CN112889871A - 一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用，属于食品技术领域。本发明公开的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，包括鼠李糖乳杆菌NX‑2、植物乳杆菌NX‑1、副干酪乳杆菌R3‑10、动物双歧杆菌NX‑6、小麦粉、食用植物油、麦芽糖醇液、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐。本发明公开的奶茶伴侣饼干在小鼠高血脂模型中显著降低TC、TG、LDL‑C浓度，而未显著降低HDL‑C的浓度，表现出良好的调节血脂作用；另外，在斑马鱼焦虑模型中具有显著降低斑马鱼运动距离、狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间的作用，表现出良好的缓解焦虑的益生功效。

Description

一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及食品技术领域，更具体的说是涉及一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用。
背景技术
现在年轻人都喜欢喝奶茶，但市场上部分奶茶却由奶精、糖精等增强奶茶风味的添加剂勾兑而成，而这些添加剂正是反式脂肪酸的主要来源，反式脂肪酸不仅会让我们容易发胖，降低记忆力，而且可以增加体内总胆固醇水平，易导致血管堵塞的低密度脂蛋白胆固醇(LDL)增加，形成血栓。另外，和咖啡、红牛一样，奶茶引起失眠的主要原因是里面含有咖啡因。咖啡因是中枢神经兴奋剂，暂时驱走睡意、恢复精力，吸收过多可能会引起类似焦虑的症状，如心悸、震颤、睡眠紊乱等。奶茶中的咖啡因主要来源于茶叶。基于此，针对人们对更高生活品质和健康的追求，急需发明一种具有预防高血脂、缓解焦虑的奶茶伴侣，既能让消费者放心享受奶茶带来的浓郁风味，又能缓解由于过量摄入反式脂肪酸和咖啡因引起的副作用。
益生菌是对宿主健康和生理功能产生有益作用的活性微生物，如乳杆菌和双歧杆菌等。大量研究表明，益生菌在提高免疫力、维持肠道微生态平衡、降低胆固醇、缓解过敏、减肥、降血糖、缓解焦虑等方面发挥着重要的作用，已被广泛用于开发功能性食品或膳食补充剂。
因此，提供一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用，奶茶伴侣饼干具有调节血脂、缓解焦虑的作用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，按重量份计，包括以下原料：复合益生菌1-5份、小麦粉100-120份、食用植物油10-14份、麦芽糖醇液28-32份、苹果纤维粉10-20份、综合果蔬发酵粉10-20份、低聚果糖1.4-3份、碳酸氢铵0.5份、碳酸氢钠0.5份、食用盐0.5份；所述复合益生菌含有25％鼠李糖乳杆菌NX-2、25％植物乳杆菌NX-1、25％副干酪乳杆菌R3-10、25％动物双歧杆菌NX-6。
进一步，所述鼠李糖乳杆菌NX-2的保藏编号为CGMCC No.20110；所述植物乳杆菌NX-1的保藏编号为CGMCC No.20109；副干酪乳杆菌R3-10的保藏编号为CGMCC No.19520；所述动物双歧杆菌NX-6的保藏编号为CGMCC No.20114。
进一步，所述鼠李糖乳杆菌NX-2≥1×106CFU/g、植物乳杆菌NX-1≥1×106CFU/g、副干酪乳杆菌R3-10≥1×106CFU/g、动物双歧杆菌NX-6≥1×106CFU/g。
进一步，一种含益生菌的奶茶伴侣饼干的制备方法，具体步骤如下：
(1)按重量份数称取各原料，将小麦粉、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐混合均匀后，缓慢加食用植物油、麦芽糖醇液搅拌成膏状，加入水调成面团，25-40℃静置20min；加水量为除复合益生菌外其余原料重量的8％；
(2)将面团放入模型中压实成形，置于烤炉焙烤，烘焙的温度控制为上火温度170℃，下火温度150℃，烘烤时间5min，自然冷却，备用；
(3)用高温灭菌后的0.85％生理盐水将复合益生菌溶解至浓度为100μg/mL，均匀喷洒在饼干表面，置于45℃烘箱烘2h，在室温下冷却1-2h，包装。
进一步，所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干在调节血脂中的应用。
进一步，所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干在缓解焦虑中的应用。
进一步，所述的奶茶伴侣饼干在高脂饲料诱导小鼠高血脂模型中，可显著降低血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的浓度，而未显著降低高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度。
进一步，所述的奶茶伴侣饼干在咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型中，可显著降低斑马鱼的运动距离。
进一步，所述的奶茶伴侣饼干在咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型中，可显著降低斑马鱼的狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种含益生菌的奶茶伴侣饼干及其制备方法和应用，奶茶伴侣饼干在小鼠高血脂模型中能显著降低血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的浓度，而未显著降低高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度；同时在斑马鱼焦虑模型中能显著降低斑马运动距离、狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间，具备应用于体内调节血脂、缓解焦虑的潜能。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清胆固醇(TC)的影响；
图2附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清甘油三酯(TG)的影响；
图3附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清低密度脂蛋白(LDL-C)的影响；
图4附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清高密度脂蛋白(HDL-C)的影响；
图5附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动轨迹的影响；
图6附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动距离的影响；
图7附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的狂躁时间的影响；
图8附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的活跃时间的影响；
图9附图为本发明实施例1的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的静止时间的影响；
图10附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清胆固醇(TC)的影响；
图11附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清甘油三酯(TG)的影响；
图12附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清低密度脂蛋白(LDL-C)的影响；
图13附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清高密度脂蛋白(HDL-C)的影响；
图14附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动轨迹的影响；
图15附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动距离的影响；
图16附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的狂躁时间的影响；
图17附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的活跃时间的影响；
图18附图为本发明实施例2的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的静止时间的影响。
图19附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清胆固醇(TC)的影响；
图20附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清甘油三酯(TG)的影响；
图21附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清低密度脂蛋白(LDL-C)的影响；
图22附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清高密度脂蛋白(HDL-C)的影响；
图23附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动轨迹的影响；
图24附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的运动距离的影响；
图25附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的狂躁时间的影响；
图26附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的活跃时间的影响；
图27附图为本发明实施例3的奶茶伴侣饼干对咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型的静止时间的影响。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
鼠李糖乳杆菌NX-2、植物乳杆菌NX-1、副干酪乳杆菌R3-10、动物双歧杆菌NX-6来自广东南芯医疗科技有限公司，均为1×106CFU/g；鼠李糖乳杆菌NX-2的保藏编号为CGMCCNo.20110；所述植物乳杆菌NX-1的保藏编号为CGMCC No.20109；副干酪乳杆菌R3-10的保藏编号为CGMCC No.19520；所述动物双歧杆菌NX-6的保藏编号为CGMCC No.20114。麦芽糖醇液来自山东康勤生物科技有限公司；苹果纤维粉来自上海诺申食品贸易有限公司；综合果蔬发酵粉来自西安瑞林生物科技有限公司。
胆固醇(TC)检测试剂盒、甘油三酯(TG)检测试剂盒、低密度脂蛋白(LDL-C)检测试剂盒、高密度脂蛋白(HDL-C)检测试剂盒均购自美国Sigma公司，普通饲料和高脂饲料均购自南通特洛菲饲料科技有限公司。
实施例1
一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，按重量份计，包括以下原料：复合益生菌1份(鼠李糖乳杆菌NX-2、植物乳杆菌NX-1、副干酪乳杆菌R3-10、动物双歧杆菌NX-6，各占25％)、小麦粉100份、食用植物油10份、麦芽糖醇液28份、苹果纤维粉10份、综合果蔬发酵粉10份、低聚果糖1.4份、碳酸氢铵0.5份、碳酸氢钠0.5份、食用盐0.5份。
上述含益生菌的奶茶伴侣饼干的制备方法，包括以下步骤：
1)按上述重量份数称取各原料，将小麦粉、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐混合均匀后，缓慢加食用植物油、麦芽糖醇液搅拌成膏状，加入水调成面团，25-40℃静置20min；加水量为除复合益生菌外其余原料重量的8％；
2)将面团放入模型中压实成形，置于烤炉焙烤，烘焙的温度控制为上火温度170℃，下火温度150℃，烘烤时间5min，自然冷却，备用；
3)用高温灭菌后的0.85％生理盐水将复合益生菌溶解(100μg/mL)，均匀喷洒在饼干表面，置于45℃烘箱烘2h，在室温下冷却1-2h即可包装。
试验例1-1实施例1的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)指标的影响
将3周龄健康雄性C57BL/6J小鼠适应性饲养1周，然后将小鼠随机分成为正常组、模型组、奶茶伴侣饼干干预组。正常组饲喂普通饲料，模型组和奶茶伴侣饼干干预组均饲喂高脂饲料。正常组、模型对照组按0.2mL/10g体重灌胃给予生理盐水，奶茶伴侣饼干干预组(0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)分别按0.2mL/10g体重灌胃给予0.5mg/mL或1mg/mL或2mg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用研钵将奶茶伴侣饼干研磨成粉状，然后用生理盐水将粉末溶解至2mg/mL，再稀释至1mg/mL、0.5mg/mL)。饲养过程中各组小鼠自由摄食及进水，每天同一时间对小鼠进行灌胃，连续4周。干预结束后，禁食12h(不禁水)，眼球采血，用1.5mL离心管收集血液，常温放置1h，离心(4000rpm，10min)分离血清。按照试剂盒说明书要求测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度。结果见图1-图4。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000071
数据表示，用单因素方差分析。与正常组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图1、2、3、4可知，与正常组(TC：2.38±0.12mmol/mL、TG：0.44±0.03mmol/mL、LDL-C：0.63±0.06mmol/mL、HDL-C：2.68±0.19mmol/mL)相比，模型组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(7.28±0.37mmol/mL)、甘油三酯(TG)(0.75±0.05mmol/mL)、低密度脂蛋白(LDL-C)(1.46±0.10mmol/mL)、高密度脂蛋白(HDL-C)(5.68±0.34mmol/mL)浓度显著升高(###p<0.005)；而与模型组(TC：7.28±0.37mmol/mL、TG：0.75±0.05mmol/mL、LDL-C：1.46±0.10mmol/mL、HDL-C：5.68±0.34mmol/mL)相比，1mg/mL、2mg/mL茶伴侣饼干干预组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(1mg/mL：5.92±0.41mmol/mL；2mg/mL：4.20±0.25mmol/mL)、甘油三酯(TG)(1mg/mL：0.56±0.04mmol/mL；2mg/mL：0.49±0.03mmol/mL)和低密度脂蛋白(LDL-C)(1mg/mL：1.13±0.06mmol/mL；2mg/mL：0.92±0.04mmol/mL)浓度显著降低(*P<0.05)，以及高密度脂蛋白(HDL-C)(1mg/mL：5.21±0.27mmol/mL；2mg/mL：4.78±0.28mmol/mL)水平没有显著降低(P>0.05)，表明奶茶伴侣饼干的干预可有效缓解由高脂饮食诱导的血脂代谢异常。
试验例1-2奶茶伴侣饼干对斑马鱼焦虑模型的改善作用
挑选发育至6dpf(days post fertilization)的健康野生型AB系斑马鱼置于96孔细胞培养板中。实验设置空白对照组、模型组(100μM咖啡因)、奶茶伴侣饼干(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)干预组，每组设置20个复孔，每孔1条鱼。空白对照组加入200μL PBS；模型组每孔加入200μL 100μM咖啡因(Sigma公司)；奶茶伴侣饼干干预组每孔均加入100μL咖啡因(200μM)，同时分别加入100μL 200μg/mL或400μg/mL或800μg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用PBS配制，经0.45μm滤膜过滤，现用现配)，即咖啡因的最终浓度100μM，奶茶伴侣饼干最终浓度分别为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL，28℃孵育24h后，将96孔细胞培养板板置于斑马鱼行为分析系统(EthoVision XT 10.4，诺达思信息技术有限责任公司)中进行轨迹跟踪，关闭光源使斑马鱼适应环境5min，随后开启行为轨迹分析软件，采集斑马鱼在黑暗环境下5min内的行为轨迹。统计斑马鱼的运动距离；同时根据斑马鱼的游动速率将斑马鱼划分为3种运动状态：静止(<4mm/s)、活跃(4-20mm/s)、狂躁(>20mm/s)，并统计斑马鱼的狂躁时间、活跃时间、静止时间。结果见图5-9。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000081
数据表示，用单因素方差分析。与空白对照组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图5和图6可知，红色的区域为斑马鱼运动的路径所覆盖的区域；与空白对照组相比，模型组(咖啡因)斑马鱼的运动轨迹增加，表明模型组斑马鱼的活跃程度增加；同时，与空白对照组(46.43±4.50cm)相比，模型组斑马鱼的运动距离(73.33±2.02cm)显著增加(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图6可知，与模型组相比，奶茶伴侣饼干组(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)斑马鱼的运动轨迹减少，表明奶茶伴侣饼干在咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型中，可降低斑马鱼的活跃程度；同时奶茶伴侣饼干浓度为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL时，斑马鱼的运动距离分别为61.12±2.60cm、59.01±2.57cm、53.65±3.77cm，与模型组(73.33±2.02cm)相比较均差异性显著(P<0.05)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中能显著降低斑马鱼的运动距离，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
由图7、图8和图9可知，与空白对照组(狂躁时间：4.51±0.53s、活跃时间：14.31±1.91s、静止时间：281.18±2.21s)相比，模型组斑马鱼的狂躁时间(43.12±3.68s)、活跃时间(66.16±3.31s)均显著增加(p<0.005)，和静止时间(190.72±5.12s)显著减少(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图7、图8和图9可知，与模型组(狂躁时间：43.12±3.68s、活跃时间：66.16±3.31s、静止时间：190.72±5.12s)相比，100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL奶茶伴侣饼干干预组斑马鱼的狂躁时间(100μg/mL：30.66±2.23s、200μg/mL：17.81±1.31s、400μg/mL：13.07±0.76s)、活跃时间(100μg/mL：46.78±3.93s、200μg/mL：41.34±3.24s、400μg/mL：33.94±3.57s)均显著减少(p<0.01)，和静止时间(100μg/mL：222.56±4.21s、200μg/mL：240.84±3.64s、400μg/mL：252.99±3.68s)显著增加(p<0.05)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中均能显著减少斑马鱼的狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
实施例2
一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，按重量份计，包括以下原料：复合益生菌3份(鼠李糖乳杆菌NX-2、植物乳杆菌NX-1、副干酪乳杆菌R3-10、动物双歧杆菌NX-6，各占25％)、小麦粉110份、食用植物油12份、麦芽糖醇液30份、苹果纤维粉15份、综合果蔬发酵粉15份、低聚果糖2份、碳酸氢铵0.5份、碳酸氢钠0.5份、食用盐0.5份。
上述含益生菌的奶茶伴侣饼干的制备方法，包括以下步骤：
1)按上述重量份数称取各原料，将小麦粉、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐混合均匀后，缓慢加食用植物油、麦芽糖醇液搅拌成膏状，加入水调成面团，25-40℃静置20min；加水量为除复合益生菌外其余原料重量的8％；
2)将面团放入模型中压实成形，置于烤炉焙烤，烘焙的温度控制为上火温度170℃，下火温度150℃，烘烤时间5min，自然冷却，备用；
3)用高温灭菌后的0.85％生理盐水将复合益生菌溶解(100μg/mL)，均匀喷洒在饼干表面，置于45℃烘箱烘2h，在室温下冷却1-2h即可包装。
试验例2-1实施例2的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)指标的影响
将3周龄健康雄性C57BL/6J小鼠适应性饲养1周，然后将小鼠随机分成为正常组、模型组、奶茶伴侣饼干干预组。正常组饲喂普通饲料，模型组和奶茶伴侣饼干干预组均饲喂高脂饲料。正常组、模型对照组按0.2mL/10g体重灌胃给予生理盐水，奶茶伴侣饼干干预组(0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)分别按0.2mL/10g体重灌胃给予0.5mg/mL或1mg/mL或2mg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用研钵将奶茶伴侣饼干研磨成粉状，然后用生理盐水将粉末溶解至2mg/mL，再稀释至1mg/mL、0.5mg/mL)。饲养过程中各组小鼠自由摄食及进水，每天同一时间对小鼠进行灌胃，连续4周。干预结束后，禁食12h(不禁水)，眼球采血，用1.5mL离心管收集血液，常温放置1h，离心(4000rpm，10min)分离血清。按照试剂盒说明书要求测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度。结果见图10-图13。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000101
数据表示，用单因素方差分析。与正常组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图10、11、12、13可知，与正常组(TC：2.46±0.22mmol/mL、TG：0.48±0.05mmol/mL、LDL-C：0.68±0.08mmol/mL、HDL-C：2.59±0.17mmol/mL)相比，模型组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(7.39±0.45mmol/mL)、甘油三酯(TG)(0.86±0.08mmol/mL)、低密度脂蛋白(LDL-C)(1.50±0.21mmol/mL)、高密度脂蛋白(HDL-C)(5.57±0.45mmol/mL)浓度显著升高(###p<0.005)；而与模型组(TC：7.39±0.45mmol/mL、TG：0.86±0.08mmol/mL、LDL-C：1.50±0.21mmol/mL、HDL-C：5.57±0.45mmol/mL)相比，0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL茶伴侣饼干干预组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(0.5mg/mL：6.04±0.28mmol/mL、1mg/mL：5.77±0.48mmol/mL；2mg/mL：4.33±0.33mmol/mL)、甘油三酯(TG)(0.5mg/mL：0.64±0.07mmol/mL、1mg/mL：0.55±0.04mmol/mL；2mg/mL：0.46±0.05mmol/mL)和低密度脂蛋白(LDL-C)(0.5mg/mL：1.16±0.08mmol/mL、1mg/mL：1.11±0.10mmol/mL；2mg/mL：0.89±0.07mmol/mL)浓度显著降低(*P<0.05)，以及高密度脂蛋白(HDL-C)(0.5mg/mL：5.19±0.27mmol/mL、1mg/mL：5.17±0.33mmol/mL；2mg/mL：4.74±0.35mmol/mL)水平没有显著降低(P>0.05)，表明奶茶伴侣饼干的干预可有效缓解由高脂饮食诱导的血脂代谢异常。
试验例2-2实施例2的奶茶伴侣饼干对斑马鱼焦虑模型的改善作用
挑选发育至6dpf(days post fertilization)的健康野生型AB系斑马鱼置于96孔细胞培养板中。实验设置空白对照组、模型组(100μM咖啡因)、奶茶伴侣饼干(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)干预组，每组设置20个复孔，每孔1条鱼。空白对照组加入200μL PBS；模型组每孔加入200μL 100μM咖啡因(Sigma公司)；奶茶伴侣饼干干预组每孔均加入100μL咖啡因(200μM)，同时分别加入100μL 200μg/mL或400μg/mL或800μg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用PBS配制，经0.45μm滤膜过滤，现用现配)，即咖啡因的最终浓度100μM，奶茶伴侣饼干最终浓度分别为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL，28℃孵育24h后，将96孔细胞培养板板置于斑马鱼行为分析系统(EthoVision XT 10.4，诺达思信息技术有限责任公司)中进行轨迹跟踪，关闭光源使斑马鱼适应环境5min，随后开启行为轨迹分析软件，采集斑马鱼在黑暗环境下5min内的行为轨迹。统计斑马鱼的运动距离；同时根据斑马鱼的游动速率将斑马鱼划分为3种运动状态：静止(<4mm/s)、活跃(4-20mm/s)、狂躁(>20mm/s)，并统计斑马鱼的狂躁时间、活跃时间、静止时间。结果见图14-18。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000111
数据表示，用单因素方差分析。与空白对照组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图14和图15可知，红色的区域为斑马鱼运动的路径所覆盖的区域；与空白对照组相比，模型组(咖啡因)斑马鱼的运动轨迹增加，表明模型组斑马鱼的活跃程度增加；同时，与空白对照组(49.66±4.85cm)相比，模型组斑马鱼的运动距离(76.73±1.98cm)显著增加(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图15可知，与模型组相比，奶茶伴侣饼干组(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)斑马鱼的运动轨迹减少，表明奶茶伴侣饼干在咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型中，可降低斑马鱼的活跃程度；同时奶茶伴侣饼干浓度为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL时，斑马鱼的运动距离分别为65.35±1.91cm、58.07±2.84cm、55.10±3.37cm，与模型组(76.73±1.98cm)相比较均差异性显著(P<0.05)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中能显著降低斑马鱼的运动距离，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
由图16、图17和图18可知，与空白对照组(狂躁时间：8.26±0.97s、活跃时间：24.29±3.97s、静止时间：267.45±4.61s)相比，模型组斑马鱼的狂躁时间(45.58±3.73s)、活跃时间(69.84±2.87s)均显著增加(p<0.005)，和静止时间(184.58±4.25s)显著减少(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图16、图17和图18可知，与模型组(狂躁时间：45.58±3.73s、活跃时间：69.84±2.87s、静止时间：184.58±4.25s)相比，100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL奶茶伴侣饼干干预组斑马鱼的狂躁时间(100μg/mL：34.35±2.78s、200μg/mL：28.41±3.07s、400μg/mL：12.27±1.21s)、活跃时间(100μg/mL：48.39±3.25s、200μg/mL：44.29±3.94s、400μg/mL：27.24±3.45s)均显著减少(p<0.05)，和静止时间(100μg/mL：217.26±3.94s、200μg/mL：227.30±4.89s、400μg/mL：260.49±4.36s)显著增加(p<0.005)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中均能显著减少斑马鱼的狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
实施例3
一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，按重量份计，包括以下原料：复合益生菌5份(鼠李糖乳杆菌NX-2、植物乳杆菌NX-1、副干酪乳杆菌R3-10、动物双歧杆菌NX-6，各占25％)、小麦粉120份、食用植物油14份、麦芽糖醇液32份、苹果纤维粉20份、综合果蔬发酵粉20份、低聚果糖3份、碳酸氢铵0.5份、碳酸氢钠0.5份、食用盐0.5份。
一种含益生菌的奶茶伴侣饼干的制备方法，包括以下步骤：
1)将小麦粉、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐混合均匀后，缓慢加食用植物油、麦芽糖醇液搅拌成膏状，加入水调成面团，25-40℃静置20min；加水量为除复合益生菌外其余原料重量的8％；
2)将面团放入模型中压实成形，置于烤炉焙烤，烘焙的温度控制为上火温度170℃，下火温度150℃，烘烤时间5min，自然冷却，备用；
3)用高温灭菌后的0.85％生理盐水将复合益生菌溶解(100μg/mL)，均匀喷洒在饼干表面，置于45℃烘箱烘2h，在室温下冷却1-2h即可包装。
试验例3-1实施例3的奶茶伴侣饼干在高血脂小鼠模型中对血清血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)指标的影响
将3周龄健康雄性C57BL/6J小鼠适应性饲养1周，然后将小鼠随机分成为正常组、模型组、奶茶伴侣饼干干预组。正常组饲喂普通饲料，模型组和奶茶伴侣饼干干预组均饲喂高脂饲料。正常组、模型对照组按0.2mL/10g体重灌胃给予生理盐水，奶茶伴侣饼干干预组(0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)分别按0.2mL/10g体重灌胃给予0.5mg/mL或1mg/mL或2mg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用研钵将奶茶伴侣饼干研磨成粉状，然后用生理盐水将粉末溶解至2mg/mL，再稀释至1mg/mL、0.5mg/mL)。饲养过程中各组小鼠自由摄食及进水，每天同一时间对小鼠进行灌胃，连续4周。干预结束后，禁食12h(不禁水)，眼球采血，用1.5mL离心管收集血液，常温放置1h，离心(4000rpm，10min)分离血清。按照试剂盒说明书要求测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度。结果见图19-图22。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000141
数据表示，用单因素方差分析。与正常组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图19、20、21、22可知，与正常组(TC：2.20±0.24mmol/mL、TG：0.45±0.06mmol/mL、LDL-C：0.65±0.09mmol/mL、HDL-C：2.56±0.16mmol/mL)相比，模型组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(7.35±0.38mmol/mL)、甘油三酯(TG)(0.90±0.05mmol/mL)、低密度脂蛋白(LDL-C)(1.49±0.14mmol/mL)、高密度脂蛋白(HDL-C)(5.45±0.33mmol/mL)浓度显著升高(###p<0.005)；而与模型组(TC：7.35±0.38mmol/mL、TG：0.90±0.05mmol/mL、LDL-C：1.49±0.14mmol/mL、HDL-C：5.45±0.33mmol/mL)相比，0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL茶伴侣饼干干预组小鼠的血清中总胆固醇(TC)(0.5mg/mL：5.86±0.32mmol/mL、1mg/mL：5.29±0.46mmol/mL；2mg/mL：4.20±0.34mmol/mL)、甘油三酯(TG)(0.5mg/mL：0.64±0.06mmol/mL、1mg/mL：0.55±0.03mmol/mL；2mg/mL：0.49±0.04mmol/mL)和低密度脂蛋白(LDL-C)(0.5mg/mL：1.09±0.13mmol/mL、1mg/mL：1.01±0.08mmol/mL；2mg/mL：0.92±0.10mmol/mL)浓度显著降低(*P<0.05)，以及高密度脂蛋白(HDL-C)(0.5mg/mL：5.04±0.25mmol/mL、1mg/mL：4.94±0.29mmol/mL；2mg/mL：4.68±0.28mmol/mL)水平没有显著降低(P>0.05)，表明奶茶伴侣饼干的干预可有效缓解由高脂饮食诱导的血脂代谢异常。
试验例3-2实施例3的奶茶伴侣饼干对斑马鱼焦虑模型的改善作用
挑选发育至6dpf(days post fertilization)的健康野生型AB系斑马鱼置于96孔细胞培养板中。实验设置空白对照组、模型组(100μM咖啡因)、奶茶伴侣饼干(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)干预组，每组设置20个复孔，每孔1条鱼。空白对照组加入200μL PBS；模型组每孔加入200μL 100μM咖啡因(Sigma公司)；奶茶伴侣饼干干预组每孔均加入100μL咖啡因(200μM)，同时分别加入100μL 200μg/mL或400μg/mL或800μg/mL奶茶伴侣饼干混悬液(用PBS配制，经0.45μm滤膜过滤，现用现配)，即咖啡因的最终浓度100μM，奶茶伴侣饼干最终浓度分别为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL，28℃孵育24h后，将96孔细胞培养板板置于斑马鱼行为分析系统(EthoVision XT 10.4，诺达思信息技术有限责任公司)中进行轨迹跟踪，关闭光源使斑马鱼适应环境5min，随后开启行为轨迹分析软件，采集斑马鱼在黑暗环境下5min内的行为轨迹。统计斑马鱼的运动距离；同时根据斑马鱼的游动速率将斑马鱼划分为3种运动状态：静止(<4mm/s)、活跃(4-20mm/s)、狂躁(>20mm/s)，并统计斑马鱼的狂躁时间、活跃时间、静止时间。结果见图23-27。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用
Figure BDA0002932498790000151
数据表示，用单因素方差分析。与空白对照组相比：###p<0.005；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
由图23和图24可知，红色的区域为斑马鱼运动的路径所覆盖的区域；与空白对照组相比，模型组(咖啡因)斑马鱼的运动轨迹增加，表明模型组斑马鱼的活跃程度增加；同时，与空白对照组(52.94±4.18cm)相比，模型组斑马鱼的运动距离(77.58±2.37cm)显著增加(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图24可知，与模型组相比，奶茶伴侣饼干组(100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)斑马鱼的运动轨迹减少，表明奶茶伴侣饼干在咖啡因诱导斑马鱼焦虑模型中，可降低斑马鱼的活跃程度；同时奶茶伴侣饼干浓度为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL时，斑马鱼的运动距离分别为64.14±2.16cm、61.81±2.88cm、57.85±2.74cm，与模型组(77.58±2.37cm)相比较均差异性显著(P<0.01)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中能显著降低斑马鱼的运动距离，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
由图25、图26和图27可知，与空白对照组(狂躁时间：7.67±0.66s、活跃时间：16.94±1.95s、静止时间：275.40±2.25s)相比，模型组斑马鱼的狂躁时间(51.21±3.58s)、活跃时间(73.51±3.31s)均显著增加(p<0.005)，和静止时间(175.28±5.18s)显著减少(p<0.005)，表明本次斑马鱼焦虑模型建立成功。
由图25、图26和图27可知，与模型组(狂躁时间：51.21±3.58s、活跃时间：73.51±3.31s、静止时间：175.28±5.18s)相比，100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL奶茶伴侣饼干干预组斑马鱼的狂躁时间(100μg/mL：35.83±2.09s、200μg/mL：30.90±3.59s、400μg/mL：15.79±0.75s)、活跃时间(100μg/mL：51.30±3.89s、200μg/mL：45.94±3.23s、400μg/mL：37.89±3.48s)均显著减少(p<0.005)，和静止时间(100μg/mL：212.87±4.10s、200μg/mL：223.16±4.74s、400μg/mL：246.33±3.68s)显著增加(p<0.005)。因此，上述结果表明奶茶伴侣饼干在体内焦虑模型中均能显著减少斑马鱼的狂躁时间、活跃时间，和显著增加静止时间，表现出缓解咖啡因引起焦虑的作用。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (6)

1.一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，其特征在于，按重量份计，包括以下原料：复合益生菌1-5份、小麦粉100-120份、食用植物油10-14份、麦芽糖醇液28-32份、苹果纤维粉10-20份、综合果蔬发酵粉10-20份、低聚果糖1.4-3份、碳酸氢铵0.5份、碳酸氢钠0.5份、食用盐0.5份；所述复合益生菌含有25％鼠李糖乳杆菌NX-2、25％植物乳杆菌NX-1、25％副干酪乳杆菌R3-10、25％动物双歧杆菌NX-6。
2.根据权利要求1所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NX-2的保藏编号为CGMCC No.20110；所述植物乳杆菌NX-1的保藏编号为CGMCCNo.20109；副干酪乳杆菌R3-10的保藏编号为CGMCC No.19520；所述动物双歧杆菌NX-6的保藏编号为CGMCC No.20114。
3.根据权利要求2所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NX-2≥1×106CFU/g、植物乳杆菌NX-1≥1×106CFU/g、副干酪乳杆菌R3-10≥1×106CFU/g、动物双歧杆菌NX-6≥1×106CFU/g。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)按重量份数称取各原料，将小麦粉、苹果纤维粉、综合果蔬发酵粉、低聚果糖、碳酸氢铵、碳酸氢钠、食用盐混合均匀后，缓慢加食用植物油、麦芽糖醇液搅拌成膏状，加入水调成面团，25-40℃静置20min；加水量为除复合益生菌外其余原料重量的8％；
(2)将面团放入模型中压实成形，置于烤炉焙烤，烘焙的温度控制为上火温度170℃，下火温度150℃，烘烤时间5min，自然冷却，备用；
(3)用高温灭菌后的0.85％生理盐水将复合益生菌溶解至浓度为100μg/mL，均匀喷洒在饼干表面，置于45℃烘箱烘2h，在室温下冷却1-2h，包装。
5.权利要求1-3任一项所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干在调节血脂中的应用。
6.权利要求1-3任一项所述的一种含益生菌的奶茶伴侣饼干在缓解焦虑中的应用。
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