具体制备如下：
（1）姬松茸液体发酵培养：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为8％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量25%，摇床150r/min培养4天，温度为25℃，调节PH为6；
3）间隔2天将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达30%，调节PH为6，温度26℃，摇床培养8天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗 3 遍，沥干水分后置于烘箱中，50℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 18%、葡萄糖3%、琼脂 1.5%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
所述培养基补充液组分为：姬松茸多糖酶解液20%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
所述姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入30倍重量的水溶解，加6%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为8，在55℃水浴中提取3h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8，静置30min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入5% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为7，超声40min后用2倍蒸馏水稀释备用。
（2）木瓜蛋白酶固定化：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌20min，水浴60℃，继续反应2h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为8，60℃反应3h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度30℃，聚合2h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱5次，再用饱和食盐水洗脱5次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：13：20。
（3）姬松茸多糖酶解方法：
取步骤（1）中姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入30倍的水溶解，加入3%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在55℃水浴中提取3h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.15%的活性炭粉，滤液8000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液；
（4）PVDF超滤膜的制备方法：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声30min，60℃水浴6h；
3）氮气除氧40min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应24h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发80s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡20h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯9.6份、聚偏氟乙烯13.2份、二甲基乙酰胺1.5份、羟丙甲基纤维素3份、甲基丙烯酸钠2.5份、磷酸三乙酯 18份、二氯甲烷70份、聚乙二醇辛基醚 5.5份、2，2-偶氮二异丁腈2份。
（5）姬松茸多糖分离提纯方法：
用孔径0.3μm的微滤膜过滤姬松茸多糖提取液，滤液用步骤（4）中的PVDF超滤膜超滤，调节温度为40℃，PH为6，压力为0.55MPa，收集过滤液，过滤液浓缩干燥后为姬松茸提取物。
实施例3
本实施例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：以重量百分数计包括灵芝破壁孢子粉230份、姬松茸提取物 40份、淀粉 68g份、硬脂酸镁 3.5份。
灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法：
（1）将原料药全部过100目筛，并按配比称重备用；
（2）将姬松茸提取物和硬脂酸镁、淀粉一起混合20min，混合均匀，得混合粉1；
（3）将混合粉1和灵芝破壁孢子粉一起混合15min，混合均匀，得总混物料；
（4）将上述总混物料在30万级洁净车间进行胶囊填充，0.35g/粒，得填充胶囊；再进行抛光，得灵芝孢子粉姬松茸胶囊。
所述姬松茸提取物具体制备如下：
（1）姬松茸液体发酵培养：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为8%％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量20%，摇床150r/min培养2天，温度为25℃，调节PH为7；
3）间隔3天将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达25%，调节PH为7，温度22℃，摇床培养5天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗 5 遍，沥干水分后置于烘箱中，60℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 16%%、葡萄糖2%、琼脂 2.5%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
所述培养基补充液组分为：姬松茸多糖酶解液15%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
所述姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入40倍重量的水溶解，加3%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为6在65℃水浴中提取5h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为9，静置20min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗4次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入10% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6，超声30min后用2倍蒸馏水稀释备用。
（2）木瓜蛋白酶固定化：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌30min，水浴70℃，继续反应2h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为6，80℃反应2h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度40℃，聚合3h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱3次，再用饱和食盐水洗脱3次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：13：20。
（3）姬松茸多糖酶解方法：
取步骤（1）中姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入40倍的水溶解，加入6%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在65℃水浴中提取5h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.2%的活性炭粉，滤液6000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液；
（4）PVDF超滤膜的制备方法：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声45min，60℃水浴4h；
3）氮气除氧30min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应26h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发60s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡26h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯8.6份、聚偏氟乙烯15.4份、二甲基乙酰胺1份、羟丙甲基纤维素5份、甲基丙烯酸钠0.5份、磷酸三乙酯 24份、二氯甲烷60份、聚乙二醇辛基醚 7.5份、2，2-偶氮二异丁腈4份。
（5）姬松茸多糖分离提纯方法：
用孔径0.2μm的微滤膜过滤姬松茸多糖提取液，滤液用步骤（4）中的PVDF超滤膜超滤，调节温度为50℃，PH为8，压力为0.45MPa，收集过滤液，过滤液浓缩干燥后为姬松茸提取物。
对比例1
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸液体发酵培养为：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为10％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量22%，摇床150r/min培养9天，温度为25℃，调节PH为6.5，全程保持无菌；
3）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗4遍，沥干水分后置于烘箱中，55℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 17%、葡萄糖2.5%、琼脂2%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
其余同实施例1.
对比例2
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸液体发酵培养为：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为10％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量22%，摇床150r/min培养3天，温度为25℃，调节PH为6.5；
3）间隔2.5天将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达23%，调节PH为6.5，温度24℃，摇床培养6天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗4遍，沥干水分后置于烘箱中，55℃烘干至恒重备用；
所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 17%、葡萄糖2.5%、琼脂2%、余量水。
所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
所述培养基补充液组分为：姬松茸液17.5%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
所述姬松茸液的制备方法为：取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解即可。
其余同实施例1。
对比例3
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解方法为：
（1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解，加4%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为7，在60℃水浴中提取4h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
（2）缓慢滴加1mol/l的KOH调节PH为7，静置25min后离心；
（3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
（4）调节PH为6.5，超声35min后用2倍蒸馏水稀释备用。
其余同实施例1。
对比例4
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解，加4.5%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为7，在55℃水浴中提取4h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8.5，静置25min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入4% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6.5，超声35min后用2倍蒸馏水稀释备用。
其余同实施例1。
对比例5
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解，加4.5%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为7，在65℃水浴中提取4h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8.5，静置25min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入11% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6.5，超声35min后用2倍蒸馏水稀释备用。
其余同实施例1。
对比例6
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入35倍重量的水溶解，加4.5%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为7，在65℃水浴中提取4h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8.5，静置25min后离心；
3）沉淀物用无水乙醇清洗3次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
4）加入7% 0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6.5，用2倍蒸馏水稀释备用。
其余同实施例1。
对比例7
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，所述培养基补充液组分为：
姬松茸多糖酶解液14%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
其余同实施例1。
对比例8
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，所述培养基补充液组分为：
姬松茸多糖酶解液21%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
其余同实施例1。
对比例9
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，所述木瓜蛋白酶固定化方法为：
将质量体积比为1:8的壳聚糖和1%的乙酸混合溶解，然后调节PH为8，所得白色沉淀减压过滤，白色沉淀用PH为7.5的磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，白色沉淀中加入3%的1mg/mL的木瓜蛋白酶液，6滴的酶激活剂，室温下搅拌30min后减压过滤；滤出物再用PH为7.5的磷酸盐缓冲溶液洗涤2次，室温下真空干燥即得固定化木瓜蛋白酶。
所述酶激活剂为0.005mol/L半肤氨酸和0.001mol/L戊二醛溶液1:1混合
其余同实施例1。
对比例10
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，木瓜蛋白酶固定化方法为：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，用磁力器搅拌25min，水浴65℃，继续反应1.5h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为7，70℃反应2.5h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度35℃，聚合2.5h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱4次，再用饱和食盐水洗脱4次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：10：13：20。
其余同实施例1。
对比例11
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，木瓜蛋白酶固定化方法为：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌25min，水浴65℃，继续反应1.5h；
2）加入木瓜蛋白酶，用磷酸盐缓冲液调节PH为7，70℃反应2.5h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度35℃，聚合2.5h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱4次，再用饱和食盐水洗脱4次，烘干干燥即可。
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：20。
其余同实施例1。
对比例12
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，木瓜蛋白酶固定化方法为：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌25min，水浴65℃，继续反应1.5h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为7，70℃反应2.5h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度35℃，聚合2.5h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱4次，再用饱和食盐水洗脱4次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.1：10：14；20。
其余同实施例1。
对比例13
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，木瓜蛋白酶固定化方法为：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌25min，水浴65℃，继续反应1.5h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为7，70℃反应2.5h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度35℃，聚合2.5h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱4次，再用饱和食盐水洗脱4次，烘干干燥即可；
所述普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.3：10：12；20。
其余同实施例1。
对比例14
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解方法为：
取姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入35倍的水溶解，加入2%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在55℃水浴中提取4h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.17%的活性炭粉，滤液7000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液。
其余同实施例1。
对比例15
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，姬松茸多糖酶解方法为：
取姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入35倍的水溶解，加入7%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在65℃水浴中提取4h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加入0.17%的活性炭粉，滤液7000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液。
其余同实施例1。
对比例16
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，PVDF超滤膜的制备方法为：
1）将一定量的聚偏氟乙烯和聚氯乙烯溶解在二甲基乙酰胺中，配置一定浓度的铸膜液，搅拌1 h 后，加入一定量的甲基丙烯酸钠，在65 ℃下搅拌 24 h，使其形成均匀的铸膜液，
2）使其在 55 ℃浴下脱泡 24 h，倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀进行刮膜，
3）待液膜在空气中蒸发 30s之后，将液膜和玻璃板一起放入去离子水中，将所得的膜放入去离子水中浸泡12h，取出成膜干燥。
所述聚偏氟乙烯、聚氯乙烯、二甲基乙酰胺、甲基丙烯酸钠质量比为17:1:82:2
其余同实施例1。
对比例17
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，PVDF超滤膜的制备方法为：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入磷酸三乙酯，超声38min，60℃水浴5h；
3）氮气除氧35min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应25h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发70s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡23h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯9.1份、聚偏氟乙烯14.2份、二甲基乙酰胺1.3份、羟丙甲基纤维素4份、甲基丙烯酸钠1.5份、磷酸三乙酯 21份、二氯甲烷65份、2，2-偶氮二异丁腈3份。
其余同实施例1。
对比例18
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，PVDF超滤膜的制备方法为：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声38min，60℃水浴5h；
3）氮气除氧35min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应25h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发70s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡23h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯9.1份、聚偏氟乙烯14.2份、二甲基乙酰胺1.3份、羟丙甲基纤维素4份、甲基丙烯酸钠1.5份、磷酸三乙酯 21份、二氯甲烷65份、聚乙二醇辛基醚5份、2，2-偶氮二异丁腈3份。
其余同实施例1。
对比例19
本对比例提供了一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，与实施例1的不同之处在于，PVDF超滤膜的制备方法为：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声38min，60℃水浴5h；
3）氮气除氧35min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应25h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发70s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡23h，取出烘干待用；
所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：
聚己内酯9.1份、聚偏氟乙烯14.2份、二甲基乙酰胺1.3份、羟丙甲基纤维素4份、甲基丙烯酸钠1.5份、磷酸三乙酯21份、二氯甲烷65份、聚乙二醇辛基醚8份、2，2-偶氮二异丁腈3份。
其余同实施例1。
灵芝孢子粉姬松茸胶囊中多糖测定方法：
采用硫酸一苯酚法测定总糖总量，采用高效液相凝胶色谱法（SE-HPLC）测定多糖纯度。
多糖提取率%=（多糖纯度*总糖总量）/姬松茸总量*100%
多糖提取率及多糖纯度结果如表1所示：
表1
Figure RE-816448DEST_PATH_IMAGE001
由表1结果可知，采用本发明提供的灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法，不仅能够明显提高多糖的提取率，减少原料浪费，同时还能提升多糖纯度，提升灵芝孢子粉姬松茸胶囊的品质。

Claims (9)

1.一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：以重量份数计包括灵芝破壁孢子粉 220-230份 、姬松茸提取物 40-50份 、淀粉 68-75g份、硬脂酸镁 0.8-3.5份。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：
所述灵芝孢子粉姬松茸胶囊的制备方法：
（1）将原料药全部过100目筛，并按配比称重备用；
（2）将姬松茸提取物和硬脂酸镁、淀粉一起混合10-20min，混合均匀，得混合粉1；
（3）将混合粉1和灵芝破壁孢子粉一起混合15-30min，混合均匀，得总混物料；
（4）将上述总混物料在30万级洁净车间进行胶囊填充，0.35g/粒，得填充胶囊；再进行抛光，得灵芝孢子粉姬松茸胶囊。
3.根据权利要求1或2所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：
所述姬松茸提取物具体制备如下：
（1）姬松茸液体发酵培养：
1）将纯化的姬松茸菌株固体斜面取菌，接种至PDA固体平板培养基上，接种量为8%-12％，25℃培养2天，得菌丝体；
2）再将菌丝体接至灭菌的液体发酵培养基中，装液量20%-25%，摇床150r/min培养2-4天，温度为25℃，调节PH为6-7；
3）间隔2-3天后将培养基补充液加入液体发酵培养基中，至装液量达25%-30%，调节PH为6-7，温度22-26℃，摇床培养5-8天，全程保持无菌；
4）过滤除去发酵液，菌丝团经去离子水冲洗 3-5 遍，沥干水分后置于烘箱中，50-60℃烘干至恒重备用；
（2）木瓜蛋白酶固定化：
1)将普鲁兰溶于10倍重量的去离子水配置成普鲁兰溶液，加入β-巯基乙胺，用磁力器搅拌20-30min，水浴60-70℃，继续反应1-2h；
2）加入木瓜蛋白酶和研磨均匀的环氧树脂混合，用磷酸盐缓冲液调节PH为6-8，60-80℃反应2-3h；
3）滴加质量分数为0.2%新戊二醇二缩水甘油醚交联剂，搅拌均匀，水浴温度30-40℃，聚合2-3h；
4）抽滤，将固体物质用乙醇洗脱3-5次，再用饱和食盐水洗脱3-5次，烘干干燥即可；
（3）姬松茸多糖酶解方法：
取步骤（1）中姬松茸干燥菌丝团粉碎，加入30-40倍的水溶解，加入3-6%固定化后的木瓜蛋白酶，调节PH为7，在55-65℃水浴中提取3-5h，冷却至室温后，滤出木瓜蛋白酶，加0.15-0.2%的活性炭粉，滤液6000-8000r/min离心，保留上清液为姬松茸多糖提取液；
（4）PVDF超滤膜的制备方法：
1）将聚偏氟乙烯、聚己内酯溶解在二甲基乙酰胺、二氯甲烷混合液中，50℃水浴加热2h；
2）在上述溶液中加入聚乙二醇辛基醚和磷酸三乙酯，超声30-45min，60℃水浴4-6h；
3）氮气除氧30-40min后，搅拌加入羟丙甲基纤维素、甲基丙烯酸钠和2，2-偶氮二异丁腈反应24-26h，得铸膜液；
4）将铸膜液振荡脱泡后倒在玻璃板上，用 200 μm 厚度的刮刀均匀刮膜，待铸膜液蒸发60-80s，将玻璃板和液膜一起放入去离子水中浸泡20-26h，取出烘干待用；
（5）姬松茸多糖分离提纯方法：
用孔径0.2-0.3μm的微滤膜过滤姬松茸多糖提取液，透过液用步骤（4）中的PVDF超滤膜超滤，调节温度为40-50℃，PH为6-8，压力为0.45-0.55MPa，收集过滤液，过滤液浓缩干燥后为姬松茸提取物。
4.根据权利要求3所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述PDA 固体平板培养基组分为：马铃薯淀粉 16%-18%、葡萄糖2%-3%、琼脂 1.5%-2.5%、余量水。
5.根据权利要求3所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述液体发酵培养基组分为：葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%、余量水。
6.根据权利要求3所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述培养基补充液组分为：姬松茸多糖酶解液15-20%、葡萄糖2.5%、玉米淀粉2.0%、麦芽粉1.2%、麸皮1.2%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.3%，余量水。
7.根据权利要求6所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述姬松茸多糖酶解液的制备方法为：
（1）取姬松茸菌丝体干燥粉碎，加入30-40倍重量的水溶解，加3-6%固定化后的木瓜蛋白酶量，调节PH为6-8，在55-65℃水浴中提取3-5h，冷却至室温，滤出木瓜蛋白酶和杂质，滤液备用；
（2）缓慢滴加1mol/L的KOH调节PH为8-9，静置20-30min后离心；
（3）沉淀物用无水乙醇清洗3-4次，合并上清液和清洗液，减压蒸馏除去乙醇；
（4）加入5-10%0.1mol/L的磷脂酰胆碱，调节PH为6-7，超声30-40min后用2倍蒸馏水稀释备用。
8.根据权利要求3所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述木瓜蛋白酶固定化方式中，普鲁兰、β-巯基乙胺、木瓜蛋白酶、环氧树脂、新戊二醇二缩水甘油醚的质量比为8：0.2：10：13：20。
9.根据权利要求3所述的一种灵芝孢子粉姬松茸胶囊，其特征在于：所述PVDF超滤膜的制备方法中的配方比例为：聚己内酯8.6-9.6份、聚偏氟乙烯13.2-15.4份、二甲基乙酰胺1-1.5份、羟丙甲基纤维素3-5份、甲基丙烯酸钠0.5-2.5份、磷酸三乙酯 18-24份、二氯甲烷60-70份、聚乙二醇辛基醚 5.5-7.5份、2，2-偶氮二异丁腈2-4份。
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